Name: Un approccio semplice per indurre la neurite Autoimmune Sperimentale in topi C57BL/6 per le valutazioni funzionali e Neuropathological (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Scopri come indurre la neurite autoimmune sperimentale in topi C57BL/6 per analisi funzionali e neuropatologiche. Questo protocollo permette di studiare la neuropatia periferica e valutare nuovi trattamenti terapeutici.

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DGG è un NHMRC Peter Doherty e sclerosi multipla ricerca Australia (MSRA) precoce carriera Fellow. JLF è supportato da una borsa di studio post-dottorato di MSRA. Questo lavoro è stato supportato dal Australian National Health e progetto del Consiglio di ricerca medica (NHMRC) concedere #APP1058647 JX.

tutte le procedure qui descritte sono state approvate dall'Istituto Florey di Neuroscienze e salute mentale (Melbourne cervello Centre) Comitato di etica degli animali e seguire la Australian codice di pratica per l'uso degli animali per scientifico Scopi.
 1. induzione di EAN Nota: EAN può essere indotta con successo nei topi C57BL/6 maschi di età compresa tra 6-8 settimane. Il protocollo di induzione dura 9 giorni in totale. Giorno 0 si riferisce al giorno della prima immunizzazione. Per questo protocollo, le iniezioni sono state condotte nell'ambito dell'anestesia (Vedi punto 1.1.2 qui sotto).
<ol><li>On Day -1: <ol><li>preparare la tossina della pertosse (Vedi Tabella materiali) soluzione di 1,6 µ g/mL utilizzando il fosfato del mouse-isotonica sterile di 0.1 M tampone (MT-PBS).</li>
		<li>Amputate con isoflurano: <ol><li>posizionare il mouse (C57BL/6, uomo, 6-8 settimane) in aula amputate e regolare il flusso di ossigeno a 1 L/min.</li>
			<li>Accendere il vaporizzatore isoflurano, regolarlo al 2,5% per amputate e monitor di respirazione e attesa per 2 min, o fino a quando i riflessi primari (arto cornea e posteriore) sono non più reattivo</li></ol>
		</li> <li>Rimuovere il mouse dalla camera amputate e amministrare 250 µ l della soluzione di tossina della pertosse sopra tramite un'iniezione intraperitoneale (i.p.) utilizzando una siringa da 0,5 mL con ago 30 1/2 G.</li>
		<li>Preparare l'inoculo iniettabile per immunizzazione: <ol><li>preparare soluzione A utilizzando 2 mg/mL soluzione del peptide 180-199 P0 (con &#62; 98% di purezza, sequenza S-S-K-R-G-R-Q-T-P-V-L-Y-A-M-L-D-H-S-R-S) in soluzione fisiologica allo 0,9%.</li>
			<li>Preparare Soluzione B utilizzando 20 mg/mL soluzione della tubercolosi del micobatterio (Vedi Tabella materiali) in Freund &#39; adiuvante completo s (FCA, composto da: 15% mannide monoolate + 85% di olio di paraffina e 0,5 mg/mL di essiccata uccisi e secchi M Mycobacterium butyricum).</li>
			<li>Per rendere l'inoculo finale per via parenterale, combinare parti di uguale volume di soluzioni A e B in un battitore di perlina e mescolarli alla massima velocità per 1 minuto a temperatura ambiente. 
			Nota: Le soluzioni A e B possono essere mantenute come magazzino e conservate a 4 ° C per un massimo di un mese ma l'inoculo finale combinato dovrà essere preparata il giorno dell'iniezione del mouse.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>Il giorno 0, amministrare 50 µ l di inoculo (preparazione descritta in passaggio 1.1.4) in un mouse tramite un'iniezione sottocutanea con un ago di 23 G. 
	Nota: L'iniezione può essere collocata tra le scapole, o tra le arti posteriori e la coda sopra il dorsum caudale.</li>
