Analisi metabolica ingabbiamento in topi alta Fed grasso e della composizione corporea

L'obiettivo di questa procedura è quello di raccogliere la composizione corporea e le misurazioni metaboliche dai topi, come le percentuali di massa grassa e magra e il dispendio energetico. Questi metodi possono aiutare a rispondere a domande importanti sul metabolismo dei topi, come ad esempio, quanto sono grassi i miei topi? E perché i miei topi sono così grassi?

Il vantaggio principale di queste tecniche è che possono essere completate in topi coscienti viventi e quindi possono essere ripetute numerose volte durante uno studio. Prima di eseguire la scansione dei topi, eseguire un test del sistema sulla macchina dell'analizzatore della composizione corporea una volta che la macchina si è riscaldata per alcune ore. Utilizzare gli standard chiamati Campione di prova del sistema dell'olio di colza o COSTI.

Apri il software di sistema, quindi fai clic sul pulsante della barra degli strumenti Test del sistema o premendo alt+Y sulla tastiera. Prima di iniziare il test, inserire lo standard corretto all'interno del gantry del sistema. Quindi eseguire il test diagnostico seguendo le istruzioni del sistema secondo necessità.

Dopo che il sistema ha superato il test, procedere con la diagnosi di un mouse. Ora metti il mouse in un supporto. Un supporto opaco rosso è il meno stressante.

Posizionare il supporto con un angolo di 45 gradi e inserire il mouse. Quindi sollevare lentamente e con attenzione il supporto fino a quando non è verticale. Inserire quindi un delimitatore nel supporto per limitare il movimento del mouse.

In alcune circostanze, con mouse estremamente attivi, potrebbe essere necessario fissare manualmente il delimitatore. Ora all'interno del software seleziona una cartella in cui salvare i dati e crea un nome file. Successivamente, se necessario, ridurre la quantità di rumore casuale nelle misurazioni di grasso e magro aumentando il numero di accumuli primari della scansione.

Di solito, tuttavia, le impostazioni predefinite forniranno il livello di precisione necessario. Se i dati per l'acqua libera e l'acqua totale non sono necessari, disattivare il livello dell'acqua utilizzando l'interruttore appropriato. Ciò velocizzerà notevolmente la scansione.

Ora avvia la scansione selezionando Avvia scansione o premendo F5 sulla tastiera. Inserire tutti i dati rilevanti sull'animale e premere OK o F5 per avviare la scansione, che richiederà circa un minuto. Dopo aver raccolto i dati, rimetti l'animale nella sua gabbia.

Pulisci sempre in modo sicuro il supporto in acrilico tra un utilizzo e l'altro, ad esempio con acqua tiepida e sapone. Successivamente, una volta che tutti gli animali sono stati scansionati, esporta i dati per ulteriori analisi e confronti. Prima di iniziare, assicurarsi che la macchina sia rimasta accesa per più di due ore.

Nel sistema di monitoraggio degli animali, aprire il programma di controllo e selezionare l'opzione di utilità Oxymax dal menu degli strumenti per avviare le pompe. Quindi controllare l'essiccante e sostituirlo con materiale fresco e asciutto, se necessario. Inoltre, controlla le condizioni della trappola per ammoniaca e della calce sodata e sostituiscila se necessario.

Quindi, collegare il serbatoio del gas di calibrazione al sistema utilizzando un regolatore e un tubo flessibile. Quindi aprire la valvola ed emettere da cinque a 10 PSI di gas. Successivamente, nel software, selezionare Calibrazione dal menu Strumenti e verificare che i flussi di campione e di riferimento siano esattamente a 0,4 litri al minuto.

Quindi verificare che il sensore di ossigeno in zirconia sia riscaldato a 725 gradi Celsius più o meno un grado Celsius. Successivamente, assicurarsi che il campione e l'essiccatore di riferimento e le pompe dell'aria siano tutti accesi e ricontrollare che il gas di calibrazione sia collegato e sintonizzato. Procedere ora con la calibrazione e, se necessario, regolare leggermente il controllo OFFSET sulla parte anteriore del sensore di ossigeno in zirconio per ottenere un valore del rapporto di ossigeno entro limiti accettabili.

Dopo aver calibrato con successo i sensori di ossigeno e anidride carbonica, staccare lo standard del gas e leggere i livelli di ossigeno del gas atmosferico che dovrebbero essere circa 20,92. Se si misura l'assunzione di cibo, prendere in considerazione l'utilizzo di una dieta per topi in polvere. Quindi caricare la tramoggia del cibo premendo la piattaforma caricata a molla.

