Name: Citometria di flusso di database-Guida per la valutazione della maturazione delle cellule mieloidi del midollo osseo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 5 s
Description: Impara la citometria di flusso multiparametrica per diagnosticare le sindromi mielodisplastiche con maggiore precisione. Questo metodo riduce la soggettività dell'analisi e permette di quantificare le differenze nelle popolazioni cellulari mieloidi.

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Gli anticorpi utilizzati in questo studio sono stati forniti da BD Biosciences. Gli autori vorrei ringraziare loro collega, Dr. Pascale Flandrin-Gresta, dal dipartimento di biologia molecolare, laboratorio di ematologia, Università ospedale di Saint-Etienne, Francia, che hanno fornito le competenze per l'interpretazione di dati NGS per la seconda Caso MDS. Gli autori sono grati per gli ematologi clinico per il loro interesse e la partecipazione a questo studio e per i pazienti e donatori sani per il loro accordo partecipare a questo studio. Gli autori inoltre ringraziare la Fondazione di "Les Amis de Rémi" per il sostegno finanziario per la pubblicazione.

<ol><li>Orfao, A., Ortuño, F., de Santiago, M., Lopez, A., San Miguel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotyping+of+Acute+Leukemias+and+Myelodysplastic+Syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Immunophenotyping of Acute Leukemias and Myelodysplastic Syndromes.</a> Cytometry Part A. 58, 62-71 (2004).</li>
<li>Porwit, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24919805">Revisiting guidelines for integration of flow cytometry results in the WHO classification of Myelodysplastic Syndromes - proposal from the International/European LeukemiaNet Working Group for Flow Cytometry in MDS (IMDSFlow).</a> Leukemia. 28 (9), 1793-1798 (2014).</li>
<li>Westers, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implementation+of+flow+cytometry+in+the+diagnostic+work-up+of+myelodysplastic+syndromes+in+a+multicenter+approach%3A+Report+from+the+Dutch+Working+Party+on+Flow+Cytometry+in+MDS%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+Research%22%5BJournal%5D)">Implementation of flow cytometry in the diagnostic work-up of myelodysplastic syndromes in a multicenter approach: Report from the Dutch Working Party on Flow Cytometry in MDS.</a> Leukemia Research. 36, 422-430 (2012).</li>
<li>Meehan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AutoGate%3A+automating+analysis+of+flow+cytometry+data%5BTitle%5D)+AND+%22Immunologic+Research%22%5BJournal%5D)">AutoGate: automating analysis of flow cytometry data.</a> Immunologic Research. 58, 218-223 (2014).</li>
<li>Greenberg, P. L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21233243">NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: myelodysplastic syndromes.</a> Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 9, 30-56 (2011).</li>
<li>Greenberg, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelodysplastic+Syndromes%2C+Version+2.2017%2C+Clinical+Practice+Guidelines+in+Oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Comprehensive+Cancer+Network%22%5BJournal%5D)">Myelodysplastic Syndromes, Version 2.2017, Clinical Practice Guidelines in Oncology.</a> Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 15, (2017).</li>
