Name: Sensillum singole registrazioni per Locust Palp sensilli Basiconica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Scopri la registrazione da singolo sensillo sui sensilla basiconica delle palpe di locusta. Questo metodo elettrofisiologico rivela i pattern di risposta neuronale agli stimoli odorosi in neuroscienza.

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Questo lavoro è sostenuto da una sovvenzione dalla Fondazione Nazionale Scienze naturali della Cina (No.31472037). Qualsiasi menzione di marchi o prodotti commerciali in questo articolo è solo scopo di fornire informazioni specifiche e non implica una raccomandazione.

1. preparazione degli strumenti e dell'insetto
<ol><li>
Preparazione delle soluzioni di elettrodi e stimoli tungsteno
	<ol>
<li>Difficoltà un nuovo filo di tungsteno (diametro di 0,125 mm, lunghezza 75 mm) in un micromanipolatore e affilarlo in una soluzione di nitrito (NaNO2) di sodio 10% (p/v) in una siringa a 10 V fornita da un alimentatore per circa 1 min sotto uno stereomicroscopio (ingrandimento 40x).</li>
		<li>Immergere il filo di tungsteno affilata ripetutamente nel NaNO2 soluzione al 10%, circa 4 mm a 5 V in < 1 min (Figura 1A).</li>
		<li>Esaminare il diametro della punta affilata tungsteno frequentemente sotto lo stereomicroscopio fino a quando è bene abbastanza penetrare la cuticola di un sensillum olfattivo del palpo locusta (Figura 1B).</li>
		<li>Preparare le soluzioni di stimolo. Diluire ciascuna della sostanza stimolo chimico in olio minerale. Diluire 1 isoottanolo e acido nonanoico alle diluizioni di 10%. Diluire E-2-esenale ed esanale alle 10-2, 10-3, 10-4e 10-5.</li>
		<li>Preparare Pasteur tubi che trasportano gli stimoli: strisce di carta da filtro (lunghezza di 2 cm, larghezza di 0,5 cm) inserire i tubi di Pasteur, aggiungere le soluzioni di stimolo diluito (ogni 10 µ l) per le strisce di carta da filtro e quindi collegare i tubi di Pasteur con puntali per pipette (1 ml).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparare l'insetto
	<ol>
<li>Posteriore cavallette (Locusta migratoria) con piantine di grano fresco sotto condizioni di sovraffollamento presso un fotoperiodo di 18:6 h (luce: scuro), una temperatura di 28-30 ° C e un'umidità relativa del 60%. Scegli 1 di 3-giorno-vecchio 5th instar ninfe Locusta e rimuovere le antenne con forbice per evitare interferenze durante la registrazione.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparando il titolare palpo mascellare locusta
	<ol>
<li>Utilizzare una lastra di vetro (25 x 75 mm) come la base di fissaggio del palpo mascellare (MPH). Attaccare un pezzo di plastica (1 mm di altezza, 10 mm di larghezza, 35 mm di lunghezza) in un angolo del vetrino con nastro bi adesivo e infine fissare un vetro di copertura (18 x 18 mm) sopra il pezzo di plastica con nastro bi adesivo. Posto un piccolo pezzo di nastro di gomma rossa sul vetro di copertura come strato antiscivolo. Il pezzo di plastica e il vetro di copertura costituiscono la piattaforma per il palpo locusta. L'altezza della piattaforma è di circa 1,5 mm.</li>
		<li>Installare un filo di tungsteno (diametro di 0,125 mm, lunghezza di 36 mm) ad una distanza di 1,5 mm parallelo all'interno bordo della piattaforma. Fissare le due estremità del filo sulla piattaforma con nastro bi adesivo.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. preparazione dei palpi mascellari Locust
<ol><li>Tagliare una provetta da centrifuga (1,5 ml) verticalmente a metà e tagliare il fondo. Inserire la locusta nella provetta di preparati. Lasciare la regione ventrale e la testa della locusta esposta. Difficoltà l'Assemblea sul vetrino con nastro adesivo biadesivo (Figura 2A).</li>
	<li>Tirare il palpo mascellare sulla piattaforma.</li>
	<li>Mettere il filo di tungsteno al quarto segmento il palpo. Mettere massa adesiva su ciascun lato del filo di tungsteno, a circa 2 mm dal palpo mascellare (Figura 2A e 2B).</li>
</ol>3. single Sensillum registrazioni
<ol><li>Luogo la preparazione di palpo mascellare locusta sotto un microscopio a basso ingrandimento (100x). Regolare la posizione della preparazione fino a quando il palpo è perpendicolare all'elettrodo di registrazione (Figura 3A).</li>
	<li>Inserire l'elettrodo di riferimento (elettrodo di tungsteno) nell'occhiello locusta utilizzando un micromanipolatore. Spostare l'elettrodo di registrazione (elettrodo di tungsteno) vicino il palpo mascellare con il micromanipolatore (Figura 3B e 3C).</li>
	<li>Regolare il dispositivo di rilascio di odore a circa 1 cm dal palpo mascellare (Figura 3B).</li>
	<li>Aprire il software di registrazione Auto Spike 32. Impostare i parametri di registrazione come segue: la scala di registrazione su 500 µV; l'alto cutoff del filtro su 300 Hz, la frequenza di taglio basso su 200 Hz; e il pretrigger su 10 s.</li>
	<li>Collegare l'elettrodo di registrazione per un 10 x universale AC/DC amplificatore.</li>
	<li>Passare il microscopio ad un ingrandimento elevato (500 X). Inserire l'elettrodo di registrazione nella base di un sensillum basiconic sul palpo mascellare e regolare delicatamente l'elettrodo di registrazione per ottenere buone spontanee picchi (Figura 3D).</li>
	<li>Aprire il controller di stimolo per fornire un flusso continuo di aria a 20 ml/s. impostare il tempo di stimolazione di 1 s. segnali di Record per 10 s, a partire di 10 s prima dell'inizio dell'impulso dello stimolo.</li>
	<li>Utilizzare un amplificatore di AC/DC universale di 10x per amplificare i segnali. Portare i segnali nei 4 IDAC. Analizzare i segnali con il software Auto Spike 32. Segnali AC sono filtrati passa-banda tra 200 a 300 Hz. uso Auto Spike 32 per distinguere le ampiezze picco-valle dai rumori. Calcolare le risposte dei neuroni come l'aumento della frequenza di potenziale di azione (punte al secondo) sopra le frequenze spontanee. Eseguire un'analisi statistica usando GraphPad Prism 7.</li>
</ol>

