Name: Polisoma Profiling nel testicolo di topo, cellule umane e di Leishmania (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 32 s
Description: Scopri la tecnica di polisoma profiling per analizzare l'engagement degli mRNA con i polisomi durante la traduzione proteica usando Leishmania major, cellule umane e tessuto di topo.

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Gli autori ringraziano Ching Lee per aiuto con la registrazione audio. La ricerca è stata sostenuta dai fondi di Start-up da Texas Tech University Health Sciences Center e per il centro di eccellenza per neuroscienze traslazionali e Therapeutics (CTNT) concede PN-CTNT 2017-05 AKHRJDHW a A.L.K.; in parte da grant di NIH R01AI099380 K.Z. James C. Huffman e Kristen R. Baca erano studiosi CISER (centro per l'integrazione di staminali formazione & ricerca) e sono stati sostenuti dal programma.

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Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Frazionamento di polisoma di gradiente di saccarosio combinato con RNA e proteina analisi delle frazioni è un metodo potente per analizzare stato traduzionale di singoli mRNA o l'intero translatome e anche ruoli di fattori proteici regolazione traduzionale macchinari durante il normale stato fisiologico o malattia. Profilatura polisomici è una tecnica particolarmente adatta per studiare la regolazione traduzionale in organismi come trypanosomatids tra cui Leishmania dove controllo trascrizionale è praticamente a...

Regolazione dell'espressione genica in cellule è controllata da meccanismi trascrizionali, post-trascrizionale e post-traduzionali. Progressi nel sequenziamento di RNA profondo consentono lo studio dei livelli di mRNA di stazionario su scala genomica a un livello senza precedenti. Tuttavia, recenti scoperte hanno rivelato che il livello di mRNA allo steady-state non correla sempre con proteina produzione1,2. Il destino di una trascrizione individuale è molto complesso e dipende da molti fattori come stress, stimoli interni/esterni, ecc. Regolazione dell'espressione genica durante la sintesi delle proteine fornisce un ulteriore livello di controllo necessario per una risposta rapida in condizioni di cambiamento di espressione. Profili, la separazione e la visualizzazione di tradurre attivamente ribosomi, polisoma (o "polyribosome") è un metodo efficace per studiare la regolazione della sintesi proteica. Anche se le prime applicazioni sperimentali è apparso in the 1960s3, polisoma profilatura è attualmente una delle tecniche più importanti nella proteina traduzione studi4. Singolo mRNA può essere tradotto da più di un ribosoma che portano alla formazione di un polisoma. Le trascrizioni possono essere bloccate sui ribosomi con cicloesimmide5 e mRNA contenente diversi numeri di polisomi possa essere separati nel processo di frazionamento polisoma da saccarosio ultracentrifugazione di pendenza6,7 , 8 , 9. analisi di RNA delle frazioni polisomici quindi permette la misura dei cambiamenti negli Stati traduzionali di singoli mRNA su scala genomica e durante diverse condizioni fisiologiche4,7, 10. il metodo è stato utilizzato anche per rivelare i ruoli di 5' UTR e 3' UTR sequenze nel controllo di mRNA traducibilità11, esaminare il ruolo dei miRNA nella repressione traduzionale12, difetti nella biogenesi dei ribosomi13 e comprendere il ruolo delle proteine associate ribosoma con malattie umane14,15. Durante l'ultimo decennio, un ruolo sempre più importante per la regolazione dell'espressione genica durante la traduzione è emerso che illustra la sua importanza nelle malattie umane. La prova per controllo traduzionale in cancro, metabolico e malattie neurodegenerative è schiacciante15,16,17,18. Ad esempio, disregolazione del controllo traduzionale eIF4E-dipendente contribuisce all'autismo relativi deficit15 e FMRP è coinvolto in stallo dei ribosomi su mRNA legati all'autismo14. Così, profili polisomici è uno strumento molto importante per studiare i difetti nella regolazione traduzionale in malattie umane multiple.
Analisi della proteina di polisomici frazioni in differenti condizioni fisiologiche analizza la funzione dei fattori connessi con i ribosomi durante la traduzione. La tecnica di profilatura polisoma è stata utilizzata in molte specie tra cui il lievito, le cellule di mammiferi, piante e protozoi10,19,20,21. Protozoi parassiti come Trypanosoma e Leishmania esibiscono limitato controllo trascrizionale dell'espressione genica. Loro genomi sono organizzati in cluster di geni coregolati polycistronic che la mancanza di trascrizione promotore-regolato22. Invece, espressione genica inerente allo sviluppo è controllato principalmente al livello della proteina traduzione e stabilità del mRNA in Trypanosomatidae specie23,24. Di conseguenza, la comprensione del controllo traduzionale in assenza di regolazione trascrizionale è particolarmente importante per questi organismi. Profilatura polisomici è un potente strumento per studiare la regolazione post-trascrizionale dell'espressione genica in Leishmania25,26,27,28.
I recenti progressi nella rilevazione dei livelli di singoli mRNA dal real tempo quantitative PCR (RT-qPCR) e completo trascrittoma di sequenziamento di nuova generazione, nonché tecnologie di proteomica, offre una risoluzione e vantaggi di profilatura polisomici ad un nuovo livello. L'uso di questi metodi può essere ulteriormente esteso dall'analisi delle singole frazioni polisomici di sequenziamento di RNA profondo combinato con analisi proteomica per monitorare lo stato traduzionale delle cellule su una scala di genoma. Ciò permette l'individuazione di nuovi giocatori molecolari che regolano la traduzione sotto differenti condizioni fisiologiche e patologiche. Qui, presentiamo un polisoma universale protocollo utilizzato su tre diversi modelli di analisi: il parassita maggiore di Leishmania, cellule umane coltivate e tessuti animali. Vi presentiamo consigli sulla preparazione dei lisati cellulari da organismi differenti, ottimizzazione delle condizioni di gradiente, scelta di inibitori della RNAsi e applicazione di RT-qPCR, Western blot ed elettroforesi del RNA per analizzare le frazioni polisoma in questo studio.

