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Un semplice protocollo ad alta efficienza per l'isolamento delle isolozioni pancreatiche dai topi
Un semplice protocollo ad alta efficienza per l'isolamento delle isolozioni pancreatiche dai topi
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JoVE Journal Biology
A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Un semplice protocollo ad alta efficienza per l'isolamento delle isolozioni pancreatiche dai topi

Full Text
32,933 Views
06:56 min
August 30, 2019

DOI: 10.3791/57048-v

Daniel Villarreal1, Geetali Pradhan2, Chia-Shan Wu1,2, Clinton D Allred1, Shaodong Guo1, Yuxiang Sun1,2

1Department of Nutrition and Food Science,Texas A&M University, 2Children's Nutrition Research Center,Baylor College of Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Questo protocollo di isolamento dell'isolotto ha descritto una nuova via di iniezione di collagenasi per digerire il tessuto esocrino e una procedura di gradiente semplificata per purificare le isole dai topi. Si tratta di digestione ezimatica, separazione/purificazione del gradiente e raccolta a mano dell'isolotto. Il successo dell'isolamento può produrre 250-350 isolotti di alta qualità e completamente funzionali per mouse.

Questo protocollo richiede l'uso di un singolo gradiente di densità che lo rende significativamente meno laborioso e più conveniente rispetto ai metodi di isolamento degli isolotti convenzionali più complessi. Il principale vantaggio di questo protocollo è che l'enzima viene consegnato direttamente al pancreas con conseguente miglioramento della digestione dei tessuti e aumento della resa dell'isolotto. Iniziare toccando gli arti del topo in posizione supina e spruzzando il corpo con il 70% di etanolo.

Utilizzando forcep in coverglass e forbici chirurgiche curve, fare un'incisione addominale orizzontale della pelle di circa tre centimetri e aprire la pelle per esporre la parete addominale. Fai un'incisione verticale da tre a quattro centimetri sul peritoneo addominale per esporre completamente il pancreas e posizionare il topo sotto un microscopio sezionante. Spingere il lobo epatico in modo superiore per esporre il condotto biliare che appare come un tubo rosa pallido e spostare delicatamente l'intestino dalla regione lombare destra e iliaca a destra della cavità addominale per esporre il condotto biliare e l'arteria epatica.

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