<ol><li>Carey, A. F., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+olfaction+from+model+systems+to+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Insect olfaction from model systems to disease control.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (32), 12987-12995 (2011).</li>
<li>Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+reception+in+insects%3A+roles+of+receptors%2C+binding+proteins%2C+and+degrading+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes.</a> Annual Review of Entomology. 58, 373-391 (2013).</li>
<li>Zhang, J., Walker, W. B., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pheromone+reception+in+moths%3A+from+molecules+to+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Molecular+Biology+and+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Pheromone reception in moths: from molecules to behaviors.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 130, 109-128 (2015).</li>
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<li>Benton, R., Vannice, K. S., Gomez-Diaz, C., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+ionotropic+glutamate+receptors+as+chemosensory+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Variant ionotropic glutamate receptors as chemosensory receptors in Drosophila.</a> Cell. 136 (1), 149-162 (2009).</li>
<li>Vosshall, L. B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+architecture+of+smell+and+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Molecular architecture of smell and taste in Drosophila.</a> Annual Review of Neuroscience. 30, 505-533 (2007).</li>
<li>de Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Odor coding in the Drosophila antenna.</a> Neuron. 30, 537-552 (2001).</li>
<li>Roelofs, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+pheromone+production+and+perception+in+European+corn+borer+moths+is+determined+by+both+autosomal+and+sex-linked+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Sex pheromone production and perception in European corn borer moths is determined by both autosomal and sex-linked genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84 (21), 7585-7589 (1987).</li>
<li>Larsson, M. C., Leal, W. S., Hansson, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+receptor+neurons+detecting+plant+odours+and+male+volatiles+in+Anomala+cuprea+beetles+%28Coleoptera%3A+Scarabaeidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Olfactory receptor neurons detecting plant odours and male volatiles in Anomala cuprea beetles (Coleoptera: Scarabaeidae).</a> Journal of Insect Physiology. 47 (9), 1065-1076 (2001).</li>
<li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+alarm+pheromone+detection+in+aphids%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of alarm pheromone detection in aphids.</a> Current Biology. 27 (1), 55-61 (2017).</li>
<li>Cui, X., Wu, C., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+response+patterns+of+16+olfactory+neurons+from+the+trichoid+sensilla+to+odorant+from+fecal+volatiles+in+the+locust%2C+Locusta+migratoria+manilensis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Insect+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological response patterns of 16 olfactory neurons from the trichoid sensilla to odorant from fecal volatiles in the locust, Locusta migratoria manilensis.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 77 (2), 45-57 (2011).</li>
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<li>Ng, R., Lin, H. H., Wang, J. W., Su, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recording+from+Drosophila+trichoid+sensilla+in+response+to+odorants+of+low+volatility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recording from Drosophila trichoid sensilla in response to odorants of low volatility.</a> Journal of Visualized Experiments. 125, e56147(2017).</li>
<li>Syed, Z., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+measurements+from+a+moth+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological measurements from a moth olfactory system.</a> Journal of Visualized Experiments. 49, e2489(2011).</li>
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<li>Liu, F., Liu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+single+sensillum+recording+to+detect+olfactory+neuron+responses+of+bed+bugs+to+semiochemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Using single sensillum recording to detect olfactory neuron responses of bed bugs to semiochemicals.</a> Journal of Visualized Experiments. 107, e53337(2016).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Gli insetti si basano su palpi per rilevare gli odori degli alimenti, e loro palpi sono creduti per svolgere un ruolo importante nella speciazione13,27. I palpi sono semplici organi olfattivi e stanno ricevendo crescente attenzione come un modello interessante per l'esplorazione della neuromolecular reti sottostanti chemosensation28.
Insetto labellar e palpo SSRs sono stati effettuati con successo su Drosoph...

