Name: Miglioramento di un modello di infarto miocardico porcina cassa chiusa tramite la normalizzazione del tessuto e le procedure di campionamento di sangue (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 1 s
Description: Scopri un protocollo per standardizzare le procedure di campionamento in un modello porcino di infarto miocardico acuto. Questo metodo consente di determinare con precisione le dimensioni dell'infarto e supporta lo sviluppo di nuovi candidati farmaceutici.

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Gli autori desiderano riconoscere Professor Christian Heinis per fornire l'inibitore di FXIIa e del rispettivo controllo. Riconosciamo anche con gratitudine Olgica Beslac, Dr. Daniel Mettler e Kay Nettelbeck dall'unità di chirurgia sperimentale, Dipartimento per la ricerca biomedica, Università di Berna per il supporto tecnico. Celine Guillod e Matthias Rausch dal reparto per diagnostica, interventistica e radiologia pediatrica, ospedale universitario di Berna, Inselspital fornito supporto con le apparecchiature a raggi x e le tecniche. Questo progetto è stato finanziato dalla Swiss National Science Foundation, progetto n. 320030_156193. Vorremmo anche ringraziare il signor Reto Haenni da comunicazione e marketing, ospedale universitario di Berna, Inselspital per il nostro esperimento di registrazione video.

1. gli animali:
Tutti gli animali sono stati trattati secondo le linee guida delle leggi nazionali svizzere. Lo studio è stato approvato dal comitato locale di sperimentazione animale del Cantone di Berna (autorizzazione no. ESSERE 25/16).
Utilizzare grandi maiali bianchi di entrambi i sessi (~ 30 ± 5 kg). Dividere gli animali ciecamente in due gruppi, un gruppo che riceve un inibitore (80 kDa proteasi) biciclico del FXIIa o il trattamento di scelta e l'altro un controllo inattivo.
2. intervento chirurgico (Figura 1)
<ol><li>Anestesia e preparazione dell'animale:
	<ol>
<li>Veloce gli animali per 12 h prima di iniziare l'esperimento.</li>
		<li>Pre-Medicare l'animale con 20 mg/kg ketamina e 2 mg/kg xylazina tramite un'iniezione intramuscolare nel collo, utilizzando una siringa da 10 mL. Registrare il peso dell'animale e sesso.</li>
		<li>Inducono anestesia iniettando 0,5 mg/kg di Midazolam e 0,05 mg/kg Atropin nella vena auricular. Intubare l'animale con un tubo endotracheale.</li>
		<li>Mantenere l'anestesia tramite ventilazione meccanica utilizzando un respiratore (O2/air 1:3, Sevorane 1,5%), un tubo endotracheale di 7-8 mm e di un filtro. Regolare la frazione di ossigeno inspirato (FiO2) al 35% e il volume corrente di 6-10 mL/kg.</li>
		<li>Profondità dell'anestesia è valutato come adeguato in assenza di risposte o motore o autonomiche a naso pizzicamento. Tono di mascella e riflessi palpebrali sono stati controllati continuamente anche targeting tono mascella rilassata e assenza di riflessi palpebrali. Temperatura al cuore è stato continuamente monitorata e manutenzione del normothermia (38-38,5 ° C) è stata assicurata con il riscaldamento passivo (isolare le coperte e bottiglie di calde).</li>
		<li>Sezionare libero, come precedentemente descritto da Koudstaal e suoi passi colleghi 3-1-3-318, arterie carotiche su entrambi i lati e incannulare li con una guaina 7F. Incannulare la vena giugulare di sinistra con una guaina 7F per prelievi del sangue venoso.</li>
		<li>Somministrare una dose bolo di 250 µ g analgesico di fentanil attraverso la linea venosa centrale, seguita da 250 µ g/h come infusione endovenosa continua utilizzando una pompa di infusione. Monitorare la temperatura corporea, frequenza cardiaca e ritmo con un 3-piombo elettrocardiogramma (ECG), pressione venosa centrale e arterioso durante l'intero esperimento.</li>
		<li>Utilizzando tubi di raccolta sangue standard, prelevare i campioni di sangue della linea di base seguenti dalla linea venosa: 5 mL di plasma citratato e 2,9 mL di plasma EDTA nelle rispettive provette. Centrifugare immediatamente a 2.000 x g per 15 min a 4 ° C. Prendere 2,9 mL di sangue in una provetta da siero e lasciar per coagulare per 30 min a temperatura ambiente prima di centrifugazione come descritto sopra.</li>
		<li>Aliquotare 200 µ l di plasma o siero in 500 µ l tubi e memorizzare tutti i campioni a-80 ° C per un'ulteriore analisi.</li>
		<li>Prelevare 0,5 mL di sangue dalla linea arteriosa utilizzando che l'analisi di gas del sangue speciale (BGA) siringhe per misurare BGA utilizzando la macchina BGA secondo le istruzioni del produttore.</li>
		<li>Prelevare 0,5 mL di sangue dalla linea venosa usando una siringa da 2 mL standard e trasferire immediatamente nella cartuccia ACT utilizzando un ago 30g. Inserire la cartuccia riempita la macchina di ACT per misurare il tempo di coagulazione secondo le istruzioni del produttore. Vedere la Figura 2 per intervalli di tempo.</li>
