Name: Un modello del coniglio di espressione del Transgene durevole nella vena giugulare di innesti di interposizione dellarteria carotica comune (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-10T12:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 58 s
Description: Scopri il posizionamento di innesti venosi di interposizione nel coniglio per studiare l'espressione transgenica durevole nell'endotelio. Questo metodo consente di testare strategie terapeutiche contro l'insufficienza dell'innesto venoso.

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<ol><li>Libby, P., Bornfeldt, K. E., Tall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis%3A+Successes%2C+Surprises%2C+and+Future+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis: Successes, Surprises, and Future Challenges.</a> Circ Res. 118, 531-534 (2016).</li>
<li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+global+estimates+of+prevalence+and+risk+factors+for+peripheral+artery+disease+in+2000+and+2010%3A+a+systematic+review+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Comparison of global estimates of prevalence and risk factors for peripheral artery disease in 2000 and 2010: a systematic review and analysis.</a> Lancet. 382, 1329-1340 (2013).</li>
<li>Mohr, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+artery+bypass+graft+surgery+versus+percutaneous+coronary+intervention+in+patients+with+three-vessel+disease+and+left+main+coronary+disease%3A+5-year+follow-up+of+the+randomised%2C+clinical+SYNTAX+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Coronary artery bypass graft surgery versus percutaneous coronary intervention in patients with three-vessel disease and left main coronary disease: 5-year follow-up of the randomised, clinical SYNTAX trial.</a> Lancet. 381, 629-638 (2013).</li>
<li>de Vries, M. R., Simons, K. H., Jukema, J. W., Braun, J., Quax, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vein+graft+failure%3A+from+pathophysiology+to+clinical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Vein graft failure: from pathophysiology to clinical outcomes.</a> Nat Rev Cardiol. 13 (8), 451-470 (2016).</li>
<li>Harskamp, R. E., Lopes, R. D., Baisden, C. E., de Winter, R. J., Alexander, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saphenous+vein+graft+failure+after+coronary+artery+bypass+surgery%3A+pathophysiology%2C+management%2C+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Saphenous vein graft failure after coronary artery bypass surgery: pathophysiology, management, and future directions.</a> Ann Surg. 257, 824-833 (2013).</li>
<li>Sabik, J. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21768550">Understanding saphenous vein graft patency.</a> Circulation. 124 (3), 273-275 (2011).</li>
<li>Owens, C. D., Ho, K. J., Conte, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+extremity+vein+graft+failure%3A+a+translational+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Vasc+Med%22%5BJournal%5D)">Lower extremity vein graft failure: a translational approach.</a> Vasc Med. 13, 63-74 (2008).</li>
<li>Robertson, K. E., McDonald, R. A., Oldroyd, K. G., Nicklin, S. A., Baker, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+coronary+in-stent+restenosis+and+vein+graft+failure%3A+does+vascular+gene+therapy+have+a+role%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Prevention of coronary in-stent restenosis and vein graft failure: does vascular gene therapy have a role.</a> Pharmacol Ther. 136, 23-34 (2012).</li>
<li>Yla-Herttuala, S., Baker, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+Gene+Therapy%3A+Past%2C+Present%2C+and+Future%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular Gene Therapy: Past, Present, and Future.</a> Mol Ther. 25, 1095-1106 (2017).</li>
<li>Schwartz, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral-mediated+gene+transfer+of+a+constitutively+active+form+of+the+retinoblastoma+gene+product+attenuates+neointimal+thickening+in+experimental+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Adenoviral-mediated gene transfer of a constitutively active form of the retinoblastoma gene product attenuates neointimal thickening in experimental vein grafts.</a> J Vasc Surg. (5), 874-881 (1999).</li>
<li>Eefting, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+lentiviral+short+hairpin+RNA+silencing+of+CCR2+inhibits+vein+graft+thickening+in+hypercholesterolemic+apolipoprotein+E3-Leiden+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Local lentiviral short hairpin RNA silencing of CCR2 inhibits vein graft thickening in hypercholesterolemic apolipoprotein E3-Leiden mice.</a> J Vasc Surg. 50, 152-160 (2009).</li>
<li>Handa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adventitial+delivery+of+platelet-derived+endothelial+cell+growth+factor+gene+prevented+intimal+hyperplasia+of+vein+graft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Adventitial delivery of platelet-derived endothelial cell growth factor gene prevented intimal hyperplasia of vein graft.</a> J Vasc Surg. 48 (6), 1566-1574 (2008).</li>
<li>Kloppenburg, G. T., Grauls, G. E., Bruggeman, C. A., Stassen, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+activin+A+expression+prevents+vein+graft+intimal+hyperplasia+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Interact+Cardiov+Th%22%5BJournal%5D)">Adenoviral activin A expression prevents vein graft intimal hyperplasia in a rat model.</a> Interact Cardiov Th. 8, 31-34 (2009).</li>