Gli animali si sono evoluti una gamma di chemosensory organi che percepiscono segnali chimici esogeni. In insetti, organi chemosensory più importanti sono le antenne e i palpi. Su questi organi, diversi tipi di peli chemosensory, chiamati sensilli chemosensory, sono innervati dai neuroni chemosensory (CSNs) entro i peli. CSNs in sensilli chemosensory riconoscere specifici segnali chimici attraverso la trasduzione del segnale da stimoli chimici a potenziali elettrici che vengono successivamente trasferiti fino al sistema nervoso centrale1,2,3 .
CSNs esprimere vari ricevitori chemosensory [ad es., odorant recettori (ORs)], recettori ionotropici recettori (IRs) e recettori gustativi (GRs) sulle loro membrane, che codificano spunti chimici esogeni associati alle varie forme di chemosensation 4,5,6. La caratterizzazione di CSNs è la chiave per la delucidazione dei meccanismi cellulari e molecolari dell'insetto chemorecezione. Ora sensillum singola registrazione (SSR) è una tecnica ampiamente utilizzata per la caratterizzazione di insetto CSNs in sensilli antennali di molti insetti, tra cui mosche7, falene8, coleotteri9, afidi10, locuste11, e le formiche12. Tuttavia, pochi studi hanno applicato un SSR a insetto palpi13,14,15,16,17, perché le particolari strutture di loro sensilli fanno un registrazione elettrofisiologica difficile18.
Sciami di locuste (Orthoptera) è spesso causano di danni alle colture gravi e perdita economica19. I palpi sono creduti per svolgere un ruolo importante nella selezione cibo delle locuste20,21,22,23,24. Due tipi di sensilli chemosensory sono studiati da un microscopio elettronico a scansione (SEM). Di solito, 350 sensilli chaetica e 7-8 sensilli basiconica sono osservati su ogni cupola della locusta palpi18. Chaetica di sensilli sono sensilli gustativi che percepiscono segnali chimici non volatile, mentre sensilli basiconica avere una funzione olfattiva, rilevamento segnali chimici volatili.
Il palpi locusta, i diametri dei socket capelli i sensilli basiconica (ca. 12 µm), sono molto maggiori di quelli di sensilli chaetica (ca. 8 µm)18,25. La parete cuticolare del basiconica di sensilli sui palpi è molto più spessa di quella di sensilli antennali18. Inoltre, la cupola del palpo ha contenuto fluido all'interno di una cuticola altamente flessibile. Queste caratteristiche fanno sì che una penetrazione con un microelettrodo e un'acquisizione di segnali elettrofisiologici buoni è più difficile per sensilli antennali. In questa carta, un protocollo SSR dettagliato ed altamente efficace per locusta palpo sensilli basiconica è presentato con un video.

