Name: Valutare il ruolo della funzione mitocondriale in affaticamento legato al cancro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-17T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: Scopri come valutare la disfunzione mitocondriale nell'affaticamento correlato al cancro utilizzando PBMC isolate e test di stress mitocondriale. Questo metodo clinico aiuta a identificare i pazienti a rischio di tossicità.

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Questo studio è completamente supportato dalla divisione di ricerca intramurale dell'Istituto nazionale di ricerca infermieristica del NIH, Bethesda, Maryland.

Lo studio corrente (NCT00852111) è stato approvato da Institutional Review Board (IRB) di istituti nazionali di salute (NIH), Bethesda, Maryland. I partecipanti arruolati in questo studio erano uomini euthymic, 18 anni di età o più anziani, che sono state diagnosticate con cancro alla prostata non-metastatico con o senza prostatectomia priore e sono stati programmati per ricevere la radioterapia esterna del fascio (EBRT). Potenziali partecipanti sono stati esclusi se avevano una malattia progressiva che potrebbe causare notevole affaticamento, hanno avuti malattia psichiatrica negli ultimi cinque anni, ha avuto non riveduta ipotiroidismo o anemia, o ha avuto una seconda malignità. Gli individui che sedativi, steroidi o agenti anti-infiammatori non steroidei utilizzati anche sono stati esclusi. I campioni di sangue di controllo in buona salute sono stati ottenuti presso la medicina NIH dipartimento di trasfusione da donatori sani sotto un protocollo approvato IRB (NCT00001846). Tutti i partecipanti sono reclutati al Magnuson Clinical Research Center al NIH. Prima della partecipazione allo studio sono stati ottenuti consensi scritti firmati.
1. mitocondriale funzione misurazione preparazione (giorno 1 dell'esperimento)
<ol><li>Idratare la cartuccia sensore (Vedi Tabella materiali; durata approssimativa: 5 min).<ol>
<li>Rimuovere la cartuccia sensore dal pacchetto. Aggiungere 200 μL di soluzione di calibratore in ciascun pozzetto della piastra utilità, quindi riempire ogni fossato con 400 μL di soluzione di calibratore.</li>
		<li>Piatto di sensore ritorno alla piastra di utilità, che ora ha calibratore soluzione in esso. Idratare la cartuccia in un incubatore a 37 ° C non-CO2 durante la notte. Nota: Cartuccia sensore deve essere idratata per un minimo di 4 ore e un massimo di 72 ore.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. preparazione del campione clinica (giorno 2 dell'esperimento)
<ol><li>Affaticamento di misura utilizzando il 13-elemento funzionale valutazione di malattia la terapia cronica - affaticamento (FACIT-F)2,23,24 al basale (prima di iniziare la radioterapia esterna), punto medio e completamento della radioterapia esterna e 1 anno post-radioterapia esterna.<ol>
<li>Utilizzare un 0 - 4 scala per ogni elemento risposta, dove 0 rappresenta "non è affatto" e un 4 indica che il convenuto si riferisce all'istruzione del corrispondente "molto." Punteggi totali dovrebbero variare da 16-53, con punteggi più bassi che riflette intensità alte di affaticamento.</li>
		<li>Definire fatica come un punteggio FACIT-F inferiore a 43, con un punteggio di FACIT-F di ≥43 che indica assenza di o non clinicamente significativo affaticamento2. Nota: Un punteggio FACIT-F di 43 migliori divide fatica decine di malati di cancro e la popolazione generale2.</li>
		<li>Includono i seguenti 13 elementi della scala di affaticamento FACIT: 1) mi sento affaticato; 2) mi sento debole tutto; 3) mi sento svogliata ("lavato fuori"); 4) mi sento stanco; 5) ho problemi con l'avvio di cose perché sono stanco; 6) ho difficoltà a finire le cose perché sono stanco; 7) ho energia; 8) sono in grado di fare le mie solite attività; 9) ho bisogno di dormire durante il giorno; 10) sono troppo stanco per mangiare; 11) ho bisogno di aiuto facendo la mia solita attività; 12) sono frustrato di essere troppo stanchi per fare le cose che voglio fare; e 13) devo limitare la mia attività sociali perché sono stanco.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isolare i PBMC dai campioni di sangue appena prelevato (durata approssimativa: 1 h).<ol>
