Emisezione laterale del cavo spinale e valutazioni comportamentali asimmetriche nei ratti adulti

Questo protocollo fornisce un modello animale affidabile di un'emisezione laterale del midollo spinale che imita la sindrome di Brown-Sequard negli esseri umani e una nuova scala di comportamento combinata per valutare i deficit comportamentali asimmetrici. Questo modello di emisezione del topo può promuovere la nostra comprensione delle menomazioni neurologiche che si verificano nella sindrome di Brown-Sequard negli esseri umani. A differenza delle valutazioni menzionate, la nostra nuova scala di comportamento combinata può essere applicata a qualsiasi stampo che richiedeva una valutazione asimmetrica, locomotiva e deficit in laboratorio.

Utilizzando questo modello di emi-sezione coerente e naturale può facilitare il confronto del risultato sperimentale tra ricerca di base e ricerca di traduzione. L'utilizzo di risultati coerenti con questo modello può essere difficile per i principianti. Il passaggio critico è posizionare l'ago verticalmente nella linea mediana, come guida per indurre la lesione.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire sia le procedure chirurgiche che comportamentali. Il giorno della procedura pulire il tavolo chirurgico con il 70% di etanolo e posizionare una pastiglia riscaldante preriscaldata sul tavolo. Dopo aver coperto l'area chirurgica con un drappo chirurgico sterile, confermare una mancanza di risposta al dito del piedi in un ratto anestetizzato.

Applicare unguento agli occhi dell'animale per evitare l'essiccazione corneale e radere i capelli sovrascrivi le vertebre toraciche. Quindi, pulire la pelle esposta con tre scrub alternati a base di iodio ed etanolo. Quando l'animale è pronto, localizzare la tredicesima costola e seguire dorsalmente la costola per identificare la sua connessione con la vertebra T-13.

Conta fino a identificare la vertebra T-9 e usa una lama bisturi numero quindici per fare un'incisione della pelle della linea mediana da tre a quattro centimetri negli otto-undicesimi processi spinosi vertebrali. Spostare il topo al microscopio chirurgico e sezionare e separare senza mezzi termini i muscoli paraspinali lateralmente dai processi spinosi verso le sfaccettature delle vertebre T-9 e T-10 su entrambi i lati. Scivolare la colonna vertebrale con un supporto stabilizzante modificato, fare una fessura su entrambi i lati dell'osso vertebrale laterale e far scorrere i bracci di acciaio inossidabile del supporto sotto le sfaccettature del processo trasversale esposte.

Stringere le viti per fissare il supporto e utilizzare un protrattore per esporre le lamina vertebrale T-8 a 11 e i processi spinosi. Usando un rongeur, eliminare il processo spinoso T-9 e rimuovere una piccola porzione della lamina, lasciata alla linea mediana e all'intera porzione destra della lamina, il più lateralmente possibile. Quindi inserire delicatamente il ronguer sotto la lamina e tagliare un piccolo pezzo di osso alla volta, fino al completamento della regione desiderata di laminectomia.

Successivamente, identificare la linea mediana dorsale della corda spinale e inserire un ago di 30 gauge verticalmente attraverso la linea mediana, nella corda spinale, fino alla parete ventrale del canale vertebrale, con la smussatura rivolta a destra. Fermare qualsiasi sanguinamento con un piccolo pezzo di schiuma di gel sterile e inserire una punta di un paio di forbici microchirurghi iridectomia attraverso la linea mediana della pista dell'ago e l'altra punta lungo la superficie laterale dell'emichord destro, per fare un taglio completo sull'emicore destro. Utilizzare il bordo laterale dello stesso ago di un coltello, per tagliare lo spazio di lesione per confermare un'emisezione destra completa.

E visualizzare il fondo del canale vertebrale, per verificare la completezza dell'emisezione destra. Utilizzare la miscela di cemento per costruire lo stretto ponte sulla spugna e i processi spinosi T-8 e T-10. Quindi, suturare gli strati muscolare e cutaneo separatamente con filo di seta 4/0 e iniettare lo 0,9% di soluzione salina sterile per mantenere l'idratazione.

Premendo la vescica urinaria da due a tre volte al giorno per la prima settimana e da una a due volte nelle settimane successive, fino a quando non ritorna l'annullamento spontaneo della vescica. Nei punti di tempo sperimentali appropriati dopo la procedura, mettere il ratto adulto in un esperimento a campo aperto ed esaminare la locomozione dell'animale per quattro minuti. Utilizzando la tabella, assegnare un valore di 1 per yes' e 0 per no'per ogni categoria di comportamento e sommare il valore totale per assegnare un punteggio finale unilaterale di passaggio dell'emisezione di 0-8.

Per l'analisi dell'accoppiamento del cancello, registrare l'animale sperimentale che cammina su un dispositivo di passerella stretto e assegnare un punteggio di 0 per il n. 1 per regolare e/o goffo', e 2 per normale'per ogni categoria di accoppiamento. Per la valutazione del posizionamento del contatto, tenere l'animale in posizione verticale, in modo che entrambi gli arti posteriori siano disponibili per la risposta di posizionamento, e spazzolare leggermente la superficie dorsale di un arto posteriore verso il bordo di una superficie. Osservare il posizionamento del piede sulla superficie e assegnare un contatto dell'arto posteriore posizionando il punteggio di 0 per nessun posizionamento'e 1 per il posizionamento'Per la valutazione della camminata in griglia, posizionare il topo su una griglia di rete metallica rivestita in plastica elevata 3 cm per 3 cm e registrare il topo che cammina liberamente attraverso la piattaforma per 30 gradini per consentire la quantificazione del numero di passi per ogni arto per determinare la gravità del deficit motorio.

La colorazione amino fluorescente di una sezione trasversale nell'epicentro della lesione mostra una completa perdita dell'emicorace destro. E la conservazione dell'emichord sinistro contralaterale alla lesione. I punteggi delle singole misure di valutazione del gate possono essere analizzati separatamente o possono essere combinati in un comportamento combinato composito dopo il punteggio dell'emisezione.

Nei primi tre giorni dopo l'infortunio, i ratti perdono la capacità di passo, con movimenti simili a gradini che iniziano a riapparire sul lato ipsilesionale a 7 10 giorni dall'infortunio. E con la maggior parte dei passaggi che sono passi dorsali. Entro 28 giorni dall'emisezione T-9, i ratti possono adottare misure plantari con una coordinazione praticamente normale.

In confronto, l'arto posteriore contralesionale è meno interrotto con il punteggio unilaterale di emisezione che cade entro i primi cinque giorni dopo l'infortunio e ritorna al basale entro il giorno 10, dopo l'infortunio. Per la prova totale di accoppiamento del cancello, sia la stabilità che l'adattabilità della coordinazione dopo l'emisezione, sono notevolmente ridotte durante i primi cinque giorni dopo l'infortunio. Anche il posizionamento del contatto e la camminata in griglia dell'arto posteriore ipsilaterale sono interessati, di solito recuperando quando l'animale inizia a prendere misure plantari.

Può essere difficile produrre una lesione pulita. Posizionare un ago nel mezzo può essere una linea guida utile per garantire una completa separazione del tessuto.