Name: Trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dellosso autogeno in un modello di coniglio migliorata dellinfezione dellosso (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Scopri un modello di infezione ossea nel coniglio con carico batterico costante e trattamento con solfato di calcio caricato di vancomicina e frammenti autogeni. Questo metodo aiuta a studiare la rigenerazione ossea e le strategie terapeutiche.

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Questo lavoro è stato supportato dal National Foundation Natural Science of China (81803808, 81873062), Zhejiang Provincial Medical Health Science e Technology Fund (2017KY271) e scienza e tecnologia progetto della provincia del Zhejiang (2017 37181).

I conigli utilizzati nel presente studio sono stati trattati in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio. Tutte le procedure sperimentali sono state seguite dalle regole di bioetica Comitato di Zhejiang Accademia di medicina tradizionale cinese.
1. preparazione della sospensione batterica
<ol><li>Sciogliere 0,5 mg di S. aureus liofilizzazione polvere (ATCC 6538) con 0,3 mL di terreno di coltura di Luria-Bertani. Mescolare la sospensione completamente.</li>
	<li>Inoculare la sospensione di batteri su piastre di agar soia triptico ed incubare le colonie batteriche a 37 ° C per 16 h.</li>
	<li>Selezionare una singola colonia batterica formando unità (CFU) e cultura in tubi di brodo di soia triptico per 24 h. eseguire una sottocultura per circa 24 h a 37 ° C e ottenere metà-logaritmica crescita fase batteri dopo 16-18 h, quando il valore di densità ottica (OD) è 0,6 a 600 nm 14.</li>
	<li>Trasferire 1 mL di sospensione di batteri in una provetta da centrifuga. Centrifugare per 5 min a 825 x g e a 4 ° C e scartare il surnatante. Risospendere e lavare i batteri con 100 µ l di tampone fosfato salino (PBS); Ripetere l'operazione 3 volte. Infine, risospendere i batteri con 3 mL di PBS.</li>
	<li>
Stimare la concentrazione di batteri usando Turbidimetria15 di McFarland.
	<ol>
<li>Trasferire 100 e 500 µ l della sospensione di batteri in una provetta colorimetrica, fino a quando la torbidità è equivalente a un 0,5 McFarland standard.</li>
		<li>Valutare la torbidità di confronto visivo per il 0,5 McFarland, quando il contenuto di batteri raggiunge circa 108 CFU/mL. Nota: Assicurarsi che il volume della sospensione di batteri è sufficiente per i seguenti protocolli. Per ogni coniglio, il volume della sospensione di batteri è inferiore a 1 mL.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Trasferire 0.2 mL di sospensione batterica ad una piastra di agar e applicarlo in modo uniforme. Incubare la piastra a 37 ° C per 16 h. conteggio delle colonie di batteri per verificare il CFU della sospensione di batteri.</li>
</ol>2. preparazione di modelli di infezione dell'osso
<ol><li>Mantenere maschio Nuova Zelanda conigli bianchi, invecchiati 3 mesi, in gabbie individuali, sotto condizioni di aria-controllato (20 ± 1 ° C) e cicli di illuminazione luce-buio di 12 h/12 h. Offriamo dieta ordinaria e acqua di rubinetto al giorno.</li>
	<li>Assicurare che al momento dell'intervento che il coniglio pesa più di 3 kg.</li>
	<li>Anestetizzare conigli tramite l'iniezione intraperitoneale con sodio pentobarbital (3 mg per 100 g di peso corporeo). Assicurarsi di conigli sono completamente anestetizzati da un tentativo di rispondere a un pizzico di zampa. Difficoltà conigli sul tavolo operatorio durante la procedura di funzionamento. Nota: Assicurarsi che la modellazione procedura dura meno di 1 h.</li>
	<li>Radere l'area di tibia prossimale utilizzando un rasoio elettrico contro la direzione della crescita dei capelli. Disinfettare la pelle applicando una soluzione povidone-iodio.</li>