<li>Raccogliere 8 mL di sangue in una provetta di preparazione di cellule mononucleari (Vedi Tabella materiali). Nota: I campioni di sangue devono essere elaborati entro 2 h dalla raccolta. La qualità di PBMCs può essere compromessa se i campioni di sangue vengono elaborati più di 2 ore dal prelievo.</li>
		<li>Centrifugare a 1.750 x g per 30 min a temperatura ambiente (18-25 ° C). Trasferire lo strato nuvoloso per un tubo conico da 15 mL. Aggiungere fino a 15 mL di PBS e capovolgere 5 volte.</li>
		<li>Centrifugare a 300 x g per 15 minuti a 4 ° C. Rimuovere con cautela e scartare il supernatante senza pellet inquietante. Risospendere il pellet con l'aggiunta di fino a 10 mL di PBS e capovolgere 5 volte.</li>
		<li>Centrifugare a 300 x g per 10 min a 4 ° C. Scartare il liquido surnatante e risospendere le cellule in 1 mL di PBS. Trasferire i PBMCs in una provetta di microfuge 1,5 mL.</li>
		<li>Centrifugare a 610 x g per 10 minuti. Con attenzione rimuovere il surnatante e risospendere il pellet in completo RPMI-1640 (RPMI-1640 supplementato con 10% FBS, 10mm penicillina/streptomicina).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cappotto cella piastre per cellule non aderenti (durata approssimativa: 30 min).<ol>
<li>Preparare la soluzione di adesivo di cellule e tessuti (Vedi Tabella materiali) diluendo la soluzione di riserva in bicarbonato di sodio 0,1 M a pH 8.0. La soluzione di lavoro dovrebbe essere a 3,5 µ g/cm2 di superficie. Nota: Questa soluzione contiene polifenolici proteine estratte dal mitilo marino, Mytilus edulis. Queste proteine sono componenti chiave della colla secernuta dalla cozza per ancorarsi alle superfici. Troviamo che la cella-Tak funziona meglio con PBMCs.</li>
		<li>Aggiungere 100 μL della soluzione adesiva diluita in ciascun pozzetto e incubare per almeno 20 min a temperatura ambiente. Lavare tre volte con acqua deionizzata e aria secca.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. mitocondriale funzione misurazione
<ol><li>Preparazione di analisi Media (durata approssimativa: 10 min). Nota: La media di analisi dovrà essere preparate il giorno dell'esperimento.<ol>
<li>Aggiungere L-glutamina, piruvato e glucosio alla base media (i costituenti stessi come per volta Eagle di Dulbecco Medium (DMEM), ma senza bicarbonato di sodio, glucosio, glutamina o sodio piruvato) per realizzare un supporto di analisi. Riscaldare la media di 37 ° C, quindi regolare il pH a 7,4. Nota: Le concentrazioni di L-Glutammina, piruvato ed il glucosio sono solitamente le stesse concentrazioni nei media di crescita normale, ma possono essere regolate in base il dosaggio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PBMCs di preparare per il test di Stress di Mito (durata approssimativa: 2 h).<ol>
<li>In ogni pozzetto per raggiungere confluency di 80-90% del piatto abbastanza PBMCs dal passaggio 2. Nella nostra esperienza, 1.5 x 105 cellule/pozzetto ha prodotto i risultati più coerenti. Nota: Wells A e H sono pozzi di sfondo e deve contenere solo analisi media con nessuna cellula. In pozzi da B a G, si consiglia di almeno 3-6 pozzetti per paziente campione di placcatura per tenere conto di valori anomali.</li>
		<li>Rallentare piastre a 200 x g per 2 minuti per permettere che le cellule di aderire al fondo dei pozzetti. Lavare le cellule una volta con media di dosaggio. Questo passaggio rimuove il bicarbonato di sodio e del siero dal supporto di crescita. Nota: Nella nostra esperienza, la fase di lavaggio rimuove in genere 20-30% delle cellule.</li>