		<li>Somministrare l'eparina 5000 IU sono stati usati insieme nella linea venosa utilizzando una siringa da 2 mL e permettere all'animale di stabilizzare per 20 min prima di iniziare l'esperimento MI.</li>
		<li>Monitor agire ogni 30-45 min, come accennato in 2.1.11. Iniettare per via endovenosa dell'eparina 2500 UI sono stati usati insieme, se l'atto è < 180 s.</li>
	</ol></li>
	<li>Esperimento di infarto miocardico
	<ol>
<li>Utilizzare un equipaggiamento di radioscopia del braccio C standard (programma di angiografia coronaria, angolo 0°, 12 fotogrammi al secondo, ~ 70 kV) - o in alternativa un sistema dedicato di angiografia - per eseguire l'intervento coronario.</li>
		<li>Utilizzare guida fluoroscopica per inserire un catetere pressione (5F, 120 cm) tramite la guaina precedentemente posizionata nell'arteria carotide sinistra. Farlo avanzare nel ventricolo di sinistra. Collegare il catetere pressione a un sistema di acquisizione per registrare la pressione ventricolare sinistra. Il sistema di acquisizione deve calcolare e registrare la frequenza cardiaca, sviluppato continuamente pressione, dP/dt massimo (contrattilità del ventricolo sinistro) e dP/dt minimo (rilassamento del ventricolo sinistro) durante l'intero esperimento. Registrare i valori basali per 10 min.</li>
		<li>Inserire un 6F (100 cm, EB3.75) catetere guida tramite la guaina precedentemente posizionata nell'arteria carotica di destra. Anticipo all'arteria coronaria di sinistra per raggiungere la sinistra arteria coronaria discendente anteriore (LAD) sotto la guida dei raggi x. Iniettare mezzo di contrasto utilizzando una siringa da 20 mL tramite catetere guida per eseguire un'angiografia coronarica della linea di base. Nota: L'iniezione di mezzo di contrasto è stato fatto da pressione manuale ma un sistema di iniettore di alimentazione dedicata potrebbe essere abituato così.</li>
		<li>Valutare la dimensione del ragazzo sul monitor a raggi x per selezionare la dimensione appropriata del catetere intervento coronarico percutaneo (PCI). Utilizzare palloncini PCI con una lunghezza di 15-25 mm e diametri compresi tra 2 e 3,5 mm a seconda delle dimensioni LAD. Assemblare il catetere PCI e guida coronarica (F 014/J, 175 cm). Collegare il catetere PCI con il dispositivo di gonfiaggio pre-riempito con mezzo di contrasto. Nota: Il diametro della lama può essere misurato direttamente su un monitor calibrato utilizzando un righello e la dimensione del palloncino PCI viene quindi selezionata di conseguenza.</li>
		<li>Inserire il sistema assemblato da 2.2.4 nel lume del catetere guida. Far avanzare il filo guida nel ragazzo fino a raggiungere oltre il secondo ramo diagonale del ragazzo.</li>
		<li>Utilizzare la guida fluoroscopica per far avanzare il catetere PCI fino a raggiungere circa la metà del ragazzo. Scegliere il sito di blocco LAD secondo l'anatomia delle coronarie, di solito dopo il secondo, a volte dopo il primo ramo diagonale (Figura 3) al fine di avere simili percentuali della relazione annuale del ventricolo sinistro (LV). Nota: La scelta del sito blocco dipende la lunghezza dei rami diagonali e così la zona di tessuto che viene fornito dal sangue tramite il rispettivo ramo. In caso di un lungo, biforcato primo ramo diagonale il sito blocco sarà solo dopo questo. In caso di un primo ramo diagonale più breve, il blocco è fatto dopo la seconda diagonale.</li>
		<li>Rimuovere il filo guida e quindi aumentare la pressione nel dispositivo di gonfiaggio per 7-10 bar per gonfiare il palloncino del catetere PCI e indurre l'ischemia del miocardio per 1 h. aumentare gradualmente il FiO2 al 50-60% tra i 15 e i 40 min di ischemia. Tenere tidal volume a 6-10 mL/kg. Nota: Questa procedura verrà ridurre l'insorgenza di extrasistoli e diminuire la frequenza delle fibrillazioni ventricolari.</li>
		<li>Record di una sequenza video di s di 5-10 durante l'iniezione di mezzo di contrasto attraverso il catetere guida di avere un angiogramma del palloncino del catetere PCI in vigore solo dopo l'avvio di ischemia; ripetere dopo 10 min di ischemia per verificare l'occlusione completa del ragazzo distale al palloncino del catetere PCI.</li>
		<li>Monitorare l'animale molto attentamente per rilevare e trattare (2.2.10) immediatamente le aritmia cardiache. Extrasystoles generalmente si verificano e aumentare in frequenza (> 3 / min) tra 20 e 40 min dopo induzione di ischemia del miocardio. In questo caso, massaggiare delicatamente il collo su entrambi i lati appena sotto la guancia. Nella maggior parte dei casi questo sarà sufficiente a ristabilire un battito cardiaco regolare, probabilmente dalla stimolazione dei barocettori vagale del nervo situato sull'arteria carotica comune.</li>
