Name: Produzione di elastina-come proteina idrogeli per incapsulamento e Immunostaining delle cellule in 3D (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 46 s
Description: Impara a produrre idrogeli da proteine elastina-simili per incapsulare cellule in 3D e analizzarle con immunofluorescenza. Questo metodo modulare permette di studiare le interazioni cella-matrice in biomateriali e medicina rigenerativa.

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Gli autori ringraziano T. Palmer e H. Basile (Stanford neurochirurgia) per la fornitura di murino NPC. Vector art nella Figura 4 è stato usato e adattato da Servier arte medica sotto Creative Commons Attribution 3.0 Unported License (https://creativecommons.org/ licenses/by/3.0/legalcode). Parte di questo lavoro è stato effettuato presso la Stanford Nano ha condiviso strutture (FNS), sostenuto dalla National Science Foundation sotto Premio ECCS-1542152. N.a.s. riconosce sostegno dal National Institute of General Medical Sciences, della National Institutes of Health (32GM 008412). C.m.m. riconosce il supporto da un NRSA NIH pre-dottorato (F31 EB020502) e il programma di studiosi di Siebel. S.C.H riconosce sostegno dal National Institutes of Health (U19 AI116484 ed EB018407 R21), National Science Foundation (DMR 1508006) e il California Institute for Regenerative Medicine (RT3-07948). Questa ricerca ha ricevuto finanziamenti dall'alleanza rigenerativa riabilitazione Research & Training (AR3T), che è sostenuta dalla Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health e Human Development (NICHD), Istituto nazionale di Disordini neurologici e colpo (NINDS) e Istituto nazionale di Imaging biomedico e Bioingegneria (NIBIB) degli istituti nazionali di salute sotto Premio numero P2CHD086843. Il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente le opinioni del National Institutes of Health.

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Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Purificazione ed espressione recombinant della proteina è un potente strumento per sintetizzare biomateriali con elevata riproducibilità. A causa dell'avvento della clonazione molecolare commercializzato in gran parte, plasmidi ricombinanti personalizzati possono essere acquistati da diversi fornitori, che riduce significativamente il tempo di lavorare con materiali come ELPs. Allo stesso modo, plasmidi possono essere richiesti direttamente dal laboratorio di origine quando l'opera originale è stata sostenuta da un contr...