		<li>Aggiungi media di dosaggio 180 μL in ogni pozzetto, tra cui sfondo pozzi A e H. Incubare in un incubatore a 37 ° C non-CO2 per 45-60 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Esecuzione del Test di Stress di Mito<ol>
<li>Ricostituire i farmaci nel Mito Stress Kit con media di test come segue:<ol>
<li>Oligomycin: Aggiungi 252 μL analisi media nel flaconcino per generare una soluzione di riserva a 50 μM.</li>
			<li>FCCP: Aggiungere 288 μL di media di dosaggio nel flaconcino per generare una soluzione di riserva a 50 μM.</li>
			<li>Antimycin A / Rotenone: aggiungere 216 μL di media di dosaggio nel flaconcino per generare una soluzione di riserva a 25 μM.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Vortice ricostituito farmaci per circa 1 minuto. Diluire in soluzioni di lavoro. Nota: Le concentrazioni delle soluzioni di lavoro dovrebbero essere titolate e pre-determinate prima dell'esperimento a seconda del tipo di cella. Per PBMCs, troviamo quel 1 μM di Oligomycin, 1 μM FCCP e 0,5 μM antimycin A / Rotenone funzionare al meglio.</li>
		<li>Dispensare i farmaci in ogni porta nella cartuccia sensore in sequenza:<ol>
<li>R: Porta pipetta 20 μL 10 μm Oligomycin, per una concentrazione finale in ciascun pozzetto di 1 μM.</li>
			<li>Porta b: pipetta 22 μL 10 μm FCCP, per una concentrazione finale in ciascun pozzetto di 1 μM.</li>
			<li>C: Porta pipetta 25 μL di 5 μM antimycin A / rotenone per una concentrazione finale in ciascun pozzetto di 0,5 μM.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Selezionare "Test di Stress di Mito" su uno strumento di cambiamento continuo extracellulare. Seguire il prompt dei comandi dello strumento e inserire la cartuccia sensore. Lo strumento eseguirà automaticamente la calibrazione del sensore. Inserire la piastra di cella dopo calibrazione del sensore e lo strumento si concluderà il resto del saggio. Dinamica dell'ossigeno è misurata a 530 nm (eccitazione) / 650nm (emissione), e concentrazione di protoni viene misurata a 470 nm (eccitazione) / 530 nm (emissione).</li>
</ol>4. normalizzazione dei dati la funzione mitocondriale
<ol><li>Preparare la soluzione di saggio di proliferazione cellulare (durata approssimativa: 5 min).<ol>
<li>Aggiungere 48 μL acido nucleico macchia (500 x) e soppressore di sfondo 240 µ l a 11,7 mL di PBS (2x). La macchia di acido nucleico è un colorante di legame al DNA cellulare-permeante e il soppressore di sfondo è un colorante di mascheramento che blocca le cellule morte o cellule con l'integrità della membrana cellulare compromessa da essere macchiato. La combinazione del colorante DNA-legantesi e il soppressore di sfondo assicura che solo dal vivo cellule sono macchiate.</li>
		<li>Una volta completata la prova di sforzo di Mito, aggiungere uguale volume di soluzione di lavoro (180 μL): 2x direttamente nel mezzo in ciascun pozzetto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incubare le cellule in presenza di soluzione di saggio di proliferazione delle cellule in un incubatore a 37 ° C per 45-60 min. quantificare il numero di cellule vive (fluorescenti) su un lettore alla 508 nm (eccitazione) / 527 nm (emissione) e normalizzare i dati OCR (durata approssimativa: 10 min) . Nota: oltre a numero cellule vive, gli utenti possono anche scegliere normalizzare i dati con il numero totale delle cellule, la quantità di acido nucleico, concentrazioni di proteine, ecc.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Affaticamento in malati di cancro è una condizione debilitante che non è ben definito o caratterizzato1. Diagnosi di affaticamento si basa interamente su una relazione soggettiva e non c'è nessuna corrente standard diagnostico o trattamento per questa circostanza, in gran parte a causa di una mancanza di comprensione nella sua pathobiology2. Dei meccanismi proposti affaticamento nei pazienti oncologici, danno nella funzione mitocondriale è una delle vie più terapeuticamente...

