Name: Bioindicazione test di idoneità ambiente Stream per giovani dacqua dolce perla cozze utilizzando metodi di esposizione In Situ (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-05T15:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Scopri metodi di bioindicazione in situ per valutare l'idoneità degli habitat fluviali per giovani Margaritifera margaritifera. Questa tecnica consente di monitorare crescita e sopravvivenza in condizioni iporeiche naturali.

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Michal Bílý e Ondřej P. Simon sono stati sostenuti da sovvenzioni da Università Ceca di scienze biologiche [interno Grant Agenzia della facoltà di scienze ambientali, CULS Praga (42110 1312 3175 (20164236))]. Karel Douda sostenuto da Fondazione Scienza Ceca (13-05872S). Dati sulla bioindicazione e presente occorrenza di mitili della perla sono stati raccolti nel corso dell'attuazione del piano d'azione di Ceca per mitili d'acqua dolce perla gestito dall'agenzia di conservazione natura della Repubblica Ceca, che è finanziato dal governo della Repubblica Ceca ed è disponibile presso

1. gabbia della maglia
Nota: Vedere la Figura 1.
<ol><li>Preparare il materiale
	<ol>
<li>Preparare il materiale per la parte in laboratorio dell'esperimento: ~ 1-2 L di fiume acqua per gabbia di rete metallica, maglia gabbie (1 scocca in plastica, 2 coperchi, 2 fogli di tecniche speciali setacci con 340 µm pori, 4 viti e 4 dadi a gabbia), pinze , una chiave, un trinoculare dissezione microscopio stereo zoom, una griglia di calibrazione (Strumentazione del microscopio), 5 capsule di Petri di 50 mm di diametro, Becher, 2 piatti di plastica, pipette Pasteur, un colino, una fotocamera digitale (~ 25 cm x 15cm x 3 - 5 cm) e una scatola di plastica.</li>
		<li>Per eseguire l'installazione di hyporheal, preparare un tubo di gomma e una maglia di 100 µm-poro e una spruzzetta. Per la costruzione del dispositivo, vedere supplementari File 1: s. 1. Costruzione di gabbie della maglia.</li>
	</ol></li>
	<li>Assemblare il fondo e la parte centrale della maglia gabbie. Assemblate la parte della gabbia che tiene gli individui. Inserire una copertura di plastica in primo luogo, poi un foglio di plastica del setaccio, e infine sulla parte superiore del corpo principale. Usare quattro viti per fissarlo.</li>
	<li>Preparare materiale biologico
	<ol>
<li>Mettere la gabbia di rete metallica nel piatto di plastica contenente acqua di fiume. Assicurarsi che le camere siano mezzo piena. Prendere i giovani FWPM (vedere supplementari File 1: s. 6. Materiale biologico) fuori dalla scatola isolata termicamente e metterli nel piatto Petri. Nota: Accertarsi che sbalzi di temperatura non superi ~ 2 ° C.</li>
		<li>Utilizzando una spruzzetta e colino, vagliare i giovani per eliminare i detriti.</li>
	</ol></li>
	<li>Impostare il microscopio e la fotocamera. Eseguire una calibrazione degli strumenti (vedere File1 supplementari: S. 5. Microscopio e phototechnics). Posto una piastra Petri contenente un po' acqua sotto il microscopio.</li>
	<li>Mettere i giovani in gabbie (attività di laboratorio sperimentale)
	<ol>
<li>Utilizzare una pipetta Pasteur per rimuovere un individuo da una capsula di Petri e posizionare nel piatto Petri sotto il microscopio.</li>
		<li>Verifica fitness dell'individuo guardando nell'oculare (~ 40 ingrandimenti). Nota: "Buona" forma significa che l'individuo si muove, ruota da lato a lato, spinge il piede fuori del guscio, ecc rimuovere fitness morto o basso gli individui con un Pasteur pipetta e metterli in un piatto separato di Petri (novellame FWPM con un'apertura Shell, nessun movimento, il piede non è tirato fuori, una shell frammentata, i giovani che galleggiano in maniera incontrollata nell'acqua, una decomposizione visibile della shell, parziale decalcificazione).</li>
