Confronto ad alta risoluzione delle frequenze di Coniugazione batterica

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della microbiologia su quanto spesso il DNA plasmide può essere diffuso tra diversi batteri. Il vantaggio principale di questa tecnica è che riducendo lo sfondo, possiamo rilevare piccole differenze nella frequenza di coniugazione con un'alta risoluzione. A dimostrare la procedura sarà Kosuke Yanagiya, uno studente laureato del mio laboratorio.

Per calcolare la frequenza di coniugazione in base al numero più probabile, filtrare l'accoppiamento di un millilitro da una coltura del donatore durante la notte con un millilitro da una coltura ricevente durante la notte per 45 minuti a 30 gradi Celsius, come appena dimostrato. Mentre la co-coltura sta incubando, diluire serialmente le colture originali del donatore e del ricevente per placcare in triplice copia sul brodo di Luria donatore, o LB, più kanamicina, o lB ricevente più piastre di gentamicina per una coltura di due giorni a 30 gradi Celsius. Al termine dell'incubazione, resuspendare la coltura sul filtro in LB sterile contenente kanamicina e gentamicina per la diluizione seriale in una piastra di coltura cellulare a 96 po 'in quadruplicata.