Trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno in un modello di coniglio migliorata dell'infezione dell'osso

Un modello animale producibile è molto importante per la ricerca sulle infezioni ossee. Tuttavia, attualmente non esiste un modello di coniglio per il quale lo stato delle infezioni e il numero di batteri è coerente. Il nostro modello di coniglio per infezione ossea utilizza un batterio coerente ed è trattato da solfato di calcio caricato con vancomicina e frammenti autogeni.

La tecnica potrebbe essere estesa verso la diagnosi di infezione ossea e terapia non di unione ossea, e nella comprensione della patogenesi dell'infezione ossea. Questo metodo potrebbe fornire informazioni su altri modelli di infezione ossea in ratti, topi e maiali. È difficile caricare lo stesso volume di sospensione batterica nel midollo osseo.

La dimostrazione visiva può aiutare i ricercatori a eseguire i passaggi critici in modo semplice e accurato. Per preparare la sospensione batterica, sciogliere prima 0,5 milligrammi di polvere liofilizzato S.aureus in 0,3 millilitri di terreno di coltura LB. Mescolare accuratamente la sospensione e striare i batteri su piastre di agar di soia triptica per la loro incubazione per 16 ore a 37 gradi Celsius.

La mattina seguente, scegli una singola unità batterica di formazione di colonie per la coltura in tubi di brodo di soia triptico per 24 ore a 37 gradi Celsius. Quando i batteri si trovano nella fase di crescita logaritmica media, trasferire 1 millilitro di batteri in un tubo da 1,5 millilitri e raccogliere i batteri mediante centrifugazione. Quindi, lavare il pellet di cellule batteriche tre volte in 100 microlitri di PBS per lavaggio, rimospensendo i batteri in 3 millilitri di PBS fresco dopo il lavaggio finale.

Per impostare lo stampo di infezione ossea, confermare la mancanza di risposta al pizzico di zampa in un coniglio bianco maschio neozelandese di tre mesi di tre chilogrammi e utilizzare un rasoio elettrico per rimuovere i capelli dalla regione tibiale prossimale contro la direzione della crescita dei capelli. Disinfettare la pelle esposta con soluzione di iodio povidone e utilizzare una penna e un righello per contrassegnare l'estremità superiore della tibia e la posizione del foro di perforazione per l'iniezione di S.Aureus, facendo attenzione che la posizione del foro di perforazione si trova nel centro orizzontale dell'altopiano tibiale. Successivamente, utilizzare un bisturi numero 11 per fare un'incisione nella pelle, seguita da un'incisione di un centimetro nel peritoneo.

Utilizzando un'unità di perforazione ossea elettrica, perforare un foro di due millimetri di diametro nella tibia e premere il foro con un cilindro di cera ossea lungo due millimetri di diametro di due millimetri. Rimuovere qualsiasi cera ossea di ricambio lungo il piano orizzontale dell'altopiano tibiale e confermare che il foro è pieno di cera ossea. Quindi, utilizzare suture chirurgiche assorbibili per cucire il periostio e la pelle in una sutura verticale del materasso per impedire all'animale di masticare i punti.

E utilizzare un iniettore di asepsi millilitro per iniettare lentamente uno per 10 alle otto unità di formazione della colonia per millilitro della soluzione di S.Aureus nel foro di perforazione. Al settimo giorno, 14, 21 e 28 dopo l'iniezione, posizionare i conigli infetti in un limitatore di conigli con la testa e l'orecchio all'esterno del trattino e raccogliere campioni di sangue dalle vene auricolari per i globuli bianchi e l'analisi delle proteine C-reattive. Dopo l'anestesia, utilizzare un bisturi numero 11 per fare la pelle tibiale centimetrica e le incisioni peritoneali e pulire la cera ossea.

Successivamente, utilizzare un'unità di perforazione ossea elettrica per perforare due fori adiacenti di 4,8 millimetri di diametro per debridere l'osso necrotico e utilizzare un cucchiaio osseo per debridere il midollo osseo necrotico e il tessuto di granulazione. Quindi, raschiare e pulire il tessuto osseo tra i due fori e stendere un millilitro del midollo osseo debridato sulle piastre di agar di sangue di pecora per un'incubazione notturna a 37 gradi Celsius. La mattina seguente, seleziona le piastre con da 30 a 300 colonie e calcola il numero di unità di formazione della colonia per animale infetto.