<li>Eefting, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+urokinase+receptor-targeted+inhibitor+for+plasmin+and+matrix+metalloproteinases+suppresses+vein+graft+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">A novel urokinase receptor-targeted inhibitor for plasmin and matrix metalloproteinases suppresses vein graft disease.</a> Cardiovasc Res. 88, 367-375 (2010).</li>
<li>Eichstaedt, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+of+COX-1+improves+lumen+size+and+blood+flow+in+carotid+bypass+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Gene transfer of COX-1 improves lumen size and blood flow in carotid bypass grafts.</a> J Surg Res. 161, 162-167 (2010).</li>
<li>Kritz, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+modulation+of+Nogo-B+attenuates+neointima+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">In vivo modulation of Nogo-B attenuates neointima formation.</a> Mol Ther. 16 (11), 1798-1804 (2008).</li>
<li>Peroulis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ex-vivo+gene+therapy+of+vein+grafts+with+Egr-1+decoy+in+the+suppression+of+intimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Vasc+Endovasc%22%5BJournal%5D)">The role of ex-vivo gene therapy of vein grafts with Egr-1 decoy in the suppression of intimal hyperplasia.</a> Eur J Vasc Endovasc. 40, 216-223 (2010).</li>
<li>Kochanek, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC39129/">A new adenoviral vector: Replacement of all viral coding sequences with 28 kb of DNA independently expressing both full-length dystrophin and b-galactosidase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 5731-5736 (1996).</li>
<li>Parks, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+helper-dependent+adenovirus+vector+system%3A+Removal+of+helper+virus+by+Cre-mediated+excision+of+the+viral+packaging+signal%5BTitle%5D)+AND+%22P+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A helper-dependent adenovirus vector system: Removal of helper virus by Cre-mediated excision of the viral packaging signal.</a> P Natl Acad Sci USA. 93, 13565-13570 (1996).</li>
<li>Chen, H. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+in+muscle+of+an+adenoviral+vector+that+lacks+all+viral+genes%5BTitle%5D)+AND+%22P+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Persistence in muscle of an adenoviral vector that lacks all viral genes.</a> P Natl Acad Sci USA. 94, 1645-1650 (1997).</li>
<li>Wen, S., Graf, S., Massey, P. G., Dichek, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+vascular+gene+transfer+with+a+helper-dependent+adenoviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Improved vascular gene transfer with a helper-dependent adenoviral vector.</a> Circulation. 110, 1484-1491 (2004).</li>
<li>Du, L., Zhang, J., Clowes, A. W., Dichek, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+and+durable+transgene+expression+in+grafted+rabbit+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer and durable transgene expression in grafted rabbit veins.</a> Hum Gene Ther. 26, 47-58 (2015).</li>
<li>Channon, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+adenoviral+gene+transfer+to+early+venous+bypass+grafts%3A+comparison+with+native+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient adenoviral gene transfer to early venous bypass grafts: comparison with native vessels.</a> Cardiovasc Res. 35, 505-513 (1997).</li>
<li>Flynn, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+apolipoprotein+A-I+in+rabbit+carotid+endothelium+protects+against+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Expression of apolipoprotein A-I in rabbit carotid endothelium protects against atherosclerosis.</a> Mol Ther. 19, 1833-1841 (2011).</li>
<li>George, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+Reduction+of+Vein+Graft+Neointima+Formation+by+Ex+Vivo+TIMP-3+Gene+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Sustained Reduction of Vein Graft Neointima Formation by Ex Vivo TIMP-3 Gene Therapy.</a> Circulation. 124, 11 Suppl 135-142 (2011).</li>
<li>Chiu-Pinheiro, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+to+coronary+artery+bypass+conduits%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Gene transfer to coronary artery bypass conduits.</a> Ann Thorac Surg. 74, 1161-1166 (2002).</li>
<li>Byrom, M. J., Bannon, P. G., White, G. H., Ng, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+the+assessment+of+novel+vascular+conduits%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Animal models for the assessment of novel vascular conduits.</a> J Vasc Surg. 52, 176-195 (2010).</li>
<li>Ribichini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oral+prednisone+after+stenting+in+a+rabbit+model+of+established+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Effects of oral prednisone after stenting in a rabbit model of established atherosclerosis.</a> J Am Coll Cardiol. 50, 176-185 (2007).</li>
<li>Langheinrich, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+in-stent+restenosis+parameters+in+rabbits+by+Micro-CT%5BTitle%5D)+AND+%22Rofo%22%5BJournal%5D)">Quantification of in-stent restenosis parameters in rabbits by Micro-CT.</a> Rofo. 177 (4), 501-506 (2005).</li>