La fatica è una condizione prevalente e angosciante che ha un impatto negativo sulla qualità della vita dei pazienti di cancro1. A questa data, la fatica di cancro rimane definita male e si basa solo su segnalazione soggettiva da pazienti2. Di conseguenza, c'è un urgente bisogno di identificare un test di laboratorio diagnostico facilmente adattabile per caratterizzare obiettivamente fatica in ambiente clinico3,4.
I meccanismi sottostanti multipli, compreso disfunzione di mitocondri, sono state proposte per causare affaticamento5. I mitocondri sono gli organelli di centrale elettrica, fornendo il 95% del fabbisogno energetico cellulare tramite fosforilazione ossidativa e svolgono un ruolo importante nella segnalazione del calcio, apoptosi, segnalazione immuni e regolamento di altri di eventi di segnalazione intracellulare6 . Di conseguenza, bioenergetica mitocondriale alterata e difetti nella produzione di energia possono contribuire alla fatica. Supporto di questa ipotesi, gli studi precedenti hanno osservato le mutazioni nel DNA mitocondriale in pazienti con la sindrome di stanchezza cronica7. Mentre rimane poco chiaro se l'origine patofisiologica della fatica si trova all'interno del sistema nervoso centrale o i tessuti periferici, come i muscoli scheletrici8,9, attualmente non esiste un metodo diretto per valutare con precisione disfunzione mitocondriale legata alla stanchezza in live, contenenti cellule.
Usando cellule mononucleari del sangue periferico (PBMCs) per studiare la funzione mitocondriale offre diversi vantaggi. In primo luogo, PBMC sono prontamente disponibili in ambito clinico utilizzando flebotomia standard e possono essere isolati rapidamente utilizzando tecniche di laboratorio di base. In secondo luogo, la raccolta del sangue è meno dilagante che raccogliendo altri tessuti quali una biopsia del muscolo. Così, i campioni di sangue possono essere raccolti dallo stesso paziente ripetutamente nel corso del tempo, che facilita la valutazione longitudinale degli effetti del trattamento. Interessante, la funzione mitocondriale in PBMCs ha sembrato essere ben correlato con Rene stato mitocondriale in un modello animale10. Inoltre, i mitocondri delle cellule immuni sono stati utilizzati come proxy per la rilevazione di cambiamenti sistemici sotto condizioni differenti di malattia11,12. I mitocondri in cellule immuni circolanti sono particolarmente sensibile ai cambiamenti nelle funzioni immuni e immuni segnalando le molecole quali le citochine13,14,15. Ad esempio, si è osservato che PBMCs da pazienti con malattie infiammatorie reumatiche acute presentano basale elevato consumo dell'ossigeno,14. Al contrario, il consumo di ossigeno è stato ridotto in PBMC isolati dai pazienti con le circostanze infiammatorie sistemiche comprese sepsi16. Nelle circostanze infiammatorie, radicali liberi prodotti dai mitocondri disfunzionali possono contribuire ulteriormente ad elevati stress ossidativo e infiammazione prolungata17. Il ruolo centrale dei mitocondri nella produzione di energia anche come stress ossidativo suggerisce l'utilità potenziale di usando la funzione mitocondriale come un proxy per lo studio della fatica in cancro pazienti 13.
Precedenti studi hanno esaminato la funzione mitocondriale utilizzate tecniche biochimiche, misura del potenziale di membrana mitocondriale o l'isolamento di popolazioni di cellule specifiche che non possono essere facilmente adattabile nella regolazione clinica5, 14,18. Negli ultimi anni, lo sviluppo di analisi di flusso extracellulare ha permesso ai ricercatori di facilmente e accuratamente esaminare i cambiamenti nel tasso di consumo di ossigeno (OCR) in risposta alle iniezioni automatizzate di inibitori respiratori19,20 , 21 , 22. Tuttavia, la maggior parte di questi studi sono progettata per tipi cellulari specifici e il grande formato di alto-rendimento potrebbe non essere applicabile in una regolazione clinica. In questo manoscritto, descriviamo un protocollo ottimizzato per esaminare la funzione mitocondriale per uso clinico.