Il 28 ° giorno dopo l'infezione, aggiungere un grammo di polvere di cloridrato di vancomicina a 9,5 grammi di solfato di calcio di grado medico e utilizzare una spatola per mescolare la miscela con tre millilitri di soluzione salina normale per 30-45 secondi. Aggiungere il prodotto misto in uno stampo flessibile in gel di silice e lasciare asciugare il prodotto a temperatura ambiente per 15 minuti. Quindi, flettere lo stampo per rimuovere il solfato di calcio caricato con vancomicina o il tallone VCS.

Per il trattamento antibiotico e l'impianto dell'osso autogeno, in primo luogo, riesporre la tibia ferita prima di radere la regione della coda e disinfettare la pelle della coda esposta con soluzione di iodio povidone. Usa le forbici chirurgiche per tagliare la coda e usa suture chirurgiche assorbibili per chiudere la pelle in una sutura del materasso verticale per impedire all'animale di masticare i punti. Usa un bisturi numero 11 per tagliare la pelle della coda per rivelare l'osso della coda.

Rimuovere qualsiasi muscolo, tessuto molle e periostio e staccare il coccino ad ogni articolazione. Trasferire i frammenti ossei in un piatto di plastica da 100 millimetri contenente soluzione salina sterile. Successivamente, utilizzare forbici curve per impiantare quattro pezzi della perla VCS nella cavità del midollo tibiale e utilizzare forcep curve per riempire il difetto osseo con otto pezzi di frammenti di osso di coda autogeni.

Quindi, chiudere il periostio e le incisioni cutanee con suture chirurgiche assorbibili in modo da sutura del materasso. I livelli di proteine c-reattive e globuli bianchi sono più alti nel gruppo del modello di infezione ossea che negli animali di controllo. Due, quattro, sei e otto settimane dopo il trattamento osseo autogeno VCS o VCS, le proteine C-reattive e i livelli dei globuli bianchi sono significativamente ridotti.

Le immagini di ricostruzione bidimensionale indicano un progressivo aumento del volume osseo durante il periodo di 12 settimane dopo il trattamento con VCS o VCS e osso autogeno, mentre la perdita ossea è significativa nel gruppo del modello di infezione ossea non trattata. Per analizzare gli indici quantitativi di rigenerazione ossea, le immagini del modello 3D possono essere ricostruite utilizzando dati bitmap e in ogni osso è possibile selezionare un diametro ovale di 4,8 millimetri per una regione ovale di interesse di 9,6 millimetri. Il rapporto tra volume osseo e volume tissutale nel gruppo di modelli di infezione ossea non trattata è significativamente inferiore a quelli misurati nei gruppi ossei autogeni VCS e VCS.

Il numero trabecolare e i punteggi di spessore nel gruppo osseo autogeno VCS sono significativamente più alti di quelli del modello di infezione ossea non trattata e degli animali VCS. Inoltre, i punteggi di separazione trabecolare nel gruppo osseo autogeno VCS sono notevolmente inferiori a quelli misurati nel modello di infezione ossea non trattata e nei gruppi VCS. Fai attenzione a selezionare conigli con un peso corporeo appropriato.

Bloccare la soluzione di Staphylococcus aureus con cera ossea. Debride completamente l'osso necrotico e perfora i due fori adiacenti di 4,8 millimetri di diametro. Seguendo la procedura, è possibile eseguire altri metodi di misura diagnostica come ultrasuoni, radiologia e tomografia computerizzata per monitorare i processi patologici dell'infezione ossea e riparare.

Questo modello migliorato di infezione ossea e la combinazione VCS e trattamento osseo autogeno potrebbero essere utili per studiare il meccanismo di sottolineatura dell'infezione ossea e della rigenerazione ossea. Poiché la polvere liofilizzato Staphylococcus aureus è pericolosa, la sospensione batterica deve sempre essere preparata in un laboratorio batterico isolato.