Name: Trattamento intracerebroventricolare con Resiniferatoxin e test del dolore nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Impara l'iniezione intracerebroventricolare di resiniferatoxin nei topi per studiare la desensitizzazione selettiva di TRPV1 a livello soprasspinale. Questo metodo facilita la ricerca in neurofarmacologia e modulazione del dolore.

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Tutti i protocolli sperimentali qui utilizzati sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Musashino. I topi maschi ddY (SLC, Shizuoka, Giappone) sono stati tenuti per almeno 7 giorni in un ciclo di 12-h luce/scuro prima di esperimenti con acqua e cibo ad libitum. Per gli esperimenti sono stati utilizzati topi di 5 o 6 settimane.
1. Preparazione dei farmaci
<ol><li>
Rtx NOTA: La soluzione alcolica RTX può causare gravi ustioni cutanee e danni agli occhi. Assicurarsi di utilizzare guanti di gomma e occhiali per la protezione durante la manipolazione. Questa soluzione stock può essere utilizzata per 6 mesi.<ol>
<li>Aggiungere 500 L di etanolo a 1 mg di RTX.</li>
		<li>Aggiungere 500 l di poliossietilene (20) monooleato sorbitano alla soluzione di cui sopra e vortice bene.</li>
		<li>Aggiungere 4 mL di salina fisiologica alla miscela e vortice bene.</li>
		<li>Aliquot 40 L della soluzione in tubi a vite da 1,5 mL e conservarli a -40 gradi centigradi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Acetaminofene
	<ol>
<li>Aggiungere la soluzione propyleneglycol 20% w/v all'acetaminofene ad una concentrazione di 30 mg/mL e sciogliere con un sonicatore. Poiché l'acetaminofene può precipitare a temperatura ambiente diverse ore dopo la dissoluzione, preparare appena prima dell'uso o mantenere la soluzione calda fino all'uso.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Iniezione sottocutanea o intracerebroventricolare di RTX
<ol><li>Scongelare la soluzione stoccata preparata in 1.1. sopra e diluirlo a 20 g/mL in liquido cerebrospinale salino o artificiale (ACSF) costituito da (in mM): 119 NaCl, 2.5 KCl, 1 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 11 glucosio, 1.3 MgSO4, 2.5 CaCl2 equilibrato con 95% O2 e 5% CO2 (pH 7.2).</li>
	<li>Anestesizzare i topi con sale di sodio pentobarbitale (60 mg/kg, intraperitonealmente) e verificare la perdita del riflesso di destra.</li>
	<li>Per il trattamento con s.c., iniettare RTX (20 g/mL) nella parte posteriore del collo ad un volume di 0,1 mL/10 g di peso corporeo. Per il gruppo di controllo, iniettare il veicolo (10% etanolo, 10% di poliossilene (20) monooleato sorbitano e 80% salino) allo stesso modo.</li>
	<li>Per il trattamento con i.c.v., iniettare 5 L di RTX (20 g/mL) nel ventricolo laterale destro. Per il gruppo di controllo, iniettare il veicolo (10% etanolo, 10% di poliossilene (20) monooleato sorbitano e 80% ACSF) nello stesso modo.<ol>
<li>Passare un ago usa e getta da 27 G attraverso un tubo metallico (0,8 mm I.D.) per esporre la punta dell'ago da 3,0 a 3,5 mm (Figura 1A).</li>
		<li>Disinfettare la testa del topo con il 70% di alcol e tenere saldamente con le dita le ossa squamosali del mouse (Figura 1B). NOTA: Prestare attenzione alle posizioni delle sporgenze squamosali, poiché queste sporgenze serviranno come punti di riferimento per l'iniezione.</li>
		<li>Spostare l'ago lateralmente sul cuoio capelluto e trovare la sutura sagittale mentre la punta dell'ago è agganciata alla sutura.</li>
		<li>Spostare la punta di circa 1 mm a destra, quindi spostare la punta in modo rostrale e trovare la sutura coronale come con 2.4.3. (Figura 1B).</li>
		<li>Inserire l'ago lentamente e verticalmente, iniettare la soluzione RTX in circa 10 secondi e tenerlo premuto per circa 10 secondi.</li>
		<li>Ritirare l'ago lentamente e riportare il mouse nella sua gabbia di casa. Il sanguinamento è di solito minimo o assente. Se si verifica un sanguinamento importante, l'uso di un altro topo deve essere considerato.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Assegnare i topi pretrattati come soggetti per il test RTX o il test di pressione della coda (rispettivamente i passaggi 3 e 4).</li>
</ol>3. Test RTX
NOTA: il test viene eseguito tra le 10:00 e le 17:00. La sala prove è mantenuta a 200 lux e 24-26 gradi centigradi.
<ol><li>Una settimana dopo i pretrattamenti con RTX (fase 2.), trasferire i topi nella sala prove almeno 60 minuti prima di iniziare il test.</li>
	<li>Pesare e posizionare ogni mouse singolarmente in una gabbia di plexiglass (29,5 x 17,5 x 13,5 cm3 altezza) almeno 30 minuti prima di iniziare la prova per consentirgli di acclimatarsi all'ambiente. NOTA: l'ordine dei test deve essere controbilanciato tra i gruppi di pretrattamento.</li>
	<li>Somministrare l'acetaminofene (300 mg/kg) al topo intraperitonealmente 20 min prima della prova.</li>
	<li>Tenere il mouse liberamente in un piccolo sacchetto di stoffa e inserire un ago da 30 calibro nel tallone della zampa posteriore destra. Far avanzare l'ago sottocutaneamente vicino alle pastiglie da passeggio e iniettare 20 L di soluzione RTX (0,05 g/mL).</li>
	<li>Misurare il periodo di comportamento di leccare /mordere nella regionelabosa della zampa interessata in ogni blocco di 5 minuti.</li>
</ol>4. Test di pressione della coda
NOTA: un misuratore di pressione di tipo Randall-Selitto viene utilizzato per valutare la soglia per la nocezione meccanica acuta. Il test viene eseguito tra le 10:00 e le 17:00. La sala prove è mantenuta a 200 lux e 24-26 gradi centigradi.
<ol><li>Una settimana dopo i pretrattamenti con RTX (fase 2.), trasferire i topi nella sala prove e pesare e posizionare ogni mouse singolarmente in una gabbia di plexiglass.</li>
	<li>Contrassegnare le macchie a 1,5 e 2,5 cm dalla base della coda.</li>
	<li>Tenere il mouse liberamente in un piccolo sacchetto di stoffa e applicare la pressione sulle macchie con una sonda smussata. NOTA: Viene imposta una pressione di taglio di 250 g per evitare danni ai tessuti.</li>
	<li>Determinare la pressione necessaria per suscitare il comportamento di fuga (sbattimento della coda, torsione e cigobramento) e calcolare la soglia di nocecettivo mediando la pressione determinata nei due punti.</li>
	<li>Ripetere i passaggi 4.3. al 4,4. ogni 15 min.</li>
	<li>Dopo aver ottenuto la linea di base, somministrare l'acetaminofene (300 mg/kg) al topo intraperitonealmente. Dopo l'amministrazione, ripetere i passaggi 4.3. e 4,4 ogni 15 minuti.</li>
</ol>