<li>Wacker, B. K., Dronadula, N., Zhang, J., Dichek, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+Vascular+Gene+Therapy+With+Apolipoprotein+A-I+to+Promote+Regression+of+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">Local Vascular Gene Therapy With Apolipoprotein A-I to Promote Regression of Atherosclerosis.</a> Arterioscler Thromb. 37, 316-327 (2017).</li>
<li>Zwolak, R. M., Kirkman, T. R., Clowes, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis+in+rabbit+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis in rabbit vein grafts.</a> Arteriosclerosis. 9, 374-379 (1989).</li>
<li>Qiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statin+therapy+prevents+expansive+remodeling+in+venous+bypass+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Statin therapy prevents expansive remodeling in venous bypass grafts.</a> Atherosclerosis. 223, 106-113 (2012).</li>
<li>Casa, L. D. C., Ku, D. N. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28441034">Thrombus Formation at High Shear Rates.</a> Annu Rev Biomed Eng. 19, 415-433 (2017).</li>
<li>Chen, C., Coyle, K. A., Hughes, J. D., Lumsden, A. B., Ku, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+blood+flow+accelerates+intimal+hyperplasia+in+endarterectomized+canine+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Reduced blood flow accelerates intimal hyperplasia in endarterectomized canine arteries.</a> Cardiovasc Surg. 5 (2), 161-168 (1997).</li>
<li>Binns, R. L., Ku, D. N., Stewart, M. T., Ansley, J. P., Coyle, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+graft+diameter%3A+effect+of+wall+shear+stress+on+vascular+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Optimal graft diameter: effect of wall shear stress on vascular healing.</a> J Vasc Surg. 10, 326-337 (1989).</li>
<li>Oka, K., Mullins, C. E., Kushwaha, R. S., Leen, A. M., Chan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+rhesus+monkeys+heterozygous+for+LDL+receptor+deficiency+by+balloon+catheter+hepatic+delivery+of+helper-dependent+adenoviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for rhesus monkeys heterozygous for LDL receptor deficiency by balloon catheter hepatic delivery of helper-dependent adenoviral vector.</a> Gene Ther. 22, 87-95 (2015).</li>
<li>Miyake, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+neointimal+formation+after+angioplasty+using+nuclear+factor-kappaB+decoy+oligodeoxynucleotide-coated+balloon+catheter+in+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Cardiovasc+Interv%22%5BJournal%5D)">Prevention of neointimal formation after angioplasty using nuclear factor-kappaB decoy oligodeoxynucleotide-coated balloon catheter in rabbit model.</a> Circ Cardiovasc Interv. 7, 787-796 (2014).</li>
<li>Chorny, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-specific+gene+delivery+to+stented+arteries+using+magnetically+guided+zinc+oleate-based+nanoparticles+loaded+with+adenoviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Site-specific gene delivery to stented arteries using magnetically guided zinc oleate-based nanoparticles loaded with adenoviral vectors.</a> FASEB J. 27, 2198-2206 (2013).</li>
<li>Hoshino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+catheter-based+strategies+for+cardiac+delivery+of+therapeutic+gelatin+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Three catheter-based strategies for cardiac delivery of therapeutic gelatin microspheres.</a> Gene Ther. 13, 1320-1327 (2006).</li>
<li>Nouri, F., Sadeghpour, H., Heidari, R., Dehshahri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation%2C+characterization%2C+and+transfection+efficiency+of+low+molecular+weight+polyethylenimine-based+nanoparticles+for+delivery+of+the+plasmid+encoding+CD200+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Preparation, characterization, and transfection efficiency of low molecular weight polyethylenimine-based nanoparticles for delivery of the plasmid encoding CD200 gene.</a> Int J Nanomed. , 5557-5569 (2017).</li>
<li>Jia, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+osteosarcoma+lung+metastases+following+intranasal+interleukin-12+gene+therapy+using+a+nonviral+polyethylenimine+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Eradication of osteosarcoma lung metastases following intranasal interleukin-12 gene therapy using a nonviral polyethylenimine vector.</a> Cancer Gene Ther. , 260-266 (2002).</li>
<li>Morishita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+hyperplasia+after+vascular+injury+is+inhibited+by+antisense+cdk+2+kinase+oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Intimal hyperplasia after vascular injury is inhibited by antisense cdk 2 kinase oligonucleotides.</a> J Clin Invest. 93, 1458-1464 (1994).</li>
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Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Punti critici in questo protocollo comprendono la gestione dell'anestesia, anticoagulazione manipolazione chirurgica della vena arteria/innestato e misure emodinamiche della vena innestata. Corretta gestione dell'anestesia è critico in questo modello di chirurgia multipla di sopravvivenza che include due operazioni relativamente lunghe (in genere 3-3.5 h per l'innesto bilaterale della vena e 1.5-2.5 h per trasduzione dell'innesto bilaterale). Abbiamo amministrato l'anestesia con una punta conica e con intubazione endotra...