		<li>Prendere due fotografie di un FWPM individuali mostrando buona forma fisica utilizzando un ingrandimento costante di ~ 80 X. Vedi File supplementari 1: s. 5. Microscopio e phototechnics. Salvare le foto. Nota: Per una buona misura della sua lunghezza, i giovani devono essere definiti nel senso della lunghezza (vista laterale). L'obiettivo principale è quello di scattare una foto di alta qualità della lunghezza massima shell abbastanza buono per consentire un'analisi di foto in seguito.</li>
		<li>Inserire i giovani nel vano appropriato nella gabbia, non appena le immagini sono prese. Registrare i numeri delle foto e della camera.</li>
		<li>Ripetere questo passaggio con ogni individuo per tutte le camere usate nella gabbia della maglia. Nota: vedere supplementari File 1: s. 1. Costruzione di gabbie della maglia.</li>
		<li>Una volta che tutti gli alloggiamenti utilizzati hanno mitili della perla, mettere il setaccio di plastica sulla gabbia, poi delicatamente mettere il coperchio di plastica e fissare tutte le parti insieme con i dadi.</li>
		<li>Nel caso di un'installazione in una zona hyporheic, una delle estremità del tubo passa attraverso uno degli alloggiamenti e fissarlo in questa posizione, poi prendere la maglia anti-intasamento e associarlo all'estremità inferiore (vedere supplementari File 1: s. 1. Costruzione di gabbie in rete).</li>
	</ol></li>
	<li>Novellame di archivio
	<ol>
<li>Mettere la gabbia nel contenitore di plastica con l'acqua del fiume, in modo che i giovani sono completamente immersi e tenerlo nella thermobox. Prima dell'installazione, lasciate che i giovani adattarsi in situ fiume acqua temperatura nel luogo di installazione (graduale raffreddamento, max 5 ° C in 24 h).</li>
	</ol></li>
	<li>Installare maglia gabbie
	<ol>
<li>Preparare il materiale di campo tra cui le gabbie di rete metallica con i giovani, punte d'acciaio, bulloni e dadi metallici, una chiave, Campo temperatura Datalogger (Vedi Tabella materiali e supplementari File 1: S.4.2. Misurazione di acqua), una stringa, una macchina fotografica, il protocollo di campo, un martello e una vanga.</li>
		<li>Trasportare i giovani FWPM al sito in un campo thermobox (cassonetto coibentato), mantenendo una temperatura dell'acqua stabile con variazioni < ~ 2 ° C. Mettere la thermobox con le gabbie di rete metallica nel fiume sul sito per lasciare che i giovani di adattarsi alle condizioni ambientali locali (pH, conducibilità, ecc.).</li>
		<li>Installare la gabbia di rete metallica.<ol>
<li>Rimuovere la gabbia di rete metallica da thermobox il campo. Fornirlo con due punte in acciaio e fissare il datalogger di campo. Ancorare la gabbia in un habitat con condizioni tipiche per FWPMs nell'area di studio (ad esempio, ai margini del flusso principale del flusso, non nel flusso d'acqua diretto, non in acqua stagnante, non in luce diretta del sole).<ol>
<li>Per l'acqua aperta, usando un paio di punte d'acciaio, fissare la gabbia al fondo del fiume; giaceva su un fianco e il livello con la parte inferiore del fiume, a valle con un angolo di 45° per il flusso del fiume, verso il centro del fiume. Il bordo orizzontale inferiore dovrebbe essere circa 10-15 cm sopra la superficie di fondo del fiume. Mantenere una distanza minima di 2 m tra ogni gabbia presso una località (Vedi supplementari File 1: s. 4. Gabbie di manutenzione).</li>
				<li>Per la zona hyporheic, scavare le gabbie nel fondo del fiume, in una posizione perpendicolare paesaggio, perpendicolare al flusso di acqua, così che il bordo orizzontale superiore della gabbia è parallelo alla superficie del fondo del fiume e le camere si trovano presso il hyporheic profondità che devono essere testati. Estrarre l'estremità superiore del tubo flessibile di gomma sopra la superficie di fondo per la possibilità di campionamento di acqua durante l'esperimento (vedere supplementari File 1: S.4.2. Misurazione di acqua). Nota: Si raccomanda di eseguire controlli periodici e manutenzione sulle gabbie (vedere supplementari File 1: S. 4. Gabbie di manutenzione).</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Disinstallare le gabbie e i giovani di trasporto dopo l'esposizione. Per questo, tirare le gabbie fuori dall'acqua, deselezionare loro di sedimenti fini pure a partire dal materiale alla deriva e metterli nella thermobox campo riempito con acqua di fiume. Trasporto le gabbie immediatamente in laboratorio e iniziare la valutazione di tasso di mortalità e crescita. Nota: Vedere File supplementari 1: s. 3. Durata di esposizione. Nel caso di una differenza di temperatura superiore a 5 ° c tra le gabbie e l'ambiente di laboratorio, è necessario prima che la temperatura a pareggiare.</li>
