Valutazione del lattato del sangue e del Plasma dell'insulina durante l'esercizio fisico ad alta intensità di cateterizzazione della vena antecubitale

L'obiettivo generale di questo esperimento è ottenere più campioni di sangue venoso da un singolo soggetto durante l'esercizio di cicloergometro. Questa misura può aiutare a rispondere a domande chiave sulla fisiologia porosa e sulla variazione ormonale e metabolizzata durante le diverse modalità di esercizio. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è possibile ottenere più campioni di sangue, anche durante l'esercizio.

A dimostrare le procedure sarà Rie Oosaki che collabora con il nostro laboratorio. Per valutare le dinamiche del sangue, degli ormoni e dei metaboliti della vena antecubitale durante il protocollo di esercizi a intervalli ad alta intensità, chiedere al soggetto di eseguire prima un riscaldamento di cinque minuti sull'ergometro a bassa intensità. Dopo un riposo di cinque minuti, chiedere al soggetto di eseguire tre intervalli di esercizio ad alta intensità di 30 secondi al 90% dell'intensità alla media di potenza determinata da un test di Wingate precedentemente eseguito, separati da quattro minuti di riposo per intervallo di esercizio.

Per la raccolta del campione di sangue, legare un laccio emostatico attorno al braccio selezionato per il cateterismo e identificare la vena antecubitale. Sterilizzare la pelle con alcool e inserire la punta di una cannula sterilizzata nella vena antecubitale e con un angolo di circa 15 gradi rispetto alla pelle. Se l'incannulamento ha successo, si deve osservare un ritorno di sangue.

Dopo aver rimosso l'ago, fissare la cannula e posizionare un fazzoletto di cotone sotto l'ago. Rimuovere l'eparina con una provetta di raccolta vuota e collegare alla cannula un nuovo contenitore per la raccolta del sangue. Aspirare circa 2,5 ml di sangue e chiudere la farfalla, ponendo immediatamente il campione sul ghiaccio.

Quindi, iniettare l'eparina per l'intera lunghezza del tubo per evitare la coagulazione del campione di sangue e chiedere al soggetto di iniziare la serie successiva di intervalli di esercizio. Dopo aver raccolto l'ultimo campione, rimuovere con cautela il tubo di incannulamento e disinfettare la pelle con altro alcol. Premere delicatamente un pezzo di cotone sterile sul sito di raccolta per ridurre al minimo il sanguinamento e trasferire 1,5 ml di sangue da ciascun campione in singole provette per microcentrifuga da 1,5 ml su ghiaccio.

Utilizzare il rilevatore di lattato, misurare il lattato ematico di ogni campione di sangue da 1 ml e centrifugare due volte le aliquote del campione di sangue da 1,5 ml. Trasferire i surnatanti in nuove provette per microcentrifuga e centrifugare nuovamente i campioni in trasferire i surnatanti in nuove provette. Quindi conservare i campioni di plasma purificato a meno 80 gradi Celsius fino all'analisi dell'insulina plasmatica mediante ELISA.

In questo esperimento rappresentativo, i livelli plasmatici di insulina sono diminuiti in tutti e sei i campioni di sangue periferico dei pazienti durante il primo e il terzo periodo di esercizio ad alta intensità di 30 secondi, ma sono aumentati durante il secondo intervallo nei periodi di recupero. Il lattato plasmatico, tuttavia, è diminuito durante il secondo e il terzo periodo di esercizio a intervalli ad alta intensità di 30 secondi ed è aumentato durante i primi 30 secondi e i periodi di recupero. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di mantenere i campioni di sangue a una temperatura non inferiore a 40 gradi Celsius.

Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come l'analisi di Brodgar per rispondere a ulteriori domande sulle variazioni del livello di pH durante l'esercizio. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come raccogliere campioni di sangue consecutivi dalla vena antecubitale durante l'esercizio con cicloergometro.