Trombosi venosa profonda indotta dalla stasi in topi monitorati dall'ecografia ad alta frequenza

Gli obiettivi generali di questa procedura sono indurre la trombosi venosa profonda nei topi utilizzando il modello di stasi della vena cava inferiore e monitorare i trombi utilizzando gli ultrasuoni ad alta frequenza. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della trombosi venosa su come un agente farmacologico, un gene o un tipo di cellula di interesse possono influenzare la formazione o la risoluzione dei trombi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che sia la formazione che la risoluzione dei trombi possono essere quantificate in modo non invasivo nei topi.

Abbiamo avuto l'idea di questo metodo per la prima volta quando stavamo studiando come denamicare e monitorare in modo non invasivo la formazione di trombi nella vena cava inferiore dei topi. Per iniziare, usa una pinza per sollevare la pelle addominale inferiore di un topo nero C57 di 8-10 settimane. E usa le forbici chirurgiche per fare un'incisione verticale parallela a entrambi i lati della linea alba dalla linea mediana.

Fai un'incisione orizzontale nella parte superiore dell'addome. Seguito da ripetute incisioni attraverso lo strato muscolare addominale. Piega la pelle e il muscolo lontano dall'incisione per esporre la cavità addominale.

E posizionare una garza inumidita su entrambi i lati della ferita. Applicare una leggera pressione su entrambi i lati dell'addome per esternalizzare l'intestino sulla garza. E posizionare un secondo strato di garza inumidita sul tessuto esternalizzato.

Sotto un microscopio da dissezione, spostare da parte il grasso peritoneale per esporre la vena cava interna, o IVC, tra le vene renali e iliache. E individua i rami laterali IVC. Usando una pinza, sezionare delicatamente intorno a ciascun ramo laterale per sfondare la fascia senza danneggiare i vasi circostanti.

Quindi, afferra con cura il grasso attorno a un ramo per sollevare la vena. E passa un pezzo di sutura di seta da sei trattini zero sotto il vaso. Quindi utilizzare una pinza da sutura e una tecnica di legatura del nodo chirurgica standard per eseguire una legatura chirurgica con almeno tre lanci attorno al ramo laterale per occludere completamente il vaso.

In alternativa, utilizzare Hemoclips. Per separare l'aorta dall'IVC, sezionare con smusso intorno e tra entrambi i vasi immediatamente distali dalla vena renale sinistra senza danneggiare nessuno dei due vasi. Quando è stata creata una finestra libera tra i vasi, passare una sezione di sutura di seta a sei trattini zero sotto l'IVC e l'aorta addominale.

E usa una pinza per tirare la sutura attraverso la finestra. Utilizzando una pinza da sutura, legare l'IVC con tre lanci immediatamente distali alla vena renale sinistra per l'occlusione completa del vaso. Verificare che l'aorta addominale sia stata lasciata ininterrotta.

E che tutti i rami laterali siano stati legati. L'IVC apparirà dilatato distalmente dal sito di legatura. E nessun flusso sanguigno sarà visibile.

Riportare il grasso peritoneale e l'intestino nella cavità addominale. E usa una pinza per sutura e sei punti di sutura in seta dash zero per chiudere separatamente gli strati muscolari e cutanei con punti di sutura. Quindi posizionare l'animale in un'incubatrice a 34 gradi Celsius per almeno 30 minuti con monitoraggio fino al completo recupero.

Posizionare il flacone di gel per ultrasuoni attraverso le bobine di un sistema di riscaldamento dell'acqua per riscaldare il gel a 37 gradi Celsius. 24 ore dopo la legatura, posizionare l'animale sulla piattaforma di analisi. E applicare il gel per elettrodi sui quattro elettrodi della piattaforma.

Con l'animale in posizione supina, fissare le zampe agli elettrodi. E inserire un termometro lubrificato nel retto. Posiziona una garza sul lato dell'animale per raccogliere il gel per ultrasuoni in eccesso.

Quindi applicare il gel sulla pelle esposta. E l'imaging dell'IVC secondo i protocolli standard di imaging ecografico. Utilizzando un sistema di microimaging ad alta frequenza, l'IVC può essere identificato nella vista longitudinale prima della legatura.

E la velocità del flusso può essere determinata dall'imaging Doppler a onde pulsate. Immediatamente dopo la legatura, è evidente una diminuzione del flusso sanguigno. 24 ore dopo la legatura, i trombi densi possono essere visualizzati all'interno dell'IVC mediante ecografia.

L'ecografia consente anche di quantificare la velocità del flusso sanguigno nei vasi. Utilizzo del Doppler colorato prima, subito dopo e 24 ore dopo la legatura. Una volta padroneggiato, il trombo può essere indotto in 30-45 minuti a seconda della presenza e del numero di rami laterali se la tecnica viene eseguita correttamente.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordarsi di prendersi il proprio tempo e di essere precisi ma delicati nei movimenti poiché è relativamente facile rompere i vasi. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come l'immunofluorescenza, l'analisi istologica o la citofluorimetria per rispondere a ulteriori domande sul contenuto cellulare dei trombi o per quantificare specifiche proteine di interesse.