Name: Strategie di campionamento e trattamento dei campioni di tessuto Biobank Porcine modelli biomedicale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: Scopri le tecniche di campionamento e trattamento dei tessuti biobank su modelli suini. Il metodo di immersione stima il volume totale degli organi, mentre la tecnica dell'orientatore genera sezioni isotrope casuali per analisi morfologiche quantitative non distorte.

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Gli autori ringraziano Lisa Pichl per l'eccellente assistenza tecnica.

<ol><li>Aigner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+pigs+as+models+for+translational+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Transgenic pigs as models for translational biomedical research.</a> J Mol. Med. 88, 653-664 (2010).</li>
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<li>Blutke, A., Schneider, M. R., Wolf, E., Wanke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+hormone+%28GH%29-transgenic+insulin-like+growth+factor+1+%28IGF1%29-deficient+mice+allow+dissociation+of+excess+GH+and+IGF1+effects+on+glomerular+and+tubular+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rep%22%5BJournal%5D)">Growth hormone (GH)-transgenic insulin-like growth factor 1 (IGF1)-deficient mice allow dissociation of excess GH and IGF1 effects on glomerular and tubular growth.</a> Physiol Rep. 4, e12709(2016).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Generazione di biobanca campionari da modelli animali suine richiede tecniche robuste ed i protocolli per la determinazione dei volumi di organi/tessuti, la generazione riproducibile del rappresentante, campioni di tessuto ridondante adatti per una vasta gamma di metodi di analisi diversi e per la randomizzazione dell'orientamento delle sezioni del campione per analisi stereologiche quantitative. I metodi descritti nel presente articolo sono adattati alle dimensioni dei suini organi e tessuti e sono stati sviluppati per ...