	<li>Contrassegnare l'estremità superiore della tibia e la posizione del foro foratura per iniezione con S. aureus (la distanza all'estremità superiore della tibia è 1,5 cm) con penna e righello. Assicurarsi che la posizione dei fori perforazione sono nel mezzo del plateau tibia in orizzontale (Figura 1A).</li>
	<li>Tagliare la tibia pelle usando un bisturi n. 11 e praticare un'incisione di 1 cm nel periostio (Figura 1B, C). Effettuare un foro di diametro di 2 mm nella tibia utilizzando un'unità di trapano elettrico dell'osso (Figura 1D).</li>
	<li>Premere i fori di diametro di 2 mm nel plateau tibia con un cilindro di cera dell'osso del diametro di 2 mm e 2 mm di altezza (Figura 1E). Rimuovere la cera di ricambio osseo lungo il piano orizzontale del plateau tibia (Figura 1,F). Controllare che il foro di 2 mm è pieno di cera dell'osso (Figura 1G). Nota: Assicurarsi che i fori siano pieni di cera dell'osso controllando il foro con o senza troppo pieno di sangue.</li>
	<li>Cucire il periostio e pelle con sutura chirurgica riassorbibile in una sutura verticale materasso per impedire che l'animale mastica i punti di sutura (Figura 1H).</li>
	<li>Iniettare 1 x 108 UFC/mL delle soluzioni di S. aureus (30 µ l per 100 g di peso corporeo) con un iniettore di asepsi 1 mL (Figura 1ho). Assicurarsi che gli aghi penetrano la cera dell'osso e iniettare lentamente la soluzione di S. aureus nel midollo osseo.</li>
	<li>Mantenere l'animale in condizioni di caldo e pulite per evitare la perdita di calore dopo la modellazione. Monitorare la frequenza respiratoria e cardiaca. Dopo il risveglio, casa conigli in gabbie individuali con libero accesso al cibo e acqua.</li>
</ol>3. valutazione del modello di infezione dell'osso
<ol><li>A giorni 7, 14, 21 e 28 dopo l'infezione, è necessario posizionare conigli nel fissatore di coniglio con la testa e orecchio fuori il fissatore.</li>
	<li>
Disegnare 2 mL di sangue dalle vene auricolare in un contenitore di sangue dell'anticoagulante di dipotassio Etilendiamminotetraacetico acido (EDTA-K2). Disegnare 1 mL di sangue da un vaso sanguigno in un contenitore di sangue. Centrifugare il siero per 10 min con una velocità di 651 x g e a temperatura ambiente.
	<ol>
<li>Determinare il numero di globuli bianchi (WBC) nel sangue intero utilizzando un analizzatore di biochimica del sangue, e proteina C - reattiva (CRP) di un enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA) metodo16del test.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ai giorni 7, 14, 21 e 28 dopo l'infezione, anestetizzare un coniglio modello con sodio pentobarbital al dosaggio di 3 mg per peso corporeo di 100 g. Tagliare la tibia pelle usando un bisturi n. 11 e praticare un'incisione di 2 cm nel periostio (Figura 2A).</li>
	<li>Pulire la cera dell'osso. Sbrigliare osso necrotico di punzonatura due adiacenti 4,8 mm diametro fori utilizzando un'unità di trapano elettrico dell'osso (Figura 2B). Sbrigliare necrotico del midollo osseo e del tessuto di granulazione con un cucchiaio di osso (Figura 2C). Nota: Pulire tessuto osseo durante lo sbrigliamento per evitare tessuto osseo restanti nel midollo osseo.</li>
	<li>Raschiare e pulire il tessuto osseo tra i due fori (Figura 2D).</li>
	<li>Spread 1 mL di midollo osseo su piastre di agar sangue di pecora. Incubare le piastre durante la notte a 37 ° C. Piastre di 30 – 300 colonie di selezionare e calcolare il numero di colonie.</li>
	<li>Alla fine del giorno 28 dopo l'infezione, estrarre campioni di tibia lungo i bordi delle articolazioni del ginocchio e della caviglia. Difficoltà gli esemplari di tibia in paraformaldeide al 4% per 24 h. DECALCIF gli esemplari di tibia in 10% EDTA per 8 settimane.</li>
	<li>Disidratare gli esemplari di tibia in una serie graduata di diluizioni di etanolo e quindi incorporare in paraffina. Tagliare 4 consecutivi 5 µm sezioni dai piani coronale. Macchia di sezioni con ematossilina ed eosina (H & E) colorazione kit.</li>
	<li>Utilizzare un microscopio per visualizzare le sezioni macchiate e registrare immagini trasmesse luce con software standard.</li>