L'aterosclerosi è una malattia infiammatoria cronica in cui accumulo di lipidi e di infiammazione nella parete del vaso sanguigno portano a restringimento del lume vascolare, attacchi cardiaci, ictus e perdita di arti1,2. Interventi percutanei (ad es., angioplastica e stenting) e terapia medica (ad es., agenti di statine e antipiastriniche) sono trattamenti utili per aterosclerosi; Tuttavia, essi sono spesso inefficaci nel trattamento della malattia ostruttiva severa sia nelle circolazioni coronariche e periferiche. L'innesto di esclusione, utilizzando segmenti di vena autogena, rimane una procedura comune per il trattamento di pazienti con malattia vascolare coronaria e periferica severa e diffusa3,4. Tuttavia, vena innesti collocati in entrambi la coronaria e periferiche circolazioni hanno tassi di pervietà a lungo termine poveri. Nella circolazione coronaria, circa il 10-20% della vena innesti sono occlusi a 1 anno e 50% sono occluse da 10 anni5,6. Nella circolazione periferica, tassi di guasto dell'innesto della vena sono 30-50% a 5 anni7.
La terapia genica è un approccio attraente per la prevenzione di guasto dell'innesto della vena perché può fornire un prodotto del gene terapeutico proprio presso il sito della malattia. Di conseguenza, numerosi studi preclinici hanno testato la vena dell'innesto gene terapia8,9. Tuttavia, essenzialmente tutti questi studi hanno esaminato l'efficacia al tempo punti (2-12 settimane)10,11,12,13,14,iniziali15, 16 , 17. siamo a conoscenza di alcuna prova che gli interventi di terapia genica possono fornire durevole protezione (anni) contro tardo guasto dell'innesto della vena che in genere deriva da neointimale iperplasia e aterosclerosi4. Abbiamo sviluppato un metodo che permette l'espressione del transgene durevole nelle vene innestate e quindi permette la sperimentazione di interventi di terapia genica in ritardo così come primi momenti. Per ottenere l'espressione del transgene durevole, il metodo incorpora HDAd vettori e una strategia di trasduzione in ritardo. Giuseppe vettori forniscono l'espressione del transgene prolungata mancanza di geni virali, impedendo il riconoscimento (e rifiuto) di cellule trasdotte dal sistema immunitario18,19,20, 21. Delayed trasduzione (effettuata 28 giorni dopo il posizionamento dell'innesto) previene la perdita di cellule trasdotte durante il processo di arterializzazione che si verifica all'inizio dopo l' innesto22.
Altri metodi che ottenere l'espressione del transgene terapeutico nella parete dell'innesto della vena si affidano la trasduzione dell'innesto della vena al momento dell'innesto posizionamento10,11,12,15,16 ,17. Quando misurati in serie, utilizzando questo approccio l'espressione del transgene diminuisce rapidamente dopo la trasduzione22,23. Di conseguenza, gli studi che utilizzano questo approccio non hanno esaminato l'efficacia oltre le 12 settimane dopo l'innesto della vena, con più non ha valutato l'efficacia oltre 4 settimane. Al contrario, il nostro metodo raggiunge innesto della vena l'espressione del transgene che persiste stabile per almeno 24 settimane e basato su studi simili effettuati in arterie-probabile continua molto più lungo22,24. Siamo consapevoli di nessun altro vena gene terapia intervento di innesto che raggiunge l'espressione del transgene stabile di questa durata.
Abbiamo usato un modello del coniglio per sviluppare il nostro metodo. Altri hanno utilizzato roditori, conigli, o più grandi animali per testare la vena dell'innesto gene terapia10,11,12,15,16,17,25, 26. Rispetto ai modelli di roditori, conigli sono più costosi e sono soggetti a requisiti normativi più severi. Tuttavia, rispetto ad animali più grandi (ad es., maiali e cani), i conigli sono molto meno costosi da acquistare e casa e molto più facile da gestire. Inoltre, vasi di coniglio assomigliano umani vasi fisiologicamente27, sono sufficientemente grandi, che possono essere utilizzati per testare gli interventi percutanei28,29, e forniscono sufficiente tessuto che più endpoint (ad es., istologia, proteine, RNA) può essere esaminato tramite un singolo vaso sanguigno esemplare22,30. Inoltre, quando i conigli con gli innesti della vena sono alimentati con una dieta ricca di grassi, sviluppano vena innesto aterosclerosi31,32, che è una causa comune dell'arteria coronaria bypass vena innesto guasto4,5 . Questi innesti di vena di coniglio aterosclerotica possono servire come substrato per gli interventi di terapia genica consegnati con questo metodo di test. Il protocollo fornito può aiutare gli investigatori a padroneggiare le competenze tecniche necessarie per ottenere l'espressione del transgene durevole negli innesti di vena di coniglio.