<table><tbody><tr><td>Instruments:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gradient master</td><td>Biocomp Instruments Inc.</td><td>108</td><td></td></tr><tr><td>Frazionatore a gradiente a pistone</td><td>Biocomp Instruments Inc.</td><td>152</td><td></td></tr><tr><td>Raccoglitore di frazioni</td><td>Gilson, Inc.</td><td>FC203B</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop One</td><td>Thermo Scientific</td><td>NanoDrop One</td><td></td></tr><tr><td>Nikon microscopio invertito</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE Ts2-FL/Ts2</td><td></td></tr><tr><td>2720 Termociclatore</td><td>Applied Biosystems by Life Technologies</td><td>4359659</td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubatore</td><td>Panasonic Healthcare Co.</td><td>MCO-170A1CUV</td><td></td></tr><tr><td>HERATHERM incubatore</td><td>Thermo Scientific</td><td>51028063</td><td></td></tr><tr><td>Cabina di Sicurezza Biologica, classe II, tipo A2</td><td>NuAire Inc.</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>Congelatore Revco Revco</td><td>Technologies</td><td>ULT1386-5-D35</td><td></td></tr><tr><td>Beckman L8-M Ultracentifuge</td><td>Beckman Coltro</td><td>L8M-70</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifuga Rotore SW41</td><td>Beckman Coulter</td><td>331362</td><td></td></tr><tr><td>Rotore a secchiello oscillante</td><td>Eppendorf</td><td>A-4-62</td><td></td></tr><tr><td>Rotore ad angolo fisso</td><td>Eppendorf</td><td>F-45-30-11</td><td></td></tr><tr><td>Quant Studio 12K Flex Macchina per PCR in tempo reale 285880228</td><td>Applied Biosystems by life technologies</td><td>4470661</td><td></td></tr><tr><td>TC20 Contatore cellulare automatizzato</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0102</td><td></td></tr><tr><td>Ematocitometro</td><td>Hausser Scientific</td><td>02-671-51B</td><td></td></tr><tr><td>Software&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software triax&nbsp;</td><td>Strumenti Biocomp Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Materiali:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetrini di conteggio, doppia camera per contatore di cellule</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td></td></tr><tr><td>Provetta per microcentrifuga da 1,5 mL</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>Provette per centrifuga polyclear open-top, (14 mm x 89 mm)</td><td>Siringa Seton Scientific</td><td>7030</td><td></td></tr><tr><td>, 5 mL</td><td>BD</td><td></td><td></td>Siringa 309646</tr><tr><td>BD 3 mL23 Ago da 1 pollice</td><td>BD</td><td>10020439</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di superficie Nunclon Delta, 14 cm</td><td>Thermo Scientific</td><td>168381</td><td></td></tr><tr><td>Nunclon Delta Piastra di superficie, 9 cm</td><td>Thermo Scientific</td><td>172931</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene unità filtro a flusso rapido da 90 mm, 500 mL, 0,2 aPES</td><td>Thermo Scientific</td><td>569-0020</td><td></td></tr><tr><td>BioLite 75 cm3</ palloni per ></td><td>Thermo Scientific</td><td>130193</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 50 mL provette coniche da centrifuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>Chemicals:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizol LS</td><td>Ambion di Life Technologies</td><td>10296028</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma</td><td>T1378-5KG</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio medio-alto dell'aquila modificata di Dulbecco (DMEM)</td><td>Sigma</td><td>D6429-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F0926-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina (P/S)</td><td>Sigma</td><td>P0781-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamina 2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668-019</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco ( DPBS)</td><td>Sigma</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato (MgCl2x6H2O)</td><td>Acros Organics</td><td>AC413415000</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio (KCl)</td><td>Sigma</td><td>P9541-500G</td><td></td></tr><tr><td>Nonidet P 40 (NP-40)</td><td>Fluka (Sigma-Aldrich)</td><td>74385</td><td></td></tr><tr><td>Inibitore ribonucleasi della RNASINA ricombinante</td><td>Promega</td><td>N2511</td><td></td></tr><tr><td>Eparina sale di sodio</td><td>Sigma</td><td>H3993-1MU</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete Mini inibitori della proteasi senza EDTA Roche</td><td>Diagnostics</td><td>11836170001</td><td></td></tr><tr><td>Glicogeno</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0551</td><td></td></tr><tr><td>Acqua</td><td>Sigma</td><td>W4502-1L</td><td></td></tr><tr><td>Cicloesimide</td><td>Sigma</td><td>C7698-1G</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformio</td><td>Fisher Scientific</td><td>194002</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitolo (DTT)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP172-5</td><td></td></tr><tr><td>Bromuro di etidio</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP-1302-10</td><td></td></tr><tr><td>Acido etilendiamminotetraacetico disodico disodico (EDTA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S316-212</td><td></td></tr><tr><td>Optimem</td><td>Life Technologies</td><td>22600050</td><td></td></tr><tr><td>Puromicina dicloridrato</td><td>Sigma</td><td>P8833-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S5-3KG</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di tripsina-EDTA</td><td>Sigma</td><td>T4049-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Hgh Capacità cDNA Kit di trascrittasi inversa</td><td>Biosistemi applicati da tecnologie di vita</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td><td>Biosistemi applicati da tecnologie di vita</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144SI-212</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP26324</td><td></td></tr><tr><td>Idrossido di potassio (KOH)</td><td>Sigma</td><td>221473-500G</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-RPL11</td><td>Abcam</td><td>ab79352</td><td></td></tr><tr><td>Proteina ribosomiale S6 (C-8) anticorpo</td><td>Santa Cruz Biotechnology Inc.</td><td>sc-74459</td><td></td></tr><tr><td>1xM199</td><td>Sigma</td><td>M0393-10X1L</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di litio</td><td>Sigma</td><td>L-9650</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil solfossido (DMSO)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D128-500</td><td></td></tr><tr><td>Gel Loading Buffer II</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM8546G</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Agarosio</td><td>Thermo Scientific</td><td>16500-100</td><td></td></tr><tr><td>Acido tricloroacetico (TCA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A322-100</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Pico PLUS substrato chemiluminescente</td><td>Thermo Scientific</td><td>34580</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeide</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP531-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodio Dodecil solfato (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L5750-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Fenilmetilsulfonilfluoruro (PMSF)</td><td>Sigma</td><td>P7626-5G</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Adenosina 5&prime;-trifosfato sale disodico idrato (ATP)</td><td>Sigma</td><td>A1852-1VL</td><td></td></tr><tr><td>Citosina 5'-trifosfato sale disodico idrato (CTP)</td><td>Sigma</td><td>C1506-250MG</td><td></td></tr><tr><td>Uridina 5'-trifosfato sale trisodico idrato (UTP)</td><td>Sigma</td><td>U6625-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Guanosina 5'-trifosfato sale sodico idrato (GTP)</td><td>Sigma</td><td>G8877-250MG</td><td></td></tr><tr><td>SP6 RNA polimerasi</td><td>NEB</td><td>M0207S</td><td></td></tr><tr><td>pirofosatasi</td><td>Sigma</td><td>I1643-500UN</td><td></td></tr><tr><td>spermidina</td><td>Sigma</td><td>S0266-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

