Name: Metodo di coltura organotypic per studiare lo sviluppo dei tessuti embrionali di pollo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Scopri il metodo di coltura organotypic per studiare lo sviluppo degli occhi embrionali di pollo in vitro. Questa tecnica consente di analizzare le interazioni tra tessuti retinici senza effetti letali sui composti.

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Gli autori vorrei ringraziare Gregory Haller (Mount Saint Vincent University) per il suo lavoro preliminare nello sviluppo del protocollo. Gli autori inoltre vorrei ringraziare Nicholas Jones (Mount Saint Vincent University) per la sua competenza tecnica e assistenza con le riprese e la produzione della parte audio/visivo del manoscritto. Daniel Andrews è stato sostenuto da finanziamenti da MSVU e scienze naturali e ingegneria ricerca Consiglio del Canada (NSERC) tramite un Undergraduate Student Research Award. Tamara A. Franz-Odendaal è sostenuta da una sovvenzione di scoperta di NSERC.

Nota: Per le fasi di embrione, utilizzano l'Hamburger e Hamilton12 (HH) tabella di gestione temporanea.
1. embrione incubazione
<ol><li>Incubare uova di gallina fertilizzate in un'incubatrice sterile, termostatato a 37 ° C ± 1 ° C e ~ 40% di umidità.</li>
	<li>Girare le uova 1 x al giorno e consentire loro di incubare a HH34 (post-fecondazione 8 giorni).</li>
</ol>2. preparazione e sterilizzazione dei materiali
<ol><li>Per 12 embrioni, autoclave 2 L di acqua distillata, 1 L di soluzione salina allo 0,85% pulcino, 12 pipette in vetro, 1 scatola di carta velina, 24 2,5 x 2,5 cm quadrati di carta da filtro semi-porosa e piazze 24 2,5 x 2,5 cm di filo d'acciaio della maglia con i bordi curvi verso il basso. Per sterilizzare i materiali, autoclave a 121 ° C per almeno 15 min. Nota: La sterilizzazione in autoclave dei materiali può essere fatto in anticipo.</li>
	<li>Sterilizzare l'incubatrice con etanolo al 70% pulendo i fianchi, mensole e porta. Posto 2 contenitori di plastica contenenti in autoclave acqua distillata acqua all'interno dell'incubatrice per mantenere l'umidità. Preriscaldare l'incubatore di coltura a 37 ° C ± 1 ° C e circa il 40% di umidità. Garantire che l'incubatrice è completamente buia; Se la porta è trasparente, coprire con carta stagnola.</li>
	<li>Preriscaldare 100 mL di terreno nutritivo e 1 mL di penicillina inserendoli nell'incubatrice cultura.</li>
	<li>Coprire l'area di lavoro con un tovagliolo di carta e sterilizzare la panchina spruzzando con etanolo al 70%. Sterilizzare 2 paia di pinze, forbici di dissezione, una lama di rasoio e un cucchiaio di plastica con etanolo al 70% in un modo simile.</li>
	<li>Capsule di Petri sterili 100 mm posto 12 e 24 capsule di Petri sterile 35 mm sul banco per l'uso. Garantire che i piatti rimangono in un sacchetto sterile fino all'utilizzo.</li>
</ol>3. embrione preparazione
Nota: Da questo punto in poi, indossare una maschera protettiva polvere per evitare di contaminare le culture. Un'infezione batterica o fungina rovinerà la cultura e c'è il rischio che si sta diffondendo rapidamente a tutte le culture nell'incubatrice.
<ol><li>Crack aprire l'uovo e trasferimento dell'embrione in una capsula Petri 100 mm contenente soluzione fisiologica allo 0,85% pulcino. Fase dell'embrione secondo le caratteristiche anatomiche descritte in Hamburger e Hamilton stadiazione linee guida12 e confermare l'embrione è a HH34.</li>
	<li>Tagliare il collo e poi bisecare la testa dell'embrione al midline usando una lama di rasoio sterilizzata. Utilizzando pinze sterili, rimuovere il cervello. Lasciare intatto il becco.</li>
</ol>4. cultura Setup
<ol><li>Posto 2 dei piatti Petri 35 mm all'interno di una capsula di Petri di 100 mm.</li>
	<li>Collocare una rete metallica in acciaio all'interno di ogni scatola di Petri 35 mm.</li>
	<li>Usando il forcipe, trasferire 1 delle teste diviso in due per un pezzo di carta da filtro semi-porosa 2,5 x 2,5 cm con l'occhio rivolto verso l'alto. Garantire il tessuto è sicuro e non scivolare inclinando leggermente.</li>
	<li>Usando il forcipe, collocare attentamente tessuto oculare e il filtro di carta sopra la maglia di filo di acciaio in 1 il 35mm piastre Petri, creando un palcoscenico rialzato con il tessuto dell'occhio sulla parte superiore.</li>
	<li>Ripetere i passaggi da 4.3 e 4.4 con l'altra metà testa.</li>
	<li>Utilizzando una pipetta di vetro sterile, aggiungere cautamente mezzo nutritivo direttamente in ogni capsula di Petri 35 mm fino a quando non raggiunge il livello della carta da filtro. Non immergere la testa mezza in mezzo nutritivo.</li>
	<li>Aggiungere 50 µ l di 10.000 U/mL penicillina-streptomicina per il terreno di coltura in ogni capsula di Petri.</li>
	<li>Piegare un pezzo di carta velina in una piccola piazza e posizionarlo all'interno il 100mm di Petri. Inumidire con acqua distillata in autoclave.</li>
	<li>Inserire la piastra di coltura sterile, scuro incubatore a 37 ° C ± 1 ° C e circa il 40% di umidità per fino a 4 giorni.</li>
	<li>Ripetere i passaggi 3 e 4 per ciascun embrione. Nota: Il numero di embrioni necessari dipenderà l'esperimento specifico; qui, descriviamo il protocollo per 12 embrioni.</li>
</ol>5. cultura manutenzione
<ol><li>Una volta al giorno, rabboccare i contenitori di plastica nell'incubatrice con acqua distillata in autoclave.</li>
	<li>Controllo quotidiano di tutte le culture per infezioni batteriche o fungine. Culture che hanno disintegrato o in cui il mezzo ha cambiato colore sono infettate. Scarta tutte le culture che si sono infettate.</li>
</ol>6. fissazione
<ol><li>Dopo coltura, rimuovere tutti i piatti dall'incubatrice.</li>
	<li>Utilizzando un paio di pinze, rimuovere delicatamente l'occhio dalla carta da filtro, facendo attenzione a non per strappare il tessuto.</li>
	<li>Difficoltà tessuto oculare in paraformaldeide al 4% in tampone fosfato salino durante la notte a 4 ° C: 1x o in formalina neutra tamponata al 10% durante la notte a temperatura ambiente.</li>
	<li>Conservare il tessuto a 4 ° C in 1x tampone fosfato salino.</li>
</ol>

