Analisi quantitativa di Micro-CT di Aortopathy in un modello murino di indotta da β-aminopropionitrile aneurisma e dissezione

Questo metodo potrebbe aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia vascolare, come determinare come le dimensioni dei vasi siano influenzate in diversi modelli animali di malattia vascolare. Il vantaggio principale di questa tecnica è che la micro-CT consente di ottenere immagini dettagliate di vasi grandi e piccoli, sia in vivo che ex vivo, che possono essere quantificate con precisione. 24 ore prima dell'analisi TC, eseguire le procedure chirurgiche per preparare il campione per una profusione intracardiaca post mortem.

Per l'anestesia, usa il 3% di isoflurano e assicurati di avere in uso uno spazzino di carbone. Quindi, mantenere l'anestesia con isoflurano dal 2 al 2,5% da una maschera facciale, anch'essa attaccata a uno spazzino con un litro di ossigeno al minuto. Prima di iniziare l'intervento, eseguire un pizzicamento delle dita dei piedi per verificare l'assenza di un riflesso del pedale.

Quindi, impostare un campo operativo con strumenti e così via. Quindi, posiziona l'animale in decubito dorsale e fissa gli arti. Ora, usando le forbici, fai un'incisione sulla linea mediana attraverso la pelle e i tessuti molli sopra lo sterno tra la sinfisi pubica e la tacca sternale.

Quindi, usa le forbici per creare un foro nel diaframma durante il processo xifoideo per entrare nella cavità toracica. Quindi, continua a usare le forbici per sezionare bilateralmente il diaframma della parete toracica ventrale. Tagliare le cartilagini costali per separare le costole dallo sterno al bordo sternale destro.

Ora, applica un morsetto emostatico fine sulla punta dello sterno vicino al processo xifoideo e muovi l'emostatico cranialmente in modo che sia posizionato sopra la testa del topo. Quindi, sezionare bruscamente eventuali attacchi tra il cuore e la parete toracica. Limitare il numero di vasi danneggiati durante la preparazione dell'animale, in quanto ciò causerà la fuoriuscita dell'agente di contrasto dai vasi recisi, il che modificherà il volume richiesto per un riempimento completo e introdurrà artefatti nell'imaging finale.

Ora, collega un ago per catetere IV calibro 27 a una siringa precaricata con 10 millilitri di PBS eparinizzato e riempi tutto il tubo con il tampone, rimuovendo tutte le bolle d'aria. La rimozione di tutte le bolle dalle linee è essenziale. Quindi, incidere immediatamente il ventricolo destro, o la vena cava inferiore, per drenare la soluzione di eparina e il sangue.

Per procedere, utilizzare la cannula per perforare il ventricolo sinistro, stabilizzato dalla pinza. Condurre la profusione a una velocità costante di due millilitri al minuto utilizzando una pompa a siringa. Dovrebbe esserci uno sbiancamento visibile degli organi.

In pochi minuti, la circolazione della vena dovrebbe essere priva di sangue. Quindi, arrestare la pompa e scollegare il tubo del catetere dalla siringa, ma non spostare l'ago del catetere. A questo punto, separare la soluzione di mezzo di contrasto in aliquote da cinque millilitri, aggiungere l'agente indurente e mescolare bene.

Quindi, caricare cinque millilitri di miscela in una siringa da 10 millilitri e cospargere l'animale con l'agente di contrasto alla velocità costante di due millilitri al minuto. Mantieni l'infuso oltre il punto in cui vedi l'agente di colata uscire dall'animale. Il mezzo di contrasto polimerizza in 20 minuti.

Una volta induriti, prelevare gli organi di interesse e fissarli in formalina tamponata neutra al 10%. Successivamente, se i campioni non vengono utilizzati per la scansione micro-CT, fissare l'intera carcassa. Altrimenti, posiziona la carcassa su un vassoio di metallo e mettila in frigorifero a quattro gradi Celsius per indurire durante la notte.

Il giorno seguente, acquisire le immagini della tomografia computerizzata a raggi X di ciascun topo utilizzando uno scanner micro-CT. Impostare i parametri dello scanner come segue; Una tensione di picco del tubo a raggi X di 55 kilovolt, una corrente di 150 microampere, un fattore di ingrandimento del sistema di 2,19 e un fattore di pixel binning della telecamera CCD di due. Questo fattore di binning produrrà una dimensione effettiva dei pixel di 29 micron.

Successivamente, analizza le immagini per identificare gli aneurismi utilizzando un approccio standardizzato. Misurare il diametro dell'asse minore nel punto più largo di tre posizioni; dell'arco aortico, dell'aorta toracica discendente e dell'aorta addominale. Idealmente, due osservatori, uno dei quali è cieco, dovrebbero analizzare ogni immagine.

Utilizzando le misurazioni, identificare gli aneurismi come dilatazioni localizzate o diffuse dei segmenti aortici a diametri superiori al 50% del diametro di riferimento. 20 topi adulti maschi di sfondo misto e di età compresa tra 20 e 30 settimane sono stati analizzati con o senza trattamento BAPN. Ciascuno è stato cosparso con una gomma siliconica radiopaca a base di piombo.

Il diametro medio dell'aorta ascendente nei topi trattati con BAPN era significativamente più grande di quello dei controlli non trattati di pari età. I punti dati dei topi con aneurismi sono in rosso. Al contrario, l'inibizione della lisil ossidasi con BAPN non ha avuto un effetto significativo sulla media toracica discendente, né questo trattamento ha influenzato i diametri dell'aorta addominale.

Un aneurisma è stato definito come 1,5 volte il diametro medio del gruppo non trattato. Il trattamento porta ad un aumento significativo degli aneurismi secondo questa definizione. Gli aneurismi nei topi trattati con BAPN sono stati identificati esclusivamente nell'aorta, con la maggior parte identificata nell'aorta toracica.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come abbondantere il sistema vascolare per l'imaging radiografico. Una volta padroneggiata, la profusione e l'analisi delle immagini possono essere eseguite in due ore se eseguite correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che i protocolli di imaging TC possono essere regolati con l'assistenza del personale radiologico per ottimizzare l'acquisizione delle immagini per gli scopi specifici dei singoli esperimenti.