<table><tbody><tr><td>Provetta per la preparazione delle cellule mononucleate CPT&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>362761</td><td>Per isolare le PBMC dopo flebotomia</td></tr><tr><td>RPMI-1640&nbsp;</td><td>Corning</td><td>10-040</td><td>Per la produzione di terreni di crescita per PBMC</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Corning</td><td>35-010-CV</td><td>Per la produzione di terreni di crescita per PBMC</td></tr><tr><td>Penicillina/streptomicina</td><td>ThermoFisher</td><td>15140122</td><td>Per la produzione di terreni di crescita per PBMC</td></tr><tr><td>Cell-Tak</td><td>Corning</td><td>354240</td><td>Soluzione adesiva per cellule e tessuti; consente alle cellule in sospensione di aderire alla superficie</td></tr><tr><td>Seahorse XF Calibrant Solution</td><td>Agilent</td><td>103059-000</td><td>Per cartucce idratanti</td></tr><tr><td>XFp Fluxpak (minipiastre e cartucce per sensori)</td><td>Agilent</td><td>103022-100</td><td>Contiene minipiastre per colture cellulari XFp e cartucce per sensori</td></tr><tr><td>Terreni di base XF</td><td>Agilent</td><td>103335-100</td><td>Per la produzione di terreni di analisi XF</td></tr><tr><td>45% coltura cellulare Soluzione D-(+)-glucosio</td><td>Corning</td><td>25-037-CI</td><td>Per la produzione di XF terreni di analisi</td></tr><tr><td>Soluzione di piruvato di sodio</td><td>Corning&nbsp;</td><td>25-000-CI</td><td>Per la produzione di terreni di prova XF</td></tr> Soluzione di <tr><td>L-glutammina</td><td>ThermoFisher</td><td>25030081</td><td>Per la produzione di terreni di prova XF</td></tr><tr><td>Kit per test da sforzo Mito Seahorse XFp</td><td>Agilent</td><td>103010-100</td><td>Contiene oligomicina, FCCP, antimicina A/rotenone</td></tr><tr><td>CyQUANT Saggio di proliferazione cellulare diretta</td><td>ThermoFisher</td><td>C35011</td><td>Per la quantificazione di cellule vive e la normalizzazione</td></tr> <tr><td>dei datiSeahorse XFp Analyzer</td><td>Agilent</td><td>S7802AEA</td><td>Per misurare la funzione mitocondriale in cellule vive</td></tr><tr><td>Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode Reader (o qualsiasi strumento in grado di quantificare le cellule fluorescenti in una piastra)</td><td>BioTek</td><td>BTCYT5PV</td><td>Per la quantificazione di cellule vive e la normalizzazione dei dati</td></tr></tbody></table>