<table><tbody><tr><td>Siringa Monouso</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3mL con ago 24G</td><td>Becton Dickinson</td><td>309571</td><td>2x per chirurgia di innesto venoso; 2x per chirurgia di trasferimento genico</td></tr><tr><td>1 mL siringa con ago 27G</td><td>Becton Dickinson</td><td>309623</td><td>2x per chirurgia di innesto venoso, 5x per chirurgia di trasferimento genico</td></tr><tr><td>Ago 19G</td><td>Becton Dickinson</td><td>305187</td><td>Gene siringa da</td></tr> 20 mL per chirurgia di <tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> trasferimento<tr><td>, luer lock</td> Cateteri <td>Nipro Medical Corp</td><td>JD+20L</td><td></td></tr><tr><td>, 24Ga x 3/4"</td><td>Terumo Medical Products</td><td>SROX2419V</td><td></td></tr><tr><td>ago 21G</td><td>Becton Dickinson</td><td>305165</td><td>Chirurgia di trasferimento genico e per siringa da 20 ml di</td></tr><tr><td>garza salina 4" x 4"</td><td>Dynarex</td><td>3242</td><td>~10-15 per intervento chirurgico</td></tr><tr><td>3-0 sutura di seta</td><td>Covidien Ltd.</td><td>Sutura in seta S-244</td><td></td></tr><tr><td>5-0</td><td>Covidien Ltd.</td><td>Sutura in polipropilene S-182</td><td></td></tr><tr><td>7-0</td><td>CP Medical</td><td>8703P</td><td></td></tr><tr><td>Sutura in polipropilene 7-0 CP</td><td>Medical</td><td>8648P</td><td>Chirurgia del trasferimento genico</td></tr><tr><td>Sutura all'acido poliglicolico 5-0</td><td>CP Medical</td><td>421A</td><td></td></tr><tr><td>Sutura all'acido poliglicolico 3-0</td><td>CP Medical</td><td>398A</td><td></td></tr><tr><td>Tamponi imbevuti di alcol</td><td>Covidien Ltd.</td><td>6818</td><td>Per il posizionamento della linea endovenosa</td></tr><tr><td>Tappo del catetere</td><td>Vetoquinol</td><td>411498</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina HCl, 100 mg/mL</td><td>Vedco Inc.</td><td></td><td></td>5098916106</tr><tr><td>Xilazina, 100 mg/mL</td><td>Akorn Inc.</td><td>4821</td><td></td></tr><tr><td>Lidocaina, 20 mg/mL</td><td>Pfizer</td><td>409427702</td><td></td></tr><tr><td>Marcaina 0,5%</td><td>Pfizer</td><td>409161050</td><td></td></tr><tr><td>Beutanasia D-Special</td><td>Intervet Inc.</td><td>NDC 00061047305</td><td>solo chirurgia del raccolto</td></tr><tr><td>Buprenorfina HCl, 0,3 mg/mL</td><td>Patterson Veterinary</td><td>12496075705</td><td></td></tr><tr><td>Saline IV sacca, 0,9% cloruro di sodio</td><td>Baxter</td><td>2B1309</td><td></td></tr><tr><td>eparina&nbsp; (5000 U/mL)</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>NDC 63323-047-10</td><td></td></tr><tr><td>Papaverina (3,5 mg/ml)</td><td>American Reagent Inc.</td><td>NDC 0517-4002-25</td><td>Diluito da 30mg/mL di stock; Utilizzare 1 ml massimo</td></tr> di <tr><td>cerotto Fentanil, 25 mcg/h</td><td>Apotex Corp.</td><td>NDC 60505-7006-2</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Fornitori multipli</td><td>Numero di catalogo non disponibile</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Vettore</td><td></td><td></td> virale <td>Solo chirurgia di trasferimento genico</td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum Porta aghi 7" dritto</td><td>Roboz</td><td>RS-7900</td><td></td></tr><tr><td>Forbici operatorie 6,5" dritto smussato/smussato</td><td>Roboz</td><td>RS-6828</td><td></td></tr><tr><td>Porta aghi /con forbici da sutura</td><td>Miltex</td><td>8-14-IMC</td><td></td></tr><tr><td>Forbici