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DOI: 10.3791/57374-v
Yu Okazawa1,2, Kosuke Mizukoshi1,2, Yu Koyama2,4, Shoki Okubo5, Hiromitsu Komiyama1, Yutaka Kojima1, Michitoshi Goto1, Sonoko Habu3, Okio Hino2, Kazuhiro Sakamoto1, Akira Orimo2
1Department of Coloproctological Surgery,Juntendo University Faculty of Medicine, 2Department of Molecular Pathogenesis,Juntendo University Faculty of Medicine, 3Atopy Research Center,Juntendo University Faculty of Medicine, 4Department of Oral Pathobiological Science and Surgery,Tokyo Dental College, 5Department of Gastroenterology,Juntendo University Faculty of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Per consentire la rivelazione altamente sensibile del cancro colorettale umano diffondere cellule (CRC), colonizzando tessuti, mostriamo qui un protocollo per la trasduzione efficiente delle particelle lentivirali proteina fluorescente verde (GFP) in cellule di organoid PDX-derivato CRC prima del loro iniezione nel destinatari topi, con osservazione al microscopio stereo-fluorescenza.
Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia dei tumori sulle micrometastasi riscontrate nei pazienti con cancro del colon. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente il rilevamento altamente sensibile di micrometastasi indotte da organoidi di cancro del colon marcati con GFP e derivati da pazienti nei topi. In generale, gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché può essere difficile rilevare micrometastasi derivate da organoidi tumorali del colon in organi distanti nei topi.
A dimostrare la procedura con Yu Okazawa saranno Kosuke Mizukoshi e Yu Koyama, entrambi studenti di dottorato e chirurghi del mio gruppo. Per generare organoidi di cellule tumorali del colon-retto umano, aggiungere prima 150 microlitri di matrice extracellulare artificiale per pozzetto a una piastra a 12 pozzetti su ghiaccio. Quando tutti i pozzetti sono stati rivestiti, incubare la piastra per 30-60 minuti in un incubatore a 37 gradi Celsius e 5% di CO2 per solidificare i gel.
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