In medicina traslazionale, maiali sono sempre più comuni per uso come animale di grandi dimensioni modelli1,2,3,4,5, a causa di parecchie somiglianze vantaggiose tra il porcino e anatomia umana e fisiologia e la disponibilità di metodi biologici molecolari stabiliti permettendo per generazione di su misura, geneticamente modelli di maiale per una vasta gamma di condizioni di malattia1,4.
Tuttavia, rispetto ai modelli del roditore, il numero di animali di un modello di rispettivi maiale che possono essere fornite per gli esperimenti in qualsiasi momento è limitato. Ciò è dovuto l'intervallo di generazione porcino di circa un anno e gli sforzi finanziari e richiedono molto tempo richiesti per la generazione di modelli porcine e zootecnia. Pertanto, singoli animali di un modello porcino, come pure i campioni che possono essere generati da questi suini, sono molto utili, specialmente se geneticamente porcine modelli e/o a lungo termine problemi sperimentali (ad esempio, le complicazioni ritardate di malattie croniche) sono esaminate in individui invecchiati2,6,7.
Nel corso di qualsiasi studio, prestazioni di analisi aggiuntive che non era stata prevista nel progetto sperimentale iniziale dello studio più tardi potrebbero rivelarsi per essere rilevante, per esempio, all'indirizzo distinte domande derivanti da precedentemente scoperto risultati inattesi. Se non sono disponibili campioni idonei per tali ulteriori esperimenti, sproporzionatamente elevato costo e dispendiose spese potrebbero essere necessarie generare ulteriori maiali e campioni di tessuto. Per essere preparati per tali eventualità, generazione delle collezioni Biobanca di campioni di backup conservati di diversi organi, tessuti o bio-liquidi, quantitativamente e qualitativamente adatti per una vasta gamma di analisi successive, è considerato un importante approccio2,6,7. I benefici ottimali la derivazione da un modello animale porcino, la disponibilità di campioni adeguati biobanca offre anche la possibilità unica per eseguire un'ampia gamma di metodi differenti di analisi sui materiali campione identico a livello multi-organo nella stessa singoli animali, per esempio, di distribuzione dei campioni agli scienziati di diversi gruppi di lavoro organizzati in una rete di ricerca2,6,7. Inoltre, la strategia di campionamento ' lungimirante ' in biobanking contribuisce anche ad una riduzione del numero di animali necessari in uno studio. I vantaggi del modello porcino biobanking recentemente sono stati dimostrati in un multi-organo, multiomics studio, esaminante organo cross-talk in un modello porcino geneticamente di mellito di diabete a lungo termine, usando gli esemplari da Monaco di Baviera MIDY maiale biobanca 2.
Ci sono alcuni requisiti obbligatori biobanca campioni generalmente devono rispettare per stabilire l'affidabilità e l'interpretabilità dei risultati delle analisi eseguite successivamente. I campioni devono essere generati in modo riproducibile, e devono essere adeguatamente rappresentante, cioè, che riflette le caratteristiche morfologiche e molecolari interessate dell'organo/tessuto sono stati prelevati i campioni da7. Per essere adatto per una vasta gamma di tipi di analisi a valle, i campioni devono essere presi in quantità sufficiente e trattati secondo le richieste (comprese le condizioni di tempo e temperatura) dei metodi analitici diversi, tra cui descrittivo analisi istopatologiche, come cryohistology, paraffina e plastica istologia, immunoistochimica, ibridazione in situ , analisi al microscopio elettronico ultrastrutturali e analisi diagnostiche di laboratorio clinico, anche come molecolare analisi del DNA, RNA, proteine e metaboliti.
Per consentire la valutazione di una vasta gamma di parametri morfologici quantitativi distinti quali numeri, volumi, lunghezze o superfici di strutture di tessuto distinti dalle analisi stereologiche quantitative, sezione randomizzato gli aerei della campioni istologici dei rispettivi organi/tessuti devono essere preparati7,8,9,10,11. In studi morfologici quantitativi, la determinazione precisa del volume totale del tessuto, organo o vano di organo, i campioni sono stati prelevati da (cioè, lo spazio di riferimento) è fondamentalmente importante7,9 , 12 per calcolare le quantità assolute dei parametri interessati entro il rispettivo organo, tessuto o organismo. Alla fine, l'effetto di restringimento di incorporamento-relative del tessuto durante la preparazione delle sezioni istologiche deve essere determinato e presi in considerazione13. Pertanto, analisi quantitative stereologiche, soprattutto di campioni archiviati (fissata i campioni di tessuto, tessuto incorporato blocchi, sezioni istologiche, ecc.) da studi precedenti sono a volte severamente limitata o addirittura impossibile12, specialmente se volumetria dei rispettivi organi/tessuti non è stata eseguita, se non disegni di campionamento adeguato sono stati applicati per mandato campioni rappresentativi, se i numeri e le quantità di campioni singoli disponibili non sono sufficienti, o se l'elaborazione della campioni è incompatibile con la valutazione dei parametri morfologici quantitativi di interesse di. A causa di molteplici fattori d'influenzano possibili, l'idoneità dei materiali di archivio-campione per l'analisi dei parametri morfologici quantitativi distinti non può essere risolta in modo inequivocabile, ma dipende la valutazione attenta di ogni singolo caso.