<ol><li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li>
<li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), New York, N.Y. 306-313 (2000).</li>
<li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li>
<li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li>
<li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+anxiety%2C+conditioned+fear%2C+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li>
<li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity%3A+Therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li>
<li>Nazıroğlu, M., Övey, İS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li>
<li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li>
<li>Barrière, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690(2013).</li>
<li>Jancsó, G., Kiraly, E., Jancsó-Gábor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li>
<li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li>
<li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li>
<li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021(2009).</li>
<li>Jancsó, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracisternal+capsaicin%3A+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li>
<li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43(2008).</li>
<li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li>
<li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452(2017).</li>
<li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li>
<li>Tjølsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formalin+test%3A+an+evaluation+of+the+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li>
<li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li>
<li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li>
<li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir%2C+an+anti-influenza+virus+drug%2C+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+%26+clinical+pharmacology+%26+toxicology%22%5BJournal%5D)">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic & clinical pharmacology & toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li>
<li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hot+flash%3A+TRPV+channels+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse per dichiarare

Il passo più critico in questi esperimenti è il successo dell'iniezione i.c.v. La tecnica di iniezione i.c.v. utilizzata qui è abbastanza semplice, ma richiede una certa pratica. Prima degli esperimenti, si raccomanda la pratica con coloranti (ad es. 0,5% di blu di prova in salina). Se l'iniezione viene eseguita correttamente, un segno di ago deve essere evidente sulla sutura coronale e il colorante iniettato deve essere presente nel ventricolo contralaterale e nel terzo ventricolo. Inoltre, l'inserimento forzato deve es...