<table><tbody><tr><td>Filo di tungsteno</td><td>ADVENT</td><td>W559504</td><td>Utilizzato per realizzare l'elettrodo e fissare il palp</td></tr><tr><td>NaNO2</td><td>Sigma-aldrich</td><td>563218-25G</td><td>Utilizzato per affilare il filo di tungsteno</td></tr><tr><td>Alimentatore CA</td><td>Syntech</td><td>A2-70</td><td>Fornire la tensione nell'affilatura del filo di tungsteno</td></tr><tr><td>Stereoscopio</td><td>Motic</td><td>SMZ-163</td><td>Utilizzato per osservare il affilatura del filo di tungsteno</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus</td><td>W-51</td><td>Utilizzato per osservare i sensilli sul palpo mascellare della locusta</td></tr><tr><td>Controller intelligente di acquisizione dati</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td>Visualizzazione su schermo in tempo reale di tutti i segnali prima e durante la registrazione</td></tr><tr><td>Controllore di stimolo</td><td>Syntech</td><td>CS-55</td><td>Utilizzato per il controllo dell'applicazione di stimolo</td></tr><tr><td>Elettronico micromanipolatore</td><td>C.M.D.T</td><td>CFT-8301D</td><td>Utilizzato per il movimento minore dell'elettrodo di registrazione</td></tr><tr><td>Micromanipolatore</td><td>Narishige</td><td>MN-151</td><td>Utilizzato per il movimento minore dell'elettrodo di riferimento</td></tr><tr><td>EDIFIER</td><td>dell'altoparlante R101T06</td><td>Collegato con IDAC-4 e che fornisce il suono per il segnale</td><td></td></tr><tr><td>Base magnetica</td><td>PDOK</td><td>PD-101</td><td>Utilizzato per tenere l'elettrodo e il tubo di erogazione dello stimolo</td></tr><tr><td>Tavolo di isolamento dalle vibrazioni</td><td>TianHe</td><td>HAP-100-1208</td><td>Utilizzato per isolare le vibrazioni dall'apparecchiatura</td></tr><tr><td>Vetrino</td><td>CITOGLAS</td><td>ZBP-407</td><td>Utilizzato per realizzare la base per l'MPH</td></tr><tr><td>Blu-tack</td><td>Bostik</td><td>Blu-tack-45g</td><td>Fissaggio del filo di tungsteno</td></tr><tr><td>Tubo Pasteur</td><td>YARE</td><td>WITEG</td><td>Posizionamento della carta da filtro contenente stimoli soluzioni di stimolo</td></tr></tbody></table>

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Single Sensillum Recordings for Locust Palp Sensilla Basiconica

I palpi dell'apparato boccale locusta sono considerati organi gustativi convenzionali che svolgono un ruolo importante nella selezione di cibo di una locusta, soprattutto per il rilevamento dei segnali chimici non volatile attraverso sensilli chaetica (precedentemente denominato terminal sensilli o crestati sensilli). C'è ora aumentando la prova che questi palpi hanno anche una funzione olfattiva. Un recettore odorizzante (LmigOR2) e un odorant-binding protein (LmigOBP1) sono state localizzate nei neuroni e nelle cellule accessorio, rispettivamente, la basiconica di sensilli dei palpi. Single sensillum (SSR) di registrazione utilizzato per registrare le risposte dei neuroni odorant, che è un metodo efficace per lo screening di ligandi attivi sui recettori specifici odoranti. SSR è utilizzata negli studi funzionali dei recettori odorant in sensilli palpo. La struttura del basiconica di sensilli situato sulla cupola dei palpi differisce da piuttosto dalla struttura di quelli sulla antenne. Di conseguenza, quando si esegue un SSR suscitato da odoranti, qualche consiglio specifico può essere utile per ottenere risultati ottimali. In questa carta, è stato introdotto un protocollo dettagliato e altamente efficace per un relè SSR da insetto palpo sensilli basiconica.