<li><a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Classification-Tumours-Haematopoietic-Lymphoid-Tissues/dp/928324494X">WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Revised 4th Edition</a>. Swerdlow, S. H., et al. (2), IARC Press. Lyon, France. 86-128 (2017).</li>
<li>https://lists.purdue.edu/pipermail/cytometry/2009-March/036889.html. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://lists.purdue.edu/pipermail/cytometry/2009-March/036889.html">https://lists.purdue.edu/pipermail/cytometry/2009-March/036889.html</a> (2018).</li>
<li><a target="_blank" href="NULL">Composition of EuroFlow panels and technical information on reagents Version 1.5</a>. , (2017).</li>
<li><a target="_blank" href="NULL">EuroFlow Standard Operating Procedure (SOP) for sample preparation and staining Version 1.2.1</a>. , (2015).</li>
<li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26, 1986-2010 (2012).</li>
<li>http;//www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-flow-cytometry/reagents/antibodies-and-dyes/recombinant-antibodies.aspx. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http;//www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-flow-cytometry/reagents/antibodies-and-dyes/recombinant-antibodies.aspx">http;//www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-flow-cytometry/reagents/antibodies-and-dyes/recombinant-antibodies.aspx</a> (2018).</li>
<li>van Dongen, J. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+antibody+panels+for+standardized+n-dimensional+flow+cytometric+immunophenotyping+of+normal%2C+reactive+and+malignant+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes.</a> Leukemia. 26, 1908-1975 (2012).</li>
<li>Matarraz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+the+Diagnosis+and+Classification+of+Monocytic-Lineage+Leukemias+by+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+B+%28Clinical+Cytometry%29%22%5BJournal%5D)">Introduction to the Diagnosis and Classification of Monocytic-Lineage Leukemias by Flow Cytometry.</a> Cytometry Part B (Clinical Cytometry). 92 (3), 218-227 (2015).</li>
<li>Westers, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotypic+analysis+of+erythroid+dysplasia+in+myelodysplastic+syndromes.+A+report+from+the+IMDSFlow+working+group%29%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Immunophenotypic analysis of erythroid dysplasia in myelodysplastic syndromes. A report from the IMDSFlow working group).</a> Haematologica. 102, 308-319 (2017).</li>
<li>Shen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+immunophenotypic+findings+in+chronic+myelomonocytic+leukemia+and+its+utility+in+monitoring+treatment+response%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry immunophenotypic findings in chronic myelomonocytic leukemia and its utility in monitoring treatment response.</a> European Journal of Haematology. 95, 168-176 (2015).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari. Il dipartimento di citometria a flusso, il laboratorio di Ematologia presso l'ospedale universitario di Saint-Etienne è un membro del Consorzio EuroFlow.