<ol><li>Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18855894">Towards understanding the development of scleral ossicles in the chicken, Gallus gallus.</a> Developmental Dynamics. 237 (11), 3240-3251 (2008).</li>
<li>Scholey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functions+of+motor+proteins+in+echinoderm+embryos%3A+an+argument+in+support+of+antibody+inhibition+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motility+and+the+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Functions of motor proteins in echinoderm embryos: an argument in support of antibody inhibition experiments.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 39 (4), 257-260 (1998).</li>
<li>Horakova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+FGFR+inhibitors+on+chicken+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Effect of FGFR inhibitors on chicken limb development.</a> Development, Growth & Differentiation. 56 (8), 555-572 (2014).</li>
<li>Gerlach, G. F., Morales, E. E., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbead+Implantation+in+the+Zebrafish+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo.</a> Journal of Visualized Experiments. (101), e52943(2015).</li>
<li>Luz-Madrigal, A., Grajales-Esquivel, E., Del Rio-Tsonis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+of+Embryonic+Chick+Eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Electroporation of Embryonic Chick Eyes.</a> Bio-protocol. 5 (12), e1498(2015).</li>
<li>Roach, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+organ+culture+of+embryonic+chick+femora%3A+a+system+for+investigating+bone+and+cartilage+formation+at+an+intermediate+level+of+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Long-term organ culture of embryonic chick femora: a system for investigating bone and cartilage formation at an intermediate level of organization.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 5 (1), 85-100 (1990).</li>
<li>Jung, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+inhibitory+action+of+BMPs+and+their+relationships+with+activators+in+feather+formation%3A+implications+for+periodic+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Local inhibitory action of BMPs and their relationships with activators in feather formation: implications for periodic patterning.</a> Developmental Biology. 196 (1), 11-23 (1998).</li>
<li>McKinnell, I. W., Turmaine, M., Patel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+Hedgehog+functions+by+localizing+the+region+of+proliferation+in+early+developing+feather+buds%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Sonic Hedgehog functions by localizing the region of proliferation in early developing feather buds.</a> Developmental Biology. 272 (1), 76-88 (2004).</li>
<li>Smith, E. L., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+take+on+an+old+story%3A+chick+limb+organ+culture+for+skeletal+niche+development+and+regenerative+medicine+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cells+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">A new take on an old story: chick limb organ culture for skeletal niche development and regenerative medicine evaluation.</a> European Cells & Materials. 26, 91-106 (2013).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Spermatogenesis+in+Explanted+Adult+Mouse+Testis+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In Vitro Spermatogenesis in Explanted Adult Mouse Testis Tissues.</a> PLoS One. 10 (6), e0130171(2015).</li>
<li>Ochoa-Villarreal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+cell+culture+strategies+for+the+production+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22BMB+Reports%22%5BJournal%5D)">Plant cell culture strategies for the production of natural products.</a> BMB Reports. 49 (3), 149-158 (2016).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Yu, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4380223/">The developmental biology of feather follicles.</a> The International Journal of Developmental Biology. 48 (0), 181-191 (2004).</li>
<li>Jabalee, J., Hillier, S., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+cellular+dynamics+during+the+development+of+intramembranous+bones%3A+the+scleral+ossicles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">An investigation of cellular dynamics during the development of intramembranous bones: the scleral ossicles.</a> Journal of Anatomy. 223 (4), 311-320 (2013).</li>
<li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental Cell Research. 16 (1), 118-147 (1959).</li>
<li>Pinto, C. B., Hall, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+an+understanding+of+the+epithelial+requirement+for+osteogenesis+in+scleral+mesenchyme+of+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">Toward an understanding of the epithelial requirement for osteogenesis in scleral mesenchyme of the embryonic chick.</a> Journal of Experimental Zoology. 259 (1), 92-108 (1991).</li>
<li>Mbiene, J. P., MacCallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> Journal of Comparative Neurology. 377 (3), 324-340 (1997).</li>
<li>Cloney, K., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+ex-ovo+culturing+of+chick+embryos+to+advanced+stages+of+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Optimized ex-ovo culturing of chick embryos to advanced stages of development.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), e52129(2015).</li>
<li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), e306(2007).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Questo protocollo si avvale del tessuto consolidato tecniche di coltura per ottenere la crescita di un occhio di pollo da embrionale giorno 8 (HH34) in vitro per 4 giorni. Questo metodo di coltura griglia fu originariamente descritto da Trowell15. Abbiamo ottimizzato un protocollo da Pinto e di Hall 1991 Studio16 utilizzando una membrana semi-porosa con griglia per studiare segnali induttivi tra strati di tessuto separati del pollo embrionale occhio<sup class="xref...