valutare il ruolo della funzione mitocondriale in affaticamento legato al cancro

Evaluating the Role of Mitochondrial Function in Cancer-related Fatigue

L'affaticamento è un comune e debilitante che colpisce la maggior parte dei malati di cancro. Fin qui, resti di affaticamento scarsamente caratterizzati con nessuna diagnostica di test per misurare obiettivamente la gravità di questa condizione. Qui descriviamo un metodo ottimizzato per la valutazione della funzione mitocondriale di PBMCs raccolti dai malati di cancro affaticato. Usando un sistema compatto flux extracellulare e iniezione sequenziale di inibitori respiratori, abbiamo esaminato lo stato funzionale mitocondriale di PBMC misurando la respirazione mitocondriale basale, ricambio capacità respiratoria ed il fenotipo di energia, che descrive la via di energia preferita di rispondere allo stress. PBMCs fresco sono prontamente disponibili in ambito clinico utilizzando standard flebotomia. L'intera analisi descritto nel presente protocollo può essere completato in meno di 4 ore senza il coinvolgimento di tecniche biochimiche complesse. Inoltre, descriviamo un metodo di normalizzazione che è necessario per ottenere dati riproducibili. La semplice procedura e normalizzazione metodi presentati consentono per raccolta di campioni ripetuti dallo stesso paziente e generazione di dati riproducibili che possono essere confrontati tra intervalli di tempo per valutare i potenziali effetti del trattamento.

Il Test di Stress di Mito si basa sul tasso di consumo di ossigeno (OCR) di misura dopo iniezione sequenziale di vari inibitori respiratori per mappare un profilo mitocondriale completo. Misurazioni di OCR dopo ogni iniezione di droga può essere utilizzato per calcolare i seguenti parametri relativi alla salute mitocondriale: OCR basale prima viene misurata prima di ogni iniezione di droga per valutare il consumo di ossigeno necessario per soddisfare la domanda di livello...

Il nostro obiettivo era quello di sviluppare un protocollo pratico per valutare la disfunzione mitocondriale è associata con affaticamento nei pazienti oncologici. Questo innovativo protocollo è ottimizzato per uso clinico che coinvolge phlebotomy solo standard e procedure di laboratorio di base.

Valutare il ruolo della funzione mitocondriale in affaticamento legato al cancro

Fatigue is a common and debilitating condition that affects most cancer patients. To date, fatigue remains poorly characterized with no diagnostic test to ...

L'obiettivo generale di questa procedura è valutare la disfunzione mitocondriale associata all'affaticamento nei pazienti oncologici. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della cura del cancro di supporto, come ad esempio se la disfunzione mitocondriale è associata all'affaticamento nei pazienti con cancro dopo aver ricevuto la radioterapia. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è meno invasiva e può essere facilmente utilizzata in clinica per identificare i pazienti a rischio di tossicità da terapia antitumorale.Questa tecnica non solo fa progredire la nostra comprensione del ruolo della disfunzione mitocondriale nell'affaticamento correlato al cancro, ma può anche migliorare la valutazione e può ottimizzarne la gestione. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sui meccanismi alla base dell'affaticamento correlato al cancro, può essere applicato anche ad altre condizioni patologiche affaticanti come le condizioni metaboliche e infiammatorie uriniche. In generale, può essere difficile per le persone che non conoscono questo metodo iniettare correttamente gli inibitori respiratori in ciascuna porta della cartuccia del sensore senza una

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La stanchezza è un sintomo comune, poco trattato e spesso poco compreso in molte malattie e disturbi. Nuovi test preclinici dell'affaticamento possono aiutare a migliorare la comprensione attuale e il trattamento futuro dell'affaticamento. A tal fine, l'attuale protocollo fornisce un nuovo mezzo per misurare il comportamento simile alla fatica nel topo.