La qualità dell'aspirato BM poteva avere un impatto sui risultati finali. L'emodiluizione dell'aspirato BM potrebbe distorcere la distribuzione delle cellule in diversi stadi di maturazione a causa dell'assenza dei progenitori o precursori cellule. Probabilmente che impiegano un metodo di lisi di massa può aiutare nella normalizzazione del BM aspira per hemodilution in analisi cytometric di flusso. Inoltre, i passaggi critici per la valutazione di displasia mieloide BM di citometria a flusso sono l'esempio di elaborazion...

In assenza di marcatori fenotipici specifici per i cambiamenti dysplastic che si verificano nelle cellule mieloidi durante MDS iniziazione e progressione, un nuovo approccio è stato proposto negli ultimi anni sulla base della valutazione delle vie di maturazione (alterata espressione di gli antigeni mieloidi durante la produzione di cellule mieloidi mature) o della distribuzione anomala di tipi differenti delle cellule all'interno del midollo osseo (BM) delle cellule scomparti1,2.
Questo articolo presenta un metodo nuovo per applicazione standardizzata di MFC al fine di rilevare i cambiamenti dysplastic in compartimenti delle cellule mieloidi BM correlati a sindromi mielodisplastiche (MDS) o altre malattie ematologiche mieloidi. Questo studio inoltre mostra l'utilità dell'utilizzo di database di maturazione per l'analisi dei dati MFC.
Standardizzazione della procedura di preparazione del campione, acquisizione dati e analisi utilizzando i database consentirebbe l'identificazione delle anomalie fenotipiche più rilevanti legate a cambiamenti dysplastic in cellule mieloidi BM. Pertanto, sono necessari per lo sviluppo di una strategia di analisi che può essere utilizzata in successive analisi statisticamente selezionati sottogruppi basati su formati ben identificati e incontestati (dot grafici, istogrammi e diagrammi separatore automatico di popolazione (APS)) Arrotonda. La scoperta di anomalie fenotipiche robuste in MDS faciliterebbe la diagnosi nei casi con o senza displasia morfologica minima e senza aberrancies citogenetica. Identificazione dei parametri discriminanti consentendo la riduzione di immunophenotypic pannelli può semplificare l'attuale punteggi2, permettendo loro applicabilità nei laboratori di patologia clinica.
Questo metodo limita le interpretazioni soggettive dei dati cytometry, come è stato segnalato in MDS diagnosi3. Questo passaggio è un prerequisito per lo sviluppo di strumenti automatizzati per l'elaborazione e l'analisi di flusso dati4.
MDS comprende un gruppo eterogeneo di disordini clonali di cellule staminali ematopoietiche (HSC) in cui le mutazioni spliceosoma cooperano con modificatori epigenetici specifici per produrre il fenotipo MDS. È ormai noto che, insieme con le mutazioni di HSC, altri meccanismi sono coinvolti nella fisiopatologia MDS, come aberrante infiammazione immune-mediata e interazioni tra HSCs maligno ed il microambiente stromale del BM. Tuttavia, questi meccanismi rimangono poco compresi. L'eterogeneità larga clinico e biologico di MDS rende la diagnosi e la selezione della terapia ottima di una sfida. Nell'ultimo decennio, gli studi multipli hanno indicato che MFC è spesso più sensibile nel rilevare displasia2 rispetto alla morfologia, ma i vincoli tecnici ed economici rendono questa tecnica difficile da standardizzare, con risultati spesso dipende il Esperienza di interprete3. Inoltre, non è chiaro come MFC può pendere la bilancia verso MDS in casi con o senza displasia morfologica minima e in assenza di anomalie citogenetiche o in casi limite come hypocellular MDS, con un conteggio basso blast, da altri non-clonale BM disturbi come guasto del midollo osseo (cioè., anemia aplastica). Inoltre rimane difficile da differenziare i casi limite di MDS con un eccesso di scoppi dalla leucemia mieloide acuta (AML). Per tutti questi motivi, le linee guida cliniche non integrano MFC test nella diagnosi finale di MDS. Nel 2011, US nazionale completa Cancer Network (NCCN) consigliato MFC per la stima della percentuale di cellule CD34 +, rilevamento dei cloni di emoglobinuria parossistica notturna e la presenza di cloni di cellula T citotossici in hypocellular MDS5. Queste due situazioni di quest'ultime comportano anche un obiettivo terapeutico poiché dati clinici hanno dimostrato una buona risposta di questi pazienti alla terapia immunosopressiva6. Linee guida NCCN 2017, citando le raccomandazioni dell'International Working Group (IWG), elencati aberrante immunophenotyping rilevamento da MFC tra i co-criteri per la diagnosi MDS, ma senza fare alcun specifiche6. Inoltre, la classificazione del WHO pubblicata di recente stipula che MFC risultati da soli non sono sufficienti per stabilire una diagnosi primaria di MDS in assenza di dati morfologici e/o citogenetica conclusivi7. Tuttavia, MFC può essere utilizzato come un ulteriore test mostrano la disregolazione della cellula mieloide maturazione modelli e quantificare la "distanza dal normale" per un paziente in un momento specifico nel corso della malattia.
Questo metodo è applicabile a laboratori clinici interessati nella valutazione della displasia nelle cellule mieloidi BM usando MFC immunophenotyping, al fine di perfezionare la diagnosi in MDS o altri disordini mieloidi con anomalie dysplastic.