		<li>Se aritmie cardiache progredire nella fibrillazione ventricolare, è possibile utilizzare un defibrillatore bifasico esterno, per ristabilire un ritmo sinusale. Applicare 5-10 compressioni toraciche con le pastiglie di defibrillatore immediatamente prima di applicare l'ammortizzatore al fine di riempire i coronaries con sangue ossigenato e quindi shock con 150 J (per gli animali di 30 kg).</li>
		<li>Ripetere se necessario e aumentare l'energia a 175 J dopo lo shock 3rd . Utilizzare impostazioni di energia superiori per gli animali più pesanti.</li>
		<li>Cinque minuti prima della fine del tempo di ischemia ripetere il campionamento di sangue accennato in 2.1.8-2.1.13. Iniettare la sostanza in esame (inibitore FXIIa biciclico o controllare 4 mg/kg, questo farlo ciecamente) per via endovenosa attraverso la linea venosa centrale e flush la linea con 20 mL di soluzione salina.</li>
		<li>Prelevare un campione di plasma citrato (come accennato in 2.1.8 e 2.1.9) 4 min dopo aver iniettato la sostanza in 2.2.12.</li>
		<li>Eseguire un angiogramma (2.2.3) per confermare l'occlusione LAD, poi sgonfiare il palloncino del catetere PCI e rimuovere il catetere dal catetere guida. Confermare l'aspersione del ragazzo distale al luogo di occlusione dall'angiogramma immediatamente dopo la deflazione e la rimozione del palloncino del catetere PCI, 10 min da allora in poi, ogni volta che segni di ischemia del miocardio erano visibili mediante ECG per più di 5 min e immediatamente prima riocclusione del ragazzo.</li>
		<li>Consentire la riperfusione del miocardio ischemico per 2 h. Prelevare campioni di siero e plasma alle 10, 30, 60 e 115 min di riperfusione (2.1.8 e 2.1.9). Monitor BGA a 60 e 115 min (2.1.10).</li>
		<li>Reinserire il catetere PCI insieme con il filo guida esattamente nella stessa posizione come quello usato per l'ischemia. Gonfiare il palloncino del catetere PCI come prima e confermare l'occlusione LAD dall'angiogramma (2.2.3). Rimuovere il catetere pressione dal ventricolo sinistro e interrompere la registrazione.</li>
		<li>Iniettare 100 mL 2% blu di Evans in fosfato tampone salino (PBS, pH 7.4) nella linea venosa centrale. Circa 30 s dopo, quando l'animale intero diventa blu, iniettare 40 mL 20% KCl per eutanasia animale. Morte è stata confermata dall'assenza di segnali ECG e onde di impulso.</li>
	</ol></li>
</ol>3. tecniche di campionamento
<ol><li>
Estrazione, dissezione e campionamento del cuore (Figura 4)
	<ol>
<li>Eseguire uno sternotomy per esporre il cuore. Seguire il protocollo precedentemente descritto da Koudstaal e colleghi, i passaggi da 8-2 e 8-318. Aprite il pericardio durante la verifica per le anomalie, che potrebbero derivare da precedente pericardite ed escludere l'animale da un'ulteriore valutazione.</li>
		<li>Sgonfiare e rimuovere il PCI così come il catetere guida. Asportare il cuore per ulteriori analisi. Tagliare la vena cava e rimuovere il sangue utilizzando una pompa di aspirazione, quindi tagliare tutti i grandi vasi che collega il cuore con il corpo.</li>
		<li>Sciacquare il cuore dentro e fuori con temperatura ambiente salino. Pesare tutto il cuore.</li>
		<li>Entro 30-40 min, tagliare il cuore a fette di circa 3-5 mm dall'apice per l' intersectiones Chordae della valvola mitrale, perpendicolare all'asse lungo con un coltello affilato.</li>
		<li>Fare attenzione a posizionare sempre il cuore nello stesso orientamento con il lato ventrale rivolto verso l'alto al fine di mantenere l'orientamento dei campioni tagliati (Figura 5).</li>
		<li>Fotografare le fette del cuore utilizzando una fotocamera reflex digitale.</li>
		<li>Tagliare via il ventricolo di destra (scartare come non necessario). Fotografare le fette del ventricolo sinistro e pesare tutte le sezioni per il peso totale del ventricolo sinistro.</li>
		<li>Distinguere tra il positivo blu di Evans e tessuto blu di Evans negativo in tutte le sezioni. Sezionare le fette per separare l'ischemico (blu di Evans negativo) dal tessuto non-ischemica (blu di Evans positivo) usando un bisturi.</li>
		<li>Prima di analizzare le sezioni negative blu di Evans (l'area ischemica a rischio, AAR). Pesare tutti loro e metterli tutti in un contenitore di plastica.</li>
		<li>Coprire le fette interamente con soluzione di 100-150 mL (secondo le dimensioni del cuore) Trifenil tetrazolio cloruro (2G TTC, 16G destrano, peso molecolare 48000-90000, in 200 mL di PBS, preparati al momento) così che i pezzi di cuore possono muoversi liberamente all'interno della soluzione. Coprire il contenitore e incubare per 20 min a 37 ° C agitando delicatamente.</li>