	<li>Il giorno 1, rendono la soluzione di tossina della pertosse di 1,2 µ g/mL (in MT-PBS) e amministrare 250 µ l in un mouse via i.p. iniezione utilizzando una siringa da 0,5 mL con ago 30 1/2 G.</li>
	<li>Il giorno 3, ripetere passo 1.3 qui sopra. 
	Nota: Soluzioni Stock A e B possono essere composti e conservate a 4 ° c per un massimo di un mese. Tuttavia, l'inoculo finale iniettabile, prodotto dalla combinazione di soluzioni di riserva A e B, deve essere fatto il giorno dell'iniezione.</li>
	<li>Il giorno 8, amministrare 50 µ l di inoculo (preparazione descritta in passaggio 1.1.4) in un mouse tramite un'iniezione sottocutanea (Vedi punto 1.2. su indicato), al sito di iniezione stesso come descritto al punto 1.2 (per ogni animale)</li></ol>
 2. Scoring clinico <ol><li>eseguire segnando clinica quotidiana a partire il giorno 0.</li>
	<li>Dare ogni mouse un punteggio pari a 0, 1, 2, 3 o 4 secondo i criteri pubblicati 4. Vedere la tabella 1 per il punteggio clinico EAN. 
	Nota: Per coerenza, uno sforzo dovrebbe essere fatto per segnare i topi allo stesso tempo ogni giorno dal ricercatore stesso.</li>
</ol> 3. Valutazione di funzione a motore Nota: le prestazioni del motore sono valutata in parallelo con il punteggio clinico per la stessa coorte degli animali. L'apparato di valutazione della funzione motoria deve essere collegato a un computer che dispone di un sistema di imaging funzione andatura (Vedi Tabella materiali) installato. Si raccomanda inoltre che tutti i topi da valutarsi dovrebbero essere abituati all'attività in esecuzione prima di induzione di EAN. Per effettuare questa operazione, esecuzioni di pratica (2 esecuzioni di test per topo) vengono eseguite tre giorni prima di induzione di malattia (giorno -3).
<ol><li>Accendere la funzione motoria valutazione apparato ed il commutatore sul pulsante luce.</li>
	<li>Scruff il mouse saldamente e suoi piedi di inchiostro abbassando esso su un contenitore riempito con inchiostro rosso mentre si tiene la sua coda. 
	Nota: Questo passaggio è obbligatorio per il ceppo C57BL/6, ma può essere ignorato se viene utilizzato un ceppo del mouse con un colore del mantello bianco.</li>
	<li>Posizionare il mouse nel vano piedi e impostare la velocità di tapis roulant a 15 cm/s.</li>
	<li>Accendere il tapis roulant e cliccare il &#34; record &#34; pulsante per catturare il movimento in esecuzione del mouse utilizzando la funzione di andatura sistema di imaging (Vedi Tabella materiali).</li>
	<li>Utilizzare un timer e misurare ogni corsa per 36 s. Dopo 36 s, interrompere la registrazione e stop il tapis roulant. 
	Nota: I topi che non è in grado di completare con successo l'attività in esecuzione per questo intervallo s 36 sono considerati di avere fallito.</li>
	<li>Salvare il file video nella cartella designata.</li>
	<li>Ripetere i passaggi precedenti per ogni mouse per essere valutato. Testare i topi con la stessa attività in esecuzione ogni 3 giorni.</li>
	<li>Analizzare i file video modificati utilizzando il software per i parametri di funzione di andatura (Vedi Tabella materiali). 
	Nota: I dettagli di come analizzare diversi parametri del motore variano tra software così consultare il produttore &#39; istruzione di s prima dell'analisi. Per ottenere l'evidenza istologica di axonal e danni di mielina tramite immunoistochimica o microscopia elettronica, tessuti possono essere assunto in qualsiasi fase post funzione motoria valutazione a seconda degli obiettivi specifici della ricerca animale.</li>
</ol>