Durante il secolo passato, coltura del tessuto bidimensionale (2D) è sviluppato in un set di strumenti integrato per lo studio della biologia fondamentale delle cellule in vitro. Inoltre, i protocolli relativamente basso costo e semplici per la coltura cellulare 2D hanno condotto alla sua adozione attraverso molte discipline biologiche e mediche. Tuttavia, ricerca passata ha dimostrato che le tradizionali piattaforme 2D possono portare a risultati che si discostano sensibilmente da quelli raccolti in vivo, causando tempo prezioso e finanziamenti sprecati per ricerca clinicamente orientata1,2, 3. Noi ed altri suppongono che questa discrepanza può essere attribuita alla mancanza di nativi biochimiche e biofisiche spunti forniti per le cellule coltivate su superfici 2D, che possono essere necessarie per la proliferazione ottimale e maturazione dei vari tipi di cellule.
Per risolvere queste limitazioni e aiuto ponte il divario tra 2D in vitro e in vivo gli studi, i ricercatori hanno sviluppato idrogel tridimensionale (3D) piattaforme per cellulari-incapsulamento1,4,5 ,6. Idrogeli sono materiali ideali per ricapitolare il microambiente endogeno della matrice extracellulare (ECM) in vivo a causa di loro proprietà meccaniche del tessuto-come e struttura gonfio d'acqua che consente il rapido trasporto di nutrienti e segnalazione fattori7,8. Inoltre, idrogeli 3D possono essere progettati per avere controllo indipendente sulle proprietà meccaniche e biochimiche dell'impalcatura. Sia matrice meccanica9,10,11,12 e ligandi cellulari-adesivo13,14,15 sono ben noti per influenzare la cella comportamento in vitro e in vivo. Così, idrogeli 3D con proprietà sintonizzabile offrono una piattaforma per studiare le relazioni causali tra cellule e loro microambiente. Criteri per una matrice di idrogel 3D ideale includono semplice, non citotossica delle cellule-incapsulamento come pure accordabilità indipendente di proprietà meccaniche fisiologicamente rilevanti e mimici di nativi cella-adesivo motivi.
Entrambi sintetico (ad es., polietilenglicole, acido polilattico, poli (acido glicolico)) e di derivazione naturale (ad es., alginato, collagene, Matrigel) idrogeli presentano vantaggi rispetto 2D in vitro piattaforme di cultura; Tuttavia, essi hanno anche notevoli lacune che limitano la loro applicabilità. Primo, molte piattaforme di derivazione naturale e sintetiche richiedono condizioni di reticolazione duro che possono essere potenzialmente tossiche per le cellule di mammiferi, che porta alla diminuzione di attuabilità delle cellule7. Inoltre, molte piattaforme sintetici mancano nativa bioattività e bisogno di essere funzionalizzate attraverso reazioni chimiche secondarie, che possono aggiungere maggiore costo e complessità16. Infine, mentre materiali di derivazione naturale contengono tipicamente intrinseche bio-attivi domini, essi sono spesso afflitti da un'elevata variabilità lotto e spesso sono limitate a formare gel relativamente debole7,17.
Ingegneria delle proteine ricombinanti presenta un unico set di strumenti per la progettazione di materiali consentendo controllo esplicito sulla sequenza della proteina e, per estensione, le potenziali proprietà meccaniche e biochimiche dell'idrogel finale dell'impalcatura18. Inoltre, sfruttando il ben nota macchine biologiche di Escherichia coli (Escherichia coli) per esprimere proteine, materiali possono essere prodotto in modo conveniente e coerente con la variabilità limitata inter - e intra-batch. La proteina elastina-come (ELP) presentata qui ha tre domini ingegnerizzati: (1) un tag T7 e His6 che consente per etichettatura tramite fluorescente contrassegnati gli anticorpi, (2) una regione 'elastin-like' che conferisce proprietà meccaniche elastiche e consente per l'industria chimica reticolazione e (3) una regione 'bio-attivi' che codifica per motivi di cella-adesivo.
Nostra regione di elastina-come si basa sulla canonica sequenza di elastina (Val-Pro-Gly-Xaa-Gly)5 dove quattro dei 'Xaa' siti dell'amminoacido isoleucina (Ile), ma potrebbero essere progettato per essere qualsiasi amminoacido ad eccezione della prolina. Questa sequenza dota ricombinante ELPs con comportamento di temperatura (LCST) soluzione critica inferiore che può essere sfruttata per post-l'espressione purificazione semplice via19,20di cicli termici. Questa proprietà LCST può essere sintonizzata per termicamente aggregato a temperature diverse modificando l'ospite 'Xaa' residuo21,22.
Qui, la posizione di 'Xaa' su una delle cinque ripetizioni elastina-come è stata sostituita con la presentazione di ammina lisina (Lys) dell'aminoacido, che è utilizzata per la reticolazione di idrogel. Il nostro lavoro precedente ha indicato non citotossica e robusto reticolazione tramite reazione con l'ammina-reattivo crosslinker tetrachis (idrossimetil) fosfonio cloruro (THPC)23. Di varie proteine contenuti e crosslinker concentrazione complessiva, siamo in grado di produrre idrogel che può essere sintonizzato per estendersi su una rigidità fisiologicamente rilevanti gamma (~0.5-50 kPa)9,23,24. Oltre alle proprietà meccaniche di tuning, cellula adesione all'interno dei risultati di idrogel dall'integrazione dei domini canonici di cella-adesivo all'interno la spina dorsale della proteina ELP. Ad esempio, l'incorporazione di estesa fibronectin-derivato 'RGDS' sequenza dell'amminoacido permette delle cellule adesione e flessibilità conformazionale, mentre le uova strapazzate, variante di 'RDGS' non vincolante limita di adesione cellula-matrice24. Modulando il rapporto di cella-adesivo non adesivo proteine come pure la concentrazione nella proteina totale, siamo in grado di produrre in modo efficace gli idrogel che abbracciano una vasta gamma di concentrazione del ligando. Resultantly, abbiamo sviluppato una piattaforma di idrogel con proprietà biochimiche e biofisiche disaccoppiate, che può essere regolato in modo indipendente per coltura ottima 3D di vari tipi cellulari.
Oltre alla matrice di rigidezza e accordabilità legante adesivo, ricombinante idrogel offrono la possibilità di profili di degrado del materiale specifico design, che è necessaria per la diffusione delle cellule, la proliferazione e la migrazione all'interno di un contesto 3D4 , 9. questo degrado è garantito dalla secrezione delle cellule delle proteasi che si rivolgono specificamente elastina-come sequenza25o estesa 'RGDS'9 . ELP idrogeli inoltre sono stati indicati per sostenere le successive analisi biochimiche che sono necessari per lo studio di attuabilità delle cellule e la funzione compreso immunocytochemistry così come estrazione di DNA/RNA/proteine per inversione quantitativa reazione a catena della polimerasi della trascrizione (qRT-PCR) e Western blot9. ELP varianti inoltre sono stati usati in un certo numero di modelli in vivo e sono noti per essere tollerato dal sistema immunitario26.
Presi insieme, ELP come una piattaforma di materiale per gli studi delle cellule-incapsulamento vanta una vasta gamma di vantaggi rispetto alle piattaforme di materiale sintetiche o di derivazione naturale, che spesso non hanno lo stesso grado di accordabilità biochimiche e biofisiche e riproducibilità. Inoltre, non citotossica un di ELP uso semplice e con un'ampia varietà di tipi cellulari (ad es., pulcino radice dorsale dei gangli14,24, progenitrici neurali murini cellule9, cellule staminali mesenchimali umane27, bovino condrociti neonatale28, human endothelial cells29,30) consente per un modello più fisiologicamente rilevante del ECM 3D endogeno rispetto alla coltura delle cellule 2D. Qui, presentiamo un protocollo per l'espressione di recombinantly-derivati, ELPs per l'uso come una piattaforma di idrogel sintonizzabile per 3D cell incapsulamento. Vi presentiamo ulteriormente la metodologia per l'etichettatura fluorescente downstream e microscopia confocale delle cellule incapsulate.