		<li>Durante questo il blu di Evans pesare di tempo incubazione a 20 min pezzi positivi (area non a rischio, ANR), prelevare campioni per l'incorporamento del tessuto-Tek (scegliere la parte più distale dall'infortunio) e conservare a-80 ° C per ulteriori analisi. Trasferire il resto in soluzione al 4% di formaldeide e conservare a temperatura ambiente per sezioni di istologia.</li>
		<li>Togliere i pezzi della relazione annuale dalla soluzione TTC. Il tessuto macchiato rosso è praticabile tessuto ischemico (VIT) e il tessuto tinto non è tessuto ischemico necrotico (NIT). Tagliare 2 piccoli pezzi (blocchi di 2-3 mm) da entrambi il NIT e VIT, incorporarli in tessuto - Tek e conservare a-80 ° C per ulteriori analisi. Questi esempi dovrebbero avere lo stesso peso.</li>
		<li>Difficoltà il resto dei pezzi (tutte le sezioni derivate dalla RAA) bloccandoli in un contenitore di polistirolo e coprendo completamente con soluzione di formaldeide 4% per 24 h a temperatura ambiente in una cappa aspirante. I pezzi dovrebbero rimanere piatti per la documentazione fotografica nel passaggio successivo.</li>
		<li>Il giorno successivo fotografare entrambi i lati dei pezzi con una fotocamera ad alta risoluzione con la stessa impostazione di zoom e la distanza dal tessuto (stesso ingrandimento). Aggiungere barre di scala automatica a tutte le immagini. Tutte le barre devono avere la stessa lunghezza. Nota: La fotocamera ad alta risoluzione dovrebbe essere collegata al software che aggiunge automaticamente la barra della scala per ogni foto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Calcolo della relazione annuale di attività e la dimensione di infarto
	<ol>
<li>% AAR del ventricolo sinistro = (peso di AAR in g / peso del ventricolo sinistro in g) * 100.</li>
		<li>Utilizzare software ImageJ per calcolare la superficie totale dell'AAR e NIT (entrambi i lati di ogni pezzo) basato sulle fotografie.</li>
		<li>Regolare la barra della scala selezionando la lunghezza della barra scala utilizzando la linea retta dallo strumento di angolo. Scegliere dal menu Analyze > Imposta scala e inserire la distanza nota e l'unità della barra della scala. Scegliere "globale" in modo che la stessa scala verrà applicata a tutte le immagini.</li>
		<li>Delimitare la zona di tutta la superficie del tessuto utilizzando lo strumento di selezione a mano libera per calcolare AAR. Fare attenzione a non includere il lato (altezza) del tessuto e/o il tessuto adiposo (Figura 6-C).</li>
		<li>Impostare la misura scegliendo "zona" e "visualizzare l'etichetta" da Analyze > menu impostare misure. Misurare l'area della superficie da analizzare > misura.</li>
		<li>Ripetere il passaggio 3.2.5 misura NIT (contrassegno solo il tessuto non colorate). Nota: Non include il tessuto adiposo (Figura 6D) nel calcolo NIT. Ripetere il passaggio sul lato opposto del tessuto.</li>
		<li>Calcolare la media AAR e NIT per ogni pezzo di tessuto.</li>
		<li>Utilizzare i valori ottenuti da 3.2.7 per calcolare il NIT come una percentuale dell'AAR:% NIT di AAR = (Σ superficie media di NIT, cm2/ Σ media superficie di AAR cm2) * 100.</li>
		<li>Due diversi investigatori dovrebbero ripetere il metodo sopra descritto. Il margine di differenza accettabile è < 10%.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Marcatori di ischemia
	<ol>
<li>Utilizzare i campioni di plasma EDTA, che sono stati precedentemente memorizzati a-80 ° C (2.1.9) per misurare il livello di troponina i cardiaca-usando un'analisi di Luminex-tipo singolo-plex come precedentemente descritto in 19.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Pérez de Prado, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed-chest+experimental+porcine+model+of+acute+myocardial+infarction-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).</li>
<li>Lown, B., Levine, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+carotid+sinus.+Clinical+value+of+its+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">The carotid sinus. Clinical value of its stimulation.</a> Circulation. 23, 766-789 (1961).</li>
<li>Regueiro-Purriños, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+Arrhythmias+and+Mortality+Associated+with+Isoflurane+and+Sevoflurane+in+a+Porcine+Model+of+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Ventricular Arrhythmias and Mortality Associated with Isoflurane and Sevoflurane in a Porcine Model of Myocardial Infarction.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2011).</li>
<li>Roberts, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Can+Med+Assoc+J%22%5BJournal%5D)">Evans blue toxicity.</a> Can Med Assoc J. 71, 489-491 (1954).</li>
<li>Ellenbroek, G. H. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Outcome+Assessment+in+a+Pig+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction.</a> J Vis Exp. , e54021(2016).</li>
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Gli autori non dichiarano alcun conflitto di interessi.