	<li>Valutare l'esperimento verificando l'idoneità di vita di ogni giovanile (vedere i passaggi 1.5.2 e 1.5.3) e prendere le 2 immagini di ogni giovanile dal vivo in una capsula Petri utilizzando un ingrandimento costante di ~ 80 X. Registrare l'idoneità e i numeri delle immagini e degli alloggiamenti.</li>
	<li>Completare l'esperimento (comune a tutti i metodi)
	<ol>
<li>Eseguire le misurazioni nel software di analisi di immagine. Utilizzare software di analisi per la determinazione di dimensioni corpo di ogni giovanile valutate sia le immagini di input (punto 1.5.3) e le immagini in uscita (passaggio 1,9). Uso la lunghezza massima totale shell documentato sia fotografie come valori di dimensione corpo in entrata e in uscita.</li>
		<li>Inserire i valori misurati il processore di tabella e calcolare l'incremento di crescita (%) per ogni superstite giovanile.</li>
		<li>Stimare il tasso di sopravvivenza (%) per gabbia di rete utilizzando il rapporto tra il numero di individui sopravvissuti a tutti gli individui sperimentali nella gabbia della maglia. Nota: Dopo l'esperimento, restituire i sopravvissuti al programma di allevamento (vedere supplementari File 1: s. 6. Materiale biologico).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Sandy Cage
Nota: Vedere la Figura 2.
<ol><li>Preparare il materiale
	<ol>
<li>Preparare il materiale per la parte in laboratorio dell'esperimento: 2 capsule di Petri (diametro ~8.5 cm), pipette Pasteur, un colino, 25 L di acqua di fiume, una scatola di plastica, setacci (maglia taglia 1 e 2 mm), una grande scatola di plastica (25L), una gabbia di sabbia (Vedi supplementari File 1 : S. 2. Costruzione di gabbie di Sandy), ordinato una macchina fotografica digitale, un trinoculare dissezione microscopio stereo zoom, una griglia di calibrazione (Strumentazione del microscopio), sabbia di fiume dall'area di studio (Vedi punto 2.1.3) e il protocollo. Vedere tabella materiali e File supplementare 1: S. 2. Costruzione di gabbie di Sandy.</li>
		<li>Preparare il materiale per il processo di isolamento: contenitori (1 per ogni gabbia con 1 letto aggiunto), 2 piastre di Petri tondi (diametro ~ 14 cm), una pipetta Pasteur, lenti di ingrandimento e 1 L di acqua di fiume.</li>
		<li>Setacciare la sabbia di fiume attraverso un setaccio di 2 mm e poi attraverso un setaccio di 1 mm per ottenere un formato di grano di 1-2 mm. la sabbia asciutta e salvarlo in una forma secca fino a quando richiesto.</li>
	</ol></li>
	<li>Prendere il novellame (vedere supplementari File 1: s. 6. Materiale biologico) fuori la thermobox e metterli nel piatto Petri. Utilizzando una spruzzetta e colino, vagliare i giovani per eliminare i detriti.</li>
	<li>Impostare il microscopio e la fotocamera (vedere supplementari File 1: s. 5. Microscopio e phototechnics).</li>
	<li>Mettere i giovani in gabbie (attività di laboratorio sperimentale)
	<ol>
<li>Posizionare la gabbia di sabbia in scatola di plastica. Spargere la sabbia ordinata (Vedi punto 2.1.3) fino a un terzo dell'altezza della gabbia della sabbia. Versare l'acqua nella scatola. Assicurarsi che la superficie della sabbia è di circa 10 mm sotto il livello dell'acqua. Inserire la gabbia di sabbia nella casella 25 L di acqua di fiume e lo espongono alla stessa temperatura come il FWPMs giovanile (vedere supplementari File 1: S.6.2. Deposito del materiale biologico) per 12 h. evitare l'esposizione della sabbia alla luce del sole.</li>
		<li>Prendere la capsula di Petri con i giovani FWPM preparati.</li>
