Valutazione sistematica del benessere nei topi per procedure usando l'anestesia generale

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di valutare il benessere dei topi dopo che sono stati sottoposti a procedure, tra cui l'anestesia generale, e di fornire dati scientificamente validi a supporto della classificazione di gravità secondo la direttiva UE 2010/63. Questo protocollo può aiutare a rispondere a domande chiave sul benessere degli animali nel campo della scienza degli animali da laboratorio, come il grado di disagio causato dalle procedure che prevedono l'anestesia generale. Il vantaggio principale di questo protocollo è che il benessere di ogni singolo topo viene valutato in modo scientifico su base animale e questo protocollo può essere facilmente adattato e integrato in altri studi pianificati.

Abbiamo avuto l'idea di questo protocollo quando abbiamo ipotizzato che se l'anestesia ripetuta causasse più stress nei topi di laboratorio rispetto a una singola esposizione, mancherebbero dati scientificamente fondati. In questa fase, preparare una scatola di vetro con una superficie del pavimento di circa 220 millimetri per 290 millimetri e un'altezza di 390 millimetri. Copri il pavimento con circa 0,5 centimetri di materiale da lettiera.

Quindi spargi una manciata di materiale da lettiera usato dalla gabbia domestica sopra il nuovo materiale da lettiera per ridurre l'angoscia causata dal nuovo ambiente. Provvedere con cibo e acqua. Trasferire delicatamente il mouse nella gabbia di osservazione e lasciare che il mouse si abitui al nuovo ambiente per almeno 30 minuti.

Per la scala della smorfia del mouse, utilizzare una fotocamera ad alta definizione per la fotografia. Scatta continuamente da 30 a 40 fotografie per ogni punto temporale entro uno o due minuti. Per testare il comportamento nelle tane secondo Deacon e Jirkof, prepara le tane mettendo 140 grammi di pellet di cibo in una bottiglia d'acqua di plastica opaca standard.

Quindi, posiziona la bottiglia d'acqua di plastica riempita con pellet di cibo parallelamente alla parete posteriore della gabbia di osservazione. Dopo due ore, pesare i pellet di cibo rimasti nella tana. Eseguire il test due volte due giorni prima della procedura come linea di base.

In questa fase, preparare una gabbia con nuovo materiale da lettiera per il periodo di osservazione di 24 ore in cui i topi vengono alloggiati individualmente. Il periodo di osservazione di 24 ore inizia dopo la scala della smorfia del topo e il comportamento di scavare. La durata dell'alloggio singolo è ridotta al minimo.

Nel frattempo, vengono misurati l'attività della gabbia domestica, l'assunzione di cibo, il comportamento di costruzione del nido e i livelli di metaboliti del corticosterone fecale. Quindi, spargi una manciata di materiale da lettiera usato senza feci dalla gabbia di casa sopra il nuovo materiale per ridurre l'angoscia. Fornire un nido di cotone quadrato standardizzato di un peso definito solo come arricchimento ambientale.

Successivamente, montare il sensore a infrarossi sulla parte superiore della gabbia per misurare l'attività della gabbia domestica. Fornire pellet di cibo standard e acqua ad libitum e posizionare il topo nella gabbia. La mattina seguente, segna il nido secondo la scala a cinque punti di Deacon circa due ore dopo l'accensione della luce.

Inoltre, pesare qualsiasi pezzo di nido non strappato che rappresenti almeno il 5% del peso iniziale del nido. Quindi, posiziona la parte superiore di una gabbia a griglia nella gabbia con un angolo di 45 gradi rispetto al lato più lungo della gabbia. Avvia il timer e monitora o registra video i mouse per 10 minuti da una distanza di circa 1,5 metri.

Nota tutte le volte in cui il topo si arrampica sulla parte superiore della gabbia con tutte e quattro le zampe sulla parte superiore della gabbia o lascia la parte superiore della gabbia con una o più zampe sul pavimento della gabbia, seguita dall'analisi. L'esperienza singola di anestesia e l'anestesia ripetuta hanno aumentato i punteggi di differenza della scala delle smorfie del topo rispetto al controllo 30 minuti dopo l'esposizione. A 150 minuti dall'ultima anestesia, i punteggi di differenza della scala delle smorfie di topo di tutti i topi sono tornati ai livelli di controllo.

Per il comportamento di scavare, solo l'anestesia ripetuta ha ridotto significativamente la percentuale di peso dei pellet di cibo che i topi hanno rimosso dalla tana rispetto al controllo. Per il comportamento di costruzione del nido, non ci sono state differenze significative nei punteggi del nido tra una singola esperienza di anestesia, anestesia ripetuta e il controllo. Nel paradigma esplorativo libero, l'anestesia ripetuta ha ridotto significativamente il numero di esplorazioni rispetto al controllo e la durata totale dell'esplorazione rispetto a una singola anestesia un giorno dopo l'ultima anestesia.

Otto giorni dopo l'ultima anestesia, non c'erano più differenze tra i gruppi di studio. Durante il tentativo di questo protocollo, è importante ricordare di maneggiare i topi con metodi a tunnel e/o di coppettazione. Prendere i topi per la coda può indurre stress e ansia che a loro volta influiscono sul benessere e possono anche influenzare i risultati del protocollo.

Questo protocollo può essere facilmente adattato e integrato negli studi pianificati per valutare l'impatto di una procedura sul benessere dei topi. A seconda della procedura e del disegno dello studio, dovrebbe essere scelto il test più adatto di questo protocollo. Dopo aver visto questo video, avrai una buona comprensione di come valutare il benessere dei topi sottoposti alla procedura di anestesia generale.

Il protocollo aiuta a classificare la gravità della procedura in modo scientifico basato sugli animali.