Name: Metodi per analizzare gli impatti di uranio naturale il Osteoclastogenesis In Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: Scopri i metodi per analizzare gli effetti dell'uranio naturale sull'osteoclastogenesi in vitro utilizzando cellule RAW 264.7. Questa tecnica consente di studiare la viabilità cellulare e la funzione ossea.

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Gli autori vorrei ringraziare Chantal Cros per assistenza tecnica disponibile. Questa ricerca è stata finanziata da sovvenzioni dal "Commissariat à l'Energie Atomique et aux energie alternative" (URANOs - programma trasversale de Toxicologie du CEA e CPRR CEA-AREVA) e da ANR (tossicità di uranio: approccio multi-livello di biomineralizzazione elaborare in osso, ANR-16-CE34-0003). Questo lavoro è stato sostenuto anche dall'Università di Nizza Sophia-Antipolis e il CNRS.

<ol><li>Keith, S., Faroon, O., Roney, N., Scinicariello, F., Wilbur, S., Ingerman, L., et al. Toxicological profile for uranium. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKeith%2C+S+%22Agency+for+Toxic+Substances+and+Disease+Registry%22">Agency for Toxic Substances and Disease Registry</a>. , Atlanta, GA. (2013).</li>
<li>Ballou, J. E., Gies, R. A., Case, A. C., Haggard, D. L., Buschbom, R. L., Ryan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deposition+and+early+disposition+of+inhaled+233UO2%28NO3%292+and+232UO2%28NO3%292+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Phys%22%5BJournal%5D)">Deposition and early disposition of inhaled 233UO2(NO3)2 and 232UO2(NO3)2 in the rat.</a> Health Phys. 51 (6), 755-771 (1986).</li>
<li>Kathren, R. L., McInroy, J. F., Moore, R. H., Dietert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uranium+in+the+tissues+of+an+occupationally+exposed+individual%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Phys%22%5BJournal%5D)">Uranium in the tissues of an occupationally exposed individual.</a> Health Phys. 57 (1), 17-21 (1989).</li>
<li>Kurttio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+effects+of+uranium+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Renal effects of uranium in drinking water.</a> Environ.Health Perspect. 110 (4), 337-342 (2002).</li>
<li>Leggett, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basis+for+the+ICRP%27s+age-specific+biokinetic+model+for+uranium%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Phys%22%5BJournal%5D)">Basis for the ICRP's age-specific biokinetic model for uranium.</a> Health Phys. 67 (6), 589-610 (1994).</li>
<li>Vidaud, C., Bourgeois, D., Meyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+as+target+organ+for+metals%3A+the+case+of+f-elements%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Bone as target organ for metals: the case of f-elements.</a> Chem. Res. Toxicol. 25 (6), 1161-1175 (2012).</li>
<li>Arzuaga, X., Gehlhaus, M., Strong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modes+of+action+associated+with+uranium+induced+adverse+effects+in+bone+function+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Modes of action associated with uranium induced adverse effects in bone function and development.</a> Toxicol. Lett. 236 (2), 123-130 (2015).</li>
<li>Ikeda, K., Takeshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+osteoclast+differentiation+and+function+in+skeletal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biochem%22%5BJournal%5D)">The role of osteoclast differentiation and function in skeletal homeostasis.</a> J. Biochem. 159 (1), 1-8 (2016).</li>
<li>Teiltelbaum, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteoclast+and+its+unique+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The osteoclast and its unique cytoskeleton.</a> Ann N Y Acad Sci. 1240, 14-17 (2011).</li>
<li>Nesbitt, S. A., Horton, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trafficking+of+matrix+collagens+through+bone-resorbing+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Trafficking of matrix collagens through bone-resorbing osteoclasts.</a> Science. 276 (5310), 266-269 (1997).</li>
<li>Salo, J., Lehenkari, P., Mulari, M., Metsikko, K., Vaananen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+osteoclast+bone+resorption+products+by+transcytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Removal of osteoclast bone resorption products by transcytosis.</a> Science. 276 (5310), 270-273 (1997).</li>
<li>Pierrefite-Carle, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+natural+uranium+on+the+UMR-106+osteoblastic+cell+line%3A+impairment+of+the+autophagic+process+as+an+underlying+mechanism+of+uranium+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Effect of natural uranium on the UMR-106 osteoblastic cell line: impairment of the autophagic process as an underlying mechanism of uranium toxicity.</a> Arch. Toxicol. 91 (4), 1903-1914 (2017).</li>