<table><tbody><tr><td><forte>Espressione e purificazione di proteine simili all'elastina</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 cm Piastre di Petri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanolo</td><td>RICCA Chemical</td><td>2546.70-1</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di ammonio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3920-500G</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP1760-25G</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>9002-18-0&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>BL21 (DE3) pLysS Cellule competenti</td><td>Invitrogen</td><td>C606003</td><td></td></tr><tr><td>cloramfenicolo</td><td>Amresco</td><td>0230-100G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Desossiribonucleasi I da pancreas bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>EDTA sale disodico, diidrato</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>O2793-500</td><td></td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP229-4</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A451-4</td><td></td></tr><tr><td>Isopropil &beta;-D-1-tiogalattopiranoside (IPTG)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP1755-10G</td><td></td></tr><tr><td>Luria Brodo</td><td>EMD Millipore</td><td>1.10285.5007</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>VWR</td><td>52858-000</td><td></td></tr><tr><td>Fenilmetanthanesolfonil fluoruro (PMSF)</td><td>MP Biomedicals</td><td>195381</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>Idrossido di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S 8045-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Unità filtro siringa (0,22 &mu; m)</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RB</td><td></td></tr><tr><td>Terrific Brodo</td><td>Millipore</td><td>71754-4</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td></td></tr><tr><td>Incapsulamento cellulare in idrogel 3D ELP</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu; m filtri per siringhe</td><td>Millipore</td><td>SLGV004SL</td><td></td></tr><tr><td>foglio di silicone di 0,5 mm di spessore</td><td>Microscopia elettronica Science</td><td>70338-05</td><td></td></tr><tr><td>piastre per coltura tissutale a 24 pozzetti&nbsp;</td><td>Punzone</td><td></td> per biopsia monouso Corning 353047 <td></td></tr><tr><td>(2 mm)</td>Punzone per biopsia monouso <td>Integra Miltex</td><td>33-31</td><td></td></tr><tr><td>(4 mm)</td>Punzone per biopsia monouso <td>Integra Miltex</td><td>33-34</td><td></td></tr><tr><td>(5 mm)</td><td>Integra Miltex</td><td>33-35</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' soluzione salina tamponata con fosfato (DPBS)&nbsp;</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>No. 1 vetrini coprioggetti in vetro da 12 mm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-545-80</td><td></td></tr><tr><td>Tetrakis(idrossimetil)fosfonio cloruro (THPC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>404861-100ML</td><td></td></tr><tr><td>0,5% Tryspin/EDTA</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Immunocitochimica delle cellule in idrogel ELP 3D</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>16% (p/v) Paraformaldeide (PFA)Scienze</td> della <td>microscopia elettronica</td><td>15701</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Roche</td><td>3116956001</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenilindo, Dicloridrato)</td><td>Sonde molecolari</td><td>D1306&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Siero d'asino</td><td>Lampire Biological Labs</td><td>7332100</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario anti-topo di capra (AF488)</td><td>Sonde molecolari</td><td>A-11017</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario anti-coniglio di capra (AF546)</td><td>Sonde molecolari</td><td>A-11071</td><td></td></tr><tr><td>Siero di capra</td><td>Gibco</td><td>16210-072</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primario nestina di topo</td><td>BD Pharmingen</td><td>556309</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Sox2 Primario Anticorpo</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>23064S</td><td></td></tr><tr><td>Smalto per unghie Microscopia</td><td>elettronica Scienze</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield Hardset Montaggio Medium&nbsp;</td><td>Laboratori vettoriali</td><td>H-1400&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

produzione di elastina-come proteina idrogeli per incapsulamento e immunostaining delle cellule in 3d