<ol><li>Newswanger, D. L., Warren, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Guillain-Barre syndrome.</a> Am Fam Physician. 69 (10), 2405-2410 (2004).</li>
<li>Ruiz, E., Ramalle-Gomara, E., Quinones, C., Martinez-Ochoa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+Guillain-Barre+syndrome+mortality+in+Spain+from+1999+to+2013%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Trends in Guillain-Barre syndrome mortality in Spain from 1999 to 2013.</a> Int J Neurosci. 126 (11), 985-988 (2016).</li>
<li>Walling, A. D., Dickson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Guillain-Barre syndrome.</a> Am Fam Physician. 87 (3), 191-197 (2013).</li>
<li>Gonsalvez, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Functional+and+Neuropathological+Testing+Paradigm+Reveals+New+Disability-Based+Parameters+and+Histological+Features+for+P0180-199-Induced+Experimental+Autoimmune+Neuritis+in+C57BL%2F6+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">A Functional and Neuropathological Testing Paradigm Reveals New Disability-Based Parameters and Histological Features for P0180-199-Induced Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 76 (2), 89-100 (2017).</li>
<li>Berg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guillain-Barre+syndrome%3A+pathogenesis%2C+diagnosis%2C+treatment+and+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Guillain-Barre syndrome: pathogenesis, diagnosis, treatment and prognosis.</a> Nat Rev Neurol. 10 (8), 469-482 (2014).</li>
<li>Koller, H., Schroeter, M., Kieseier, B. C., Hartung, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+inflammatory+demyelinating+polyneuropathy--update+on+pathogenesis%2C+diagnostic+criteria+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy--update on pathogenesis, diagnostic criteria and therapy.</a> Curr Opin Neurol. 18 (3), 273-278 (2005).</li>
<li>Griffin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+the+motor-sensory+axonal+Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Pathology of the motor-sensory axonal Guillain-Barre syndrome.</a> Ann Neurol. 39 (1), 17-28 (1996).</li>
<li>Taylor, W. A., Hughes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+allergic+neuritis+induced+in+SJL+mice+by+bovine+P2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Experimental allergic neuritis induced in SJL mice by bovine P2.</a> J Neuroimmunol. 8 (2-3), 153-157 (1985).</li>
<li>Zou, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P0+protein+peptide+180-199+together+with+pertussis+toxin+induces+experimental+autoimmune+neuritis+in+resistant+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">P0 protein peptide 180-199 together with pertussis toxin induces experimental autoimmune neuritis in resistant C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Res. 62 (5), 717-721 (2000).</li>
<li>Miletic, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P0%28106-125%29+is+a+neuritogenic+epitope+of+the+peripheral+myelin+protein+P0+and+induces+autoimmune+neuritis+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">P0(106-125) is a neuritogenic epitope of the peripheral myelin protein P0 and induces autoimmune neuritis in C57BL/6 mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 64 (1), 66-73 (2005).</li>
<li>Hafer-Macko, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+motor+axonal+neuropathy%3A+an+antibody-mediated+attack+on+axolemma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Acute motor axonal neuropathy: an antibody-mediated attack on axolemma.</a> Ann Neurol. 40 (4), 635-644 (1996).</li>
<li>Griffin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+nodal+changes+in+the+acute+motor+axonal+neuropathy+pattern+of+the+Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Early nodal changes in the acute motor axonal neuropathy pattern of the Guillain-Barre syndrome.</a> J Neurocytol. 25 (1), 33-51 (1996).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nessun conflitto di interessi per quanto riguarda questo lavoro.