Il pollo embrionale (Gallus gallus) è un organismo di modello eccellente comunemente utilizzato nel campo della biologia. Il periodo di incubazione è di circa 21 giorni e molte uova possono essere incubate contemporaneamente, rendendo sperimentazione rapido ed efficiente. Forse la cosa più importante, l'embrione è anche facilmente manipolabili, consentendo il vasto studio chiavi dei processi di sviluppo e dei geni e proteine che guidano questi processi.
L'occhio di pollo embrionale è un organo complesso che si sviluppa attraverso l'interazione di un numero di diversi tessuti simili a molti altri sistemi del corpo. Questo metodo consente lo studio dello sviluppo di questi tessuti, specialmente nelle fasi avanzate di sviluppo. Ad esempio, la retina a più strati può essere di particolare interesse per coloro che studiano lo sviluppo del sistema nervoso. Metodi alternativi che permettono lo studio di altri tessuti dell'occhio come la cornea, il corpo vitreal, la lente, la sclera e le palpebre sono di beneficio ai ricercatori. L'occhio embrionali di pollo contiene anche una serie di ossa piatte, gli ossicini sclerali, che possono essere utilizzati come un modello per lo studio di induzione dell'osso intramembranous e ossificazione in vertebrati1.
Attualmente, ci sono una serie di metodi utilizzati per studiare lo sviluppo embrionale. Microiniezioni di anticorpi inibitori o altre molecole inibitorie2,3, impiantato chirurgicamente microsfere imbevuto di inibitore4, e5 di elettroporazione sono tutti metodi che possono essere utilizzato per downregulate geni o le proteine di interesse in un embrione. Metodi simili vengono utilizzati per aumentare il proteine. Questi metodi non sono senza loro limitazioni. Ad esempio, quando si utilizza sostanze chimiche per alterare lo sviluppo embrionale, devono essere valutati gli effetti letali sull'embrione, e questo limita l'utilizzo di metodi di cui sopra per siti localizzati di applicazione a dosi sufficientemente basse per garantire la sopravvivenza della dell'embrione.
La coltura in vitro del tessuto è stata utilizzata in una vasta gamma di organismi nello studio dello sviluppo e può essere utilizzata per ignorare alcune delle limitazioni di cui sopra. Ad esempio, i femori6, piuma germogli7,8e membra9 del pollo sono tutti stati studiati usando il tessuto di coltura metodi, come hanno i testicoli dei mouse10 e le radici e gambi di piante11. Questi metodi concedono gli scienziati un alto grado di controllo sullo sviluppo dei tessuti, come la possibilità di variare la temperatura e alterare la disponibilità di nutrienti. L'isolamento del tessuto dall'embrione intero rende anche molto meno sensibili agli effetti letali di sostanze chimiche, consentendo in tal modo gli studi di manipolazione su scala globale a concentrazioni più elevate. Un altro notevole vantaggio di in vitro coltura è la conservazione dell'ambiente cellulare del tessuto; la disposizione dei tessuti rimane relativamente invariata, rendendo possibile lo studio delle interazioni tra tessuto differenti tipi9. Così, in vitro coltura apre le porte a ulteriori sperimentale si avvicina non è disponibile in modelli in vivo o in ovo .
Attualmente, studiare lo sviluppo dell'occhio embrionale pollo usando i prodotti chimici è particolarmente impegnativo. Una serie di Membrane Extraembrionali copertina l'embrione, che lo rende difficile applicare microsfere o prodotti chimici; l'embrione è anche molto attivo all'interno l'uovo come esso invecchia, complicando ulteriormente un metodo già difficile. Questo protocollo consente un facile accesso all'occhio e relativi tessuti circostanti, eliminando queste barriere, fornendo nel contempo nuove opportunità per esaminare i processi inerenti allo sviluppo all'interno dell'occhio. Questo protocollo è stato istituito per studiare l'induzione dei ossicles scleral all'interno dell'occhio embrionale.