Castroviejo</td><td>Roboz</td><td>RS-5658</td><td></td></tr><tr><td>Porta aghi Castroviejo, 5,75" dritto con blocco</td><td>Roboz</td><td>RS-6412</td><td></td></tr><tr><td>Forbici Stevens 4,25" curvo smussato/smussato</td><td>Roboz</td><td>RS-5943</td><td></td></tr><tr><td>Divaricatore Alm 4" 4X4 5mm rebbi smussati</td><td>Roboz</td><td>RS-6514</td><td>2x</td></tr><tr><td>Morsetto per asciugamani Backhaus 3,5"</td> <td>Roboz</td><td></td><td>4x</td></tr><tr><td>Pinza per impostazione micro clip 4.75"</td><td>Roboz</td><td>RS-6496</td><td></td></tr><tr><td>Clip micro vascolari, 11 mm</td><td>Roboz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surg-I-Loop</td><td>Scanlan International</td><td>1001-81M</td><td>5 cm di lunghezza</td></tr><tr><td>Pinza Bonaccodato, 4" (10 cm) dentellature longitudinali lunghe, punta seghettata a croce, larghezza della punta 1,2 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-5210</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 pinze Inox misura della punta .17 & volte; .10 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-5042</td><td></td></tr><tr><td>Graefe pinze, 4" (10 cm) lungo seghettato dritto, punta da 0,8 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-5280</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per zanzare Halstead, 5" dritte, punte da 1,3 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-7110</td><td>2x</td></tr><tr><td>pinze per zanzare Halstead,&nbsp; 5" curve, punte da 1,3 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-7111</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per zanzare Jacobson 5" curve extra delicate, punte da 0,9 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-7117</td><td></td></tr><tr><td>Pinza Kantrowitz, 7,25" delicata a 90 gradi, punte da 1,7 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-7305</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per tessuti 5", 1X2 denti, larghezza punta 2 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-8162</td><td></td></tr><tr><td>Pinza Allis-Baby, 12 cm, 4x5 denti, larghezza punta 3 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11092-12</td><td>2x</td></tr><tr><td>Pinza Adson, 12 cm, seghettata, diritta</td><td>Fine Science Tools</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>Manipolo ed elettrodo per elettrochirurgia veterinaria</td><td>MACAN Manufacturing</td><td>HPAC-1; R-F11</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Suite Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coperta e pompa per acqua calda circolante</td><td>Fornitori multipli</td><td>Numero di catalogo non disponibile</td><td></td></tr><tr><td>Unità di riscaldamento Bair hugger</td><td>3M</td><td>Modello 505</td><td></td></tr><tr><td>Pompa per infusione IV</td><td>Heska</td><td>Vet IV 2.2</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizzatore e scavenger di isoflurano</td><td></td><td>Numero di catalogo non disponibile</td><td></td></tr><tr><td>Monitor multiparametrico veterinario</td><td>Surgivet</td><td>Surgivet Advisor</td><td></td></tr><tr><td>Unità di elettrochirurgia veterinaria</td><td>MACAN Manufacturing</td><td>MV-9</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio operatorio</td><td>D.F. Vasconcellos</td><td>M900</td><td>Ingrandimento 25X per la chirurgia dell'innesto venoso; ingrandimento 16X per la chirurgia del trasferimento genico</td></tr></tbody></table>

