Name: Lo spostamento verso lalto: Un semplice e flessibile In Vitro tridimensionale invasione protocollo di analisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Impara l'assay di invasione verticale invertito per quantificare la migrazione cellulare in 3D nel microambiente originale. Questo metodo supporta la ricerca sul cancro e lo screening di agenti farmacologici.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Quest'opera è stata sostenuta dai National Institutes of Health (NIMHD-G12MD007581) attraverso il RCMI-centro per la salute ambientale alla Jackson State University e il dipartimento della difesa, Idea Award 11-1-0205.

Nota: Il presente protocollo è descritto in McArdle et al. 11. un diario è fornito nella Figura 1.
1. preparazione della piastra di coltura
<ol><li>Lavare il piatto 35mm cultura che contiene un fondo di vetro 10 mm con 1 mL di 1 M di acido cloridrico (HCl) per 15 min abbassare l'idrofobicità del fondo di vetro.</li>
	<li>Lavare la piastra di coltura due volte con 1 mL di soluzione salina tampone fosfato (PBS) per sbarazzarsi di tutti l'HCl.</li>
	<li>Lavare la piastra di coltura due volte con 1 mL di etanolo al 70%.</li>
	<li>Sciacquare la piastra di coltura con 1 mL di terreno di coltura specifico delle cellule (qui, uso α-MEM completati con 10% calore inattivato FBS e 1% non essenziali aminoacidi). Nota: La piastra di coltura trattata contenente il terreno di coltura possa essere memorizzata nell'incubatore CO2 con un umidificatore a 37 ° C fino al giorno successivo.</li>
	<li>Crescere le cellule (MSCs e MCF-7 co-cultura) nel fondo di vetro trattato bene di piastra di coltura 35mm al confluency di 100%. Co-coltura 35.000 cellule MSC e 75.000 delle cellule MCF7 per 24 h.</li>
</ol>2. preparazione del gel collagene
<ol><li>Conservare le punte di una micropipetta utilizzate per pipettaggio il gel di collagene nel congelatore per prevenire la polimerizzazione del collagene al contatto. Nota: Questo è il punto più critico.</li>
	<li>Determinare un volume collagene coda di ratto io per essere utilizzato sulla base della concentrazione dello stock del collagene. Preparare 100 µ l di gel di collagene per questo test. Nota: Alta concentrazione di collagene di coda di ratto che Stock funziona meglio. Determinare il volume di 10 x supporto per volta Eagle di Dulbecco da utilizzare per diluire il collagene conseguenza.</li>
	<li>Combinare il collagene della coda del ratto ghiaccio I (3,8 µ g/mL di brodo), la media per volta Eagle di 10 x Dulbecco e 1 mezzo di coltura cellulare x completati con 2% di siero bovino fetale e il chemoattractant appropriato a una concentrazione finale di collagene di 2,4 mg/mL.</li>
	<li>Aggiungere il miscela 4,5% di soluzione di bicarbonato di sodio per neutralizzare il gel di collagene. Nota: Il volume di soluzione di bicarbonato di sodio aggiunto varia in base al pH esatto di altri reagenti. Si consiglia di testare la miscela con strisce di pH per assicurare la soluzione neutra, o utilizzare un indicatore di pH nel terreno di coltura.</li>
	<li>Laici 80 µ l di miscela di collagene sopra le cellule all'interno il fondo di vetro ben della piastra di coltura.</li>
	<li>Lasciare che il gel di collagene polimerizzare per 30 min in un incubatore a CO2 con un umidificatore a 37 ° C.</li>
	<li>Coprire il gel di collagene con 2 mL di medium di cellulare con riduttori del siero (2%) e incubare le cellule a 37 ° C in un incubatore a CO2 con un umidificatore per 24, 48 o 72 ore. Attenzione: La piastra deve essere maneggiata con cura per evitare che il gel di collagene da distaccarsi dal fondo di vetro.</li>
</ol>3. esempio di preparazione di collagene gel utilizzando uno stock di collagene coda di ratto di 3,8 µ g/ml
<ol><li>Su ghiaccio, combinare 114,5 µ l collagene coda di ratto, 16,6 µ l di 10 x DMEM e 33.1 µ l di terreno di coltura contenente il chemoattractant.</li>
	<li>Neutralizzare la miscela di collagene con 14.0 µ l di bicarbonato di sodio.</li>
	<li>Continuare come al punto 2.5.</li>
</ol>4. imaging delle cellule
<ol><li>Rimuovere delicatamente il supporto del piatto.</li>
	<li>Sciacquare delicatamente il gel con 1 mL di PBS.</li>
	<li>Fissare le cellule con 1 mL di paraformaldeide al 4% per 15 min.</li>
	<li>Lavare le cellule due volte con 1 mL di PBS.</li>
	<li>Macchia le celle con soluzione DAPI (100 ng/mL) per 20 minuti a temperatura ambiente.</li>
	<li>Immagine delle celle utilizzando un microscopio confocale in luoghi diversi e prendere 400 µm dello stack z immagini di ogni posizione di 16 µm. Il microscopio utilizzato ha un unità che permette l'imaging confocale utilizzando una luce bianca, la sorgente di eccitazione di arco di scansione del disco. Utilizzare una lente X 20 utilizzata con apertura numerica di 0,75.</li>
	<li>Ricostituire le immagini.<ol>