Questo rapporto descrive un metodo semplice per indurre EAN utilizzando il peptide di180-199 P0 in topi C57BL/6, consentendo la quantificazione dei principali deficit neuropathological e funzionale in topi indotti con EAN. Distinto per il protocollo di induzione di EAN descritto qui è l'uso dell'anestesia durante l'esecuzione le iniezioni di immunizzazione. L'uso dell'anestesia isoflurano migliora notevolmente la capacità di garantire che il volume totale dell'inoculo viene iniettato per via sottocutanea nella...

Neuropatie periferiche possono essere di origine genetica o acquisita, con neuropatie acquisite avendo entrambi metabolica, ischemica, infiammatorie, o tossici precipitanti. Queste malattie sono anche utilmente classificate come assonale o demyelinative in origine. Il più comune acquisita demielinizzante neuropatie periferiche sono la polineuropatia Demyelinating infiammatoria acuta (AIDP, noto anche come sindrome di Guillain-Barré, GBS) e cronica infiammatoria demielinizzante polineuropatia (CIDP)1, 2 , 3 , 4; entrambi sono patogeneticamente caratterizzati da una reazione autoimmune diretta contro la guaina di mielina, che causa demielinizzazione dei nervi periferici. In queste malattie, le cellule di T attivate attraversano la barriera del nervo e generano una reazione immune all'interno il PNS. Attivazione dei macrofagi all'interno del nervo quindi causa demielinizzazione o direttamente tramite attacco fagocitica, oppure indirettamente tramite secrete mediatori infiammatori, con conseguente disabilità clinica come paralisi e disfunzione sensitiva5. Mentre gli assoni demyelinated mantengono la capacità di essere remyelinated seguito demielinizzazione, remyelination è spesso ritardato o incompleta, con conseguente suscettibilità degli assoni nudi a danni irreversibili, che è la causa principale della clinica permanente disabilità. Attualmente, i trattamenti più efficaci sono immunomodulatori, ma nonostante la loro efficacia, in molti casi il recupero è spesso lento e ~ 25% pazienti avvertiranno i deficit funzionali residui che riducono significativamente la loro qualità di vita6, 7.
EAN è un modello animale ampiamente usato di demielinizzanti neuropatia periferica che ha fornito le comprensioni importanti nella patogenesi e un mezzo per valutare nuovi agenti terapeutici4. Questo modello può essere indotta in specie diverse come i conigli, ratti, topi e porcellini d'India e viene indotta tramite immunizzazione con antigeni neurogeni. Tuttavia, l'induzione di EAN successo dipende in ultima analisi su una risposta immunitaria adeguata per la malattia si verifichi. In considerazione delle variazioni di specie (e inter-specie/ceppo) nella funzione immune, molteplici combinazioni di antigeni e adiuvanti sono stati sviluppati per indurre correttamente EAN. In termini di strumenti genetici murini, C57BL/6 è il più ampiamente usato; Tuttavia, il peptide di proteina P2 tradizionale 57-81 (P257-81) che provoca la malattia nel ceppo suscettibili SJL mouse8 è in grado di patogenesi illeciti portando a deficit funzionali nel ceppo C57BL/6. Fortunatamente, paradigmi di sensibilizzazione utilizzando il P0106-125 o P0180-199 peptidi, consegnato in adiuvante combinato con l'iniezione di pertosse tossina può superare questa barriera, abilitazione sofisticati strumenti genetici per essere utilizzato nella modello murino di EAN.
Qui, un metodo semplice per l'induzione di EAN nei topi C57BL/6 è presentato. Inoltre, viene fornito un approccio globale e dettagliato da cui valutare i deficit funzionali e neuropathological associati alla malattia. Il peptide di P0180–199 9 è stato scelto preferenza l' alternativa1057-81 di P0. Il modello di199 180–P0 è stato descritto per produrre meno gravi segni clinici rispetto con l' alternativa1057-81 di P0 e rischia pertanto di sostenere l'introduzione di potenzialmente perturbazioni genetiche deleterie, recuperare dalle procedure chirurgiche (ad esempio l'impianto pompa osmotica) ed è favorevole alla prova4funzione di andatura di tapis roulant. Tuttavia, i tapis roulant andatura funzione test e istologici protocolli descritti qui facilmente potrebbero essere applicati quando si studia la malattia in una variante di57-81 indotto P0.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6, maschio, 6-8 settimane</td><td>Australian Bioresources Cenre, WA, Australia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elenco della tossina della pertosse</td><td>Biological Laboratories, Inc., CA, USA</td><td>#181</td><td></td></tr><tr><td>0.1 M topo fosfato tamponato salino (MT-PBS)</td><td></td><td></td> <td>avrà il proprio protocollo.