un modello del coniglio di espressione del transgene durevole nella vena giugulare di innesti di interposizione dell'arteria carotica comune

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

Chirurgia di bypass dell'innesto della vena è un trattamento per la malattia occlusiva arteriosa; Tuttavia, il successo a lungo termine è limitata dalla guasto dell'innesto a causa di trombosi, iperplasia intimale ed aterosclerosi. L'obiettivo di questo articolo è quello di illustrare un metodo per posizionare gli innesti bilaterali interposizione venosa in un coniglio, poi trasducendo gli innesti con un vettore di trasferimento del gene che raggiunge l'espressione del transgene durevole. Il metodo consente l'indagine dei ruoli biologici di geni e loro prodotti proteici nell'omeostasi dell'innesto della vena normale. Inoltre permette il testing di transgeni per le attività che potrebbero impedire il guasto dell'innesto di vena, ad es., se l'espressione di un transgene impedisce la crescita di neointimale, riduce l'infiammazione vascolare o riduce l'aterosclerosi in conigli alimentati con una dieta ad alta percentuale di grassi. Durante un intervento chirurgico di sopravvivenza iniziale, i segmenti di destra e di sinistra della vena giugulare esterna sono asportati e messi bilateralmente come invertita innesti di interposizione dell'arteria carotica comune di fine--lato. Durante un secondo intervento di sopravvivenza, effettuato 28 giorni più successivamente, ciascuno degli innesti è isolato dalla circolazione con clip vascolari e i lumen sono pieni (tramite un'arteriotomia) con una soluzione contenente un vettore (HDAd) adenovirale helper-dipendente. Dopo 20 min di incubazione, la soluzione di vettore è aspirata, arteriotomia viene riparato e flusso viene ripristinato. Le vene si raccolgono a intervalli di tempo dettate da singoli protocolli sperimentali. Il ritardo di 28 giorni tra il posizionamento dell'innesto e la trasduzione è necessario garantire l'adeguamento dell'innesto della vena per la circolazione arteriosa. Questo adattamento evita rapida perdita di espressione del transgene che si verifica negli innesti di vena trasformati prima o immediatamente dopo l'innesto. Il metodo è unico nella sua capacità di raggiungere l'espressione del transgene durevole, stabile nelle vene innestate. Rispetto ad altri modelli di innesto di grande vena animali, conigli hanno vantaggi di basso costo e facile movimentazione. Rispetto ai modelli dell'innesto della vena del roditore, conigli sono più grandi e più facile da manipolare vasi sanguigni che forniscono abbondante tessuto per l'analisi.

La competenza tecnica di un nuovo operatore deve essere convalidata prima che l'operatore può utilizzare questo metodo per generare dati sperimentali. La prima pietra miliare che deve realizzare un nuovo operatore è la pervietà dell'innesto della vena coerente dopo l'ambulatorio iniziale l'innesto della vena e la trasduzione in ritardo l'ambulatorio successivo. Oltre il 90% la pervietà dopo ciascuno degli ambulatori è auspicabile e realizzabile. L'evidenza può essere valutata in modo non ...

Questo metodo descrive il posizionamento degli innesti della vena di interposizione in conigli, la trasduzione degli innesti e il raggiungimento dell'espressione del transgene durevole. Questo permette l'indagine su ruoli fisiologici e patologici di transgeni e loro prodotti proteici nelle vene innestate e il test di terapie geniche per la malattia dell'innesto della vena.