<li>Ubios, A. M., Guglielmotti, M. B., Steimetz, T., Cabrini, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uranium+inhibits+bone+formation+in+physiologic+alveolar+bone+modeling+and+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Res%22%5BJournal%5D)">Uranium inhibits bone formation in physiologic alveolar bone modeling and remodeling.</a> Environ. Res. 54 (1), 17-23 (1991).</li>
<li>Bozal, C. B., Martinez, A. B., Cabrini, R. L., Ubios, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ethane-1-+hydroxy-1%2C1-bisphosphonate+%28EHBP%29+on+endochondral+ossification+lesions+induced+by+a+lethal+oral+dose+of+uranyl+nitrate%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Effect of ethane-1- hydroxy-1,1-bisphosphonate (EHBP) on endochondral ossification lesions induced by a lethal oral dose of uranyl nitrate.</a> Arch. Toxicol. 79 (8), 475-481 (2005).</li>
<li>Kurttio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+as+a+possible+target+of+chemical+toxicity+of+natural+uranium+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Bone as a possible target of chemical toxicity of natural uranium in drinking water.</a> Environ. Health Perspect. 113 (1), 68-72 (2005).</li>
<li>Collin-Osdoby, P., Osdoby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RANKL-mediated+osteoclast+formation+from+murine+RAW+264.7+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">RANKL-mediated osteoclast formation from murine RAW 264.7 cells.</a> Methods Mol. Biol. 816, 187-202 (2012).</li>
<li>Beranger, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+binding+of+poly%28ADP-Ribose%29+polymerase-1+and+JunD%2FFra2+accounts+for+RANKL-induced+Tcirg1+gene+expression+during+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Miner.+Res%22%5BJournal%5D)">Differential binding of poly(ADP-Ribose) polymerase-1 and JunD/Fra2 accounts for RANKL-induced Tcirg1 gene expression during osteoclastogenesis.</a> J. Bone Miner. Res. 22 (7), 975-983 (2007).</li>
<li>Mirto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+uranium%28VI%29+speciation+for+the+evaluation+of+in+vitro+uranium+cytotoxicity+on+LLC-PK1+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Exp.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Influence of uranium(VI) speciation for the evaluation of in vitro uranium cytotoxicity on LLC-PK1 cells.</a> Hum. Exp. Toxicol. 18 (3), 180-187 (1999).</li>
<li>Carrière, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+uranium+speciation+on+normal+rat+kidney+%28NRK-52E%29+proximal+cell+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Influence of uranium speciation on normal rat kidney (NRK-52E) proximal cell cytotoxicity.</a> Chem. Res. Toxicol. 17 (3), 446-452 (2004).</li>
<li>Milgram, S., Carrière, M., Malaval, L., Gouget, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+accumulation+and+distribution+of+uranium+and+lead+in+osteoblastic+cells+as+a+function+of+their+speciation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Cellular accumulation and distribution of uranium and lead in osteoblastic cells as a function of their speciation.</a> Toxicology. 252 (1-3), 26-32 (2008).</li>
<li>Milgram, S., Carrière, M., Thiebault, C., Malaval, L., Gouget, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+and+phenotypic+effects+of+uranium+and+lead+on+osteoblastic+cells+are+highly+dependent+on+metal+speciation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic and phenotypic effects of uranium and lead on osteoblastic cells are highly dependent on metal speciation.</a> Toxicology. 250 (1), 62-69 (2008).</li>
<li>Studzinski, G. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStudzinski%2C+GP+%22Cell+Growth%2C+Differentiation+and+Senescence+A+Practical+Approach%22">Cell Growth, Differentiation and Senescence A Practical Approach</a>. , Oxford University Press. Oxford. (1999).</li>
<li>Gritsaenko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+uranium+impairs+the+differentiation+and+the+resorbing+function+of+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Natural uranium impairs the differentiation and the resorbing function of osteoclasts.</a> Biochim Biophys Acta. 1861 (4), 715-726 (2017).</li>
<li>Motiur Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation-coupled+osteoclast+differentiation+by+RANKL%3A+Cell+density+as+a+determinant+of+osteoclast+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Proliferation-coupled osteoclast differentiation by RANKL: Cell density as a determinant of osteoclast formation.</a> Bone. 81, 392-399 (2015).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare

Per quanto sappiamo, questa è la prima volta che una procedura dettagliata con l'obiettivo di studiare l'effetto di uranio naturale sull'osso resorbing cellule è descritto. Questo approccio sarà utile per ottenere una migliore comprensione dell'impatto di uranio sulla fisiologia dell'osso e può fornire un interessante nuovo strumento per lo screening dei chelatori di uranio. Inoltre, riteniamo che potrebbe essere applicato il protocollo descritto qui per studiare l'impatto di altri metalli pesanti su osteoclatogenesis.</...

L'uranio è un elemento radioattivo naturale presente nel suolo, aria e acqua; come tale, gli animali e gli esseri umani sono esposti a uranio naturale nelle loro diete. Oltre alle fonti naturali, l'uranio proviene da attività antropiche, che aumenta la sua abbondanza nell'ambiente. Uranio pone rischi sia chimici e radiologici. Tuttavia, poiché l'uranio naturale (che è una miscela isotopica contenente 99,27% 238U e 0,72% 235U 0.006% 234U) ha una debole attività specifica (25.103 Bq.g-1), suoi impatti sulla salute sono attribuiti a sua tossicità chimica.
Qualunque suo percorso di voce (inalazione, ingestione o esposizione cutanea), la maggior parte dell'uranio entra nel corpo è eliminato con le feci e solo una piccola parte raggiunge la circolazione sistemica. Circa il 67% di uranio nel sangue a sua volta viene filtrato dai reni e lascia il corpo nelle urine entro 24 ore1. Il resto è per lo più depositato in reni e le ossa, i due principali organi bersaglio di uranio tossicità2,3,4. Poiché lo scheletro è stato identificato come il luogo primario di uranio a lungo termine conservazione2,3,4,5,6, diversi studi sono stati condotti per esplorare il effetto dell'uranio su osso fisiologia7.
L'osso è un tessuto mineralizzato che è continuamente rinnovato tutta la sua durata. Rimodellamento osseo è un processo complesso che dipende dai tipi di cellula specializzata e consiste principalmente di due fasi: il riassorbimento della matrice vecchia pre-esistente dagli osteoclasti seguita da costruzione de novo dell'osso dall'osteoblasto. Gli osteoclasti sono grandi cellule multinucleare risultanti dalla fusione di cellule progenitrici di origine ematopoietica che migrare verso siti di riassorbimento dove essi attribuiscono alle ossa di8. Loro attaccamento si verifica simultaneamente con una vasta riorganizzazione di loro citoscheletro9. Questa riorganizzazione è necessaria per l'istituzione di un compartimento isolato tra la cella e la superficie dell'osso in cui l'osteoclasto secerne protoni, che porta alla dissoluzione dell'idrossiapatite e proteasi coinvolte nella degradazione della matrice organica. I prodotti di degradazione risultanti sono stimolazione, trasportati attraverso la cella per l'area della membrana di fronte la superficie ossea e secreta, un processo chiamato transcitosi10,11.
I risultati degli studi in vivo e in vitro indicano che l'uranio inibisce la formazione dell'osso e altera il numero e l'attività degli osteoblasti7,12. Al contrario, gli effetti dell'uranio sul riassorbimento dell'osso e gli osteoclasti sono stati scarsamente esplorati. Diversi studi in vivo hanno segnalato un aumento di riassorbimento dell'osso dopo amministrazione del nitrato di uranile in topi o ratti13,14. Inoltre, un'indagine epidemiologica ha suggerito che l'aumento nell'assunzione di uranio nell'acqua da bere ha teso ad essere associato con un aumento nel livello del siero di un marker di riassorbimento osseo in uomini15. Presi insieme, questi risultati hanno condotto alla conclusione che l'uranio, che si accumula nell'osso potrebbe promuovere il riassorbimento dell'osso. Tuttavia, i meccanismi cellulari coinvolti in questo effetto potenziale di uranio rimangano una questione aperta. Per questo motivo, abbiamo deciso di esaminare l'impatto dell'uranio sul comportamento di resorbing cellule ossee.