		<li>Verifica fitness degli individui guardando nell'oculare (Vedi punto 1.5.2).</li>
		<li>Eseguire la documentazione fotografica come segue. Scattare una foto di tutti gli individui scoperto (Vedi punto 1.5.3) e scegliere 10 degli individui più grandi. In alternativa, prendere le immagini di tutti i giovani insieme a basso ingrandimento (~ 40 X) per una valutazione di massa e 10 esemplari. Salvare tutte le foto e registrare i loro numeri.</li>
		<li>Utilizzando una spruzzetta, spostare i giovani FWPM nella gabbia sabbia preparata.</li>
	</ol></li>
	<li>Novellame di archivio
	<ol>
<li>Mettere la gabbia nella grande scatola di plastica con acqua di fiume, in modo che la gabbia è completamente immersa e tenerlo nella thermobox. Lasciate che i giovani adattare in situ fiume temperatura dell'acqua (graduale raffreddamento, max 5 ° C per 24 h) prima dell'installazione.</li>
	</ol></li>
	<li>Installare gabbie sabbiose
	<ol>
<li>Preparare il materiale per l'installazione di campo: gabbie sabbiose, un campo di ~ 25-L thermobox, una pietra piatta (minimo 1 kg di peso), una rete (maglia mm 10 x 10), una spruzzetta, Campo temperatura Datalogger (Vedi Tabella materiali e supplementari File 1: Misurazione dell'acqua S.4.2.), una vanga e il protocollo di campo.</li>
		<li>Trasporto le gabbie con i giovani al sito in thermobox il campo, mantenendo una temperatura dell'acqua stabile (cambiamento di ~ 2 ° C). Mettere il campo Container termico con le gabbie di sabbiose nel fiume presso il campo sito di lasciare i giovani FWPM di adattarsi alle condizioni ambientali locali (pH, conducibilità, ecc.).</li>
		<li>Installare le gabbie sabbiose in habitat con condizioni tipiche per FWPMs (ad es., al bordo del flusso del flusso principale in un meandro, non nel flusso d'acqua diretto, non in acqua stagnante, non in luce diretta del sole).<ol>
<li>Per acque aperte, fissare le gabbie sabbiose per una pietra piatta usando una rete e posizionarlo sul fondo del fiume. Assicurarsi che il lato più grande della gabbia forma un angolo di 45° con il flusso.</li>
			<li>Per Hyporheal, scavare le gabbie in fondo del fiume perpendicolare al flusso d'acqua affinché il coperchio di gabbia è livello con la superficie inferiore di fiume. Nota: Si raccomanda di eseguire controlli periodici e manutenzione sulle gabbie (vedere supplementari File 1: S. 4. 1. controlli del sito).</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Disinstallare le gabbie e i giovani di trasporto dopo l'esposizione Nota: vedere supplementari File 1: s. 3. Durata di esposizione.<ol>
<li>Tirare le gabbie fuori dall'acqua, eliminarle del materiale alla deriva e metterli nella thermobox campo riempito con acqua di fiume.</li>
		<li>Trasporto le gabbie al laboratorio e iniziare la valutazione di tasso di mortalità e crescita. Nota: Nel caso di una differenza di temperatura superiore a 5 ° c tra le gabbie e l'ambiente di laboratorio, è necessario lasciare che le temperature di pareggiare.</li>
	</ol></li>
	<li>Giovani dalla sabbia separati-FWPM
	<ol>
<li>Preparare in un recipiente rotondo con una profondità di 50 mm (per ogni gabbia separatamente) e un contenitore giro aggiuntivo. Trasferire la sabbia dalla gabbia nel contenitore rotondo. Utilizzare un moto vorticoso per lavare fuori le particelle più leggere in un nuovo contenitore.</li>
		<li>Assaggiare il contenuto da questo contenitore gradualmente e cercare juveniles passo-passo utilizzando una pipetta Pasteur e una lente di ingrandimento. Mettere i giovani in di Petri con la pipetta Pasteur. Ripetere questo passaggio fino a quando l'ultimo giovanile è stato trovato e poi un altro 10 x dopo il primo risultato negativo. Dopo ogni lavaggio, è necessario aggiungere acqua pulita del fiume al contenitore originale con sabbia. Nota: Soprattutto dopo il primo lavaggio, correttamente esaminare il contenuto e pulirlo di zavorra come sedimenti fini e altre alluvioni.</li>
	</ol></li>
	<li>Valutare l'esperimento
	<ol>