Un modello del coniglio di espressione del Transgene durevole nella vena giugulare di innesti di interposizione dell'arteria carotica comune

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

Questo metodo può rispondere a domande chiave sulla patogenesi del fallimento dell'innesto venoso. Ad esempio, potrebbe identificare mediatori del fallimento del trapianto e testare strategie volte a prevenire il fallimento del trapianto. Il vantaggio principale di questa tecnica è la sua capacità di ottenere un'espressione transgenica duratura e stabile nell'endotelio dell'innesto venoso.Dopo aver anestetizzato un coniglio secondo il protocollo di testo, radere l'animale dalla tacca sternale al bordo della mandibola. Al termine dell'impostazione chirurgica, utilizzare l'elettrocauterizzazione per tagliare la pelle lungo la linea mediana tra l'incisura sternale e la mandibola, lunga circa sette-nove centimetri. Quindi fissare i morsetti per asciugamani per tenere aperta l'incisione.Sezionare senza mezzi termini sotto la fascia lungo l'intera linea mediana. Quindi utilizzare l'elettrocauterizzazione per tagliare lo strato fasciale sezionato lungo la linea mediana. Successivamente, iniziando dal lato destro, sezionare tra il muscolo ioide sternale sovrastante la trachea e il muscolo sternoefalico per esporre l'arteria carotide comune.Quindi sezionare con cura un segmento di quattro o

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Iperplasia neointimale è la causa primaria di stenosi nelle vene arterializzato. Proponiamo un nuovo protocollo per cui si innesta la vena giugulare esterna destra con la tecnica bracciale in carotide comune di ratti Sprague Dawley. Il tasso di sopravvivenza è stata del 100% per il punto temporale di sacrificio.

La formazione di una sofisticata tecnica microchirurgica: Interposizione della vena giugulare esterna innesto nella carotide comune in Rats

In questo video, dimostriamo una procedura per prelevare chirurgicamente un segmento della vena giugulare da un modello di coniglio. Il segmento resecato può essere utilizzato come innesto di vena autologa per studiare l'iperplasia intimale che si sviluppa a causa della pressione arteriosa.

Prelievo di innesto della vena giugulare da un modello di coniglio: una procedura chirurgica per asportare un segmento della vena giugulare di coniglio per studi ex vivo

Questo video dimostra l'interposizione dell'arteria carotide del coniglio con la vena giugulare per indurre l'iperplasia intimale venosa sottoponendo le vene a pressione arteriosa. Questo modello aiuterà a studiare interventi molecolari e genetici per attenuare la progressione dell'iperplasia intimale dopo interventi di rivascolarizzazione.

Interposizione dell'arteria carotide e della vena giugulare: una tecnica per indurre l'iperplasia intimale venosa nel modello di coniglio

Questo metodo è quello di introdurre un transgene nell'endotelio delle arterie carotiche coniglio. Introduzione del transgene permette di valutare il ruolo biologico del prodotto transgene in arterie normali o modelli di malattia. Il metodo è anche utile per misurare l'attività di sequenze regolatrici del DNA.

In Vivo Trasferimento del gene per l'endotelio dell'arteria carotica comune di coniglio

Il presente protocollo mira a creare sperimentalmente iperplasia intima venosa sottoponendo le vene alla pressione arteriosa per lo sviluppo di strategie per attenuare l'iperplasia intimave venosa a seguito di chirurgia di rivascolazione utilizzando innesti vena.

Un modello di interposizione venosa di coniglio che imita la chirurgia di rivascolarizzazione usando grafts di venina per valutare l'iperplasia intima sotto la pressione sanguigna arteriosa

Lo sviluppo e la sperimentazione di dispositivi endovascolari per il trattamento dell'aneurisma intracranico è ancora di grande importanza. La maggior parte dei modelli di aneurisma utilizzati oggi mancano delle importanti caratteristiche di una parete degenerata arteriosa o dell'emodinamica di una vera biforcazione. Pertanto, abbiamo mirato a progettare un nuovo modello di biforcazione della sacca arteriosa nei conigli.

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Un modello del coniglio di espressione del Transgene durevole nella vena giugulare di innesti di interposizione dellarteria carotica comune (Video) | JoVE Journal

Un modello del coniglio di espressione del Transgene durevole nella vena giugulare di innesti di interposizione dell'arteria carotica comune

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