Qui, descriviamo il protocollo che abbiamo stabilito per caratterizzare e quantificare gli effetti di uranio naturale sulla vitalità di pre- osteoclasti e sulla differenziazione di osteoclasti e attività resorptive. Gli esperimenti descritti nel presente documento sono state fatte con il RAW 264.7 murino trasformato linea cellulare del macrofago, che possono facilmente differenziare in osteoclasti quando coltivate in presenza della citochina RANKL per 4 o 5 giorni, e che è classicamente usato per studiare osteoclasto differenziazione e la funzione16. Le procedure elaborate sono affidabili, dare risultati altamente riproducibili e sono pienamente applicabile al primari osteoclasti. Per tutte queste ragioni, riteniamo che questa metodologia è utile per ottenere una migliore comprensione dei meccanismi molecolari coinvolti nella tossicità di uranio nell'osso. Inoltre, riteniamo che questo approccio potrebbe essere adattato come uno strumento di screening per l'identificazione di nuovo uranio agenti chelanti.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12-604F</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-MEM</td><td>Lonza</td><td>BE12-169F</td><td></td></tr><tr><td>EMEM senza rosso fenolo</td><td>Lonza</td><td>12-668E Acqua</td><td></td></tr><tr><td>per colture cellulari</td><td>Lonza</td><td>BE17-724F</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di penicillina-streptomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Soluzione di L-Glutammina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di Tripano Blu 0,4%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Siero fetale bovino</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30071,03</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione acquosa di bicarbonato di sodio al 7,5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Fosfatasi acida, kit di lekociti (TRAP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>387A</td><td></td></tr><tr><td>Tiazoil, blu, tetrazolio bromuro (MTT), polvere</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5655</td><td></td></tr>, <tr><td>dimetilsolfossido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5879</td><td></td></tr>, <tr><td>alizarina rossa, sale sodico, 1% p/v.</td><td>Alfa Aeros</td><td>42746</td><td></td></tr><tr><td>Piastre per il riassorbimento osseo per osteoassay, piastre a 24 pozzetti</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3987</td><td></td></tr><tr><td>Multiwell Piastre a 24 pozzetti</td><td>Falcon</td><td>353504</td><td></td></tr><tr><td>Flask 75 cm2</td><td>Falcon</td><td>353133</td><td></td></tr><tr><td>Provette coniche in polipropilene 50 ml</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Raschietti per celle 30 cm</td><td>TPP</td><td>90003</td><td></td></tr></tbody></table>

metodi per analizzare gli impatti di uranio naturale il osteoclastogenesis in vitro

Methods for Analyzing the Impacts of Natural Uranium on In Vitro Osteoclastogenesis