Due sottotipi di sensilli (pb1 e pb2) sul palpo mascellare locuste vengono identificati in base a dinamiche di risposta diversa per chimica odoranti (isoottanolo 1 10% e 10% acido nonanoico). I neuroni in pb1 producono picchi significativamente più di 1-isoottanolo rispetto ad acido nonanoico mentre i neuroni in pb2 sono significativamente che meno attivata da 1 isoottanolo rispetto ad acido nonanoico (Figura 4). Esanale ed E-2-esenale può evocare un palpo lo...

Questo articolo descrive un protocollo dettagliato ed altamente efficace per le registrazioni di single sensillum dalla basiconica di sensilli sul palpi dell'apparato boccale degli insetti.

Sensillum singole registrazioni per Locust Palp sensilli Basiconica

The palps of locust mouthparts are considered to be conventional gustatory organs that play an important role in a locust&#39;s food selection, especially ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di introdurre un protocollo dettagliato e altamente efficace per effettuare registrazioni di singoli sensilli da palpi di insetti Sensilla Basiconica. Poiché padroneggiato può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della chemiorecezione della dissezione. Consentendo il recettore dell'odore specifico nei sensilli del palpo.Il vantaggio principale di questo è che utilizzare un registratore Sensilla Basiconia di robinia dei palpi. Per preparare gli elettrodi di tungsteno, collegare prima un nuovo filo di tungsteno in un micro manipolatore e osservarlo con un ingrandimento di 40 volte. Ora affila il filo erogando 10 volt mentre usi una siringa per applicare il nitrito di sodio al 10%.Quindi ridurre la potenza a cinque volt e immergere ripetutamente quattro millimetri del filo affilato in una soluzione di nitrito di sodio. Quando è in uso, la punta deve essere abbastanza sottile da penetrare la cuticola di un palpo di locusta sensillo olfattivo. Quindi, prepara le soluzioni di stimolo.Diluire ciascuna delle sostanze di stimolo chimico in olio minerale. Effettuare diluizioni del 10% di 1-Nonanol e acido nonanoico in olio minerale. Quindi fare una serie di diluizioni seriali di dieci volte di E-2-esenale ed esanale in olio minerale.Successivamente, prepara i tubi Pasteur carichi di stimoli. Inserire le strisce di carta da filtro nelle provette e aggiungere 10 microlitri di soluzioni di stimolo diluite alle strisce di carta da filtro. Quindi tappare le provette con puntali per pipette da un millilitro.Dalle registrazioni ricavare un supporto per palpi mascellari di locusta da un vetrino, un pezzo di plastica, un vetrino coprioggetti e nastro biadesivo e nastro di gomma. Attacca il pezzo di plastica a un angolo del vetrino usando del nastro biadesivo, quindi usa un altro pezzo di nastro adesivo per attaccare il vetrino coprioggetti al pezzo di plastica. Quindi attacca un piccolo pezzo di nastro di gomma rossa sul vetro di copertura per renderlo una superficie antiscivolo.Quindi, usando il nastro, attacca un filo di tungsteno a 1,5 millimetri parallelo al bordo interno della piattaforma e fissa entrambe le estremità del filo sulla piattaforma. Questo completa il supporto. Allevare la robinia su piantine di grano fresco e al 60% di umidità da 28 a 30 gradi Celsius e con un ciclo di luce di 18 ore.Per raccogliere l'antenna, selezionare le ninfe di locuste di quinto stadio di un giorno o di tre giorni. Rimuovere l'antenna utilizzando delle forbici sottili in modo che non possano interferire con la registrazione. Per fissare la locusta utilizzare un tubo da 1,5 millimetri tagliato in 1/2 verticalmente.Lasciare esposta la regione ventrale e la testa della locusta. Quindi fissare la robinia e il tubo al vetrino con