Production of Elastin-like Protein Hydrogels for Encapsulation and Immunostaining of Cells in 3D

Tecniche di coltura tissutale (2D) bidimensionali sono stati essenziali per la nostra comprensione della biologia delle cellule fondamentali. Tuttavia, la mancanza di sistemi di coltura del tessuto 2D tradizionale una matrice tridimensionale (3D), risultante in un significativo scollamento tra risultati raccolti in vitro e in vivo. Per risolvere questa limitazione, i ricercatori hanno creato piattaforme di coltura del tessuto 3D idrogel che possono imitare le proprietà biochimiche e biofisiche del microambiente delle cellule in vivo . Questa ricerca ha motivato la necessità di sviluppare materiale piattaforme che supportano incapsulamento cella 3D e analisi biochimiche a valle. Ingegneria delle proteine ricombinanti offre un unico set di strumenti per disegno materiale idrogel 3D e sviluppo, consentendo il controllo specifico di sequenza della proteina e quindi, per estensione, le potenziali proprietà meccaniche e biochimiche della risultante matrice. Qui, presentiamo un protocollo per l'espressione di recombinantly-elastina-come proteina derivata (ELP), che può essere utilizzato per forma idrogel con proprietà meccaniche regolabili in modo indipendente e concentrazione del ligando delle cellule-adesivo. Presentiamo inoltre una metodologia per l'incapsulamento di cellule all'interno di ELP idrogeli e macchiatura immunofluorescente successive di embedded cellule per analisi a valle e la quantificazione.

Il ELPs utilizzata nel presente protocollo sono costituite da cinque regioni: un tag di T7, His6 tag, sito di clivaggio Enterochinasi (EK), una regione di bio-attivi e una regione di elastina-like (Figura 1). I tag T7 e His6 consentono per una facile identificazione mediante tecniche di Western blot standard. Introduzione del sito di clivaggio EK permette la rimozione enzimatica della regione tag, se necessario. La regione di bio-attivi codifica per l'estesa,...

Idrogeli di ingegneria della proteina ricombinanti sono vantaggiosi per la coltura cellulare 3D poiché consentono completa accordabilità della catena polimerica e di conseguenza, il microambiente delle cellule. Qui, descriviamo il processo di purificazione della proteina ricombinante elastino-simili e la sua applicazione in incapsulamento cella 3D idrogel.

Produzione di elastina-come proteina idrogeli per incapsulamento e Immunostaining delle cellule in 3D

Two-dimensional (2D) tissue culture techniques have been essential for our understanding of fundamental cell biology. However, traditional 2D tissue ...

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di esprimere e purificare proteine simili all'elastina derivate in modo ricombinante da utilizzare come idrogel sintonizzabile per l'incapsulamento cellulare 3D. Inoltre, questo protocollo presenta la metodologia per la marcatura fluorescente a valle nella microscopia confocale di cellule incapsulate. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nei campi dei biomateriali, della medicina rigenerativa e della biologia cellulare, come la comprensione del ruolo delle interazioni cellula-matrice extracellulare nel 3D.Il vantaggio principale di questa tecnica è che fornisce una piattaforma di materiali riproducibile, sintonizzabile e modulare, adatta allo studio di più tipi di cellule. Nel complesso, l'implementazione di questa tecnica può migliorare la nostra comprensione dei parametri critici di segnalazione della ECM cellulare che potrebbero determinare il successo delle future terapie rigenerative basate sulle cellule. Striare una piastra di agar di ampicillina e cloramfenicolo con un ceppo batterico prefabbricato contenente un vettore che codifica per l'ELP di interesse.Quindi incubare la piastra striata capovolta a 37 g

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Vi presentiamo i protocolli per le 3 dimensioni (3D) incapsulamento delle celle all'interno di idrogel sintetico. La procedura di incapsulamento viene delineato per due metodi comunemente usati di reticolazione (michael-tipo di addizione e di luce iniziata meccanismi di radicali liberi), come pure una serie di tecniche per la valutazione del comportamento delle cellule incapsulate.