L'uranio è stato indicato per interferire con la fisiologia dell'osso ed è ormai assodato che questo metallo si accumula in osso. Tuttavia, piccolo è conosciuto circa l'effetto di uranio naturale sul comportamento delle cellule di osso. In particolare, l'impatto dell'uranio su osteoclasti, le cellule responsabili del riassorbimento della matrice dell'osso, non è documentata. Per studiare questo problema, abbiamo stabilito un nuovo protocollo con acetato di uranile come fonte di uranio naturale e la linea cellulare murina di 264,7 come modello dei precursori degli osteoclasti. Nel presente documento, abbiamo dettagliate tutte le analisi necessarie per test di citotossicità di uranio sui precursori degli osteoclasti e per valutarne l'impatto sul osteoclastogenesis e la resorbing funzione degli osteoclasti maturi. Le condizioni abbiamo sviluppato, in particolare per la preparazione di uranile contenenti terreni di coltura e per la semina di RAW 264.7 celle consentono di ottenere risultati affidabili e altamente riproduttive. Inoltre, abbiamo ottimizzato l'uso di strumenti software per facilitare l'analisi di vari parametri quali la dimensione degli osteoclasti o la percentuale di matrice resorbed.

Macchiatura di fosfatasi acida tartrato-resistente è stata utilizzata per visualizzare gli osteoclasti come grandi cellule viola che hanno 3 o più nuclei. Immagini rappresentative degli osteoclasti ottenuti da 264.7 celle grezze coltivate in presenza di RANKL e ioni uranile sono mostrati nella Figura 1. Cambiamenti nel numero e le dimensioni degli osteoclasti in risposta all'uranio sono facilmente visibili in immagini composite di tutta pozzi e in immagini in...

L'uranio è conosciuto per interessare il metabolismo dell'osso. Qui, presentiamo un protocollo volto a indagare l'effetto dell'esposizione all'uranio naturale sulla vitalità, la differenziazione e la funzione degli osteoclasti, le cellule responsabili di riassorbimento dell'osso.

Metodi per analizzare gli impatti di uranio naturale il Osteoclastogenesis In Vitro

Uranium has been shown to interfere with bone physiology and it is well established that this metal accumulates in bone. However, little is known about ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di studiare gli effetti dell'esposizione naturale all'uranio sulla vitalità, differenziazione e funzione degli osteoclasti. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della tossicità ambientale sull'impatto dell'esposizione all'uranio sulla fisiologia e sul metabolismo osseo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che fornisce un nuovo interessante strumento per lo screening degli originatori di uranio.Quando la coltura cellulare RAW 264.7 ha raggiunto l'85-90% di confluenza, utilizzare un raschietto cellulare per sollevare meccanicamente le cellule dal fondo del pallone di coltura cellulare e trasferire le cellule in una provetta conica sterile da 50 millilitri. Pipettare la soluzione cellulare alcune volte per rompere i grumi e contare la sospensione a cellula singola risultante. Diluire le cellule a una concentrazione di 10 volte al quarto di cellule per millilitro in terreno essenziale minimo alfa modificato, integrato con L-glutammina e siero fetale bovino al 5% e aggiungere un millilitro di cellule per pozzetto a una piastra di coltura cellulare a 24 pozzetti per un'incubazione di sei ore a 37 gradi

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Biologia dello sviluppo

In questo video, descriviamo un saggio di riassorbimento osteoclastico in vitro su piastre di coltura cellulare rivestite di fosfato di calcio coltivate con osteoclasti derivati da cellule mononucleate di sangue periferico umano. Gli osteoclasti formano un caratteristico anello di actina sulla matrice rivestita di fosfato di calcio della piastra di coltura cellulare e degradano la matrice all'interno della regione dell'anello di actina per rilasciare ioni calcio e fosfato, con conseguente...

Saggio del pozzo di riassorbimento: una tecnica in vitro per quantificare l'attività di riassorbimento del calcio degli osteoclasti maturi utilizzando piastre di coltura rivestite di fosfato di calcio

In questo video, dimostriamo l'effetto di diverse concentrazioni di anticorpi anti-c-fms sull'osteoclastogenesi, che è il processo di formazione degli osteoclasti dai progenitori degli osteoclasti.

Effetto dell'anticorpo anti C-fms sull'osteoclastogenesi nelle cellule del midollo osseo di topo in vitro

Gli osteoclasti sono cellule che riassorbono l'osso principale nel corpo. La capacità di isolare osteoclasti in gran numero ha causato notevoli progressi nella comprensione della biologia osteoclasti. In questo protocollo, si descrive un metodo per l'isolamento, la coltivazione e quantificare l'attività degli osteoclasti in vitro.