<li>Aprire le immagini per un determinato gel (circa 25 immagini) e creare una serie di immagini facendo clic su immagine → pile → immagini di stack. La prima immagine corrispondeva alla parte inferiore del gel (z = 0 µm), la seconda immagine corrispondeva al primo passo nella direzione z (z = 16 µm), la terza immagine corrispondeva al secondo passaggio nella direzione z (z = 32 µm). Valutare ogni nucleo ad ogni profondità di immagine e designare la profondità alla quale il nucleo era a fuoco più nitida come la profondità di invasione per quella determinata cella.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Friedl, P., Brocker, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+cell+locomotion+within+three-dimensional+extracellular+matric%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The biology of cell locomotion within three-dimensional extracellular matric.</a> Cell Mol Life Sci. 57, 41-64 (2000).</li>
<li>Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+architecture%3A+the+ultimate+regulator+of+breast+epithelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function.</a> Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).</li>
<li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3, 362-374 (2003).</li>
<li>Yarrow, J. C., Perlman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing%2C+a+comparison+of+image-based+readout+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparison of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21(2004).</li>
<li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensation+mechanism+in+tumor+cell+migration%3A+mesenchymal-amoeboid+transition+after+blocking+of+pericellular+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Compensation mechanism in tumor cell migration: mesenchymal-amoeboid transition after blocking of pericellular proteolysis.</a> J Cell Biol. 160, 267-277 (2003).</li>
<li>Sahai, E., Marshall, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differing+modes+of+tumour+cell+invasion+have+distinct+requirements+for+Rho%2FROCK+signalling+and+extracellular+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Differing modes of tumour cell invasion have distinct requirements for Rho/ROCK signalling and extracellular proteolysis.</a> Nat Cell Biol. 5, 711-719 (2003).</li>
<li>Kam, Y., Guess, C., Estrada, L., Weidow, B., Quaranta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+circular+invasion+assay+mimics+in+vivo+invasive+behavior+of+cancer+cell+lines+and+distinguishes+single-cell+motility+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A novel circular invasion assay mimics in vivo invasive behavior of cancer cell lines and distinguishes single-cell motility in vitro.</a> BMC Cancer. 8, 198(2008).</li>
<li>Staton, C. A., Reed, M. W., Brown, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+analysis+of+current+in+vitro+and+in+vivo+angiogenesis+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">A critical analysis of current in vitro and in vivo angiogenesis assays.</a> Int J Exp Pathol. 90, 195-221 (2009).</li>
<li>Poujade, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+migration+of+an+epithelial+monolayer+in+response+to+a+model+wound%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Collective migration of an epithelial monolayer in response to a model wound.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 104, 15988-15993 (2007).</li>
<li>Noubissi, F. K., Harkness, T., Alexander, C. M., Ogle, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis-induced+cancer+cell+fusion%3A+a+mechanism+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Apoptosis-induced cancer cell fusion: a mechanism of breast cancer metastasis.</a> FASEB J. 29, 4036-4045 (2015).</li>
<li>McArdle, T. J., Ogle, B. M., Noubissi, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+In+Vitro+Inverted+Vertical+Invasion+Assay+to+Avoid+Manipulation+of+Rare+or+Sensitive+Cell+Types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer%22%5BJournal%5D)">An In Vitro Inverted Vertical Invasion Assay to Avoid Manipulation of Rare or Sensitive Cell Types.</a> J Cancer. 7, 2333-2340 (2016).</li>
<li>Noubissi, F. K., Ogle, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Cell+Fusion%3A+Mechanisms+Slowly+Unravel%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cancer Cell Fusion: Mechanisms Slowly Unravel.</a> Int J Mol Sci. 17, (2016).</li>
<li>Meyvantsson, I., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+models+in+microfluidic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Cell culture models in microfluidic systems.</a> Annu Rev Anal Chem. 1, 423-449 (2008).</li>
<li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell+migration+in+three+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+In+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods In Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li>
<li>Yang, C., Tibbitt, M. W., Basta, L., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+memory+and+dosing+influence+stem+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanical memory and dosing influence stem cell fate.</a> Nat Materials. 13, 645-652 (2014).</li>
</ol>