polisoma profiling nel testicolo di topo, cellule umane e di leishmania

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Espressione della proteina corretta al momento giusto e nelle giuste quantità è alla base della funzione normale delle cellule e la sopravvivenza in un ambiente veloce-cambiante. Per lungo tempo, gli studi di espressione genica sono stati dominati dalla ricerca al livello trascrizionale. Tuttavia, i livelli allo stato stazionario di mRNA non correlano bene con la produzione di proteine, e la traducibilità dei mRNAs varia notevolmente a seconda delle condizioni. In alcuni organismi, come il parassita Leishmania, l'espressione della proteina è regolata principalmente a livello traduzionale. Studi recenti hanno dimostrato che dysregulation di traduzione della proteina è associata con cancro, metabolico, neurodegenerative e altre malattie umane. Polisoma profiling è un metodo potente per studiare il regolamento della proteina di traduzione. Permette di misurare lo stato traduzionale di singoli mRNA o esaminare la traduzione su scala genomica. La base di questa tecnica è la separazione di polisomi, ribosomi, loro subunità e mRNAs gratuito durante la centrifugazione di un pattern citoplasmatico lisato attraverso un gradiente di saccarosio. Qui, presentiamo un protocollo profilatura polisoma universale utilizzato su tre diversi modelli - parassita maggiore di Leishmania, cellule umane coltivate e tessuti animali. Leishmania cellule crescono liberamente in sospensione e cellule umane coltivate crescono nello strato monomolecolare aderente, mentre testicolo di topo rappresenta un campione di tessuto animale. Così, la tecnica si adatta a tutte queste fonti. Il protocollo per l'analisi delle frazioni polisomici include rilevamento dei singoli livelli di mRNA di RT-qPCR, proteine mediante Western blot e analisi di RNA ribosomiale (rRNA) tramite l'elettroforesi. Il metodo può essere ulteriormente esteso da esame dell'associazione di mRNA con il ribosoma a livello del trascrittoma di profonda RNA-seq e analisi delle proteine associate ribosoma di spettroscopia di massa delle frazioni. Il metodo può essere facilmente regolato ad altri modelli biologici.

In questo studio, descriviamo l'applicazione della tecnica di profilatura polisomici a tre diverse fonti: parassita maggiore di Leishmania, cellule umane coltivate e testicolo di topo. Leishmania cellule crescono liberamente in mezzi liquidi in sospensione, cellule umane coltivate crescono nello strato monomolecolare del aderente su piastre e testicolo del mouse rappresenta un campione di tessuto. Il metodo può essere facilmente regolato a altri tipi di cellule liberamen...

L'obiettivo generale di tecnica di profilatura polisoma è analisi di attività traduzionale di singoli mRNA o del trascrittoma mRNA durante la sintesi proteica. Il metodo è importante per gli studi di regolamento di sintesi della proteina, l'attivazione di traduzione e repressione in salute e più malattie umane.

Polisoma Profiling nel testicolo di topo, cellule umane e di Leishmania

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

L'obiettivo generale di questa tecnica è studiare l'impegno degli mRNA individuali con i polisomi durante la traduzione. La profilazione dei polisomi è una potente tecnologia per studiare l'interazione dell'mRNA con ribosomi e polisomi. La tecnica è importante per gli studi sulla regolazione della sintesi proteica, l'attivazione della traduzione e la repressione.Qui il nostro team presenta le tecniche per il frazionamento polisomiale e l'analisi delle frazioni sull'esempio di tre organismi. Parassita Leishmania major, cellule umane coltivate e un tessuto animale. Questo approccio consiste in quattro fasi principali: preparazione del lisato, preparazione del gradiente di saccarosio e ultracentrifugazione, frazionamento dei polisomi e raccolta dei campioni.Analisi delle frazioni. Le cellule provenienti da diverse fonti vengono raccolte, lavate e lisate in tampone di lisi mediante passaggio attraverso un ago o un omogeneizzatore Dounce. La centrifugazione viene utilizzata per rimuovere i detriti cellulari che chiariscono il lisato.Un gradiente continuo di saccarosio è formato dalla miscelazione di soluzioni di saccarosio al 10% e al 50% in un creatore di gradienti. Il lisato viene car

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Biochimica

Un saggio parassita-salvataggio e di trasformazione con THP1 cellule...