<table><tbody><tr><td>Piastre di Petri per colture cellulari da 35 mm</td> Piastra di Petri per colture cellulari <td>Corning</td><td>353001</td><td>di facile presa, polistirene, non pirogena</td></tr><tr><td>Piastre di Petri per colture cellulari da 100 mm</td><td>Corning</td><td>353003</td><td>piatto per colture tissutali, polistirene, carta apirogena</td></tr><tr><td>Kimtech</td><td></td><td>34155</td><td>Tergicristalli per attività di marca Kimtech Science, 280 per rete</td></tr><tr><td>metallica</td><td>di cartone n/a</td><td>n/a</td><td>rete metallica in acciaio inossidabile (dimensione della griglia 0,7 mm)</td></tr><tr><td>pipette in vetro monouso</td><td>VWR</td><td>14673-010</td><td>Vetro borosilicato monouso 5 3/4"</td></tr> <tr><td>terreno nutritivo</td><td>Gibco</td><td>12591-038</td><td>Fitton-Jackson Modification, [+] L-glutammina con rosso fenolo (BGJB)</td></tr><tr><td>penicillina-streptomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4458</td><td>10000 unità/mL penicillina streptomicina soluzione filtro stabilizzato</td></tr><tr><td> carta</td><td>da filtro semiporosa Whatman</td><td>1454 090</td><td>90mm</td></tr><tr><td>uova di gallina fecondate</td><td>Dalhousie University Agricultural College</td><td>n/a</td><td>può essere ottenuto da aziende agricole locali</td></tr><tr><td>cloruro di sodio (NaCl)</td><td>EMD</td><td>SX0420-3</td><td>cristalli di cloruro di sodio, reagente grado</td></tr><tr><td>1 L bottiglia di vetro</td><td>VWR</td><td>89000-240</td><td>1 L pyrex bottiglia di vetro autoclavabile</td></tr><tr><td>etanolo</td><td>Fisher Scientific BP82011</td><td></td><td>70%</td></tr> contenitori <tr><td>tupperware</td> di biologia molecolare <td>n/a</td><td>n/a acquistati</td><td>in negozio e sterilizzati con</td></tr><tr><td>lamette da barba usa e getta</td><td>EtOH VWR</td><td>55411-050</td><td>lame da barba industriali a bordo singolo (acciaio al carbonio chirurgico)</td></tr><tr><td>cucchiai di plastica</td><td>n/a</td><td>n/a acquistati</td><td>in negozio e sterilizzati con maschera antipolvere EtOH</td></tr><tr><td></td><td>3M</td><td>n/a</td><td>3M 8500 Comfort Mask</td></tr><tr><td>paraformaldeide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>paraformaldeide, grado reagente,</td></tr><tr><td>formalina cristallina tamponata neutra</td><td>Fisher Scientific</td><td>72210</td><td>10% formalina tamponata neutra</td></tr><tr><td>fosfato soluzione salina tamponata (PBS)</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 10X pH 7,4 (137mM NaCl, 2,5mM KCl, 4,3mM Na2HPO4, 1,4mM KH2PO4)15</td></tr> <tr><td>ml provette per centrifuga</td><td>presterilizzate</td><td>VWR</td><td>21008-216</td></tr><tr><td>Pinze</td><td>FST</td><td>n/a</td><td>pinze fini soluzione</td></tr><tr><td>salina per pulcini&nbsp;</td><td>n/a</td><td>n/a&nbsp;</td><td>0,85% NaCl</td></tr><tr><td>carta stagnola</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>tovagliolo di carta</td><td>acquistato in negozio n/a</td><td>n/a</td><td>acquistato in negozio</td></tr></tbody></table>