Gli animali ricevono vari stimoli fisici e chimici dal loro ambiente attraverso sensori sui nervi periferici. Il recettore transitorio potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1) è uno dei canali termosensibili, non selezionativi che agiscono come sensori di calore1,2e l'attivazione e/o modulazione di TRPV1 è noto per essere un passo chiave per la nociception in entrambi i contesti normali e infiammatori3. Anche se il modello di espressione generale è controverso, l'espressione di TRPV1 è stata suggerita anche nelle regioni sovraspinali, essendo coinvolta in varie attività cerebrali (tra cui nocezione4, termoregolazione5,ansia 6, disordine di iperattività di deficitdi attenzione 7e epilessia8). Inoltre, è stato recentemente suggerito che l'acetaminofene, un antidolorifico ampiamente usato, media l'attivazione del TRPV1 centrale per suscitare la sua azione analgesica9,10.
La somministrazione di agonisti TRPV1 in eccesso, tra cui capsaicina e resiniferatoxin (RTX) agli animali porta alla morte di neuroni TRPV1-positivi e desecizione di lunga durata a TRPV1 agonisti11,12. In combinazione con l'applicazione locale (intrathecal13,14, intracisternale15,16,17e intraganglional18), questo approccio di ablazione chimica ha fornito un modo alternativo per indagare le funzioni fisiologiche di TRPV1. Recentemente abbiamo riferito che l'iniezione intracerebroventricolare (i.c.v.) di RTX inibisce l'effetto analgesico dell'acetaminofene nei topi, suggerendo la desegnibilità TRPV1 sovraspinale-selettiva19. In questo manoscritto, presentiamo il protocollo preciso per l'iniezione i.c.v. e i successivi test del dolore.
L'iniezione diretta di farmaci nei ventricoli del cervello permette di studiare i loro effetti centrali, minimizzando eventuali effetti periferici. La procedura di iniezione i.c.v. presentata qui è una modifica del metodo riportato da Haley e McCormick20. Questo metodo è semplice che comporta l'inserimento di un ago di iniezione nei ventricoli successivi attraverso la sutura coronale e non richiede alcuna attrezzatura speciale o procedure chirurgiche per la cannulation.
L'applicazione locale periferica degli agonisti TRPV1 evoca una sensazione di dolore bruciante e infiammazione neurogenica. I topi trattati sistemicamente con RTX e topi TRPV1-KO sono insensibili a questa stimolazione13. Abbiamo eseguito l'iniezione intraplantar di RTX (test RTX) per confermare la conservazione della periferica TRPV1 in RTX-i.c.v. Topi. Questo metodo è una modifica del test formalina convenzionale21.
È stato riferito che i topi trattati sistemicamente con topi RTX e TRPV1-KO mostrano una soglia normale agli stimoli meccanici11,13,22. Qui presentiamo una procedura per il test di pressione della coda per testare i cambiamenti nell'effetto analgesico dell'acetaminofene.
Tutte queste procedure sono ortodosse e versatili, e possono essere applicate agli studi di altri farmaci.

<table><tbody><tr><td>Resiniferatoxin</td><td>LKT Laboratories</td><td>R1774</td><td>utilizzato per i pretrattamenti s.c./i.c.v. e il test RTX</td></tr><tr><td>Paracetamolo</td><td>IWAKI SEIYAKU</td><td></td><td>donato da IWAKI SEIYAKU</td></tr><tr><td>Pentobarbital sale sodico</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>P0776</td><td>utilizzato per l'anestesia</td></tr><tr><td>Etanolo (99.5)</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>057-00456</td><td>utilizzato per la dissoluzione RTX</td></tr><tr><td>Poliossietilene(20) Monooleato di sorbitano</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>161-21621</td><td>utilizzato per la dissoluzione di RTX</td></tr><tr><td>25 &#956; L microsiringa</td><td>Hamilton</td><td>1702LT</td><td>utilizzata per iniezione endovenosa</td></tr><tr><td>100 &#956; Microsiringa L</td><td>Hamilton</td><td>1710LT</td><td>utilizzata per iniezione intraplantare</td></tr><tr><td>Ago monouso calibro 26</td><td>TERUMO</td><td>NN-2613S</td><td>utilizzato per iniezione endovenosa</td></tr><tr><td>Ago monouso calibro 30</td><td>NIPRO</td><td>01134</td><td>utilizzato per iniezione intraplantare</td></tr><tr><td>Misuratore di pressione</td><td>Ugo</td><td>Basile Analgesy-Meter Tipo 7200</td><td>utilizzato per test di pressione di coda</td></tr></tbody></table>

trattamento intracerebroventricolare con resiniferatoxin e test del dolore nei topi