<table><tbody><tr><td>BD FACSCantometro a flusso II</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>SN:</td><td>V33896301336 3 laser, configurazione 4-2-2, Filtri e specchi dettagli: https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSCanto_II_FilterGuide.pdf</td></tr><tr><td>Awel C48-R Centrifuga</td><td>AWEL Industries, FR</td><td>SN: 910120016; Modello n.: 320002001</td><td>centrifughe a bassa velocità; capacità 60 provette FACS</td></tr><tr><td>Pipette da 10&micro; L e 200&micro; </td><td></td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>Pasteur pipette</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL Provette Falcon provette</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>in polipropilene per FACS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Topo Anti-Umano HLA-DR</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>655874</td><td>clone L243 Topo BALB/c IgG2a, &kappa; Fluorochrome Horizon V450 (Ex max 404 nm/ Em max 448 nm)</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Human CD45</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>560777</td><td>clone HI30 Mouse IgG1, &kappa; Fluorochrome Horizon V500 (Ex max 415 nm/ Em max 500 nm)</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Human CD16</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656146</td><td>clone CLB/fcGran1 Mouse BALB/c IgG2a, &kappa; fluorocromo FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>Topo anti-umano CD13</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>347406</td><td>clone L138 Topo BALB/c X C57BL/6 IgG1, &kappa; Fluorocromo PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Topo Anti-Umano CD34</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>347222</td><td>clone 8G12 Topo BALB/c IgG1, &kappa; Fluorocromo PerCP-Cy5.5 (Ex max 482 nm/ Em max 678 nm)</td></tr><tr><td>Topo Anti-Umano CD117</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>339217</td><td>clone 104D2 Topo BALB/c IgG1 Fluorocromo PE-Cy7 (Ex max 496 nm/ Em max 785 nm)</td></tr><tr><td>Topo Anti-Umano CD11b</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>333143</td><td>clone D12 Topo BALB/c IgG2a, &kappa; D12, fluorocromo APC (Ex max 650 nm/ Em max 660nm</td></tr><tr><td>Topo Anti-Umano CD10</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>646783</td><td>clone HI10A Topo BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>Topo anti-umano CD35</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>555452</td><td>clone E11 IgG1 di topo, &kappa; Fluorocromo FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>Topo anti-umano CD64</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>644385</td><td>clone 10.1 Topo BALB/c IgG1, &kappa; Fluorocromo PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Clone di topo anti-umano CD300e</td><td>Immunostep</td><td>IREM2A-T100</td><td>UP-H2 Topo BALB/c IgG1, k Fluorochrome APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Topo anti-umano CD14</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>641394</td><td>clone MoP9 Topo BALB/c IgG2b, &kappa; Fluorocromo APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>Topo anti-umano CD36</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656151</td><td>clone CLB-IVC7 IgG1 di topo, &kappa; fluorocromo FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>Topo anti-umano CD105</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>560839</td><td>clone 266 Topo BALB/c IgG1, &kappa; Fluorocromo PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Topo Anti-Umano CD33</td><td></td><td>345800</td><td>clone P67.6 Topo BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Topo anti-umano CD71</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>655408</td><td>clone M-A712 Topo BALB/c IgG2a, &kappa; Fluorocromo APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>Soluzione di lisi 10x concentrato (IVD)</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>349202</td><td></td></tr><tr><td>FACSFlow Sheath Fluid</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>FACSDiva CS& Perline T IVD</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656046</td><td></td></tr><tr><td>PARTICELLE DI CALIBRAZIONE ARCOBALENO, 8 PICCHI</td><td>Cytognos, Salamanca, Spagna</td><td>SPH-RCP-30-5A</td><td>lotti EAB01, EAC01, EAD05, EAE01, EAF01, EAG01, EAH01, EAI01, EAJ01, EAK01</td></tr><tr><td>Particelle di compensazione Multicolor CompBeads(CE/IVD)</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>rif. #51-90-9001229 + #51-90-9001291</td><td></td></tr><tr><td>Versioni software Diva 6.1.2 e 6.1.3</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Compresse saline tamponate con fosfato</td><td>R& D Systems, Minneapolis, USA</td><td>5564</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina&nbsp;( BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, Francia</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Sodio azide 99%</td><td>Sigma-Aldrich, Francia</td><td>199931</td><td></td></tr><tr><td>Infinicyt versione software 1.8.0.e</td><td>Cytognos, Salamanca, Spagna</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

citometria di flusso di database-guida per la valutazione della maturazione delle cellule mieloidi del midollo osseo

Database-guided Flow-cytometry for Evaluation of Bone Marrow Myeloid Cell Maturation