Del miocardio mi / R la ferita ha un effetto significativo sulla dimensione finale di infarto che si traduce direttamente in prognosi dei pazienti dopo infarto miocardico acuto3. Comprensione della patofisiologia del miocardio mi / R ferita è il primo passo per ridurre o prevenire che. Del miocardio mi / R ferita è una condizione acuta che si verifica subito dopo riperfusione dei vasi occlusi. Io / lesioni R conduce all'attivazione della risposta immunitaria innata e danno cellulare si verifica ne...

Cardiopatia ischemica, in particolare infarto miocardico (MI), è la principale causa di morte nei paesi sviluppati 1. Oggi, il trattamento standard di MI è intervento coronarico percutaneo (PCI), il trattamento del catetere a palloncino. Uno dei fattori critici che influisce sulla qualità della vita e la prognosi dei pazienti dopo il MI acuto trattati con PCI è la dimensione di infarto. La riduzione delle dimensioni può avere un grande impatto sulla sopravvivenza e prognosi paziente 2. Ischemia/riperfusione miocardica (io / R) lesione ha una notevole influenza sulla dimensione di infarto così uno degli obiettivi principali nella ricerca cardiovascolare è di prevenire o ridurre del miocardio mi / R lesioni 3. I meccanismi esatti di I / lesioni R sono ancora sotto indagine 4. Attivazione della cascata del plasma e cellule endoteliali sono tratti distintivi di I / R lesioni 5. Attivazione del sistema di coagulazione è chiaramente coinvolti 6,7. Recentemente, il ruolo di FXII, come un peptide a Monte presto coinvolto nell'attivazione della fase di contatto della cascata della coagulazione, è stato dimostrato in un FXII k.o. modello del ratto di cerebrale I / R infortunio 8. Convalida di questi risultati in un modello porcino è un passo importante nella traduzione clinica. Di conseguenza, stiamo testando un nuovo inibitore di FXIIa biciclico (80 kDa proteasi) nel contesto del miocardio mi / lesioni R in uno studio pilota.
Modelli animali, che mimano la situazione clinica di trattamenti acuti MI e PCI, sono essenziali per migliorare la nostra comprensione della patofisiologia di miocardio mi / lesioni R e per testare le opzioni di trattamento novello. Suini rappresentano un buon modello animale per clinica del miocardio mi / lesioni R. Questo non è solo perché i loro cuori sono molto simili ai cuori umani per quanto riguarda l'anatomia e la circolazione coronarica, ma mostrano anche risposte fisiopatologiche simili al 9,di ischemia e riperfusione miocardica10. Altri modelli quali ratti e topi non soddisfano questi criteri e mostrano notevoli differenze rispetto ai cuori umani 11,12, mentre ad esempio, i cani hanno molti più vasi coronarici collaterali rispetto agli esseri umani 13.
Il modello di infarto miocardico acuto suina è stato ampiamente usato nella ricerca cardiovascolare per studiare la malattia di cuore ischemica compresa del miocardio mi / R ferita 14,15,16,17. Quest'ultima è una condizione infiammatoria, a causa della quale riducendo al minimo la reazione infiammatoria correlata a sternotomy o toracotomia utilizzato in chirurgia open-petto è essenziale. Il modello di cassa chiusa tramite una regolazione di angiografia clinica C-braccio supera questo problema. Inoltre, uno dei punti più importanti è che il nostro protocollo fornisce un'accurata distinzione tra ischemico (area a rischio, AAR) e aree non-ischemica del ventricolo sinistro (area non a rischio, ANR) in modo che la dimensione di infarto (tessuto ischemico necrotico, NIT) può essere accuratamente determinato. Il nostro obiettivo per questa carta è chiaramente definire una metodologia riproducibile di un porcino del miocardio mi / lesioni R modello, in particolare per quanto riguarda il campionamento del tessuto miocardico, che consentirà una più precisa analisi dei meccanismi molecolari di I / lesioni R e un quadro più chiaro degli effetti di trattamenti farmacologici romanzo.