del nastro biadesivo. Quindi estrarre il palpo mascellare destro e posizionarlo sulla piattaforma.Metti il filo di tungsteno al quarto segmento del palpo. Ora circonda il filo di tungsteno con stucco Taft blu a circa due millimetri dal palpo mascellare. È fondamentale per impostare nel modo più corretto la piattaforma con un supporto per palpo mascellare di locusta di un centimetro e utilizzare il filo di tungsteno per comprendere i quattro segmenti o il palpo.Ora osservate la preparazione con un ingrandimento del 100% e posizionate il palpo perpendicolarmente all'elettrodo di registrazione. Successivamente, utilizzando un micromanipolatore, inserire un elettrodo di riferimento in tungsteno nell'occhio di locuste. Quindi spostare l'elettrodo di registrazione vicino al palpo mascellare.Quindi posizionare il dispositivo di erogazione degli odori a circa un centimetro dal palpo mascellare. Ora apri il software di registrazione e imposta i parametri di registrazione. Per la scala di registrazione utilizzare 500 microvolt.Per l'alto taglio del filtro utilizzare 300 hertz. Impostare il taglio dei bassi su 200 hertz e impostare il pre-trigger su 10 secondi. A questo punto passare il microscopio ad un ingrandimento elevato e inserire l'elettrodo di registrazione nella base di un sensillum basale sul palpo mascellare.Quindi regolare delicatamente l'elettrodo di registrazione per ottenere buoni picchi spontanei. È molto importante che l'elettrodo di registrazione penetri nella base del sensillum e che una volta entrato nel sensillum vengano preparati. Ora apri il controller dello stimolo per fornire un flusso d'aria continuo a 20 millimetri al secondo.Successivamente, impostare il tempo di stimolazione su un secondo e registrare i segnali per 10 secondi a partire da 10 secondi prima dell'inizio dell'impulso di stimolo. Ora raccogli i dati. Due sottotipi di sensilli sul palpo mascellare della locusta erano distinguibili in base alla loro dinamica di risposta agli stimolanti chimici 1-Nonanol e acido nonanoico.Gli odoranti Hexanal ed E-2-Hexanal presenti naturalmente nelle fonti alimentari possono evocare una risposta di apertura del palpo di locuste. In risposta, i neuroni E-2-Hexanal pb1 hanno potenziali d'azione più lunghi. Confrontando le variazioni medie dello spiking durante i cinque secondi prima della stimolazione con i cinque secondi dopo la stimolazione si nota che la risposta all'1-Nonanol è significativamente più alta dell'acido nonanoico nei neuroni pb1.E il contrario è vero per i neuroni pb2. Anche la risposta di questi neuroni all'E-2-esenale e all'esanale è dose-dipendente. I due tipi di neuroni hanno un diverso modello di risposta alla dose rispetto all'E-2-esenale, ma la risposta all'esanale è per lo più la stessa.Dopo aver visto questo video dovresti avere una buona comprensione di come eseguire la registrazione altamente efficace del singolo sensilla sul palpo di locuste Sensilla Basonica. Una volta padroneggiata, la tecnica può essere eseguita se eseguita correttamente. Quando si tenta questa procedura è importante che il tubo del palpo venga inserito nella base del sensillo da quando l'elettrodo di registrazione viene inserito.Dopo questo sviluppo ha aperto la strada alla ricerca nel campo della fisiologia degli insetti e ai meccanismi cellulari dell'olfatto incellulare nell'apparato boccale.

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Risposte elettrofisiologiche dei neuroni sensoriali olfattivi di odori può essere misurata in insetti utilizzando registrazioni sensillum singolo. In questo articolo il video ci mostrerà come eseguire registrazioni sensillum singolo nelle antenne del moscerino della frutta...