metodo di coltura organotypic per studiare lo sviluppo dei tessuti embrionali di pollo

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Il pollo embrionale è comunemente utilizzato come organismo modello affidabile per lo sviluppo dei vertebrati. L'accessibilità e l'incubazione breve periodo lo rende ideale per la sperimentazione. Attualmente, lo studio di queste vie inerenti allo sviluppo nell'embrione di pollo è condotto applicando inibitori e farmaci presso siti localizzati e alle concentrazioni basse utilizzando una varietà di metodi. La coltura in vitro del tessuto è una tecnica che consente lo studio dei tessuti separati dall'organismo ospite, evitando contemporaneamente molte delle limitazioni fisiche presenti quando si lavora con interi embrioni, come la suscettibilità degli embrioni per alte dosi di sostanze chimiche potenzialmente letale. Qui, presentiamo un organotipiche coltura protocollo per coltura l'embrionale pollo mezza testa in vitro, che presenta nuove opportunità per l'esame dei processi di sviluppo oltre i metodi attualmente stabiliti.

Utilizzando questo metodo, un occhio di pollo embrionali possa essere coltivato dal giorno 8 del suo sviluppo (HH34) in vitro per 4 giorni. Quattro giorni di sviluppo in ovo corrisponde a HH38.
Questo metodo di coltura supporta lo sviluppo di germogli di piuma che circondano l'occhio e sulle palpebre (Figura 1B). Questi germogli di piume non sono presenti in ovo a HH34 pri...

Qui, presentiamo un organotipiche coltura protocollo per crescere organi embrionali di pollo in vitro. Utilizzando questo metodo, lo sviluppo del tessuto embrionale pollo può essere studiato, pur mantenendo un elevato grado di controllo dell'ambiente di cultura.

Metodo di coltura organotypic per studiare lo sviluppo dei tessuti embrionali di pollo

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di fornire l'accesso agli occhi embrionali di pollo in un contesto in vitro per consentire uno studio approfondito dei complessi percorsi di sviluppo nell'embrione. Nel pollo embrionale, lo studio dell'occhio è spesso difficile, a causa dello sviluppo delle palpebre, del movimento dell'embrione e della crescita di tessuti extra embrionali. Composti come farmaci e inibitori possono anche avere effetti letali sull'embrione, rendendo difficile l'uso di questi composti per modulare i percorsi genici.I progressi nella coltura dei tessuti in vitro hanno permesso agli scienziati di isolare questi tessuti ed eliminare molte di queste barriere. Il nostro protocollo è vantaggioso in quanto ci permette di studiare l'occhio nel suo insieme, compresi tutti i tessuti che hanno il potenziale di interagire durante lo sviluppo, come la retina neurale e l'epitelio pigmentato retinico. Inizia con l'autoclavaggio dei materiali per assicurarti che tutte le soluzioni e le attrezzature siano sterili prima della procedura.Per fare ciò, sterilizzare in autoclave due litri di acqua distillata e un litro di soluzione fisiologica per pulcini, insieme a una sc

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Utilizzo di espianti di pelle aviaria per studiare il patterning e l'organogenesi dei tessuti

Qui, presentiamo un protocollo per innestare organoidi cerebrali umani in più stadi di maturazione nella membrana corioallantoica (CAM) del pulcino. Gli organoidi cerebrali sono stati coltivati seguendo protocolli standardizzati non guidati.

Modellazione precoce della nicchia neurovascolare dell'organoide umano non guidato nella membrana corioallantoica dell'embrione permissivo del pulcino

Scopri il metodo di coltura organotypic per studiare lo sviluppo degli occhi embrionali di pollo in vitro. Questa tecnica consente di analizzare le interazioni tra tessuti retinici senza effetti letali sui composti.

Metodo di coltura organotypic per studiare lo sviluppo dei tessuti embrionali di pollo

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