Il tapis roulant fatica di prova: un test semplice, high-throughput di stanchezza simile comportamento per il mouse

Qui presentiamo un protocollo per l'isolamento delle cellule leucemiche dal midollo osseo di leucemia pazienti e l'analisi del loro stato metabolico. Valutazione del profilo metabolico delle cellule di leucemia primaria potrebbe contribuire a caratterizzare meglio la domanda di cellule primarie e potrebbe portare alla medicina più personalizzata.

Valutazione del profilo metabolico delle cellule di leucemia primaria

Abbiamo sviluppato un protocollo pratico e un approccio analitico per valutare la fosforilazione ossidativa mitocondriale e la capacità di trasferimento di elettroni negli omogeneizzati tumorali freschi. Questo protocollo può essere facilmente adattato per esaminare varie funzioni mitocondriali che contribuiscono all'inizio, alla progressione e alla risposta al trattamento del cancro.

Determinazione analitica della funzione mitocondriale degli omogeneizzati tumorali solidi asportati

La respirometria ad alta risoluzione accoppiata a sensori di fluorescenza determina il consumo di ossigeno mitocondriale e la generazione di specie reattive dell'ossigeno (ROS). Il presente protocollo descrive una tecnica per valutare le frequenze respiratorie mitocondriali e la produzione di ROS nel nervo sciatico permeabilizzato.

Valutazione della funzione mitocondriale nel nervo sciatico mediante respirometria ad alta risoluzione

Descriviamo protocolli graduali che misurano la respirazione mitocondriale di neutrofili di topo e umani e cellule HL60 utilizzando l'analizzatore di flusso extracellulare metabolico.

Misurazione in tempo reale del profilo bioenergetico mitocondriale dei neutrofili

Questo protocollo descrive una tecnica per la generazione di cibridi da cellule tumorali in sospensione come strumento per studiare il ruolo dei mitocondri nel processo tumorigenico.

Generazione di cibridi transmitocondriali utilizzando linee cellulari tumorali

La bioenergetica delle cellule T CD8 può essere interrogata utilizzando il Mito Stress Test. Questa metodologia può essere utilizzata per studiare la programmazione metabolica acuta e cronica. Questo protocollo descrive gli approcci per esaminare le relazioni tra la biologia del recettore delle cellule T e l'analisi bioenergetica.

Misurazione della funzione mitocondriale delle cellule T CD8 naive ed effettrici

Qui presentiamo un protocollo di respirometria ad alta risoluzione per analizzare la bioenergetica nei moscerini della frutta mutanti PINK1B9-null. Il metodo utilizza il protocollo SUIT (Substrate-Uncoupler-Inhibitor-Titration).

Analisi della funzione mitocondriale in un mutante PINK1B9-null di Drosophila melanogaster utilizzando la respirometria ad alta risoluzione

Qui, descriviamo un metodo completo per misurare la fosforilazione ossidativa mitocondriale in fibre muscolari scheletriche fresche permeabilizzate da muscolo umano o di topo. Questo metodo consente la quantificazione in tempo reale della respirazione mitocondriale e la valutazione della preferenza per il carburante e della flessibilità metabolica, preservando le reti mitocondriali esistenti e l'integrità della membrana.

Misurazione della respirazione mitocondriale nelle fibre muscolari scheletriche umane e di topo mediante repirometria ad alta risoluzione

Questo studio ha utilizzato l'ecografia per la diagnosi e test di follow-up per confermare l'efficacia del trattamento di progressiva resistenza esercizio (PRE) in linfedema al seno per cancro (BCRL). L'ecografia può essere applicato in modo efficace per garantire la diagnosi e il trattamento del linfedema.

Ecografica Valutazione del seno Linfedema correlati al cancro

Scopri come valutare la disfunzione mitocondriale nell'affaticamento correlato al cancro utilizzando PBMC isolate e test di stress mitocondriale. Questo metodo clinico aiuta a identificare i pazienti a rischio di tossicità.

Valutare il ruolo della funzione mitocondriale in affaticamento legato al cancro

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