A11-positive &#946;-amyloid Oligomer Preparation and Assessment Using Dot Blotting Analysis

Huang Chunhui; Xu Dilin; Zhang Ke; Shentu Jieyi; Yan Sicheng; Wu Dapeng; Wang Qinwen; Cui Wei

doi:10.3791/57592

Oligomero di β-amiloide a11-positiva preparazione e valutazione utilizzando Dot Blotting analisi

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Biochemistry

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A11-positive β-amyloid Oligomer Preparation and Assessment Using Dot Blotting Analysis

Oligomero di β-amiloide a11-positiva preparazione e valutazione utilizzando Dot Blotting analisi

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06:17 min

May 22, 2018

DOI: 10.3791/57592-v

Huang Chunhui^1,2, Xu Dilin¹, Zhang Ke¹, Shentu Jieyi², Yan Sicheng¹, Wu Dapeng³, Wang Qinwen¹, Cui Wei^1,2

¹Ningbo Key Laboratory of Behavioral Neuroscience, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Pathophysiology, School of Medicine,Ningbo University, ²Li Dak Sum Yip Yio Chin Kenneth Li Marine Biopharmaceutical Research Center,Ningbo University, ³School of Materials Science and Chemical Engineering,Ningbo University

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Questo protocollo descrive come preparare oligomeri Aβ da un peptide sintetico in vitro e per valutare la quantità relativa di oligomero Aβ da un punto di analisi macchiante.

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo neurofarmacologico. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è semplice, affidabile e riproducibile formare oligomero di amiloide-beta. Mostriamo che la dimostrazione di questo metodo è fondamentale poiché i passaggi per la preparazione dell'oligomero beta sono difficili da imparare.

Innanzitutto, regolare la concentrazione della soluzione di monomero A-beta a 0,25 milligrammi per millilitro aggiungendo 900 microlitri di acqua distillata doppia al tubo. Quindi continuare ad evaporare la soluzione monomerica con azoto gassoso ad alta purezza fino a quando il volume raggiunge circa 850 microlitri con una concentrazione di circa 0,29 milligrammi per millilitro. La presenza di HR5P influisce sulla formazione dell'oligomero A-beta.

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