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Il recettore transitorio potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1), un canale termosensibile, è noto per innescare dolore nei nervi periferici. Oltre alla sua funzione periferica, è stato suggerito anche il suo coinvolgimento nelle funzioni cerebrali. Resiniferatoxin (RTX), un agonista TRPV1 ultrapotente, è stato conosciuto per indurre la dese riesensibilità a lungo termine di TRPV1, e questa desesensibilità è stato un approccio alternativo per studiare la rilevanza fisiologica delle cellule che esprimono TRPV1. Qui descriviamo un protocollo per il trattamento intracerebroventricolare (i.c.v.) con RTX nei topi. Le procedure sono descritte per il test della stimolazione TRPV1 periferica (test RTX) e la stimolazione meccanica (test di pressione della coda) quindi seguire. Anche se le risposte nocicettive dei topi che erano stati somministrati RTX i.c.v. erano paragonabili a quelle dei gruppi di controllo, i topi somministrati da RTX-i.c.v. erano insensibili all'effetto analgesico dell'acetaminofene, suggerendo che il trattamento i.c.v. RTX può indurre la desensitizzazione trPV1 sovraspinal-selettiva. Questo modello murino può essere utilizzato come un comodo sistema sperimentale per studiare il ruolo di TRPV1 nella funzione cerebrale/sovraspinale. Queste tecniche possono anche essere applicate agli studi sulle azioni centrali di altri farmaci.

I topi trattati con i.c.v. non mostrano anomalie apparenti nel loro aspetto, attività spontanee, pesocorporeo 19 e temperatura corporea del nucleo (gruppo trattato con veicolo, 38,4 x 0,3 gradi centigradi, n - 6; Gruppo trattato da RTX, 38,7 x 0,2 gradi centigradi, n - 6).
Figura 2A-B mostra la reattività dei topi trattati con s.c.- o i.c.v. all'iniezione int...

Il potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1) nella regione sovraspinale è stato suggerito di svolgere alcuni ruoli nella funzione cerebrale. Descritto qui è un protocollo per l'iniezione intracerebroventricolare di resiniferatoxin per la desecizione trPV1 sovraspinale nei topi. Vengono inoltre presentate le procedure per alcuni esami del dolore.

Trattamento intracerebroventricolare con Resiniferatoxin e test del dolore nei topi

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

L'obiettivo generale di questo pretrattamento è quello di generare topi e che i canali TRPV1 siano desensibilizzati nelle regioni sovraspinali. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo neurofarmacologico. Il vantaggio principale di questa tecnica è che la desensibilizzazione selettiva sopraspinale TRPV1 può essere indotta in un modo abbastanza semplice.Per iniziare questa procedura, anestetizzare un topo con sodio pentobarbitale intraperitonealmente e verificare la perdita del riflesso di destra. Per il trattamento sottocutaneo, iniettare RTX a 20 microgrammi per millilitro nella parte posteriore del collo con un volume di 0,1 millilitro per 10 grammi di peso corporeo. Per il gruppo di controllo, iniettare il veicolo nello stesso modo.Passa un ago monouso calibro 27 attraverso un tubo metallico per esporre la punta dell'ago da 3 a 3,5 millimetri. Quindi tenere saldamente le ossa squamose del mouse con le dita. Spostare l'ago lateralmente sul cuoio capelluto e trovare la sutura sagittale mentre la punta dell'ago è agganciata sulla sutura.Spostare la punta di circa un millimetro verso destra, quindi spostare la punta rostralmente per trovare la sutura coronal

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Questo video mostra un metodo per stabilire un modello di neuropatia a piccole fibre nei topi utilizzando l'agonista TRPV1 resiniferatossina (RTX). Delinea i passaggi coinvolti nella somministrazione di RTX ai topi e spiega come RTX induce la morte neuronale nei neuroni sensoriali di piccolo diametro, stabilendo così il modello di neuropatia.

