Routine di metodo di Screening per microparticelle in trasfusioni della piastrina

L'obiettivo generale di questo metodo è quello di caratterizzare le trasfusioni piastriniche mediante test di routine che possono essere eseguiti nei centri donatori o nelle banche del sangue ospedaliere per ottimizzare l'uso di questi emoderivati per i pazienti con sanguinamento o cancro del sangue. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella medicina trasfusionale, ad esempio se una trasfusione di piastrine contiene piastrine attivate o non attivate. Il vantaggio principale di questa tecnica è che fornisce uno screening rapido e accurato per il contenuto di microparticelle come indicatore comprovato dell'attivazione piastrinica.

Le persone che non conoscono questo metodo dovranno imparare a prelevare campioni dai segmenti dei tubi, perché questo non viene fatto di routine in questo momento. Abbiamo avuto l'idea di questo metodo per la prima volta quando abbiamo visto che le piastrine di diversi donatori avevano un'alta variabilità nello stato di attivazione e questo sembrava avere un impatto sul paziente. Esistono tre metodi per ottenere un campione da un concentrato piastrinico.

Per prelevare il campione da una busta, mescolare bene il contenuto della sacca piastrinica con un leggero movimento orizzontale per cinque secondi, inclinando da un'estremità all'altra, cinque volte. Aprire il morsetto sulla busta, la busta viene evacuata e si riempirà da sola. Non è necessario riempire completamente la busta, poiché è necessario solo un campione da 100 microlitri per il test Dynamic Light Scattering o DLS.

Scollegare la busta dalla busta sigillando a caldo il tubo di collegamento con un sigillante per tubi. Quando si esegue il campionamento da tubi vuoti, verificare che il tubo della sacca piastrinica sia stato conservato vuoto e che il blocco del tubo sia ancora in posizione. Ispezionare visivamente il tubo per verificare che non vi sia concentrato di piastrine nel tubo.

Chiudere lo spelatubi sul tubo, il più vicino possibile al blocco tubi, comprimendo le maniglie per schiacciare il tubo tra i rulli mantenendo lo spelafili chiuso, rilasciare il blocco tubi. Tirare lentamente lo stripper lungo il tubo vuoto, lasciando che il tubo si riempia lentamente dietro lo stripper. Continua fino a quando la sezione sotto lo spogliarellista non si è completamente gonfiata o fino a quando lo spogliarellista non si trova entro un pollice dall'estremità del tubo.

È fondamentale comprimere saldamente le maniglie dello spelatubi e tirare lentamente lo spogliarellista lungo il tubo. Una volta raggiunto il punto di arresto con lo stripper, utilizzare il sigillante per tubi per sigillare a caldo il tubo un pollice sopra lo stripper. Ora, rilascia le maniglie dello spelatubi manuale.

Sigillare nuovamente a caldo, da uno a due pollici sopra la guarnizione precedente per creare il segmento di test. Quindi, tagliare il segmento di test dall'unità piastrinica. Questo segmento verrà utilizzato per i test DLS.

Quando si esegue il campionamento da un tubo non vuoto, appendere la sacca verticalmente e rilasciare il blocco del tubo, se in posizione. Ispezionare visivamente il tubo per determinare se ci sono grumi solidi significativi. Se sono presenti grumi solidi, sigillare sopra di essi, in modo che non possano essere rimossi nel sacchetto.

Quindi, chiudere lo spelatubi sul tubo, il più vicino possibile all'estremità sigillata del tubo. Spelare il contenuto del tubo nella borsa, comprimendo le maniglie per schiacciare il tubo tra i rulli. Mantenendo la forza di serraggio, spostare lo spelatubi lungo il tubo verso il sacco.

Rimuovere la sacca piastrinica dal gancio di sospensione e mescolare delicatamente la sacca per cinque secondi, inclinandola da un'estremità all'altra cinque volte, mantenendo la spogliarellista chiusa. Appendi la borsa in verticale, tenendo chiusa la spogliarellista. Tirare lentamente lo stripper lungo il tubo vuoto, lasciando che il tubo si riempia lentamente dietro lo stripper.