Così, come la posizione, dimensioni, numero, elaborazione, direzione di taglio e orientamento dei campioni potenzialmente influenzerà i risultati delle analisi successive, questi fattori sono di grande importanza e devono essere considerati nel disegno sperimentale di qualsiasi studio. Per quanto riguarda questi aspetti e le caratteristiche speciali dell'anatomia suina, linee guida di campionamento completo, dettagliato, su larga scala modelli animali adattati a suina recentemente sono stati stabiliti, fornendo un robusto riferimento standardizzato, riproducibile e generazione efficiente di campioni ridondanti, adeguatamente elaborati, di alta qualità da più di 50 diverse specie suina organi e tessuti6,7.
Le descrizioni metodologiche e il video tutorial illustrato nel presente articolo forniscono dettagliate, illustrativi, comprensibile, passo a passo le istruzioni per esecuzione pratica di una varietà di tecniche per volumetria, campionamento dei tessuti suine e organi e trattamento dei campioni di tessuto per metodi differenti di analisi a valle. Le tecniche consigliate includono metodi per la determinazione dei volumi di organi/tessuti e densità sulla base dei principi di Archimede e Cavalieri9, compresa la determinazione delle dimensioni del restringimento tridimensionale del tessuto relativo alla incorporamento in diversi incorporamento media14 durante l'elaborazione per esame istologico, applicazione del campionamento casuale sistematico-ponderato sul volume praticabile si avvicina, elaborazione di campioni di tessuto campionata per diverse successive analisi7,8,9,15e generazione di opportunamente orientato ed elaborati campioni per potenziali analisi quantitative stereologiche7,8, 9,10,11. Accanto a loro applicazione nei progetti di porcino biobanca, i metodi hanno dimostrati sono generalmente adatti per tutti gli studi che esaminano proprietà quantitativa histo-morfologiche di organi/tessuti. Inoltre, disegni di campionamento casuale sistematico sono particolarmente utili per la generazione di campioni rappresentativi in esperimenti utilizzando metodi di analisi molecolare per rilevare alterazioni di abbondanza di, per esempio, RNA, proteine o metaboliti in vari organi e tessuti.
I prossimi paragrafi forniscono una breve introduzione a questi metodi, mentre loro prestazioni funzionali sono descritto nella sezione protocollo.
Determinazione dei volumi di organi/tessuti Determinazione dei volumi e pesi dell'organo è importante in diverse impostazioni sperimentali, come questi fattori potrebbero indicare cambiamenti, potenzialmente correlati al sperimentalmente esaminati fattori di interesse. Il volume totale di un organo/tessuto è anche comunemente richiesto per il calcolo di parametri quantitativi assoluti, (ad esempio, il numero totale delle cellule), dalle densità numerica stereologically stima del volume (cioè, il numero di celle per unità di volume del tessuto)7,12. Oltre alle tecniche utilizzando attrezzature tecniche complesse, quali tomografia del calcolatore, ci sono fondamentalmente tre metodi pratici comunemente utilizzate per determinare il volume assoluto di un organo o tessuto. Il volume di un organo può essere determinato da "diretto misura volumetrica" secondo il principio di Archimede, cioè, misurazione del volume di acqua o soluzione salina spostato dalla struttura quando completamente sommerso. Tuttavia, per in modo paragonabile grandi organi porcini, questi approcci sono poco pratico e incline a imprecisione, poiché richiedono molto grande/misurazione volumetrica boccette. Più convenientemente, il volume di un organo/tessuto può essere calcolato dal suo peso e densità7,12,16, che può essere determinato in modo efficiente utilizzando il "metodo di immersione"7,12 ,16 (passaggio di protocollo 1.1.). Volumi di organo/tessuto possono inoltre essere stimate utilizzando la volumetria approcci basati sul "principio di Cavalieri" (1598-1647). In termini semplici, afferma il principio di Cavalieri, che, se due oggetti sono sezionati in piani paralleli ad un piano terra, e i profili delle sezioni tagliano attraverso i due oggetti alle corrispondenti distanze dal piano di terra hanno le stesse aree, i due oggetti hanno lo stesso volume. Quindi, il volume degli oggetti di forma arbitraria può essere valutato come il prodotto delle loro zone di profilo di sezione in sezione parallela, altrettanto lontani gli aerei e la distanza tra i piani di sezione. Questo è comprensibile con la seguente analogia: considera due stack composto lo stesso numero di monete identiche sono collocati fianco a fianco, uno stack con l'inserviente di monete impilata una sopra l'altra producendo una forma cilindrica dello stack delle monete e l'altro pila di monete con fuori centro posizionato monete (Figura 3A). Anche se le forme di entrambi gli stack di moneta sono diverse, i volumi sono gli stessi, poiché le zone delle monete a livelli corrispondenti di entrambi gli stack (vale a dire, le aree di profili di sezioni parallele tagliano attraverso entrambi gli stack di moneta a distanze uguali dalla terra) sono identici. Stima dei volumi di porcini organi e tessuti utilizzando il principio di Cavalieri7,12,15 è descritto al punto 1.2.