</ol>4. preparazione del VCS perline
<ol><li>Aggiungere 1 g di vancomicina cloridrato polvere a 9,5 g di solfato di calcio di grado medico e quindi aggiungere 3 mL di soluzione salina normale per l'alimentazione mista. Mescolare accuratamente con una spatola per 30-45 s.</li>
	<li>Posizionare il prodotto miscelato in uno stampo flessibile gel di silice (cilindro di diametro 4,8 mm e 4,8 mm di altezza) e asciugare a temperatura ambiente per 15 minuti, rimuovere le perline VCS flettendo la muffa.</li>
</ol>5. antibiotici e l'impianto di osso autologo
<ol><li>Anestetizzare conigli modello con sodio pentobarbital al dosaggio di 3 mg per peso corporeo di 100 g al 28° giorno dopo l'infezione. Radere l'area di tibia prossimale utilizzando un rasoio elettrico. Disinfettare la pelle applicando soluzione povidone-iodio. Nota: Assicurarsi che la procedura di modellazione è meno di 1 h.</li>
	<li>Radere la regione di coda utilizzando un rasoio elettrico e disinfettare la coda applicando soluzione povidone-iodio.</li>
	<li>Tagliare la coda utilizzando forbici chirurgiche. Tagliare la coda della pelle usando un bisturi n. 11 e rivelare l'osso della coda. Cucire la pelle in corrispondenza della regione di coda con suture assorbibili chirurgiche in una sutura verticale materasso per impedire all'animale di masticare le suture.</li>
	<li>Rimuovere qualsiasi muscolo, il tessuto molle e il periostio. Staccare l'osso della coda ad ogni giunto e trasferire il frammento di osso per un piatto di plastica di 100 mm contenente soluzione fisiologica sterile.</li>
	<li>Impianto 4 pezzi di perline VCS (cilindro di diametro 4,8 mm e 4,8 mm di altezza, vancomicina 1,25 mg al pezzo del branello) nella cavità del midollo con Pinzette curve (Figura 2E).</li>
	<li>Riempire il difetto osseo con 8 pezzi di ossa autogena (cilindro del diametro di 2 mm e 4 mm di altezza per ogni pezzo) usando curve pinzette (Figura 2E).</li>
	<li>Cucire il periostio e pelle con suture chirurgiche assorbibili in maniera di sutura materasso (Figura 2F). Nota: Mantenere la temperatura a 25 ° C durante la chirurgia.</li>
	<li>Mantenere l'animale in condizioni di caldo e pulite per evitare la perdita di calore dopo la chirurgia. Monitorare la frequenza respiratoria e cardiaca. Dopo il risveglio, casa conigli in gabbie individuali con libero accesso al cibo e acqua.</li>
</ol>6. Le valutazioni di attività antibiotica
<ol><li>Mettere i conigli in un fissatore di coniglio e posizionare l'orecchio fuori il fissatore e testa a 2, 4, 6 e 8 settimane dopo il trattamento.</li>
	<li>Prelevare il sangue dalle vene auricolare con vaso sanguigno dell'anticoagulante EDTA K2. Disegnare 1 mL di sangue da un vaso sanguigno in un contenitore di sangue. Centrifugare il siero per 10 min con una velocità di 651 x g e a temperatura ambiente.</li>
	<li>Determinare il conteggio di globuli bianchi (WBC) nel sangue intero mediante Analizzatore di biochimica del sangue e la proteina C - reattiva (CRP) di un metodo di ELISA16.</li>
</ol>7. Le valutazioni di rigenerazione ossea
<ol><li>Eutanasia conigli iniettando con un over dosaggi di sodio pentobarbital, alla fine di 8 o 12 settimane dopo il trattamento.</li>
	<li>Estrarre i campioni di tibia, lungo i bordi delle articolazioni del ginocchio e della caviglia. Sbrigliare i muscoli e strati fasciali.</li>
	<li>Analizzare la struttura della tibia utilizzando micro-tomografia (micro-CT). Scegliere un diametro di 4,8 mm di area ovale e 9.6 mm di lunghezza come la regione di interesse (ROI). Ricostruire le immagini del modello 3D utilizzando dati bitmap.</li>
	<li>Scegliere punteggi del rapporto del volume volume/tessuto osseo (BV/TV), spessore trabecolare (Tb.Th), trabecola numero (Tb.N) e trabecular separazione (Tb.Sp)from the3D modelli per valutare la rigenerazione ossea.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non segnalano conflitti di interesse in questo lavoro.