Registrazioni Sensillum singolo in Insetti Drosophila melanogaster E Anopheles gambiae</em

Sistemi olfattivi degli insetti offrono opportunità uniche per la registrazione di odorizzante-indotto risposte nelle forme di electroantennograms (EAG) e le registrazioni sensillum singolo (SSR), che vengono sommati risposte da tutti i neuroni olfattivi (ORNs) situato sulla antenna e da quelli alloggiati in singole sensilli, rispettivamente.

Le misurazioni elettrofisiologiche da un sistema olfattivo Moth

Questo articolo descrive un metodo per isolare elettrofisiologico stimolazione chimica per i singoli sensilli via extracellulare, in punta di registrazioni in olio minerale.

Elettrofisiologia di Scorpion Peg sensilli

In questo video, una mosca di Drosophila viva è montata in un tubo per studi elettrofisiologici. Gli elettrodi sono posizionati alla base del sensillum per registrare specifiche risposte neuronali ai feromoni con i neuroni del recettore olfattivo della mosca.

Registrazioni elettrofisiologiche da Drosophila sensilla in risposta a odori volatili

Dimostriamo variazioni del extracellulare più unità tecnica di registrazione per la caratterizzazione degli odori-risposte evocate nelle prime tre fasi del percorso olfattivo invertebrati. Queste tecniche possono essere facilmente adattati per esaminare l'attività ensemble in altri sistemi neuronali pure.

Multi-unit Metodi di registrazione per caratterizzare l&#39;attività neurale nel Locust (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) Circuiti olfattive

Questo protocollo descrive registrazione extracellulare delle possibili azioni di risposta sparati dai neuroni del gusto labellar in Drosophila.

Elettrofisiologici Registrazione da<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Taste Sensilla

Le cimici dei letti si affidano ai neuroni recettori olfattivi alloggiati nei loro sensilli olfattivi antennali per rilevare le sostanze semiochimiche nell'ambiente. Utilizzando la registrazione di un singolo sensillo, dimostriamo un metodo per valutare la risposta delle cimici dei letti alle semiosostanze chimiche ed esploriamo il processo di codifica coinvolto.

Utilizzando Sensillum singolo controllo per rilevare olfattiva Neuron Risposte di cimici a semiochimici

Questo articolo descrive un protocollo dettagliato e altamente efficace di ibridazione in RNA in situ , in particolare per i geni espressi a basso livello del recettore dell'Odorant (OR), così come altri geni, nelle antenne degli insetti utilizzando digoxigenina (DIG) o sonde con biotina.

Localizzazione dei geni del recettore degli odoranti nell&#39;antenna di Locust da RNA<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di dimostrare come presentare gli odoranti a bassa volatilità per la registrazione singolo-sensillare da parte dei neuroni del recettore olfattivo Drosophila che rispondono ai feromoni cuticolari a catena lunga.

Registrazione elettrofisiologica da<em&gt; Drosophila</em&gt; Senso Trichoide in risposta a Odoranti di bassa volatilità

Per osservare l'ultrastruttura della sensilla degli insetti, nello studio è stata presentata la microscopia elettronica di scansione e trasmissione (rispettivamente SEM e TEM). Tween 20 è stato aggiunto nel fissativo per evitare la deformazione del campione nella microscopia seM.

Esempio di metodo di preparazione del microscopio elettronico di scansione e trasmissione per le appendici di Woodboring Beetle

Un metodo di registrazione elettrofisiologica raramente utilizzato, la registrazione di base, consente l'analisi di caratteristiche della codifica del gusto che non possono essere esaminate con i metodi di registrazione convenzionali. La registrazione delle basi consente anche l'analisi delle risposte gustative a stimoli idrofobici che non possono essere studiati con metodi elettrofisiologici tradizionali.

Registrazione di base: una tecnica per analizzare le risposte dei neuroni del gusto in Drosophila

Scopri la registrazione da singolo sensillo sui sensilla basiconica delle palpe di locusta. Questo metodo elettrofisiologico rivela i pattern di risposta neuronale agli stimoli odorosi in neuroscienza.

Sensillum singole registrazioni per Locust Palp sensilli Basiconica

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