Determinazione del grado di restringimento del tessuto legata alla inclusione di istologico Nelle analisi di diversi parametri morfologici quantitativi misurati nelle sezioni istologiche del tessuto, l'effetto di restringimento di incorporamento-relative del tessuto che si verificano durante la lavorazione per l'istologia del tessuto deve essere determinato e presi in considerazione. L'entità del restringimento di incorporamento-relative del tessuto può essere variabile e dipende sia il tessuto, l'elaborazione e l'incasso medio8,13,17,18,19. Generalmente, cambiamenti relativi all'incorporamento del volume di un campione di tessuto (cioè, per lo più restringimento) si verificano in tutte le tre dimensioni dello spazio e, di conseguenza, influisce su tutti i parametri dimensionali stimati dalle analisi stereologiche quantitative8 . In sostanza, il grado di restringimento di incorporamento-relative del tessuto, espresso come il fattore di ritiro lineare tessuto (fS), può essere stimato come indicato al punto 1.3. e usate per la correzione di parametri morfologici quantitativi (restringimento sensibile)14.
Campionamento casuale sistematico-ponderato sul volume di organi/tessuti Istituzione di una raccolta di Biobanca di campioni dell'organo/tessuto suino, approcci sistematici di campionamento casuale-ponderato sul volume come descritti nel passaggio 2 hanno dimostrato di essere pratiche, risparmio di tempo ed efficienti tecniche per la generazione del rappresentante, tessuto multi-purpose campioni7,8,9,15.
Generazione di sezioni isotropica uniforme casuale e casuale uniforme verticale per analisi quantitative stereologiche Biobanca di campioni di tessuto devono essere adatto per una vasta gamma di metodi differenti di analisi stereologiche quantitativa per la stima di un massimo di parametri che non potrebbe essere determinato senza un esemplare adeguatamente preparato. Quasi tutti i parametri quantitativi stereologiche possono essere determinati, utilizzando "isotropo (indipendente) casuale (IUR) sezioni uniformi"8,9. Nelle sezioni IUR, l'orientamento tridimensionale del piano di sezione del campione di tessuto è casuale. Ciò può essere ottenuto dalla randomizzazione della posizione del campione di tessuto rispetto alla posizione del piano di sezione, come applicato nei "Isector" metodo11 (punto 3.1 del protocollo), o da casualizzazione dell'orientamento del piano di sezione relativi alla campione di tessuto, come il metodo di "Orientatore"10 (passo 3.2 del protocollo). Nei campioni di tessuto, come la pelle o la mucosa esemplare Mostra un asse verticale naturalmente presente, o definito e correttamente identificabile, preparazione di "verticale uniforme casuale (RVU) sezioni" (fase di protocollo 3.3.) sezionato rigorosamente all'interno del piano di loro asse verticale è vantaggioso8,20. Per un discorso completo dei fondamenti teorici del campionamento IUR/VUR e una discussione esaustiva delle potenziali a valle analisi quantitativi stereologiche, si rimanda il lettore interessato ai libri di testo di stereology quantitativa nella vita Scienze8,9.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Carl Roth GmbH, Germania</td><td>Agar (polvere), Cat.: 5210.3</td><td>Sciogliere circa 1 g di agar in 10 ml di acqua fredda in un becher di vetro o plastica, scaldare in forno a microonde a 700 W, far bollire la soluzione due volte mescolando rigorosamente. Versare nello stampo ancora caldo e lasciare solidificare. Attenzione: Durante la manipolazione con agar liquido caldo, indossare occhiali e guanti protettivi.</td></tr><tr><td>Pinza</td><td>Hornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, Germania</td><td>Schieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Cat.: 3664902</td><td>Qualsiasi tipo di pinza (meccanica o elettronica) va bene.</td></tr><tr><td>Stampi per colata (metallo)</td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml; nde, Germania</td><td>Einbettsch&auml; Edelstahl, 14 x 24 x 5 mm, Cat.: 14302b</td><td>Qualsiasi altro tipo di stampo per colata di metallo utilizzato per l'inclusione di paraffina andrà bene.</td></tr><tr><td>Copie di modelli di griglie a croce (5mm - 6 cm)</td><td>n.a.n.a.Copie</td><td></td> <td>di modelli di griglie a croce (5mm - 6 cm) sono forniti nel file di dati supplementari di Albl et al.&nbsp; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)</td></tr><tr><td>Modelli di copia di cerchi equiangolari e pesati per il coseno</td><td>n.a.n.a.I</td><td></td> <td>modelli di copia di cerchi equiangolari e ponderati per il coseno sono forniti in Nyengaard & Gundersen. Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) and in Gundersen et al. Stereological Principles and Sampling Procedures for Toxicologic Pathologists. In: Haschek e Rousseaux&acute; s Manuale di patologia tossicologica. 3a ed., 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).</td></tr><tr><td>Morsetti pieghevoli (clip per raccoglitori YIHAI, 15 mm e 19 mm)</td><td>Ningbo Tianhong Stationery Co ltd., Cina</td><td>Y10006 e Y10005</td><td>Andrà bene anche qualsiasi altro tipo di morsetti pieghevoli standard per ufficio.</td></tr><tr><td>Pinza (anatomica)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Germania</td><td>neoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Cat.: 1-1811</td><td>Qualsiasi tipo di pinza anatomica va bene.