Negli studi precedenti, sono stati costruiti vari tipi di modelli animali per studiare sia l'infezione acuta e cronica dell'osso; Tuttavia, la ricerca per il modello ideale persiste ancora17,18. Inoltre, il modello di infezione ossea ideale è previsto per simulare le caratteristiche patologiche di infezione ossea in ambiente clinico, mentre i periodi di modellazione, rimanere basso costo e facile da realizzare. Finora, il modello di infezione dell'osso di conigli...

L'infezione dell'osso provoca solitamente da batteri o altri invasione microorganismo dopo traumi, fratture ossee o altre malattie di osso1. L'infezione dell'osso può indurre un alto livello di distruzione del tessuto dell'osso e l'infiammazione. Nella clinica, lo Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) è l'agente causativo predominante di osso infezione2,3. L'infezione dell'osso è doloroso e debilitante e spesso assume un decorso cronico che è estremamente difficile da trattare4. Allo stato attuale, lo sbrigliamento del tessuto necrotico e impiantare dei branelli di vancomicina-caricati del calcio (VCS) sono stati confermati come una strategia efficace per il controllo di infezione locale5,6. Tuttavia, 10-15% dei pazienti ha avvertito un processo di riparazione dell'osso prolungato, ritardi di consolidazione o pseudoartrosi dopo trattamento anti-infezione7. Il grande segmento di un difetto dell'osso è la questione più difficile per i chirurghi ortopedici. Un innesto di osso autologo è considerato la sostituzione ottimale dell'osso nell'osso non sindacale trattamento8,9.
Ad oggi, la maggior parte degli studi sull'osso infezione e l'impianto di osso autologo sono stati condotti in vari tipi di modelli animali, come i ratti, conigli, cani, maiali e pecore10,11. Modelli di coniglio sono più comunemente utilizzati per studi di infezione dell'osso, come prima interpretata da Norden e Kennedy nel 197012,13. Nel nostro studio precedente, abbiamo utilizzato modelli di coniglio seguendo il metodo di Norden, e abbiamo trovato che la quantità di S. aureus iniettato nel midollo osseo non era possibile quantificare con precisione, come la fuoriuscita di sangue dal midollo osseo ha condotto all'overflow di soluzione di batteri.
Questo articolo presenta un metodo chirurgico migliore per indurre infezione ossea sui conigli. Al termine della procedura, un'analisi biochimica del sangue, un esame batteriologico e un esame istopatologico sono stati effettuati per verificare il modello di infezione dell'osso. Quindi, VCS è stata impiantata per inibire l'infezione e l'osso autogeno è stato impiantato per promuovere la rigenerazione ossea.

<table><tbody><tr><td>sutura chirurgica riassorbibile</td><td>Jinghuan</td><td>18S0604A</td><td></td></tr><tr><td>iniettore di asepsi</td><td>Jinglong</td><td>cera ossea 20170501</td><td></td></tr><tr><td></td><td>ETHICON</td><td>JH5CQLM</td><td></td></tr><tr><td>Telecamera CCD Vaso</td> sanguigno anticoagulante <td>Olympus</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>EDTA-K2</td><td>XINGE</td><td>20170802</td><td></td></tr><tr><td>Unità di perforazione ossea elettrica</td><td>Bao Kang</td><td>BKZ-1</td><td></td></tr><tr><td>Rasoio elettrico</td><td>Codos</td><td>3800</td><td></td></tr><tr><td>stampo flessibile in gel di silice&nbsp;</td><td>WRIGHT</td><td>1527745</td><td></td></tr><tr><td>Kit di colorazione per ematossilina ed eosina</td><td>Beyotime</td><td>20170523</td><td></td></tr><tr><td>terreno di coltura Luria-Bertani</td><td>Baisi Biothchnology</td><td>20170306</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di calcio per uso medico</td><td>WRIGHT</td><td>1527745</td><td></td></tr><tr><td>tomografia microcomputerizzata (micro-CT)</td><td>Bruker</td><td>SkyScan 1172&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus</td><td>CX41</td><td></td></tr><tr><td>Conigli bianchi della Nuova Zelanda</td><td>Zhejiang Experimental Animal Center&nbsp;</td><td>SCXK 2014-0047</td><td></td></tr><tr><td>n. 11 bisturi</td><td>Yuanlikang</td><td>20170604</td><td></td></tr><tr><td>soluzione salina normale</td><td>Mingsheng</td><td>20170903</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>TBD (Jingyi)</td> <td>20170703-0592</td><td></td></tr><tr><td>pentobarbital sodico</td><td>Merk</td><td>2070124</td><td></td></tr><tr><td>soluzione di iodio povidone</td><td>Lierkang</td><td>20170114</td><td></td></tr><tr><td>S. aureus polvere liofilizzata</td><td>Cina General Microbiological Centro di raccolta della coltura</td><td>ATCC 6538</td><td></td></tr><tr><td>agar sangue di pecora</td><td>HuanKai Microbial</td><td>3103210</td><td></td></tr><tr><td>piastre di agar di soia triptica</td><td>HuanKai Microbial</td><td>3105697</td><td></td></tr><tr><td>tubi di brodo di soia triptico</td><td>HuanKai Microbial</td><td>3104260</td><td></td></tr><tr><td>Vancomicina</td><td>Lilly</td><td>C599180</td><td></td></tr></tbody></table>

trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno in un modello di coniglio migliorata dell'infezione dell'osso

Treatment with Vancomycin Loaded Calcium Sulphate and Autogenous Bone in an Improved Rabbit Model of Bone Infection

Risultati di infezione dell'osso dall'invasione batterica, che è estremamente difficile da trattare in chirurgia clinica, ortopedica e traumatica. L'infezione ossea può provocare l'infiammazione continua, osteomielite ed eventuale osso non-Unione. Istituzione di un modello animale fattibile, riproducibile è importante alle ossa ricerca di infezione e di trattamento antibiotico. Come un modello in vivo, il modello di coniglio è ampiamente usato nella ricerca di infezione dell'osso. Tuttavia, gli studi precedenti sul coniglio dell'osso ha mostrati che lo stato di infezione era incoerente, così come la quantità di batteri variabile di modelli di infezione. Questo studio presenta un metodo chirurgico migliore per indurre l'infezione dell'osso su un coniglio, bloccando i batteri nel midollo osseo. Quindi, valutazioni multi-livelli possono essere effettuate per verificare il metodo di modellazione.
In generale, sbrigliamento del tessuto necrotico e l'impianto di solfato di calcio di vancomicina-caricato (VCS) sono predominanti nel trattamento antibiotico. Sebbene il solfato di calcio in VCS benefici Osteocita strisciando e nuova crescita ossea, voluminosa dell'osso difetti si verificano dopo rimuovere il tessuto morto. L'osso autogeno (AB) è una strategia interessante per superare i difetti dell'osso per il trattamento di difetti ossei massiccia dopo rimuovere il tessuto morto osso necrotico.
In questo studio, abbiamo usato l'osso della coda come un osso autologo impiantato nel difetto osseo. Riparazione ossea è stata misurata utilizzando micro-computare-tomografia (micro-CT) e l'analisi istologica dopo sacrificio animale. Di conseguenza, nel gruppo VCS, non-Unione dell'osso è stata ottenuta costantemente. Al contrario, le zone di difetto dell'osso nel gruppo VCS-AB sono state diminuite significativamente. Il presente metodo di modellazione descritto un metodo riproducibile, fattibile, stabile per preparare un modello di infezione dell'osso. Il trattamento di VCS-AB è provocato da tassi più bassi di pseudoartrosi dell'osso dopo il trattamento antibiotico. Il modello di infezione migliore dell'osso e il trattamento di combinazione di VCS e osso autogeno potrebbe essere utile per studiare i meccanismi di fondo nella rigenerazione ossea dell'osso e infezione pertinente per applicazioni ortopediche di traumatologia.

Valutazione del modello di infezione dell'osso Dopo l'infezione con S. aureus, le manifestazioni patologiche dei conigli erano simili al sintomo rappresentativo di osteomielite cronica nella clinica. Nel nostro studio, 30 conigli sono stati infettati e sottomesso come un gruppo di modello, e 10 conigli sono stati sottoposti come animali di controllo. Tutti i conigli di modello hanno infettato i seni del sito locale di tibia, con pus bianco e giallo sul flusso ...

Questo studio presenta un coniglio migliorato modello infettato da Staphylococcus aureus bloccando la stessa quantità di batteri nel midollo osseo. Vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno sono utilizzati per il trattamento di riparazione dell'osso e antibiotico. Il protocollo potrebbe essere utile per studiare l'infezione dell'osso e la rigenerazione.

Trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno in un modello di coniglio migliorata dell'infezione dell'osso

Bone infection results from bacterial invasion, which is extremely difficult to treat in clinical, orthopedic, and traumatic surgery. The bone infection ...

Un modello animale producibile è molto importante per la ricerca sulle infezioni ossee. Tuttavia, attualmente non esiste un modello di coniglio per il quale lo stato delle infezioni e il numero di batteri è coerente. Il nostro modello di coniglio per infezione ossea utilizza un batterio coerente ed è trattato da solfato di calcio caricato con vancomicina e frammenti autogeni.La tecnica potrebbe essere estesa verso la diagnosi di infezione ossea e terapia non di unione ossea, e nella comprensione della patogenesi dell'infezione ossea. Questo metodo potrebbe fornire informazioni su altri modelli di infezione ossea in ratti, topi e maiali. È difficile caricare lo stesso volume di sospensione batterica nel midollo osseo.La dimostrazione visiva può aiutare i ricercatori a eseguire i passaggi critici in modo semplice e accurato. Per preparare la sospensione batterica, sciogliere prima 0,5 milligrammi di polvere liofilizzato S.aureus in 0,3 millilitri di terreno di coltura LB. Mescolare accuratamente la sospensione e striare i batteri su piastre di agar di soia triptica per la loro incubazione per 16 ore a 37 gradi Celsius.La mattina seguente, scegli una singola unità batterica di formazione di colonie per la coltura in tubi di brodo di soia triptico per 24 ore a 37 gradi Celsius. Quando i batteri si trovano nella fase di crescita logaritmica media, trasferire 1 millilitro di batteri in un tubo da 1,5 millilitri e raccogliere i batteri mediante centrifugazione. Quindi, lavare il pellet di cellule batteriche tre volte in 100 microlitri di PBS per lavaggio, rimospensendo i batteri in 3 millilitri di PBS fresco dopo il lavaggio finale.Per impostare lo stampo di infezione ossea, confermare la mancanza di risposta al pizzico di zampa in un coniglio bianco maschio neozelandese di tre mesi di tre chilogrammi e utilizzare un rasoio elettrico per rimuovere i capelli dalla regione tibiale prossimale contro la direzione della crescita dei capelli. Disinfettare la pelle esposta con soluzione di iodio povidone e utilizzare una penna e un righello per contrassegnare l'estremità superiore della tibia e la posizione del foro di perforazione per l'iniezione di S.Aureus, facendo attenzione che la posizione del foro di perforazione si trova nel centro orizzontale dell'altopiano tibiale. Successivamente, utilizzare un bisturi numero 11 per fare un'incisione nella pelle, seguita da un'incisione di un centimetro nel peritoneo.Utilizzando un'unità di perforazione ossea elettrica, perforare un foro di due millimetri di diametro nella tibia e premere il foro con un cilindro di cera ossea lungo due millimetri di diametro di due millimetri. Rimuovere qualsiasi cera ossea di ricambio lungo il piano orizzontale dell'altopiano tibiale e confermare che il foro è pieno di cera ossea. Quindi, utilizzare suture chirurgiche assorbibili per cucire il periostio e la pelle in una sutura verticale del materasso per impedire all'animale di masticare i punti.E utilizzare un iniettore di asepsi millilitro per iniettare lentamente uno per 10 alle otto unità di formazione della colonia per millilitro della soluzione di S.Aureus nel foro di perforazione. Al settimo giorno, 14, 21 e 28 dopo l'iniezione, posizionare i conigli infetti in un limitatore di conigli con la testa e l'orecchio all'esterno del trattino e raccogliere campioni di sangue dalle vene auricolari per i globuli bianchi e l'analisi delle proteine C-reattive. Dopo l'anestesia, utilizzare un bisturi numero 11 per fare la pelle tibiale centimetrica e le incisioni peritoneali e pulire la cera ossea.Successivamente, utilizzare un'unità di perforazione ossea elettrica per perforare due fori adiacenti di 4,8 millimetri di diametro per debridere l'osso necrotico e utilizzare un cucchiaio osseo per debridere il midollo osseo necrotico e il tessuto di granulazione. Quindi, raschiare e pulire il tessuto osseo tra i due fori e stendere un millilitro del midollo osseo debridato sulle piastre di agar di sangue di pecora per un'incubazione notturna a 37 gradi