<table><tbody><tr><td>ABL 90 Flex, analizzatore di gas ematici</td><td></td> <td>Radiometro-Analisi</td> <td>dei gas ematici (BGA)</td></tr><tr><td>ACT Plus</td><td>Medtronic-Tempo</td><td></td> <td>di coagulazione attivato</td></tr><tr><td>Atropin</td> <td>Sintetica-Atropinum</td> <td>Sulfas, 0,5mg/ml</td><td></td></tr> <tr><td>Bilancia (20-500 Kg)</td><td>NAGATA Scale, Tiwan</td><td>HTB/HTR</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Bilancia (21-4200 g)</td><td>Mettler toledo, Svizzera</td><td>MS4002SDR</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Provette per la raccolta del sangue: EDTA, citrato e siero</td><td>S-Monovette, Nuembrecht, Germania</td><td>05.1167.001, 05.1071.001 e 05.1557.001 Possono</td><td>essere utilizzati prodotti alternativi</td></tr><tr><td>BV Pulsera mobile</td><td>Philips-È</td><td></td> <td>possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Labcare, Regno Unito</td><td>ALC PK120R</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Defibrillatore Lifepak 12</td><td>Medtronic-I</td><td></td> <td>prodotti alternativi possono essere utilizzati</td></tr><tr><td>Destrano da Leuconostoc mesenteroides</td><td>Sigma-Aldrich, Germania</td><td>D3759</td><td>Media M.wt 48000-90000</td></tr><tr><td>Fotocamera reflex digitale a obiettivo singolo</td><td>Sony, Thailandia</td><td>DSLR-A500/A550</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Pinze da dissezione</td><td></td><td></td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Catetere per dilatazione EMPIRA RX PCI Cordis</td><td>, Johnson& Johnson, USA</td><td>85R15300S</td><td>Diametro 3 mm, lunghezza 15 mm, È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Catetere per dilatazione EMPIRA RX PCI</td><td>Cordis, Johnson& Johnson, USA</td><td>85R15350S</td><td>Diametro 3,5 mm, lunghezza 15 mm, È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich, Germania</td><td>E2129</td><td>Respiratore</td></tr><tr><td>premium tossico Fabius GS</td><td>Dr&auml; ger, L&uuml; beck,</td> <td>Germania-Stazione</td> <td>di lavoro per anestesia, È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Fentanyl</td><td>Inselspital ISPI-Fentanyl</td><td></td> <td>2500mcg/50ml</td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Pathology Institute, Università di Berna</td><td>SI148701</td><td>Possono essere utilizzati prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Inibitore FXIIa</td><td>Fornito dal laboratorio del Prof. Christian Heinis nell'EPFL</td><td></td><td>Nuovo peptide biciclico</td></tr><tr><td>Galeo, filo guida coronarico</td><td>Biotronik, Germania</td><td>125497</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Catetere di guida</td><td>Boston Scientific, Florida, USA</td><td>34356-06</td><td>6F (100 cm, EB3.75). Prodotti alternativi possono essere utilizzati</td></tr><tr><td>Eparina Sodica</td><td>Drossapharm, Basilea,</td><td></td> <td>Svizzera-Liquemin, 25000 U.I./5 ml</td></tr><tr><td>Elettrochirurgia di fascia alta</td><td>BOWA, Germania</td><td>ARC 400</td><td>Fonte elettrica per l'aspirazione del sangue. È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Filtro respiratorio Hydro-Guardmini</td><td>Intersurgical, Lituania</td><td>1745000</td><td>Filtri</td></tr><tr><td>Immagine J</td><td>National Institute of Health, USA</td><td>1.47v</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Dispositivo di gonfiaggio, Atrion QL2530</td><td>Atrion medical product, Alabama, USA</td><td>96402</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>IntelliVue MP 70</td><td>Philips, Boeblingen,</td> <td>Germany-Monitor</td> <td>(ECG, frequenza cardiaca, pressione sanguigna e temperatura corporea). Possono essere utilizzati prodotti alternativi</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sintetica SA-Cloruro</td><td></td> <td>di potassio 15%</td></tr> <tr><td>ketamina</td><td>vetoquinol-narketan</td><td></td><td>, 1 ml/100 mg</td></tr><tr><td>LR-ACT</td><td>Medtronic</td><td>402-01</td><td>ACT siringhe speciali</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Roche-Dormicum</td><td></td><td>, 5 mg/ml</td></tr><tr><td>Bisturi</td><td></td><td></td> monopolare <td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>È</td><td></td><td></td><td>possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Fotocamera ad alta risoluzione, supporto per imaging macro PathStand per l'imaging grossolano</td><td>, risoluzione HD 1080</td><td></td><td>p. USA. È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Preparazione</td> <td>interna-È</td> <td>possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Cannula venosa periferica, 18 G</td><td></td><td></td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Sistema di acquisizione dati PowerLab 4/35</td><td>Adinstruments, Spechbach,</td><td></td> Germania-Rotamax120T <td></td></tr><tr><td></td><td>Heidolph, Germania</td><td>544-41200-00</td><td>Shaker. L'alternativa può essere utilizzata</td></tr><tr><td>R&uuml; schelit-Super Safety Clear Tube</td><td>Teleflex, Dublino, Irlanda</td><td>112480</td><td>Tubo per vie aeree, è possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Siringhe aspiratore Pico sicure</td><td>Radiometro</td><td>956-622</td><td>Siringhe speciali BGA</td></tr><tr><td>Saline</td><td>Sintetica Bioren-NaCl</td><td></td> <td>0,9%. Prodotti alternativi possono essere utilizzati</td></tr><tr><td>Sevorane 1,5%</td><td>AbbVie</td><td></td> <td>AG-Sevorane 250ml 100%</td></tr><tr><td>Guaina</td><td>Cordis, Johnson& Johnson, USA</td><td>504-607 A</td><td>AVANTI + / 7 F, È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Pompa di infusione spaziale</td><td>B.Braun Medical AG,</td> <td>Germania-Per</td> <td>l'infusione di fentanil. È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>SPR-350 (catetere Millar)</td><td>Adinstruments, Texas, USA</td><td>840-8166</td><td>MIKRO-TIP, 5F, 120 cm</td></tr><tr><td>Sega</td><td></td><td></td> per sternotomia <td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Suture</td><td>ETHICON, Johnson& Johnson, USA</td><td>Y3110H</td><td>Monocryl 3-0 SH-1 Plus. È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Siringhe (20, 10 e 5 mL)</td><td>CODAN,Baar, Svizzera</td><td>62.7602, 62.6616, 62.5607 rispettivamente</td><td>Utilizzato per iniettare materiali anestetici per via intramuscolare o direttamente nella linea venosa centrale. Anche per iniettare eparina o FXIIa o il rispettivo controllo. È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Divaricatore</td><td></td><td></td> toracico <td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Tissue-tek</td><td>SAKURA, Paesi Bassi</td><td>4583</td><td>Composto O.C.T. Pinze</td></tr><tr><td></td><td></td><td>vascolari</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr><tr><td>Xenetix 300 mezzi di contrasto</td><td>Guerbet, Z&uuml; ricco,</td><td></td> <td>Svizzera-Lobitridol, 300 mg di ioduro/ml</td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Vetoquinolo-Xilapan</td><td></td><td>, 20mg/1 ml</td></tr><tr><td>2,3,5-Trifeniltetrazolio coruro</td><td>Sigma-Aldrich, Austria</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu; Tubi L (eppendorf)</td><td>Trefflab, Svizzera</td><td>96.08185.9.03</td><td>È possibile utilizzare prodotti alternativi</td></tr></tbody></table>