Stabilire un modello murino di neuropatia delle piccole fibre utilizzando la resiniferatossina

Fonte: Fukushima, A., et al. Trattamento intracerebroventricolare con resiniferatossina e test del dolore nei topi. J. Vis. Exp. (2020)Questo video mostra la procedura per l'iniezione intracerebroventricolare di resiniferatossina nei topi per desensibilizzare i recettori TRPV1 nel cervello.

Trattamento intracerebroventricolare con resiniferatossina per la desensibilizzazione di TRPV1 nel cervello di topo

Fonte: Martinez, E., et al. Farmacoterapia intracranica e dosaggi del dolore nei roditori. J. Vis. Exp. (2019).Questo video mostra la somministrazione intracranica di un farmaco analgesico in un ratto anestetizzato con una cannula guida pre-impiantata nella corteccia prefrontale. Un ulteriore farmaco analgesico viene co-somministrato per via intraperitoneale. Dopo il recupero, la risposta al dolore termico del ratto viene valutata utilizzando l'apparato di Hargreave, dove viene misurata la...

Effetto sinergico della somministrazione intracranica e intraperitoneale di farmaci analgesici sulla risposta al dolore termico in un ratto

Presentiamo un protocollo per misurare l'assorbimento di [14C]-iodoantipirina (IAP) e valutare l'attivazione dei substrati neurali coinvolti nel dolore centrale post-ictus (CPSP) in un modello di roditore.

Misure autoradiografici di [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine nel cervello di ratto Dopo centrale post-ictus Pain

Questo studio stabilisce un modello sperimentale di neuropatia pura piccola fibra con resiniferatossina (RTX). Una dose unica di RTX (50 µ g/kg) è ottimale per lo sviluppo di un modello di neuropatia di piccole fibre che imita le caratteristiche dei pazienti e potrebbe aiutare a studiare il significato molecolare nocicettivo sottostante il dolore neuropatico.

Che istituisce un modello murino di una neuropatia pura piccola fibra con l'agonista Ultrapotent di Transient Receptor potenziali vanilloidi tipo 1

In questo documento vengono forniti dettagli per i metodi di produzione e controllo di qualità di una proteina di fusione ricombinante IL4-10. Mostriamo anche come testare l'efficacia di questa proteina a risolvere il dolore in un modello murino di dolore infiammatorio.

Sviluppo di proteine ricombinanti per trattare il dolore cronico

Qui presentiamo un protocollo per eseguire esperimenti farmacologici intracranici seguiti da analisi del comportamento di dolore nei roditori. Questo protocollo permette ai ricercatori di fornire bersagli molecolari e cellulari del cervello, per gli agenti farmacologici nel trattamento del dolore.

Dosaggi di dolore nei roditori e farmacoterapia intracranica

Il sintomo più notevole dell'emicrania è il forte dolore alla testa, e si ipotizza che questo sia mediato dai neuroni sensoriali che innervano le meningi. Qui, presentiamo un metodo per applicare localmente sostanze alla dura in modo minimamente invasivo mentre si utilizza l'ipersensibilità facciale come output.

Stimolazione durale e test di von Frey periorbitale nei topi come modello preclinico di cefalea

La legatura parziale del nervo sciatico induce dolore neuropatico cronico di lunga durata, caratterizzato da risposte esagerate agli stimoli termici e meccanici. Questo modello murino di dolore neuropatico è comunemente usato per studiare terapie innovative per la gestione del dolore. Questo articolo descrive in dettaglio la procedura chirurgica per migliorare la standardizzazione e la riproducibilità.

Legatura parziale del nervo sciatico: un modello murino di dolore neuropatico cronico per studiare l'effetto antinocicettivo di nuove terapie

I vermicelli e test Manipolazione Capellini di destrezza zampe anteriori sfruttare l'inclinazione naturale di roditori di manipolare alimenti con zampe anteriori abili e movimenti cifra. Gli animali sono videoregistrate durante la manipolazione corti filamenti di crudo pasta secca. Lento movimento permette la riproduzione di video per la quantificazione di regolazioni zampe anteriori.

I vermicelli e test Manipolazione Capellini: Semplici misure quantitative della funzione zampe anteriori abile nel ratto e nel topo

Impara l'iniezione intracerebroventricolare di resiniferatoxin nei topi per studiare la desensitizzazione selettiva di TRPV1 a livello soprasspinale. Questo metodo facilita la ricerca in neurofarmacologia e modulazione del dolore.

Trattamento intracerebroventricolare con Resiniferatoxin e test del dolore nei topi

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