Gli autori hanno dichiarato che nessun interesse concorrenti esiste.

Qui, descriviamo un'analisi semplice di invasione verticale invertito che è conveniente per una varietà di tipi di cellule, compreso le cellule che sono rare e/o dipendente da loro microambiente. In questa analisi 3D di invasione, le cellule rimangono nel loro microambiente originale e sono coperti dal gel di collagene che contiene un fattore chemiotattico. Le cellule quindi migrano e invadono nel collagene. In questa analisi, le cellule possono essere macchiate e facilmente monitorate all'interno il gel. La semplicità e...

Motilità cellulare è un processo fisiologico e dello sviluppo normale delle cellule. Tuttavia, i cambiamenti nel modello e la capacità delle cellule di migrare e invadere sono associati con patologie tra cui malattie infiammatorie e cancro metastasi1,2,3. Metastasi è senza dubbio l'aspetto più mal capito nel cancro. Per riprodurrsi per metastasi, le cellule tumorali devono degradare la matrice extracellulare (ECM), invadere il tessuto locale e intravasate. Una volta in circolazione, le cellule tumorali si diffonderanno al sito distante, MPEG e formare tumori secondari. Di conseguenza, la capacità delle cellule di degradare la ECM, migrare e invadere è relativo al loro potenziale metastatico. Diversi approcci sono stati sviluppati per analizzare e quantificare le funzionalità di migrazione e invasione delle cellule. Gli approcci più utilizzati comprendono la cicatrizzazione di dosaggio, time-lapse microscopia e analisi dell'alloggiamento di Boyden. La ferita guarigione dosaggio4 e tempo lapse microscopia sono analisi semplice e conveniente che vi darà luce preliminare nella migrazione cellulare. Tuttavia, entrambi sono le analisi 2D che non riflettono l'ambiente 3D in cui le cellule si trovano in vivo. Gli studi hanno indicato che le cellule rispondono in modo diverso in un ambiente 3D rispetto ad un 2D si5,6. Inoltre, saggi di guarigione della ferita sono difficili da riprodurre e a produrre risultati quantitativi7,8,9. Analisi della zona di esclusione di cella, che è una modifica 3D della ferita guarigione saggio, è un test più fisiologicamente rilevanti, ma non è adatto per le celle in basse in numero, ad esempio cellule ibride derivanti dalla cella fusione eventi10,11 .
L'analisi della camera di Boyden è un dosaggio di 3-dimensionale che fornisce microambienti rilevanti per gli studi cellulari. Tuttavia, esso richiede le cellule per essere rimosso dal loro microambiente originale e ad essere depositati nella camera superiore del sistema di dosaggio Boyden di migrare e invadere verso il basso verso il chemoattractant contenente il mezzo. Questo approccio 3D non è appropriato nell'analizzare la capacità di migrazione e l'invasione delle cellule vulnerabili a loro microambiente e/o limitata nel numero10,11,12. Un approccio più recente per analizzare l'invasione e la migrazione cellulare è la microfluidica gradiente camera dosaggio13. Anche se adatto e affidabile negli studi di migrazione e invasione, questo dosaggio è più costoso e potrebbe essere tecnicamente difficile per un tipico laboratorio. Descriviamo qui un saggio di semplice invasione verticale invertito che è compatibile con molti tipi di cellule tra cui cellule sensibili alla loro microambiente e/o ristretta nel numero. Questo test è stato adattato dal protocollo proposto da Hooper et al. 14. in questa analisi, le cellule rimangono nella loro microambiente originale e loro migrazione e invasione è monitorato mentre si muovono verso l'alto nel gel collagene contenente un chemoattractant11. Questo test è riproducibile ed è stato ottimizzato e convalidato nella piastra di coltura di 35 mm. Esso potrebbe essere adattato a diverse metodiche tra cui formati di cella diversa cultura, diverse matrici o forza di adesione e chemiotattici differenti. Questo test potrebbe fungere da piattaforma in vitro per lo screening iniziale nel processo di scoperta di farmaci.