Incapsulamento cellulare in idrogel 3D per l&#39;ingegneria tissutale

Questo video mostra una tecnica per l'immunocolorazione delle cellule incapsulate in un idrogel 3D. La coltura di idrogel contenente cellule progenitrici neurali viene fissata, permeabilizzata e trattata con una soluzione bloccante per prevenire l'immunocolorazione non specifica. Viene aggiunto un cocktail di anticorpi primari per legare proteine specifiche, seguito da anticorpi secondari marcati in fluorescenza e da una colorazione nucleare. Il campione viene quindi montato su un vetrino e...

Immunocolorazione di cellule incapsulate in un sistema di idrogel 3D

Il collagene è una componente fondamentale della ECM, e fornisce spunti essenziali per molti processi cellulari che vanno dalla migrazione verso la differenziazione e la proliferazione. Qui fornito è un protocollo per l'incorporamento celle all'interno di idrogel di collagene 3D, e una tecnica più avanzata per la generazione di matrici di collagene randomizzati o allineati con microcanali PDMS.

Preparazione del 3D collagene Gel e microcanali per lo studio delle interazioni 3D<em&gt; In Vivo</em

Descriviamo un processo sequenziale per la formazione mediata dalla luce e il successivo patterning biochimico di matrici sintetiche di idrogel per applicazioni di coltura cellulare tridimensionale. Viene dimostrata la costruzione e la modifica di idrogel con la chimica fotoclick citocompatibile. Inoltre, vengono presentate tecniche semplici per quantificare e osservare i modelli e determinare la vitalità cellulare all'interno di questi idrogel.

Formazione Light-mediata ed il modello di idrogel per colture cellulari

Questo è un metodo per creare un 3-dimensionale scaffold coltura cellulare dalla matrice extracellulare polmonare. polmone Intact è trasformato in idrogel in grado di sostenere la crescita delle cellule in tre dimensioni.

Sintonizzabile idrogel da polmonare matrice extracellulare per colture cellulari 3D

Diversi metodi per manipolare architettura tridimensionale in idrogel a base di proteine vengono valutate qui rispetto alla proprietà del materiale. Le reti di macroporosa sono funzionalizzate con un peptide di cella-adesivo, e loro fattibilità in coltura cellulare viene valutata utilizzando due linee cellulari di modello diverso.

Facile manipolazione delle architetture in idrogel a base di proteine per applicazioni della coltura delle cellule

Questo protocollo descrive la fabbricazione di microcryogels elastico 3D macroporosa integrando microfabbricazione con tecnologia cryogelation. Durante il caricamento con cellule, microtissues 3D vengono generati, che possono essere facilmente iniettate in vivo per facilitare la terapia rigenerativa o assemblati in matrici per in vitro screening di farmaci di alto-rendimento.

Microtissues 3D per la terapia rigenerativa iniettabile e droga di High-throughput Screening

Qui descriviamo una facile preparazione di idrogeli iniettabili a base di chitosano usando immina dinamica chimica. Metodi per regolare la resistenza meccanica di idrogel e la sua applicazione nella coltura cellulare 3D sono presentati.

Preparazione di idrogeli iniettabili a base di chitosano e la sua applicazione nella coltura cellulare 3D

La lavorazione a taglio durante la formazione di idrogel provoca la produzione di sospensioni di microgel che si tagliano sottili ma si ristrutturano rapidamente dopo la rimozione delle forze di taglio. Tali materiali sono stati utilizzati come matrice di supporto per la bioprinting di strutture complesse e cariche di cellule. Qui vengono descritti i metodi utilizzati per produrre il letto di supporto e i bioink compatibili.

Gel fluidi di agarosio formati dalla lavorazione a taglio durante la gelificazione per la bioprinting 3D sospesa

Questo articolo descrive come biostampare in 3D idrogel fototabili per studiare l'irrigidimento della matrice extracellulare e l'attivazione dei fibroblasti.

Idrogel fotoregistrabili in bioprinting 3D per studiare l'attivazione dei fibroblasti

Sebbene la rigidità della matrice extracellulare (ECM) sia un regolatore chiave del comportamento cellulare, i meccanismi di rilevamento e trasduzione sottostanti restano poco chiari. Per affrontare questo problema, forniamo protocolli per creare substrati a base di poliacrilammide e silicone con rigidità regolabile, per approfondire la nostra comprensione della diafonia cellula-ECM.

Generazione di substrati extracellulari in poliacrilammide e silicone con rigidità definita per applicazioni in biologia cellulare

Impara a produrre idrogeli da proteine elastina-simili per incapsulare cellule in 3D e analizzarle con immunofluorescenza. Questo metodo modulare permette di studiare le interazioni cella-matrice in biomateriali e medicina rigenerativa.

Produzione di elastina-come proteina idrogeli per incapsulamento e Immunostaining delle cellule in 3D

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