Mediante ibridazione In Situ di fluorescenza (pesce) per monitorare lo stato di coesione braccio in prometafase e metafase I Oocytes di Drosophila

L'obiettivo generale di questa procedura è generare sonde FISH e visualizzare lo stato di coesione del braccio meiotico negli ovociti di drosophila durante la prima e la prima metafase. Il vantaggio principale di questa tecnica è che permette di dosare lo stato di coesione del braccio in prometafase e in metafase uno ha arrestato gli ovociti di Drosophila. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della meiosi da drosofila, ad esempio quali condizioni portano a una perdita prematura della coesione del braccio?

Questa tecnica ha il potenziale per ampliare la nostra comprensione dell'effetto dell'età materna nell'uomo, che si verifica, almeno in parte, perché la coesione meiotica si deteriora con l'invecchiamento degli ovociti. Iniziare questo protocollo con la generazione della sonda a braccio per FISH, nonché la dissezione e la fissazione degli ovociti come descritto nel protocollo di testo. Per separare gli ovociti in fase avanzata, aggiungere prima un millilitro di PBSBTX in un piatto di dissezione poco profondo.