miglioramento di un modello di infarto miocardico porcina cassa chiusa tramite la normalizzazione del tessuto e le procedure di campionamento di sangue

Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures

Ischemia del miocardio riperfusione (I / R) lesioni contribuiscono per quasi la metà della zona necrotica dopo infarto miocardico. Fino ad oggi non c'è nessun farmaco approvato per prevenire o ridurre del miocardio mi / lesioni R. Lo studio e la comprensione dei meccanismi fisiopatologici del miocardio I / R la ferita è essenziale sviluppare trattamenti efficaci. Grandi esperimenti sugli animali sono un passo importante in metodi traslazionale. Il modello porcino di infarto miocardico acuto è stato stabilito e descritto da noi stessi e gli altri. Abbiamo mirato a migliorare ulteriormente il valore del modello concentrandosi in particolare sulle tecniche di campionamento per l'utilizzo in futuri esperimenti. Inoltre, diamo risalto a passi piccoli ma importanti che possono influenzare la qualità dei risultati finali. Per simulare la situazione clinica di infarto mi / lesioni R, un catetere di intervento coronarico percutaneo (PCI) è stata inserita l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (ragazzo) di un maiale anestetizzato. ° ° ° Questo modello imita infarto miocardico acuto e trattamento di PCI in esseri umani con la possibilità di determinare con precisione la zona a rischio come pure il necrotico- e tessuto ischemico vitale. Qui il modello è stato usato per studiare l'effetto di un inibitore di peptide biciclico del FXIIa. Il modello può anche essere modificato per consentire tempi di riperfusione studiare gli effetti successivi di infarto miocardico.

Un animale morto prematuramente prima della somministrazione di FXIIa peptide inibitore o di un controllo a causa di un errore tecnico (improvviso calo della pressione sanguigna durante il tempo di ischemia, prima dell'aggiunta della sostanza in esame). Un animale è stato escluso dal gruppo di inibitore di FXIIa perché non di ischemia/riperfusione è stato osservato dovuto l'anatomia anormale dell'arteria discendente anteriore sinistra (ragazzo). Una grande parte del ventricolo sinistro, t...

Qui dimostriamo un protocollo per standardizzare le procedure di campionamento di un modello porcino stabilito di infarto miocardico acuto al fine di aumentarne il valore traslazionale nella comprensione della patofisiologia della lesione del miocardio di ischemia/riperfusione e per testare nuovi farmaci candidati.

Miglioramento di un modello di infarto miocardico porcina cassa chiusa tramite la normalizzazione del tessuto e le procedure di campionamento di sangue

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved ...

L'obiettivo generale di questo modello di infarto miocardico a torace chiuso suino è studiare il danno da riperfusione dell'ischemia miocardica. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella ricerca cardiovascolare, come lo studio della fisiopatologia del danno da riperfusione ischemica nel contesto dell'infarto miocardico acuto. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente una determinazione accurata delle dimensioni dell'infarto e una tecnica di campionamento precisa per ulteriori analisi.Preparare il maiale per l'intervento chirurgico e somministrare gli anestetici come descritto nel protocollo di testo. Iniziare la dissezione liberando le arterie carotidi su entrambi i lati. Incannularli con guaine a 7 francesi.Successivamente, incannulare la vena giugulare sinistra con una guaina a 7 French per il prelievo di sangue venoso. Quindi utilizzare provette standard per la raccolta del sangue per prelevare i campioni di sangue di base dalla linea venosa. Raccogliere cinque e 2,9 millilitri di sangue rispettivamente in provette di raccolta del plasma citrato e EDTA e centrifugare immediatamente a 2.000 g per 15 minuti a quattro gradi Celsius.Successivamente

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Trauma chirurgico induce una risposta infiammatoria. Citochine e ligandi endogeni sono noti per modulare dimensione miocardio a seguito di ischemia e riperfusione. Vi presentiamo una versione modificata del chiuso petto modello di ischemia e di riperfusione murino con pesi appesi per minimizzare gli effetti di toracotomia.