Osteoclasti derivazione dal midollo osseo di topo

L'acqua di spurgo di produzione (PBW) è stata trattata con nanoparticelle di ossido rameico (CuO-NPs) e la tossicità cellulare è stata valutata in cellule umane in coltura. L'obiettivo di questo protocollo è stato quello di integrare il campione ambientale nativo in un formato di coltura cellulare che valuti i cambiamenti di tossicità dovuti al trattamento con CuO-NP.

Rimozione di Oligoelementi per Cupric nanoparticelle di ossido di uranio da<em&gt; In Situ</em&gt; Recupero Bleed Acqua e il suo effetto sulla vitalità cellulare

Gli osteoclasti sono polykaryons di macrofage specifici del tessuto derivato dal lignaggio dei monociti-macrofage delle cellule staminali ematopoietiche. Questo protocollo descrive come isolare le cellule del midollo osseo in modo da ottenere grandi quantità di osteoclasti riducendo il rischio di incidenti riscontrati nei metodi tradizionali.

Isolamento, purificazione e differenziazione dei precursori dell'osteoclast dal midollo osseo del ratto

Questo protocollo comprende dissezione delle ossa lunghe murine e isolamento del midollo osseo, per generare i macrofagi del midollo osseo e producono gli osteoclasti usando fattore (M-CSF) e attivatore del ricevitore del legante di fattore nucleare Kappa-B (RANKL) di stimolazione della Colonia del macrofago o fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-α) e loro arresto dall'anticorpo anti-c-fms, ricevitore di M-CSF.

Effetto dell'anticorpo Anti-c-fms sulla formazione degli osteoclasti e la proliferazione dei precursori degli osteoclasti In Vitro

Questo protocollo presenta un saggio di assorbimento di aminoacidi radiomarcato, utile per valutare il consumo di aminoacidi sia nelle cellule primarie che nelle ossa isolate.

Valutazione del consumo di aminoacidi in cellule ossee in coltura e alberi ossei isolati

Il saggio del flusso metabolico cellulare in tempo reale misura il tasso di consumo di ossigeno e il tasso di acidificazione extracellulare, che corrisponde alla produzione di adenosina trifosfato mitocondriale e glicolitica, utilizzando sensori di pH e ossigeno. Il manoscritto spiega un metodo per comprendere lo stato energetico degli osteoblasti e la caratterizzazione e l'interpretazione dello stato bioenergetico cellulare.

Utilizzo dell'analizzatore di flusso metabolico cellulare in tempo reale per monitorare la bioenergetica degli osteoblasti

Qui presentiamo protocolli che offrono una base flessibile e strategica per manipolare viralmente le cellule precursori degli oligodendrociti per sovraesprimere proteine di interesse al fine di interrogare specificamente il loro ruolo negli oligodendrociti attraverso il modello in vitro di mielinizzazione del sistema nervoso centrale.

Produzione e l'uso di Lentivirus a celle selettivamente trasdurre primaria Oligodendrocyte precursore In Vitro Saggi mielinizzazione

Abbiamo stabilito un metodo per incapsulare cellule staminali pluripotenti (cellule PS) in capsule di idrogel di alginato utilizzando un ugello coassiale.  Ciò impedisce alle cellule di aggregarsi eccessivamente e limita lo stress da taglio sperimentato dalle cellule in coltura in sospensione.  La tecnica è applicabile alla produzione di massa di cellule PS e alla ricerca sulla nicchia delle cellule staminali.

Incapsulamento alginato di cellule staminali pluripotenti usando un ugello coassiale

Scopri i metodi per analizzare gli effetti dell'uranio naturale sull'osteoclastogenesi in vitro utilizzando cellule RAW 264.7. Questa tecnica consente di studiare la viabilità cellulare e la funzione ossea.

Metodi per analizzare gli impatti di uranio naturale il Osteoclastogenesis In Vitro

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