<li>Verifica l'idoneità di ogni giovanile (vedere i passaggi 2.4.3 e 1.5.2) e contare il numero dei sopravvissuti.</li>
		<li>Scattare una foto (Vedi punto 2.4.4.) di ciascuno separatamente, anche se questo significa che non c'è nessuna chiara identità di ogni individuo. In alternativa, prendere le foto alla rinfusa e scegliere un sottoinsieme delle 10 persone più coltivate tra i risultati finali. Nota: Entrambe le possibilità hanno un simile valore di segnalazione. Possibilità 1 ha una limitazione di un maggiore carico di lavoro, ma anche il beneficio del più alto ingrandimento di foto e così anche una maggiore precisione.</li>
	</ol></li>
	<li>Completare l'esperimento
	<ol>
<li>Effettuare misurazioni in software di analisi di immagine. Completare l'esperimento come fatto nelle gabbie della maglia (Vedi punto 1.10) con la seguente eccezione: non valutare il tasso di crescita (%) di ogni giovanile ma valutare il gruppo nel suo complesso nell'esperimento sabbia gabbia. Nota: Dopo l'esperimento, i sopravvissuti devono essere restituiti al programma di allevamento (Vedi S.6.1 File supplementari. Sezione di un materiale biologico).</li>
	</ol></li>
</ol>

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<li>Hruška, J. Experience of semi-natural breeding programme of freshwater pearl mussel in the Czech Republic. Die Flussperlmuschel in Europa: Bestandssituation und Schutzmassnahmen. , 69-75 (2000).</li>
<li>Bayne, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+components+of+growth+differences+between+individual+oysters+%28Crassostrea+gigas%29+and+a+comparison+with+Saccostrea+commercialis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+Biochemical+Zoology%22%5BJournal%5D)">Physiological components of growth differences between individual oysters (Crassostrea gigas) and a comparison with Saccostrea commercialis.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 72 (6), 705-713 (1999).</li>
<li>Tamayo, D., Azpeitia, K., Markaide, P., Navarro, E., Ibarrola, I. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00227-016-2905-z">Food regime modulates physiological processes underlying size differentiation in juvenile intertidal mussels Mytilus galloprovincialis.</a> Marine Biology. 163 (6), (2016).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Tempo di esposizione:
Anche un mese esposti maglia gabbie Visualizza una crescita visibile che riflette le differenze tra le località (Figura 3), quindi sono molto utilizzabile per la rilevazione rapida e facile di una caratterizzazione di località. Tuttavia, la rilevanza dei risultati dipende dallo stato a breve termine delle condizioni, che possono oscillare. In particolare, eventi di pioggia breve possono svolgere un ruolo. Al contrario, imprevedibile inquinamento...

L'esposizione di organismi sperimentali in situ con la successiva valutazione del loro stato è uno dei modi per ottenere informazioni circa la qualità ambientale e (soprattutto) l'idoneità del sito per una specie. All'interno di animali, un tale bioindicazione è applicabile principalmente per piccoli invertebrati che sono in grado di vivere in uno spazio limitato limitato. Giovani fasi di bivalvi (Bivalvia) sono un tale organismo adatto gruppo1.
Bivalvi della famiglia Unionidae sono una componente molto importante di ecosistemi acquatici2. Tuttavia, queste specie sono spesso in pericolo critico, soprattutto nei torrenti e fiumi. Alcuni di loro sono caratterizzati come "specie ombrello" cui conservazione è strettamente correlata alla conservazione del biotopo intero flusso e che richiedono un completo approccio3. Questi animali hanno un ciclo di vita associato con molti componenti dell'ambiente, da acqua chimica4,5 a cambiamenti nelle popolazioni di pesci che servono come cozza larve ospita6. Perché i giovani cozza spesso rappresentano una fase critica del ciclo di vita della cozza, l'idoneità del sito per il loro sviluppo in questa fase è fondamentale per uno sviluppo della popolazione di successo specie in una località.