A Murine chiuso del torace modello di ischemia miocardica e riperfusione

Questo protocollo descrive il modello suino infarto del miocardio (MI) con un 90 min-torace chiuso palloncino occlusione coronarica discendente anteriore sinistra (LAD), seguita da riperfusione. Inoltre, il protocollo per diversi parametri di risultato, come la funzione cardiaca, emodinamica, resistenza microvascolare e dimensioni dell'infarto, sono anche presentato.

Infarto miocardico e funzionale Outcome Assessment in Pigs

Viene descritto un modello altamente riproducibile per l'infarto del miocardio nei topi con manipolazioni minimamente invasive. Il modello può essere facilmente eseguito, con conseguente elevata riproducibilità e tasso di sopravvivenza. Pertanto, il modello descritto ridurrà il numero di animali necessari come richiesto dal principio delle 3R (Sostituzione, Perfezionamento e Riduzione).

Minimal procedura chirurgica invasiva di indurre infarto miocardico nei topi

valutazione dei risultati affidabile e preciso è la chiave per la traduzione di terapie pre-clinici in trattamento clinico. Il documento corrente descrive come valutare tre clinicamente rilevanti parametri di outcome primario di performance cardiaca e danni in un modello di infarto miocardico acuto maiale.

La valutazione dell&#39;outcome primario in un modello suino di infarto miocardico acuto

Questo protocollo descrive un nuovo metodo per il confronto 3D del tessuto miocardico con tutto il cuore con la risonanza magnetica. Questo è progettato per la valutazione accurata di iniezioni intramiocardici nella zona infartuata confine di un modello suino cronica di infarto miocardico.

3D Whole-cuore Analisi tessuto miocardico

L'obiettivo generale dello studio attuale è quello di presentare le tecniche di induzione dell'infarto del miocardio (MI) e dell'insufficienza cardiaca da infarto post-miocardico (post-MI HF) nei minipig di Gottinga chiusi e adulti e la caratterizzazione del modello HF post-MI nei minipig di Gottinga rispetto ai maiali Landrace.

Infarto post-miocardico Insufficienza cardiaca in occlusione coronarica a torace chiuso/ modello di riperfusione nei minipig di Gottinga e nei maiali Landrace

Qui, presentiamo un protocollo per ottenere immagini di micro tomografia computerizzata ad alta risoluzione di cuori interi di mammiferi sani e patologici con miglioramento del contrasto selettivo del collagene.

Tecniche di preparazione dei tessuti per l'imaging micromografico computerizzato con contrasto di modelli cardiaci di mammiferi di grandi dimensioni con malattia cronica

I modelli animali di infarto miocardico (MI) che emulano il processo naturale della malattia nell'uomo sono cruciali per comprendere i meccanismi fisiopatologici e testare la sicurezza e l'efficacia delle nuove terapie emergenti. Qui, descriviamo un modello di suini MI creato implementando una bobina di embolizzazione percutanea.

Infarto miocardico mediante dispiegamento della bobina di embolizzazione percutanea in un modello suino

Qui presentiamo un protocollo incentrato sul controllo di qualità della legatura dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra modificando tecnicamente la procedura tradizionale nei ratti per la ricerca acuta sull'ischemia-riperfusione miocardica.

Legatura delle arterie coronarie discendenti anteriori sinistre per la ricerca sull'ischemia-riperfusione: miglioramento del modello tramite modifiche tecniche e controllo qualità

Il protocollo descrive un modello di donazione di animali di grandi dimensioni (suini) dopo morte circolatoria, seguito da perfusione regionale normotermica toracoaddominale che simula da vicino lo scenario clinico nel trapianto di cuore e ha il potenziale per facilitare studi e strategie terapeutiche.

Modello di donazione su animali di grandi dimensioni dopo morte circolatoria e perfusione regionale normothermica per la valutazione cardiaca

Scopri un protocollo per standardizzare le procedure di campionamento in un modello porcino di infarto miocardico acuto. Questo metodo consente di determinare con precisione le dimensioni dell'infarto e supporta lo sviluppo di nuovi candidati farmaceutici.

Miglioramento di un modello di infarto miocardico porcina cassa chiusa tramite la normalizzazione del tessuto e le procedure di campionamento di sangue (Video) | JoVE Journal

Miglioramento di un modello di infarto miocardico porcina cassa chiusa tramite la normalizzazione del tessuto e le procedure di campionamento di sangue

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