<table><tbody><tr><td>MatTek P35G-1.5-10C</td><td>MatTek Corporation, Ashland, MA</td><td>P35G-1.5-10-C</td><td>piatti con fondo in vetro opaco</td></tr><tr><td>Collagene a coda di ratto I</td><td>Corning, Corning, NY, USA</td><td>354236</td><td>Gel di collagene</td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>HCl Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA</td><td>10010023</td><td>Pbs</td></tr><tr><td>10X Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA</td><td>D2429</td><td>10X DMEM</td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA</td><td>S5761</td><td>NaHCO3</td></tr><tr><td>Confocal Microscopio</td> fluorescente <td>Olympus America, Center Valley, PA, USA</td><td>Microscopio confocale</td><td>Olympus IX81</td></tr><tr><td>Siero</td> <td>bovino fetale definitoGE Healthcare Life Sciences HyClone Laboratories, Utah, USA</td><td>SH30070.03</td><td>FBS</td></tr><tr><td>Ti:Sapphire microscopio a scansione laser multi-fotone</td><td>Prarie Technologies, Sioux Falls, SD, USA</td><td>40x NA 0.8 obiettivo</td><td>MPLSM</td></tr><tr><td>Software Imaris</td><td>Bitplane Inc. Zurigo, CH</td><td>Imaris 7.5.2</td><td>Software Imaris</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA</td><td>50980487</td><td>PFA</td></tr><tr><td>&alpha;-medium essenziale minimo</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA</td><td>M0894</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>ATCC; Manassas, VA, USA</td><td>HBT-22</td><td></td></tr><tr><td>MSC</td><td>Trivedi e Hematti, 2007</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Obiettivo 20X UPLAPO</td><td>Olympus America, Center Valley, PA, USA</td><td>36-064</td><td>Obiettivo Olympus UPLSAPO 20X</td></tr></tbody></table>

lo spostamento verso l'alto: un semplice e flessibile in vitro tridimensionale invasione protocollo di analisi