La cozza perla d'acqua dolce (FWPM, Margaritifera margaritifera; Unionida, Bivalvia) è un bivalvi in pericolo critico che si verificano nei flussi europei oligotrofici. I loro numeri sono scesi drasticamente durante il 20° secolo in tutta l'area di occorrenza. Sembra che l'attuale declino nella riproduzione di specie nella maggior parte delle popolazioni europee centrale è principalmente causato da molto basso a zero sopravvivenza del novellame durante i primi anni della loro vita. Si presume che giovanile FWPMs vivere per molti anni in hyporheic superficiale zona7, di cui le condizioni e la loro variabilità non sono ancora ben descritti. Inoltre, fino al loro secondo anno di vita, i giovani hanno solo una dimensione di fino a circa 1 mm, quindi sono molto difficili da trovare in grandi volumi di sedimenti sotto condizioni naturali8. Pertanto, gli esperimenti con i giovani in cattività sono necessari per lo studio della loro ecologia.
All'interno di Ceca piano d'azione per Freshwater Pearl cozza9, ci sono migliaia di giovani in aumento ogni anno da un programma di allevamento semi-naturale. Tuttavia, c'è una domanda di cui località e habitat sono adatti per supporto di successo della popolazione di questi giovani o reintroduzione di eventuali specie. In situ bioindications presentare un modo di trovare la risposta.
Nonostante il fatto che i tassi di sopravvivenza incoerente di cozze giovanile in gabbie di esposizione sono stati osservati in alcune opere precedenti che mettevano in discussione l'idoneità di cozze giovanile come bioindicatori10, parecchi studi recenti hanno confermato la applicabilità dei metodi di esposizione giovanile per la qualità dell'acqua test11,12,13. Inoltre, è stato dimostrato che diversi fattori devono essere considerati quando si interpretano i risultati di questi studi particolari, quali l' origine stock14 e gli effetti persistenti di condizioni larvale15.
Si pone la questione di come installare juveniles sperimentale in località testata e come valutare più efficacemente la loro condizione. La prima applicazione rigorosa di metodi di esposizione in situ con FWPMs giovanile è stata pubblicata da Buddensiek16. Gli individui FWPM giovanili sono stati tenuti in gabbie di foglio, esposti in acqua flusso libero dei flussi, e la sopravvivenza e la crescita sono stati quantificati dopo diverse settimane di esposizione. L'approccio è stato originariamente sviluppato come un metodo di allevamento semi-artificiale, ma l'autore ha anche evidenziato l'applicabilità per la valutazione delle esigenze di habitat e la qualità dell'acqua. Sebbene la sopravvivenza giovanile FWPM è naturalmente molto bassa su una scala di mesi/anni e solo un numero molto piccolo di animali sopravviveranno, il tasso di sopravvivenza può essere un buon indicatore dell'effetto ambientale su una scala di parecchie settimane16. In anni di ricerca, metodi di esposizione sono stati sviluppati a seguito degli habitat hold sperimentale giovanile cozza-streaming in diretta e per valutare i loro tassi di crescita e sopravvivenza; Questi includono sabbia caselle17, silos di cozza basato su un principio di upwelling18e vari altri esposizione gabbie (riassunte da gomma e colleghi)11. Perché i giovani si presentano naturalmente in hyporheic superficiale zona7, l'applicazione di dispositivi sperimentali all'interno del fondo di flusso è molto desiderabile.
Nel nostro articolo, descriviamo l'uso di due dispositivi di esposizione per FWPMs: io) per volta gabbie di foglio Buddensiek ("maglia gabbie") consentendo anche bioindicazione test in condizioni di hyporheal; e ii) Hruška sabbia scatole ("gabbie sabbiose"). Il protocollo descrive l'applicazione di entrambi i metodi in condizioni di acqua e hyporheic aperte (vale a dire, quattro varianti di esposizione sono descritti). I metodi sono stati gradualmente modificati e ampliati nel corso di più di 15 anni di applicazione nell'ambito del piano di azione Ceca per Freshwater Pearl cozza9 e verificati da una serie di esperimenti.

