Un modello chiuso-cassa per indurre costrizione trasversale aortica in topi

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di eseguire la costrizione aortica trasversa, in un modello murino a torace chiuso, inducendo l'ipertrofia miocardica ventricolare sinistra. Questa tecnica minimamente invasiva, aiuta a ridurre i problemi respiratori e a minimizzare la risposta infiammatoria. Questo metodo può aiutarci a rispondere a domande chiave, nel campo dell'immunologia, ad esempio, la risposta della macrofagia cardiaca nello sviluppo dell'ipertrofia ventricolare sinistra.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che la gabbia toracica rimane intatta e quindi il trauma è ridotto al minimo. Poiché gli spazi e i volumi correnti sono adattati al peso corporeo, questo protocollo può essere utilizzato in topi di diverse dimensioni. Riduce anche i traumi chirurgici e diminuisce la deviazione nei valori di misurazione.

Dopo aver anastetizzato un topo, secondo il protocollo di testo, spostare il mouse su un tavolo operatorio a temperatura controllata e staccare l'ogiva collegata alla scatola di induzione dell'anestesia per mantenere la narcosi. Con una sutura di nylon, fissare gli incisivi superiori del topo. Pizzica la coda per assicurarti l'assenza di riflessi.

Usa del nastro adesivo per fissare le estremità. Dopo aver inserito una sonda rettale, applicare la crema depilatoria sulla gola e sulla parte superiore del torace, secondo le istruzioni del produttore, e lasciarla riposare per un minuto. Quindi, rimuovere la crema e ripetere se necessario.

Con le impostazioni del ventilatore regolate in base ai parametri fisiologici e l'animale sotto un microscopio operatorio, incidere la pelle sulla linea mediana di circa tre millimetri sotto la mandibolare fino alla seconda costola. Identificare la linea mediana e i tessuti connettivi della ghiandola sottomandibolare. Quindi, usa due pinze angolate per dividere delicatamente e senza mezzi termini la ghiandola sulla linea mediana ed esplorare il muscolo tracheale.

Preparare delicatamente la trachea, separando senza mezzi termini i muscoli paratracheali. Usa una pinza per tirare la lingua per raddrizzare la gola per facilitare l'intubazione e inserisci delicatamente una cannula per l'intubazione all'interno della trachea. Confermare l'intubazione visualizzando direttamente il tubo all'interno della trachea e controllando il corretto movimento del torace.

Preparare entrambe le arterie carotidi, che si trovano adiacenti alla trachea, usando una pinza per separare delicatamente il tessuto connettivo. Applicare il gel per ultrasuoni sulla punta della sonda Doppler da 20 hertz e posizionare la punta della sonda sull'arteria carotide destra e sinistra, con un angolo inferiore a 45 gradi. Ruotare lentamente la sonda per spostarla lateralmente e medialmente per trovare un segnale doppler, quindi inclinare la sonda per ottimizzare il segnale.

Utilizzando un nuovo set di guanti sterili e forbici, espandere l'incisione cutanea fino al secondo spazio intercostale. Quindi, con la punta della pinza, aprire il secondo spazio intercostale e inserire i divaricatori. Con un ingrandimento del 200%, identifica la linea mediana e i tessuti connettivi.

Quindi, usa una pinza angolata per dividere delicatamente il timo. Rimuovere il tessuto adiposo fino a quando l'arco aortico non è chiaramente visibile. Con una pinza angolata per il pollice, preparare un tunnel sotto l'aorta trasversa, tra l'arteria brachiocefalica e l'arteria carotide comune sinistra.

Quindi, usando una pinza fine, tenere una sutura 6-0 e passare il filo sotto l'arco aortico. Con la seconda pinza, prendi il filo dall'altro lato dell'arco. Posizionare con cautela il distanziatore parallelamente all'aorta trasversale.

Preparare un doppio nodo sciolto sul distanziatore e assicurare il posizionamento ottimale del distanziatore in parallelo all'aorta. Quindi, fare il primo nodo e fare rapidamente un secondo nodo contrario, prima di rimuovere prontamente il distanziatore. Il passaggio più critico dell'intera procedura è legare entrambi i nodi in modo rapido e stretto e rimuovere immediatamente il distanziatore.

Chiudere il secondo spazio intercostale, con una sutura in polipropilene 6-0, e prestare particolare attenzione ai vasi succlavi durante la legatura. Quindi, utilizzando una sutura in polipropilene 6-0, cucire la pelle in uno schema di sutura continuo. Confermare la legatura ed eseguire le cure postoperatorie, secondo il protocollo di testo.

Queste misurazioni della velocità del flusso doppler convalidano un TAC di successo, che provoca un aumento della velocità del sangue nell'arteria carotide destra, a causa dell'elevata pressione nel ventricolo sinistro e nell'aorta, causando al contempo un'attenuazione della velocità del flusso sanguigno post-stenotico nell'arteria carotide sinistra. Come mostrato in questo grafico, i rapporti tra peso cardiaco e peso corporeo sono aumentati significativamente nei topi TAC, rispetto ai topi senza bande, sei giorni dopo l'intervento chirurgico. Questo rapporto era quasi costante dopo 21 giorni.

La frequenza cardiaca ha un effetto significativo sulla contrattilità ventricolare sinistra e sulla gittata cardiaca. Questo grafico rivela che non c'erano differenze nella frequenza cardiaca dei topi con bande aortiche e non con bande aortiche, dopo 21 giorni. Come dimostrato qui, un bendaggio costante dell'aorta è stato dimostrato da un aumento della pressione arteriosa sistolica, misurata tramite un catetere ventricolare sinistro dopo 21 giorni.

I topi C57 black six, sono comunemente noti per sviluppare ipertrofia eccentrica con disfunzione sistolica dopo TAC. È stato riscontrato un aumento del diametro ventricolare sinistro, che appare significativo anche nelle misurazioni del volume di pressione. Di conseguenza, i volumi telesistolici e diastolici sono aumentati in modo significativo.

Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in meno di 10 minuti, se eseguita correttamente. Infine, questa procedura fornisce un'analisi ottimizzata della risposta immunitaria nell'ipertrofia ventricolare sinistra, perché il minimo trauma chirurgico limita l'induzione aspecifica del sistema immunitario. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire la costrizione aortica trasversa standardizzata e minimamente invasiva.