</td></tr><tr><td>Soluzione di formaldeide 4%</td><td>SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Germania</td><td>Formaldeide 37/40 %, Cat.: 1000411525005</td><td>Diluire al 4% da soluzione concentrata. Tampone a pH neutro. Indossare un'adeguata protezione per occhi, mani e vie respiratorie. Processare campioni di tessuto fissati in soluzione di formaldeide sotto una cappa di aspirazione e indossare occhiali protettivi e guanti da laboratorio.</td></tr><tr><td>Carta millimetrata (per calibrazione)</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, Jena, Germania. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Penig Millimeterpapier A4, Cat.: 2514</td><td>Qualsiasi tipo di carta millimetrata (in scala millimetrica) va bene.</td></tr><tr><td>Bicchieri da laboratorio (5ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Germania</td><td>Becherglas SIMAX&reg; , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Cat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-1036</td><td>Qualsiasi tipo di bicchiere in vetro o plastica da 5 &ndash; 100 ml di volume va bene.</td></tr><tr><td>Bilancia da</td> <td>laboratorioMettler Toledo GmbH, Gie&szlig; en, Germania</td><td>PM6000</td><td>Qualsiasi bilancia da laboratorio standard con intervalli di misurazione compresi tra 0,1 mg e circa 20 g, rispettivamente tra 100 mg e circa 500 g andrà bene</td></tr><tr><td></td><td>Sartorius AG, G&ouml; ttingen, Germania</td> Lame per microtomo <td>BP61S</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml; nde, Germania</td><td>FEATHER Microtome blasdes S35, Cat.:14700</td><td>Qualsiasi tipo di lame per microtomo monouso andrà bene.</td></tr><tr><td>Morfometria / software / sistema di planimetria</td><td>National Institute of Health (NIH)</td> <td>ImageJ</td><td>Scarica da https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997).</td></tr><tr><td>Zeiss-Kontron, Eching, Germania</td> Sistema <td>di</td><td></td><td>analisi delle immagini VideoplanTM</td> Fotocamera</tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td>D40</td><td>Va bene qualsiasi tipo di fotocamera digitale che può essere montata su un treppiede.</td></tr><tr><td>Lucidi in plastica</td><td>Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Germania</td><td>Laser Overhead-Folie DINA4 Cat.:&nbsp; 3562</td><td>Qualsiasi trasparenza in plastica stampabile (al laser) andrà bene.</td></tr><tr>Le <td></td><td>tabelle dei numeri casuali possono essere convenientemente generate (con numeri definiti di numeri casuali ed entro intervalli definiti), utilizzando generatori di numeri casuali, come ad esempio: https://www.random.org/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Lame di rasoio</td><td>Plano GmbH, Wetzlar, Germania</td><td>T5016</td><td>Qualsiasi tipo di lamette da barba andrà bene.</td></tr><tr><td>Righello</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, Jena, Germania. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Office-Point Lineal 30 cm, Kunststoff, trasparente, Cat.: ln30</td><td>Va bene anche qualsiasi tipo di righello in scala cm-mm.</td></tr><tr><td>Soluzione salina (0,9%)</td><td>Carl Roth GmbH, Germania</td><td>Cloruro di sorio, >99% Cat.: 0601.1</td><td>Per preparare soluzione fisiologica allo 0,9%, sciogliere 9 g di NaCl in 1000 ml di acqua distillata a 20°C.</td></tr><tr><td>Lame per bisturi</td><td>Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, Germania</td><td>Lame chirurgiche BRAUN N&deg; 22</td><td>Qualsiasi tipo di lama di bisturi andrà bene.</td></tr><tr><td>Scanner</td><td>Hewlett-Packard</td><td>hp scanjet 7400c</td><td>Qualsiasi tipo di scanner da ufficio standard in grado di scansionare con risoluzioni da 150-600 dpi andrà bene.</td></tr><tr><td>Esempi</td><td></td> <td>di dispositivi di affettatura autocostruiti possono essere trovati in Knust, et al. Anatomical record. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) e nel file di dati supplementari di Albl et al.&nbsp; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016).</td><td></td></tr><tr><td>Stampi per colata sferica (ad es. in diametro 25,5 mm)</td><td>Pralinen-Zutaten.de, Windach, Germania</td><td>Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25,5 mm</td> Gli <td>stampi per colata sferica possono anche essere autocostruiti o ottenuti da altri fornitori di dolciumi (per praline). Gli stampi di colata qui indicati sono in realtà l'imballaggio/avvolgimento di impasti di praline cave (prima mangia le praline e poi utilizza la confezione per la generazione di sezioni del settore i)</td></tr><tr><td>Filo sottile</td><td>Basteln & Hobby Schobes, Stra&szlig; lontano, Germania. www,bastel-welt.de</td><td>Messingdraht (0.3 mm) Cat.: 216464742</td><td>Qualsiasi altro tipo di filo sottile va bene.</td></tr><tr><td>Carta velina</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Germania</td><td>Declcate Task Wipes-White, Cat.: 1-5305</td><td>Qualsiasi altro tipo di carta velina da laboratorio va bene.</td></tr><tr><td>Penna a tenuta stagna</td><td>Staedler Mars GmbH & Co KG, N&uuml; rnberg, Grmany</td><td>Lumocolor permanente 313, 0,4 mm, S, nero, Cat.: 313-2</td><td>Qualsiasi altro tipo di penna impermeabile va bene.</td></tr></tbody></table>