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Sebbene siano state sviluppate le analisi 3D invasione, la sfida rimane per studiare le cellule senza intaccare l'integrità del loro microambiente. 3D tradizionali dosaggi come la camera di Boyden richiedono che le cellule vengono spostate dalla posizione originale cultura e spostate in un nuovo ambiente. Non solo fa questo interferire con i processi cellulari che sono intrinsechi al microambiente, ma spesso risulta in una perdita di cellule. Questi problemi sono particolarmente impegnativi, quando si tratta di cellule che sono rari, o estremamente sensibili alla loro microambiente. Qui, descriviamo lo sviluppo di un saggio di invasione 3D che evita entrambi preoccupazioni. In questo saggio, cellule sono placcate bene all'interno di una piccola e una matrice di ECM contenente un chemoattractant è disposto in cima le cellule. Ciò non richiede alcun spostamento di cella e permette alle cellule di invadere verso l'alto nella matrice. In questa analisi, l'invasione delle cellule, come pure la morfologia delle cellule può essere valutata all'interno del gel di collagene. Usando questa analisi, ci caratterizzano la capacità invasiva delle cellule rare e sensibile; le cellule di ibrido risultante dalla fusione tra cellule di cancro al seno MCF7 e mesenchimali/multipotenti staminali/stroma cellule (MSCs).

Abbiamo usato una piastra di coltura di 35mm con un vetro inferiore e ratto coda collagene I a sviluppare e ottimizzare un'invasione in vitro 3D analisi di protocollo. Usando questa analisi, abbiamo ha mostrato quel seno cancro cellule MCF7 e MSC cellule potrebbero invadere in gel di collagene per una distanza media di 0,04 ± 1,8 µm e 41,3 ± 76,0 µm rispettivamente dopo 48 h quando IGF1 (18,6 ng/mL) è stato usato come chemoattractant (Figura 2). Anco...

Questo protocollo descrive un'analisi di invasione verticale invertito che potrebbe essere utilizzata per quantificare le funzionalità di migrazione e invasione delle cellule in un ambiente tridimensionale, preservando il microambiente cellulare. Questo test è adatto per le cellule rare e/o sensibili.

Lo spostamento verso l'alto: Un semplice e flessibile In Vitro tridimensionale invasione protocollo di analisi

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

L'obiettivo generale di questo test di invasione è quantificare le capacità migratorie e invasive di cellule rare e sensibili in un ambiente 3D senza spostare le cellule dal loro microambiente. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della ricerca sul cancro sulla capacità di invasione di eventi sensibili e orali, come il prodotto di fusione delle cellule tumorali. Il vantaggio principale di questa tecnica è che le cellule vengono analizzate nel loro microambiente originale utilizzando un'impostazione 3D.Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia del cancro perché può essere utilizzata per lo screening di agenti farmacologici in grado di inibire l'invasione e la metastasi delle cellule tumorali. La dimostrazione visiva di questa tecnica è fondamentale. L'aspirazione della temperatura e del pH della miscela di collagene influisce sulla sua polimerizzazione e la manipolazione brusca provoca il distacco del gel.Iniziare trattando una piastra di coltura da 35 millimetri con un pozzetto di fondo in vetro da 10 millimetri con un millilitro di acido cloridrico molare per abbassare l'idrofobicità del vetro. Dopo 15 minuti, lavare la piastra due vo

moving-upwards-simple-flexible-vitro-three-dimensional-invasion-assay

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Questo video dimostra come misurare l'invasione delle cellule attraverso inserti in coltura cellulare utilizzando una metodologia basata fluorescenza.

Un In vitro FluoroBlok Tumore Assay Invasion

Modelli di invasione delle cellule tumorali in tre dimensioni della matrice extracellulare meglio riflettere...

Modellazione e imaging 3-Dimensional Invasion cella Collettiva

Comunemente utilizzati, sono descritti metodi altamente accessibili per l'esame migrazione cellulare e l'invasione in vitro. Il primo metodo è il saggio chiusura della ferita cella che misura la motilità cellulare. Il secondo metodo è il transwell migrazione e invasione test che valuta la chemiotassi e la capacità invasiva delle cellule.