<table><tbody><tr><td><forte>materiale biologico manutenzione e cura</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Giovani di cozze perlifere d'acqua dolce</td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td>da un programma di allevamento FWPM</td></tr><tr><td>scatole di plastica</td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>thermobox</td><td>MERCI</td><td>212,070,600,030</td><td>Ci sono molte possibilità. Questo è solo un esempio.</td></tr><tr><td>thermobox da campo (ca25 l)</td><td>qualsiasi</td><td></td><td>NA cold box (scatola isolata) comunemente usato per il trasporto di alimenti</td></tr>, <tr><td>acqua fluviale</td>, <td>qualsiasi</td><td></td> piastra di Petri NA<td></td></tr>, <tr><td></td><td>qualsiasi</td><td></td> pipetta Pasteur in plastica NA <td></td></tr><tr><td>con bulbo a palloncino (contagocce)</td><td>qualsiasi</td><td></td><td>diametro del foro NA: 1 mm</td></tr>, <tr><td>perossido di idrogeno</td>, <td>qualsiasi</td><td></td> contenitore in plastica NA <td></td></tr><tr><td>(ca 50 l) per l'acqua del fiume</td><td>qualsiasi</td> filtro da tè <td>in plastica NA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td>comunemente usato in cucina</td></tr><tr><td>costruzione di gabbie a rete</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>corpi principali in plastica</td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>plactic</td><td>copre qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>setacci tecnici speciali 340 e micro; m</td><td>Seta & Setacci tecnici speciali Progress</td><td>UHELON 20 T</td><td></td></tr><tr><td>100 & micro; m</td><td>Seta & Tubo</td> in gomma Progress <td>UHELON 67 M</td><td></td></tr><tr><td>(diametro 5,5 mm)</td><td>qualsiasi</td><td></td> bullone in acciaio NA <td></td></tr><tr><td>qualsiasi</td><td></td><td>dado</td> in acciaio NA <td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td> chiave <td>NA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td><td></td> punta in acciaio NA <td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td> pinza <td>NA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td> bicchiere <td>NA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>piatti di plastica (ca. 25x15x3-5cm)</td><td>qualsiasi</td><td></td> bottiglia di squirt NA<td></td></tr>, <tr><td>qualsiasi</td><td>protocollo</td><td>di campo NA</td><td></td></tr>, <tr><td></td><td>qualsiasi</td><td></td> cancelleria NA<td></td></tr>, <tr><td></td><td>qualsiasi</td><td></td> contenitore di plastica NA<td></td></tr>, <tr><td></td><td>qualsiasi</td><td></td> corda NA<td></td></tr>, <tr><td></td><td>qualsiasi</td> martello <td>NA</td><td></td></tr>, <tr><td></td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Gabbie sabbiose costruzione e utilizzo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>setaccio 1 mm</td><td>qualsiasi</td> setaccio <td>NA</td><td></td></tr><tr><td>2 mm</td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>setacci tecnici speciali 340 &; m</td><td>Seta & Progress</td><td>UHELON 20 T</td><td></td></tr><tr><td>scatole di plastica con coperchio ermetico</td><td>qualsiasi</td><td></td> adesivo hot melt NA <td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td><td></td> scatola di plastica NA <td></td></tr><tr><td>(ca 250 x 150 x 100 cm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>scatola di plastica grande (ca 25 l)</td><td>qualsiasi</td><td>pietra piatta NA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>rete</td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>sabbia di fiume</td><td>qualsiasi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>contenitori rotondi</td><td>qualsiasi</td><td>lente</td> d'ingrandimento NA <td></td></tr><tr><td></td><td>Carson</td><td>Carson CP 60</td><td>Ci sono molte possibilità. Questo è solo un esempio</td></tr><tr><td>gabbie installazione e manutenzione</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>field datalogger di temperatura</td><td>ONSET</td><td>UA-001-64</td><td>http://www.onsetcomp.com/products/data-loggers/ua-001-64</td></tr><tr><td>spade</td><td>any</td><td>NA</td><td></td></tr> toothbrush <tr><td></td><td>any</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>experiment evaluation </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>stereomicroscopio zoom per dissezione trinoculare Ottica</td><td>Bresser</td><td>ICD 10x-160x</td><td>Ci sono molte possibilità. Questo è solo un esempio.</td></tr><tr><td>fotocamera digitale/ oculare elettronico</td><td>Bresser ottica</td><td>MikroCamLab 5M</td><td>Ci sono molte possibilità. Questo è solo un esempio.</td></tr><tr><td>Cintura di calibrazione</td><td>Am Scope</td><td>SKU: MR100</td><td>Ci sono molte possibilità. Questo è solo un esempio.</td></tr><tr><td>fonte di alimentazione esterna con due guide luminose mobili</td><td>Arsenale</td><td>K1309010150021</td><td>Ci sono molte possibilità. Questo è solo un esempio.</td></tr><tr><td>Software per immagini</td><td>Software ImageJ Le</td><td></td><td>possibilità sono molteplici. Questo è solo un esempio.</td></tr><tr><td>processore da tavolo</td><td>MS excel</td><td></td><td>Ci sono molte possibilità. Questo è solo un esempio.</td></tr></tbody></table>