Celsius. La mattina seguente, seleziona le piastre con da 30 a 300 colonie e calcola il numero di unità di formazione della colonia per animale infetto.Il 28 ° giorno dopo l'infezione, aggiungere un grammo di polvere di cloridrato di vancomicina a 9,5 grammi di solfato di calcio di grado medico e utilizzare una spatola per mescolare la miscela con tre millilitri di soluzione salina normale per 30-45 secondi. Aggiungere il prodotto misto in uno stampo flessibile in gel di silice e lasciare asciugare il prodotto a temperatura ambiente per 15 minuti. Quindi, flettere lo stampo per rimuovere il solfato di calcio caricato con vancomicina o il tallone VCS.Per il trattamento antibiotico e l'impianto dell'osso autogeno, in primo luogo, riesporre la tibia ferita prima di radere la regione della coda e disinfettare la pelle della coda esposta con soluzione di iodio povidone. Usa le forbici chirurgiche per tagliare la coda e usa suture chirurgiche assorbibili per chiudere la pelle in una sutura del materasso verticale per impedire all'animale di masticare i punti. Usa un bisturi numero 11 per tagliare la pelle della coda per rivelare l'osso della coda.Rimuovere qualsiasi muscolo, tessuto molle e periostio e staccare il coccino ad ogni articolazione. Trasferire i frammenti ossei in un piatto di plastica da 100 millimetri contenente soluzione salina sterile. Successivamente, utilizzare forbici curve per impiantare quattro pezzi della perla VCS nella cavità del midollo tibiale e utilizzare forcep curve per riempire il difetto osseo con otto pezzi di frammenti di osso di coda autogeni.Quindi, chiudere il periostio e le incisioni cutanee con suture chirurgiche assorbibili in modo da sutura del materasso. I livelli di proteine c-reattive e globuli bianchi sono più alti nel gruppo del modello di infezione ossea che negli animali di controllo. Due, quattro, sei e otto settimane dopo il trattamento osseo autogeno VCS o VCS, le proteine C-reattive e i livelli dei globuli bianchi sono significativamente ridotti.Le immagini di ricostruzione bidimensionale indicano un progressivo aumento del volume osseo durante il periodo di 12 settimane dopo il trattamento con VCS o VCS e osso autogeno, mentre la perdita ossea è significativa nel gruppo del modello di infezione ossea non trattata. Per analizzare gli indici quantitativi di rigenerazione ossea, le immagini del modello 3D possono essere ricostruite utilizzando dati bitmap e in ogni osso è possibile selezionare un diametro ovale di 4,8 millimetri per una regione ovale di interesse di 9,6 millimetri. Il rapporto tra volume osseo e volume tissutale nel gruppo di modelli di infezione ossea non trattata è significativamente inferiore a quelli misurati nei gruppi ossei autogeni VCS e VCS.Il numero trabecolare e i punteggi di spessore nel gruppo osseo autogeno VCS sono significativamente più alti di quelli del modello di infezione ossea non trattata e degli animali VCS. Inoltre, i punteggi di separazione trabecolare nel gruppo osseo autogeno VCS sono notevolmente inferiori a quelli misurati nel modello di infezione ossea non trattata e nei gruppi VCS. Fai attenzione a selezionare conigli con un peso corporeo appropriato.Bloccare la soluzione di Staphylococcus aureus con cera ossea. Debride completamente l'osso necrotico e perfora i due fori adiacenti di 4,8 millimetri di diametro. Seguendo la procedura, è possibile eseguire altri metodi di misura diagnostica come ultrasuoni, radiologia e tomografia computerizzata per monitorare i processi patologici dell'infezione ossea e riparare.Questo modello migliorato di infezione ossea e la combinazione VCS e trattamento osseo autogeno potrebbero essere utili per studiare il meccanismo di sottolineatura dell'infezione ossea e della rigenerazione ossea. Poiché la polvere liofilizzato Staphylococcus aureus è pericolosa, la sospensione batterica deve sempre essere preparata in un laboratorio batterico isolato.

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Trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dellosso autogeno in un modello di coniglio migliorata dellinfezione dellosso (Video) | JoVE Journal

Trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno in un modello di coniglio migliorata dell'infezione dell'osso

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