</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Pharmachem, QLD, Australia</td><td></td><td>Laboratories avrà il proprio protocollo per la somministrazione.</td></tr><tr><td>P0180&ndash; 199 peptide</td><td>Wuxi Nordisk Biotech Co. Lt. SHG, CHN</td><td></td><td>P0180&ndash; 199, sequenza S&ndash; S&ndash; K&ndash; R&ndash; G&ndash; R&ndash; Domande e risposte T&ndash; P&ndash; V&ndash; L&ndash; Y&ndash; A&ndash; M&ndash; L&ndash; D&ndash; H&ndash; S&ndash; R&ndash; S</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis (ceppo H37RA)</td><td>Difco, MI, USA</td><td>#231141</td><td></td></tr><tr><td>adiuvante completo di Freund (FCA)</td><td>Difco, MI, USA</td><td>#263910</td><td></td></tr><tr><td>16% Paraformaldeide (PFA)</td><td>Servizi di microscopia elettronica</td><td>#15710</td><td>Diluire al 4% PFA il giorno della raccolta dei tessuti.</td></tr><tr><td>25% glutaraldheyde</td><td>ProSciTech Pty Ltd, QLD, Australia#</td><td>11-30-8</td><td>Diluire al 2,5% di glutaraldeide il giorno della fissazione.</td></tr><tr><td>Sodio azide</td><td>Chem-Supply Pty Ltd, SA, Australia</td><td>SL189</td><td>Crea il 10% (p/v) di stock in 0,1 milioni di MT-PBS. Utilizzare allo 0,03% (v/v).</td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Chem-Supply Pty Ltd, SA, Australia</td><td>SA030</td><td>Utilizzare al 30% (p/v).</td></tr><tr><td>Temperatura di taglio ottimale (OCT) medio</td><td>Sakura Finetek, CA, USA</td><td>#4583</td><td></td></tr><tr><td>Siero d'asino normale</td><td>Merck Millipore, MA, USA</td><td>#S30-100</td><td>Utilizzare come diluente anticorpale al 10% (v/v) o altra concentrazione determinata dal proprio laboratorio.</td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Sigma Aldrich, MI, USA</td><td>#90o2-31-1</td><td>Uso in diluente anticorpale allo 0,3% (v/v) o altra concentrazione determinata dal proprio laboratorio.</td></tr><tr><td>proteina precursore dell'amiloide di coniglio (APP)</td><td>Invitrogen (Life Technologies), CA, USA</td><td>S12700</td><td>Utilizzato in 1:400 o titolato nel proprio laboratorio.</td></tr><tr><td>proteina-1 associata alla anti-contactina di coniglio (Caspr)</td><td>Dono del Prof. Elior Peles, Wiezmann Institute of Science, Israele</td><td></td><td>Utilizzato a 1:500 o titolato nel proprio laboratorio.</td></tr><tr><td>Appropriati Alexa Fluor coniugati anticorpi secondari</td><td>Molecular Probes (Life Technologies), OR, USA</td><td>Vari</td><td>usi a 1:200 o titolare nel proprio laboratorio. La scelta della specie in cui è stato allevato l'anticorpo e di Alexa Fluor è a discrezione di ciascun laboratorio.</td></tr><tr><td>Soluzione di montaggio acquosa</td><td>Dako (Agilent), CA, USA</td><td></td>#S3023 <td>Ogni laboratorio avrà le proprie preferenze.</td></tr><tr><td>Name</td><td>Azienda</td><td>Numero catalogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.5 mL siringa con aghi da 301/2 g</td><td>BD</td><td>#326105</td><td></td></tr><tr><td>aghi da 23 g</td><td>BD</td><td>#305143</td><td></td></tr><tr><td>Tampone</td><td></td><td></td> di inchiostro rosso <td>Qualsiasi tampone di inchiostro rosso o colorante alimentare rosso può essere utilizzato per segnare le zampe degli animali.</td></tr><tr><td>Apparato DigiGate (include tapis roulant)</td><td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema di imaging DigiGate</td><td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cronometro</td><td></td><td></td><td>È possibile utilizzare qualsiasi timer.</td></tr><tr><td>DigiGait 8 Software</td><td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Zeiss</td><td></td><td>È possibile utilizzare qualsiasi microscopio da dissezione appropriato.</td></tr><tr><td>Vetrini caricati</td><td>Superfrost Plus, Lomb Scientific Pty Ltd</td><td>SF41296SP</td><td></td></tr><tr><td>Cyrostat</td><td>Leica</td><td></td><td>È possibile utilizzare qualsiasi cirostato adatto.</td></tr><tr><td>Attrezzature per la perfusione e strumenti</td><td></td><td></td> di dissezione <td>I laboratori avranno i propri protoctoli di perfusione.</td></tr><tr>I laboratori in camera <td></td><td></td><td>umificata opaca</td><td>possono produrne una propria utilizzando un contenitore di plastica opaca.</td></tr><tr><td>PAP pene</td><td>GeneTex (USA)</td><td></td><td>La matita di cera o la tensione superficiale possono anche essere utilizzate per creare un pozzo intorno alla sezione del tessuto.</td></tr><tr><td>Microscopio confocale</td><td>Zeis LSM780</td><td></td><td>È possibile utilizzare qualsiasi microscopio confocale con linee laser appropriate.</td></tr><tr><td>FIJI/Image J</td><td>Istituti Nazionali di Sanità</td><td></td><td>Disponibile dal www.fiji.sc</td></tr></tbody></table>