strategie di campionamento e trattamento dei campioni di tessuto biobank porcine modelli biomedicale

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

Nella ricerca medica traslazionale, porcini modelli costantemente sono diventati più popolari. Considerando l'alto valore dei singoli animali, specialmente di maiale geneticamente modelli e il numero spesso limitata di animali disponibili di questi modelli, creazione di raccolte di (biobanca) dei campioni di tessuto adeguatamente elaborato adatto per un ampio spettro di metodi di analisi successive, incluse le analisi non specificati nel punto del tempo di campionamento, rappresentano significativi approcci per sfruttare appieno il valore traslazionale del modello. Per quanto riguarda le peculiarità dell'anatomia suina, le linee guida complete recentemente sono state stabilite per generazione standardizzato di rappresentante, campioni di alta qualità da suini diversi organi e tessuti. Queste linee guida sono prerequisiti essenziali per la riproducibilità dei risultati e la loro comparabilità tra diversi studi e gli investigatori. La registrazione dei dati di base, come pesi dell'organo e volumi, la determinazione di punti di campionamento e il numero di campioni di tessuto da generare, come pure loro orientamento, dimensione, elaborazione e indicazioni di rifilatura, sono fattori rilevanti determinazione della generalizzabilità e usabilità del campione per analisi morfologiche molecolari, qualitative e quantitative. Qui, una dimostrazione illustrativa, pratica e dettagliata delle tecniche più importanti per la generazione del rappresentante, multi-purpose biobanca esemplare da tessuti di origine suine è presentato. I metodi descritti qui includono la determinazione dei volumi di organi/tessuti e densità, l'applicazione di una procedura di campionamento casuale sistematico-ponderato sul volume per organi parenchimali di punto-conteggio, determinare l'entità del restringimento del tessuto legate alla inclusione istologici di campioni e generazione di campioni orientati casualmente per analisi stereologiche quantitative, come le sezioni di casuale uniforme isotropici (IUR) generate dai metodi "Orientatore" e "Isector" e uniforme verticale sezioni (RVU) casuale.

Tecnica di immersione per la determinazione della densità di tessuto/organo
Figura 12A -B Mostra il rappresentanza determinazione della densità e il volume di un rene porcino usando la tecnica di immersione descritta nel passaggio 1.1 (Figura 1, Figura 2). Risultati più rappresentativi delle misurazioni di densità di suini ult...

Le applicazioni pratiche e le prestazioni dei metodi per la generazione di campioni di tessuto rappresentativo di porcini modelli animali per un ampio spettro di analisi a valle nella biobanca progetti sono dimostrati, tra cui volumetria, campionamento casuale sistematico, e trattamento differenziale dei campioni di tessuto per i tipi di analisi qualitative e quantitative morfologiche e molecolari.

Strategie di campionamento e trattamento dei campioni di tessuto Biobank Porcine modelli biomedicale

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Questo video mostra due tecniche chiave per il campionamento e l'elaborazione di campioni di tessuto suino della biobanca. La tecnica di sommersione stima in modo affidabile il volume totale di organi e tessuti e la tecnica dell'orientatore genera sezioni di tessuto isotropo casuali per una stima imparziale dei parametri morfologici quantitativi. Il vantaggio principale della tecnica di immersione per la determinazione della densità dei tessuti è che può essere applicata a qualsiasi tipo di tessuto e che produce risultati affidabili sia per campioni piccoli che per campioni di grandi dimensioni.I vantaggi della tecnica dell'orientatore sono che è altamente efficiente e funziona anche con campioni di tessuto di grandi dimensioni. Per iniziare la volumetria per un organo di grandi dimensioni, asportare un pezzo di tessuto di dimensioni adeguate dall'organo. Tamponare accuratamente il campione con un tovagliolo di carta per rimuovere il sangue in eccesso e il liquido tissutale.Quindi pesare il campione su una bilancia di precisione e registrare il peso del campione. Aggiungere lo 0,9% di soluzione salina in un becher di dimensioni adeguate. Non riempire completamente il becher per evi