Quindi riempi le bottiglie d'acqua e organizza il cibo. Ora pesa e ispeziona lo stato di salute dei topi prima di procedere al montaggio delle camere. Quindi posizionare la tramoggia del cibo sulla bilancia.

Sopra di esso, posizionare la camera con la piattaforma perforata. Quindi posizionare con cura il mouse nella camera e fissare un coperchio utilizzando le clip anteriore e posteriore. Quindi fissare la bottiglia d'acqua per completare l'installazione.

Ora prepara il mouse successivo e dopo che tutti i topi sono pronti, ricontrolla i coperchi della camera, i topi e l'acqua. Per eseguire l'esperimento, selezionare Apri file sperimentale dal menu. Quindi seleziona il modello appropriato.

Successivamente, in Configurazione, definire i parametri dell'esperimento che devono essere registrati e deselezionare le camere non in uso. Selezionare quindi la posizione in cui salvare l'esperimento. Se si deve misurare l'assunzione di cibo, tarare la bilancia.

Avviare quindi l'acquisizione dei dati selezionando Esegui dal menu Esperimento. Le prime 24 ore possono essere utilizzate come fase di acclamazione e le successive 24 ore e più, utilizzate per l'analisi dei dati. Almeno due volte al giorno, controllare gli animali e la raccolta dei dati.

Assicurati che ognuno abbia accesso a cibo e acqua e cerca segni di sofferenza come scavare il pavimento perforato. Nel software controlla la raccolta dei dati in tempo reale. Vai alla scheda Metabolico per esaminare il consumo di ossigeno, il RER e il dispendio energetico.

O2IN dovrebbe leggere tra 20,90 e 20,94 CO2IN dovrebbe leggere circa 0,04 RER dovrebbe leggere tra 0,7 e uno, la portata dovrebbe essere costante da 0,5 a 0,6 litri al minuto. Nella scheda Attività, vengono visualizzati i dati in tempo reale sulle interruzioni del raggio. Nelle schede Alimentazione vengono visualizzati i dati in tempo reale sul consumo di cibo.

Per completare l'esperimento, selezionare Interrompi dal menu Esperimento ed esportare i risultati come file CSV per l'analisi. Quindi ispeziona la salute dei topi, pesali e poi rimettili nelle loro gabbie domestiche. Nei grafici seguenti, i quadrati neri rappresentano i topi alimentati con una dieta ricca di grassi e i cerchi neri rappresentano i topi alimentati con la dieta chow standard.

I cambiamenti nei parametri di composizione corporea causati dall'alimentazione ad alto contenuto di grassi sono stati misurati tramite EchoMRI utilizzando le procedure descritte. Dopo una settimana di dieta ricca di grassi, c'è stato un significativo aumento di peso che è aumentato di tre settimane. La variazione di peso potrebbe essere chiaramente attribuita a una variazione della massa grassa.

Non era dovuto a un cambiamento nella massa magra, nel contenuto di acqua libera o nel contenuto totale di acqua. Nei seguenti grafici a barre, le colonne bianche rappresentano i topi nutriti con cibo e le colonne nere rappresentano i topi alimentati con alto contenuto di grassi. Le misurazioni di V02, quando normalizzate alla massa animale, non hanno mostrato cambiamenti dopo il periodo di tre settimane.

Allo stesso modo, le misurazioni del dispendio energetico, quando normalizzate alla massa animale, non hanno mostrato cambiamenti. L'attività fisica misurata dalle rotture del fascio, variava in base all'ora del giorno, ma era la stessa per entrambi i gruppi. L'assunzione di cibo non era diversa quando normalizzata alla massa corporea.

Questa quantità è significativamente più energia assunta con la dieta ricca di grassi. Una volta stabilita, in quanto non invasiva, l'analisi della composizione corporea può essere condotta quotidianamente, se necessario. Mentre le sessioni prolungate di monitoraggio metabolico degli animali possono essere considerate più stressanti per i topi a causa dell'isolamento sociale, queste analisi possono anche essere eseguite numerose volte all'interno di un Le implicazioni di queste tecniche si estendono verso l'identificazione di bersagli terapeutici per l'obesità e i disturbi metabolici come il diabete di tipo due attraverso l'attenta fenotipizzazione metabolica dei topi per quanto riguarda le manipolazioni genetiche o i trattamenti farmacologici.

In definitiva, non solo questi metodi possono fornire informazioni per l'obesità, ma anche per altre condizioni come i modelli di massa di sarcopenia, cachessia tumorale, distrofia muscolare o distrofia widi.