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DOI: 10.3791/57048-v
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Questo protocollo di isolamento dell'isolotto ha descritto una nuova via di iniezione di collagenasi per digerire il tessuto esocrino e una procedura di gradiente semplificata per purificare le isole dai topi. Si tratta di digestione ezimatica, separazione/purificazione del gradiente e raccolta a mano dell'isolotto. Il successo dell'isolamento può produrre 250-350 isolotti di alta qualità e completamente funzionali per mouse.
Questo protocollo richiede l'uso di un singolo gradiente di densità che lo rende significativamente meno laborioso e più conveniente rispetto ai metodi di isolamento degli isolotti convenzionali più complessi. Il principale vantaggio di questo protocollo è che l'enzima viene consegnato direttamente al pancreas con conseguente miglioramento della digestione dei tessuti e aumento della resa dell'isolotto. Iniziare toccando gli arti del topo in posizione supina e spruzzando il corpo con il 70% di etanolo.
Utilizzando forcep in coverglass e forbici chirurgiche curve, fare un'incisione addominale orizzontale della pelle di circa tre centimetri e aprire la pelle per esporre la parete addominale. Fai un'incisione verticale da tre a quattro centimetri sul peritoneo addominale per esporre completamente il pancreas e posizionare il topo sotto un microscopio sezionante. Spingere il lobo epatico in modo superiore per esporre il condotto biliare che appare come un tubo rosa pallido e spostare delicatamente l'intestino dalla regione lombare destra e iliaca a destra della cavità addominale per esporre il condotto biliare e l'arteria epatica.
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