Epatectomia parziale lobulare: Un modello chirurgico per rigenerazione epatica morfologica

L'obiettivo generale di questa procedura chirurgica è indurre la rigenerazione morfologica del fegato tramite epatectomia lobulare parziale. Questo metodo può rispondere a domande chiave nel campo della biologia delle cellule staminali e della medicina rigenerativa sulla rigenerazione morfologica del fegato e sulle cellule staminali specifiche del fegato. I principali vantaggi di questa tecnica sono che è minimamente invasiva e non richiede insulti chimici o cauterizzazione.

Prima di toccare gli animali, strofinare la lettiera della gabbia della madre sui guanti. Quindi trasferisci tutti i cuccioli e un po' di lettiera dalla gabbia della madre in una gabbia vuota sopra un termoforo. Quindi, metti un cucciolo sotto un microscopio da dissezione.

Dopo aver confermato il livello appropriato di sedazione per mancanza di risposta al pizzicamento delle dita, utilizzare una piccola garza per disinfettare la parete addominale posteriore dell'animale con betadina. Usa forbici e pinze per micro dissezione per praticare un'incisione di mezzo centimetro della clavicolare media sinistra immediatamente sotto la gabbia toracica. Usa la pinza per separare delicatamente la pelle.

Quindi praticare una seconda incisione più profonda nella cavità peritoneale e utilizzare il bordo smussato posteriore delle forbici e delle pinze per microdissezione per applicare una leggera pressione laterale su entrambi i lati dell'addome, forzando l'apice del lobo sinistro fuori dalla cavità peritoneale. Quando l'apice sinistro del lobo sinistro è visibile, amputare la quantità sperimentale appropriata di tessuto dal lobo e posizionare il tessuto in una provetta da 1,5 millilitri di PBS su ghiaccio. Usando un pezzo di garza arrotolato, riportare delicatamente il lobo sinistro nella cavità peritoneale.

Rimuovere la garza quando l'emorragia si ferma e bagnare il sito chirurgico e l'area circostante con una garza imbevuta di PBS. Chiudere il sito chirurgico con punti di sutura e un punto corrente. Quindi arrotolare delicatamente ma accuratamente una garza imbevuta di PBS sul cucciolo e sul sito della ferita assicurandosi che non rimangano sangue o betadina.

Lascia che il cucciolo si riprenda vicino alle garze esposte alle feci e all'urina della madre. Quando tutti i cuccioli sono stati epatoctomizzati, rimetti tutti gli animali e la lettiera nella gabbia della madre. Dopo aver pesato i lobi, fissare i campioni di tessuto in paraformaldeide al 2% per un'ora a temperatura ambiente.

Al termine della fissazione, trasferire i fazzoletti in stampi di congelamento individuali contenenti un mezzo di temperatura di taglio ottimale per il congelamento su ghiaccio secco. E acquisisci sezioni di 7-10 micrometri di ciascun lobo utilizzando qualsiasi criostato standard. Controlla i cuccioli ogni giorno per almeno 56 giorni per confermare che le loro ferite rimangano chiuse e inietta analgesia 24 e 48 ore dopo l'intervento.

Al punto finale sperimentale appropriato, raccogliere e pesare il fegato di ogni cucciolo in blocco. Quindi separare attentamente ogni singolo lobo al suo attacco prossimale e confrontare la massa del lobo sinistro amputato con la massa dell'intero fegato per determinare l'entità della rigenerazione in ciascun lobo. Una sottile rigenerazione del lobo sinistro può essere osservata 7-14 giorni dopo l'intervento chirurgico e la rigenerazione completa è spesso osservata dopo 56 giorni.

L'analisi istologica non rivela differenze significative nelle aree degli epatociti nel fegato rigenerato. Inoltre, le iniezioni di EdU nei topi neonatali indicano un aumento significativo del numero di cellule proliferanti nel lobo sinistro rigenerante danneggiato rispetto ai controlli illesi, suggerendo che la proliferazione cellulare contribuisce alla rigenerazione del lobo sinistro nei neonati. L'epatectomia nei topi giovani del giorno 14 postnatale provoca una diminuzione della rigenerazione nel lobo sinistro con un aumento della compensazione dai lobi illesi, tuttavia.

Indicando che entro 14 giorni la risposta alla lesione alla resezione acuta passa dalla rigenerazione specifica del lobo alla compensazione globale. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in 15 minuti se eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante prestare la massima attenzione possibile per non causare ulteriore stress alla madre o ai cuccioli.

A seguito di questa procedura, è possibile eseguire altri metodi, come le epatcomie seriali o le lesioni epatiche croniche, per valutare ulteriormente il potenziale rigenerativo del fegato. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della biologia delle cellule staminali per esplorare la rigenerazione del fegato nel topo neonatale. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come completare un'amputazione controllata specifica del lobo del fegato di topo neonatale.

Non dimenticare che lavorare con l'isoflurano è estremamente pericoloso e che quando si esegue questa procedura è necessario prendere sempre precauzioni come una maschera facciale e guanti.