Nella migrazione delle cellule in vitro e saggi Invasion

Questo articolo fornisce metodologie dettagliate per l'utilizzo di tridimensionali (3D) test per quantificare l'invasione delle cellule di cancro al seno. In particolare, discuteremo le procedure necessarie per configurare tali analisi, quantificazione e analisi dei dati, così come i metodi per esaminare la perdita dell'integrità della membrana che si verifica quando le cellule invadono.

Quantificazione del cancro al seno Cellula Invasività Utilizzando una tridimensionale (3D) Modello

L'invasione dei tessuti normali circostanti è una caratteristica distintiva dei tumori maligni. Forniamo qui un semplice saggio semi-automatico su micropiastra dell'invasione in una biomatrice 3D naturale che è stata esemplificata con una serie di modelli di tumori umani avanzati.

Tridimensionale (3D) Tumore Spheroid Invasion Assay

Questo metodo valuta l'invasione delle cellule tumorali dagli sferoidi in una matrice 3D circostante.  Gli sferoidi vengono generati con il metodo della coltura a goccia sospesa e quindi incorporati in una matrice composta da materiali a membrana basale e collagene di tipo I.  L'invasione degli sferoidi viene successivamente monitorata.

Un Cancer Cell Saggio sferoide valutare Invasion in un Ambiente 3D

La transizione da epiteliale a mesenchimale (EMT) consente ai tumori di diventare invasivi. Per studiare l'EMT, viene descritto un modello in vitro basato su cellule staminali neurali (NSC) privo di siero ed enzimi. Questo sistema standardizzato consente la valutazione quantitativa e qualitativa della migrazione cellulare, dell'espressione genica e proteica. Il modello è adatto per la scoperta di farmaci.

Un modello enzima e Neural Stem Cell Culture siero-libero per EMT Investigation Adatto per Drug Discovery

I processi che governano l'invasione della vescica cancro rappresentano opportunità di biomarcatore e sviluppo terapeutico. Qui vi presentiamo un modello di invasione del cancro della vescica che incorpora 3-d cultura di sferoidi di tumore, time-lapse imaging e microscopia confocale. Questa tecnica è utile per definire le caratteristiche del processo invasivo e per lo screening di agenti terapeutici.

Sistema di coltura cellulare 3D per studiare l'invasione e la valutazione terapeutica nel cancro della vescica

L'attuale protocollo descrive un metodo integrato, indagando la migrazione delle cellule tumorali e l'invasione su un'unica piattaforma in tempo reale, fornendo un'opzione facilmente riproducibile e tempo efficiente per studiare la morfologia e la mobilità delle cellule.

Un flusso di lavoro semplice migrazione/invasione utilizzando un Imager di vivere-cella automatizzata

Questo test utilizza cellule staminali embrionali di topo differenziate in corpi embrioidi coltivati in gel di collagene 3D per analizzare i processi biologici che controllano l'angiogenesi germinativa in vitro. La tecnica può essere applicata per testare farmaci, modellare malattie e per studiare geni specifici nel contesto di delezioni embrionalmente letali.

In vitro Saggio tridimensionale di germinazione dell'angiogenesi utilizzando cellule staminali embrionali di topo per la modellazione di malattie vascolari e test farmacologici

L'invasione è un importante fenomeno biologico nello sviluppo e nella progressione del cancro. Questo processo è influenzato dalle cellule non neoplastiche e dai componenti del microambiente tumorale. Lo scopo di questo studio è quello di descrivere un metodo alternativo per analizzare l'invasione delle cellule tumorali in vitro utilizzando colture tridimensionali (3D).

Strategia alternativa per analizzare l'invasione cellulare in vitro di colture 3D

Impara l'assay di invasione verticale invertito per quantificare la migrazione cellulare in 3D nel microambiente originale. Questo metodo supporta la ricerca sul cancro e lo screening di agenti farmacologici.

Lo spostamento verso l'alto: Un semplice e flessibile In Vitro tridimensionale invasione protocollo di analisi

Esplora altri video