Un test Parasite salvataggio e di trasformazione per screening Antileishmanial contro intracellulare<em&gt; Leishmania donovani</em&gt; Amastigoti in THP1 umana linea cellulare Leucemia acuta Monocytic

Qui, descriviamo un metodo per analizzare le modifiche l'apertura di traduzione dell'mRNA di cellule eucariotiche in risposta alle condizioni di stress. Questo metodo si basa sulla separazione velocità su gradienti di saccarosio di traduzione ribosomi da ribosomi non traslanti.

Analisi della traduzione innesco durante condizioni di stress da polisoma Profiling

La capacità delle cellule di adattarsi allo stress è fondamentale per la loro sopravvivenza. La regolazione della traduzione dell'mRNA è una di queste strategie di adattamento, che prevede una rapida regolazione del proteoma. Qui, forniamo un protocollo standardizzato di profilazione dei polisomi per identificare mRNA specifici che vengono tradotti selettivamente in condizioni di stress.

Valutazione della Selective mRNA Traduzione in cellule di mammifero per polisoma Profiling

Questo protocollo descrive un metodo semplice per estrarre e frazionare i trascritti dai tessuti vegetali sulla base del numero di ribosomi legati. Permette una stima globale dell'attività traduttiva e la determinazione dello stato traduzionale di specifici mRNA.

Un metodo facile per piante polysome Profiling

Qui presentiamo un protocollo per eseguire polisoma profilatura sul cuore isolato e perfuso del mouse. Descriviamo i metodi per aspersione di cuore, polisoma profiling e l'analisi delle frazioni polisoma rispetto al mRNA, Mirna e il proteoma polisoma.

Dinamica proteomica e miRNA analisi di polisomi da Mouse cuore dopo Langendorff aspersione isolata

Qui, presentiamo un protocollo eCLIP per determinare i principali obiettivi di RNA dei candidati RBP in testis.

Metodo di immunoprecipitazione crosslinking migliorato (eCLIP) per un'identificazione efficiente dell'RNA legato alle proteine nei testis del topo

Qui abbiamo presentato un metodo di sequenziamento dell'mRNA a singola cellula multiplexed per profilare l'espressione genica nei tessuti embrionali del topo. Il metodo di sequenziamento dell'mRNA a singola cellula (scRNA-Seq) basato su droplet in combinazione con strategie di multiplexing può profilare singole cellule da più campioni contemporaneamente, riducendo significativamente i costi del reagente e riducendo al minimo gli effetti batch sperimentali.

Analisi del sequenziamento dell'mRNA a cella singola multiplexed delle cellule embrionali del topo

Lo sviluppo del cervello dei mammiferi richiede un adeguato controllo dell'espressione genica a livello di traduzione. Qui descriviamo un sistema di profilazione polisome con una piattaforma di gradiente di saccarosio e frazionamento facile da assemblare per valutare lo stato traslazionale degli mRNA nel cervello in via di sviluppo.

Analisi della traduzione nel cervello del mouse in via di sviluppo utilizzando la profilazione polisome

Questo protocollo descrive come generare un profilo polisomico senza utilizzare generatori di gradienti automatizzati o sistemi di frazionamento del gradiente.

Profilazione dei polisomi senza generatori di gradienti o sistemi di frazionamento

Qui, descriviamo la metodologia utilizzata per generare ceppi di L. panamensis e L . donovani che esprimono il gene per eGFP come transgene integrato stabile utilizzando il sistema pLEXSY. I parassiti trasfettati sono stati clonati limitando la diluizione e i cloni con la più alta intensità di fluorescenza in entrambe le specie sono stati selezionati per un ulteriore utilizzo nei saggi di screening farmacologico.

Sviluppo di ceppi di specie di Leishmania con espressione costitutiva di eGFP

Qui presentiamo una valutazione longitudinale di criceti dorati infettati per via intraperitoneale (IP) o per via intragengivale (IG) con L. infantum-Luc mediante imaging bioluminescente e mediante PCR. I criceti sono stati valutati 1 giorno dopo l'infezione (1 dpi), 1 settimana dopo l'infezione (8 dpi) e 3 settimane dopo l'infezione (22 dpi) e soppressi al 50° dpi e 8 mesi dopo l'infezione.

In vivo Imaging di criceti infetti da Leishmania infantum mediante inoculazione gengivale di amastigoti axenici che esprimono luciferasi

Scopri la tecnica di polisoma profiling per analizzare l'engagement degli mRNA con i polisomi durante la traduzione proteica usando Leishmania major, cellule umane e tessuto di topo.

Polisoma Profiling nel testicolo di topo, cellule umane e di Leishmania

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