un approccio semplice per indurre la neurite autoimmune sperimentale in topi c57bl/6 per le valutazioni funzionali e neuropathological

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Neurite autoimmune sperimentale (EAN) è un modello sperimentale ben apprezzato delle malattie demielinizzanti periferiche autoimmuni. Malattia EAN è indotto immunizzando topi con peptidi neurogeni di dirigere un attacco infiammatorio verso componenti del sistema nervoso periferico (PNS). Gli avanzamenti recenti hanno permesso l'induzione di EAN nella linea di mouse C57BL/6 relativamente resistente usando la proteina del myelin zero (P0)106-125 o peptidi180-199 P0 consegnati in adiuvante combinato con l'iniezione di tossina della pertosse. La capacità di indurre EAN nel ceppo C57BL/6 consente l'utilizzo di numerosi strumenti genetici che esiste su questo sfondo del mouse e permette così sofisticato studio della patogenesi della malattia e interrogatorio dell'azione meccanicistico di approcci terapeutici in combinazione con approcci transgenici. In questo studio, dimostriamo un approccio semplice per indurre correttamente EAN utilizzando il peptide di180-199 P0 in topi C57BL/6. Abbiamo anche delineare un protocollo per la valutazione dei deficit funzionali che si verificano in questo modello, accompagnato da una serie di caratteristiche neuropathological. Così, questo modello è un potente modello sperimentale per studiare la patogenesi delle neuropatie demielinizzanti periferiche umane e per determinare l'efficacia di potenziali terapie che mirano a promuovere la riparazione della mielina e proteggono da danno del nervo in autoimmune neurite.

Peptide180-199 P0 indotto EAN nei cavi di topi C57BL/6 per una malattia monofase con punteggio clinico inizio dal post di 6 giorni prima immunizzazione (dpi) e massimo punteggio gravità è osservata da 25 dpi seguita da alcuni punteggio clinico miglioramento da 40 dpi durata (Figura 1)4,9. In termini di funzione di andatura, topi cominciano a fallire in una semplice attività in esecuzione pi...

Questo rapporto descrive un approccio semplice per indurre con successo la neurite autoimmune sperimentale (EAN) utilizzando la proteina della mielina zero (P0)180-199 del peptide in combinazione con adiuvante completo di Freund e tossina della pertosse. Vi presentiamo un paradigma sofisticato in grado di valutare con precisione l'entità dei deficit funzionali e neuropatologia che si verificano in questo EAN.

Un approccio semplice per indurre la neurite Autoimmune Sperimentale in topi C57BL/6 per le valutazioni funzionali e Neuropathological

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di indurre con successo la Neurite Autoimmune Sperimentale o EAN in un modello murino per l'analisi funzionale e patologica del processo patologico. Il modello EAN può essere utilizzato per affrontare questioni chiave relative alla neuropatia periferica. È anche un modello meraviglioso per studiare potenzialmente l'efficacia di nuovi agenti terapeutici.Il vantaggio principale di questo approccio è che fornisce un paradigma di test funzionale semplice e oggettivo che può essere applicato quando si utilizza il modello EAN nel mouse. A dimostrare la procedura con me oggi è Sang Won Yoo, che è uno studente universitario nel laboratorio di biologia della neurotrofina e della mielina presso l'Università di Melbourne. Tre giorni prima dell'induzione della malattia, accendere l'apparecchio di valutazione della funzione motoria e accendere il pulsante della luce.Prendi il topo e abbassalo su un contenitore di colorante alimentare rosso. Posiziona il mouse nello scomparto pedonale e imposta la velocità del tapis roulant a 15 centimetri al secondo. Accendere il tapis roulant e fare clic su registra per utilizzare il sistema di imaging della fu

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Il video dimostra l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino iniettando una combinazione di glicoproteine oligodendrocitarie mieliniche e Mycobacterium tuberculosis inattivato. Il modello consente ai ricercatori di studiare i meccanismi della malattia e testare gli interventi terapeutici.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

Questo video mostra il metodo per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) iniettando peptidi derivati dalla mielina con un adiuvante per attivare le cellule T autoreattive, che migrano verso il cervello. La tossina della pertosse viene somministrata per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo a queste cellule T e ad altre cellule immunitarie di entrare nel cervello. Queste cellule immunitarie causano demielinizzazione, portando a una compromissione...

Generazione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

In questo video, un modello murino di sclerosi multipla viene stabilito utilizzando l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE). Al topo viene iniettata un'emulsione contenente un peptide neuronale e un adiuvante, innescando una risposta immunitaria che attiva le cellule T autoreattive. Questo è seguito da un'iniezione di tossina della pertosse (PTX) per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo alle cellule T autoreattive di infiltrarsi nel cervello. Questa...