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Questo è un protocollo per la preparazione ottimale dei tessuti per analisi genomiche, trascrittomiche e proteomiche di pipistrelli catturati in natura. Esso comprende protocolli per la cattura pipistrello e la dissezione, la conservazione dei tessuti, e la coltura cellulare del tessuto pipistrello.

Raccolta di tessuti di pipistrelli per -Omics Analyses e Primary Cell Culture

In questo protocollo sono stati progettati primer specifici suiini, sono stati costruiti frammenti di DNA specifici contenenti plasmidi e sono state stabilite curve standard per la quantificazione. Utilizzando primer specifici per specie, cpsDNA è stato quantificato da qPCR in modelli di trapianto di cellule da maiale a topo e modelli di trapianto di patch per arteria da maiale a scimmia.

Quantificazione del DNA circolante specifico del maiale nel sangue di un modello di xenotrapianto

Questo protocollo descrive in dettaglio la tecnica per la rimozione del cervello dei suini nella sua interezza e la dissezione di diverse regioni cerebrali comunemente studiate nelle neuroscienze.

Estrazione e dissezione del cervello di maiale addomesticato

Nel seguente lavoro, descriviamo i passaggi consecutivi necessari per la creazione di una grande biobanca di cancro colorettale e pancreatico.

Creazione e manutenzione di una biobanca vivente - Come lo facciamo

The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

Caratterizzazione delle cellule endoteliali di escrescenza del sangue (BOEC) dal sangue periferico suino

Le biobanche sono risorse cruciali per la ricerca biomedica e l'unità Biobank for Translational and Digital Medicine presso l'Istituto europeo di oncologia è un modello in questo campo. Qui forniamo una descrizione dettagliata delle procedure operative standard delle biobanche per la gestione di diversi tipi di campioni biologici umani.

Biobanca per la medicina traslazionale: procedure operative standard per una gestione ottimale dei campioni

Questo protocollo descrive un metodo per facilitare la raccolta di campioni da campioni di prostatectomia radicale. L'obiettivo è quello di mappare, caratterizzare e sezionare con micro-macro campioni di tessuto dai campioni in base a criteri anatomopatologici prima di conservarli in una biobanca.

Miglioramento dell'affidabilità della biobanca dei tumori alla prostata con una migliore tecnica di campionamento e caratterizzazione istologica

Questo protocollo descrive l'esecuzione di una craniectomia utilizzando un trapano pneumatico ad alta velocità su un maiale Landrace danese di 3 mesi. L'accesso avviene attraverso l'osso frontale e rivela la dura madre ventrale e gli emisferi cerebrali sottostanti. Questa procedura consente l'accesso a gran parte del cervello del maiale.

Accesso al cervello suino tramite craniectomia pneumatica ad alta velocità

Qui presentiamo un metodo standard per isolare in modo efficiente cellule staminali e adipociti derivati dalle adipoci, caratterizzato da una riduzione del &gt;90% dei tempi di lavorazione, un'elevata vitalità cellulare e una compatibilità ampia.

Isolamento efficiente di cellule staminali e adipociti derivati dall'adiposo dal tessuto adiposo suino

Nelle sezioni seguenti, si delineano le procedure per la preparazione di microsfere di alginato per l'uso in applicazioni biomediche. Specificatamente illustrano una tecnica per creare multistrato alginato microsfere per il duplice scopo di incapsulamento delle cellule e proteine ​​come potenziale trattamento di diabete di tipo 1.

Generazione di microsfere di alginato per applicazioni biomediche

Scopri le tecniche di campionamento e trattamento dei tessuti biobank su modelli suini. Il metodo di immersione stima il volume totale degli organi, mentre la tecnica dell'orientatore genera sezioni isotrope casuali per analisi morfologiche quantitative non distorte.

Strategie di campionamento e trattamento dei campioni di tessuto Biobank Porcine modelli biomedicale

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