bioindicazione test di idoneità ambiente stream per giovani d'acqua dolce perla cozze utilizzando metodi di esposizione in situ

Bioindication Testing of Stream Environment Suitability for Young Freshwater Pearl Mussels Using In Situ Exposure Methods

Conoscenza di idoneità habitat per mitili d'acqua dolce è un passo importante nella conservazione di questo gruppo di specie minacciate di estinzione. Descriviamo un protocollo per l'esecuzione in situ prove di esposizione giovanile all'interno di bacini imbriferi oligotrofe fiume sopra periodi di un mese e tre mesi. Per valutare il tasso di crescita e sopravvivenza giovanile sono disponibili due metodi (in entrambe le modifiche). I metodi e le modifiche differiscono nel valore per la località di bioindicazione e ognuno ha i suoi vantaggi così come le limitazioni. Il metodo di sabbia gabbia funziona con un grande insieme di individui, ma solo alcuni degli individui sono misurati e i risultati sono valutati alla rinfusa. Nel metodo gabbia della maglia, gli individui sono tenuti e misurati separatamente, ma un basso numero individuale viene valutato. La modifica di esposizione di acqua aperta è relativamente facile da applicare; Mostra la crescita giovanile potenziale di siti e può anche essere efficace per la prova di tossicità dell'acqua. La modifica di esposizione all'interno del letto ha bisogno di un carico di lavoro elevato, ma è più vicina alle condizioni di un ambiente naturale e giovanile ed è meglio per aver segnalato la reale idoneità di località. D'altra parte, sono necessari ulteriori repliche in questa modifica a causa della sua variabilità di ambiente alta-hyporheic.

I quattro metodi di bioindicazione (gabbie aperte acqua sabbiosa, gabbie sabbiose nel letto, aprire acqua maglia gabbie e all'interno-letto maglia gabbie) sono stati applicati per studiare l'idoneità di condizione di ambiente per FWPMs in alto Moldava bacino fiume (foresta Boema, ceco Repubblica). Questo fiume rappresenta una località di residuo di FWPM all'interno di Europa centrale19. Qui, presentiamo una serie di risultati che illustrano gli aspetti più importan...

In situ bioindications consentono la determinazione dell'idoneità di un ambiente per le specie minacciate di estinzione cozza. Descriviamo due metodi basati sull'esposizione giovanile di mitili d'acqua dolce perle in gabbie all'habitat oligotrofici fiume. Entrambi i metodi sono implementati nelle varianti per open water e ambienti acquatici hyporheic.

Bioindicazione test di idoneità ambiente Stream per giovani d'acqua dolce perla cozze utilizzando metodi di esposizione In Situ

Knowledge of habitat suitability for freshwater mussels is an important step in the conservation of this endangered species group. We describe a protocol ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della conservazione dell'ecosistema fluviale, come le indicazioni di stadi favorevoli per le giovani cozze che aumentano pure, come previsione di questo che propago. Il vantaggio principale di questa tecnica è che possiamo testare la crescita e la sopravvivenza del novellame in condizioni iporreiche che rappresentano l'ambiente naturale del giovane. A dimostrare le procedure saranno i miei colleghi Simona Nemcikova, Jan Svanyga e Vojtech Barak.Quando si montano le gabbie, inserire sempre prima un coperchio di plastica, poi un foglio del setaccio di plastica e infine il corpo principale sulla parte superiore. Metti la gabbia nel piatto di plastica contenente l'acqua del fiume alla temperatura di conservazione FWPM. Assicurarsi che le camere siano piene a metà.Quindi, caricare gli FWPM in una capsula di Petri. Usando un flacone a spruzzo e un colino, setaccia i giovani per eliminare i detriti. Quindi, pipetta un individuo dal piatto e trasferiscilo in un piatto al microscopio per verificarne l'idoneità.Seleziona solo FWPM di buona forma fisica. Scatta due fotografie di ciascuna posata nel senso della lunghezza a circa

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