Questo video dimostra il processo di valutazione della disfunzione motoria in un modello murino attraverso la somministrazione della tossina della pertosse e di un inoculo contenente peptidi e adiuvanti che imitano la mielina, seguiti da test su tapis roulant per valutare la funzione motoria e valutare il danno nervoso risultante dovuto all'attivazione immunitaria e alla demielinizzazione.

Valutazione della funzione motoria in un modello murino sperimentale di neurite autoimmune

Il trapianto di cellule staminali / progenitrici neurali (NPC) detiene grandi promesse in neurologia rigenerativa. La consegna sistematica di NPC è trasformato in efficace protocollo, bassa invasività, e terapeuticamente molto efficace per fornire cellule staminali nel cervello e nel midollo spinale di roditori e primati non umani affetti da danni infiammatoria cronica sperimentale del sistema nervoso centrale.

Iniezione sistemica di cellule staminali neurali / progenitrici nei topi con EAE cronica

Questo manoscritto descrive i metodi per l'induzione e il punteggio del modello sperimentale di encefalomielite autoimmune (EAE), insieme alla valutazione della distribuzione delle cellule immunitarie e dei livelli di citochine mRNA nei linfonodi, nella milza, nel sangue e nel midollo spinale utilizzando la citometria a flusso e la PCR quantitativa, rispettivamente, in varie fasi della malattia.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale nei topi e valutazione della distribuzione delle malattie-dipendente delle cellule immunitarie in vari tessuti

Questo protocollo descrive come determinare se i trattamenti farmacologici per l'encefalomielite autoimmune sperimentale mostrano protezione del SNC come conseguenza della soppressione dell'infiltrazione delle cellule immunitarie o sono neuroprotettivi durante l'assalto dell'infiltrazione delle cellule immunitarie.

La determinazione di soppressione del sistema immunitario contro il sistema nervoso centrale di protezione per farmacologici Interventi a demielinizzazione autoimmune

Mostriamo una tecnica per bioluminescenza vivo in vivo e vicino infrarosso per immagini di neurite ottica ed encefalite nel modello di encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) per la sclerosi multipla in topi SJL / J.

Bioluminescenza e vicino infrarosso Imaging di neurite ottica e cervello infiammazione nel modello EAE della sclerosi multipla nei topi

Qui, presentiamo protocolli per studiare danno dell'unità neurovascolare durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale in vivo. Ci rivolgiamo in particolare come determinare la permeabilità della barriera emato - encefalica e attività della gelatinasi coinvolti nella migrazione dei leucociti attraverso la limitans glia.

Visualizzazione di danno delle barriere endoteliali e gliali dell'unità neurovascolare durante l'encefalomielite Autoimmune Sperimentale In Vivo

Il presente protocollo descrive l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino utilizzando glicoproteina oligodendrocitaria mielinica e monitorando il processo della malattia utilizzando un sistema di punteggio clinico. I sintomi sperimentali correlati all'encefalomielite autoimmune vengono analizzati utilizzando l'analisi della tomografia microcomputerizzata del femore di topo e il test in campo aperto per valutare il processo della malattia in modo completo.

Induzione e diversi indicatori di valutazione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale

Per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale, un modello animale di sclerosi multipla, i topi vengono immunizzati con un'emulsione acqua-in-olio contenente un autoantigene e un adiuvante completo di Freund. Mentre esistono diversi protocolli per la preparazione di queste emulsioni, qui viene presentato un protocollo di omogeneizzazione rapido, semplice e standardizzato per la preparazione dell'emulsione.

Un metodo di omogeneizzazione rapido, semplice e standardizzato per preparare emulsioni antigene/adiuvanti per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Scopri come indurre la neurite autoimmune sperimentale in topi C57BL/6 per analisi funzionali e neuropatologiche. Questo protocollo permette di studiare la neuropatia periferica e valutare nuovi trattamenti terapeutici.

Un approccio semplice per indurre la neurite Autoimmune Sperimentale in topi C57BL/6 per le valutazioni funzionali e Neuropathological (Video) | JoVE Journal

Un approccio semplice per indurre la neurite Autoimmune Sperimentale in topi C57BL/6 per le valutazioni funzionali e Neuropathological

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