Continua fino a quando la sezione sotto lo spogliarellista non si è completamente gonfiata o fino a quando lo spogliarellista non si trova entro un pollice dall'estremità del tubo. Una volta raggiunto il punto di arresto con lo stripper, utilizzare il sigillante per tubi per sigillare a caldo il tubo, un pollice sopra lo stripper. Dopo aver rilasciato lo stripper, sigillare nuovamente a caldo da uno a due pollici sopra il sigillo precedente per creare il segmento di test.

Tagliare e scartare l'ultima parte del tubo. Quindi, tagliare il segmento di test dall'unità piastrinica. Questo segmento verrà utilizzato per i test DLS.

Utilizzando un paraspruzzi e forbici pulite e asciutte, tagliare un'estremità del tubo della sacca o del segmento di prova. Riempire immediatamente il capillare utilizzando lo strumento di campionamento per prelevare il campione direttamente dalla sacca aperta o dal segmento del tubo nel capillare. Sigillare il fondo del capillare riempito spingendolo delicatamente nel sigillante del tubo capillare, applicando una leggera torsione e una certa pressione contro il vassoio.

Quindi, scollegare la pipetta a volume fisso da 100 microlitri e il puntale dal capillare, assicurandosi che il capillare rimanga saldamente incorporato nel sigillante del tubo capillare. Rimuovere il capillare dalla vaschetta del sigillante del tubo capillare e pulire con un tampone di alcol isopropilico. Assicurarsi che non rimangano intrappolate bolle d'aria sbattendo delicatamente la parte inferiore del capillare.

Infine, posizionare il capillare nel sistema DLS. Per iniziare, avviare la console, seguire le istruzioni sul touch screen per accedere e selezionare l'opzione di test delle microparticelle o MP per avviare un nuovo test DLS per misurare il contenuto di microparticelle di un campione di piastrine. Immettere le informazioni sul campione utilizzando uno scanner di codici a barre o inserirle manualmente.

Posizionare il capillare nel sistema DLS quando indicato e avviare il test. Al termine del test, rimuovere il campione dal supporto capillare e smaltire in modo appropriato i materiali di consumo secondo le linee guida dell'impianto. Etichettare la sacca piastrinica con il colore corrispondente al risultato.

Ad esempio, l'arancione per i non attivati e il rosa per quelli attivati. La diffusione dinamica della luce misura la velocità delle particelle che si muovono in sospensione mediante il moto browniano. In base alle diverse velocità, le particelle piccole si muovono velocemente e le particelle grandi si muovono lentamente.

Questa tecnologia determina la distribuzione dimensionale di un campione. Il DLS determina che questa trasfusione contiene piastrine non attivate in base a un contenuto di microparticelle inferiore al 15%. Infatti. La maggior parte delle piastrine discoidi con pochissime microparticelle erano visibili al microscopio.

Tuttavia, una trasfusione di piastrine diversa, che ad occhio nudo sembra esattamente la stessa della prima sacca, conteneva piastrine attivate, basate su un contenuto di microparticelle superiore al 15%. In questo campione, varie morfologie piastriniche, piccoli aggregati e molte microparticelle erano visibili al microscopio. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come prelevare in modo non invasivo un campione da una sacca piastrinica, riempire il capillare e testare il campione per il contenuto di microparticelle, per consentire l'uso ottimizzato di un inventario piastrinico.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante mescolare bene il sacchetto per ottenere un campione buono e rappresentativo. E seguendo questa procedura, si potrebbero eseguire altri metodi, come la citometria a flusso, per rispondere a domande sull'origine cellulare delle microparticelle. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in circa due minuti e mezzo.

Insieme al test di cinque minuti, le trasfusioni di piastrine possono essere caratterizzate in meno di otto minuti. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha permesso alle banche del sangue degli ospedali di esaminare il loro inventario piastrinico, trattare i pazienti ematologici/oncologici solo con piastrine non attivate e osservare una riduzione delle trasfusioni di piastrine utilizzate. Come si dice, la trasfusione più sicura è quella che non viene somministrata.

Sebbene questo metodo fornisca informazioni sulla caratterizzazione delle piastrine prima della trasfusione, può anche essere utilizzato per testare il plasma ricco di piastrine direttamente dai donatori. Le implicazioni di questa tecnica si estendono al trattamento dei pazienti affetti da cancro del sangue perché beneficiano di trasfusioni piastriniche non attivate, che riducono il rischio di diventare refrattari.