Un gruppo di lavoro avviato entro l'associazione di Cytometry francese (AFC) è stato sviluppato al fine di armonizzare l'applicazione della citometria a flusso multiparametrica (MFC) per la diagnosi di malattia mieloide in Francia. Il protocollo presentato qui è stato concordato e applicata tra settembre 2013 e novembre 2015 in sei laboratori diagnostici francesi (ospedali dell'Università di Saint-Etienne, Grenoble, Clermont-Ferrand, Nizza e Lille e Institut Paoli-Calmettes in Marsiglia) e ha permesso la standardizzazione dell'acquisizione di dati e preparazione del campione del midollo osseo. Tre database di maturazione sono stati sviluppati per neutrofilo, monocytic e stirpi degli eritrociti con midollo osseo da individui "sani" donatore (individui senza alcuna prova di una malattia ematopoietica). Un metodo affidabile di analisi per ogni linea mieloide dovrebbe essere applicabile per uso diagnostico sistematico. Nuovi casi possono essere analizzati nello stesso modo e confrontati con i database di solito. Così, le anomalie fenotipiche quantitative e qualitative possono essere identificate e quelli sopra 2SD rispetto ai dati dei campioni di midollo osseo normale dovrebbe essere considerate indicative di patologia. La maggiore limitazione è la maggiore variabilità tra i dati ottenuti utilizzando gli anticorpi monoclonali ottenuti con i metodi basati su tecnologie di ibridoma e attualmente utilizzati nella diagnosi clinica. L'impostazione di criteri per la validazione tecnica dei dati acquisiti possono contribuire a migliorare l'utilità di MFC per la diagnostica MDS. La definizione di questi criteri richiede analisi in un database. La riduzione della soggettività investigatore nell'analisi dei dati è un importante vantaggio di questo metodo.

I 54 campioni di BM raccolti in K-EDTA anticoagulante sono stati inclusi nello studio. In assenza di tutte le informazioni sui pazienti sono stati analizzati i dati MFC. Studio retrospettivo hanno dimostrato che i campioni di BM erano 7 donatori sani (5 maschi e 2 femmine con un'età mediana di 47,4 [35-48], 11 individui senza prova di una malattia ematopoietica (8 maschi e 3 femmine con un'età mediana di 57,9 [35-72]) e 36 casi con varie condizioni patologiche: 1 caso con l'anemia e il l...

La diagnosi MDS è difficile in assenza di criteri morfologici o citogenetica non informativo. MFC potrebbe contribuire ad affinare il processo diagnostico MDS. Per diventare utile per la pratica clinica, l'analisi MFC deve basarsi su parametri con sufficiente sensibilità e specificità, e i dati devono essere riproducibili tra operatori diversi.

Citometria di flusso di database-Guida per la valutazione della maturazione delle cellule mieloidi del midollo osseo

A working group initiated within the French Cytometry Association (AFC) was developed in order to harmonize the application of multiparameter flow ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella diagnosi di malattie mieloidi come sindromi mielodisplasia o altre malattie ematologiche che si evolvono con anomalie di maturazione nei lignaggi delle cellule mieloidi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che riduce la soggettività dello sperimentatore in tale analisi e interpretazione. Questo metodo può fornire informazioni su quali sono i parametri più discriminatori per la mielodisplasia.Permette la quantificazione delle differenze rispetto alle normali popolazioni di cellule mieloidi. A dimostrare la procedura sarà Tiphanie Picot, una borsista post-dottorato del nostro laboratorio. Iniziare mescolando 600 microlitri del campione di cellule primarie con 10 millilitri di tampone di lavaggio in un tubo conico da 15 millilitri per due centrifugazioni e 10 millilitri di tampone di lavaggio fresco per lavaggio.Dopo il secondo lavaggio, sospendere nuovamente il pellet in 400 microlitri di tampone di lavaggio fresco e trasferire 350 microlitri della sospensione cellulare in un tubo FACS in polipropilene a cinque millilitri, contenente l'intero pannello di anticorpi dorsali. Dopo aver accuratamente miscelato le cellu

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La colonia di cellule che formano (CFC) test è un test in vitro in cui progenitori emopoietici formare colonie in terreno semisolido. Una combinazione di morfologia delle colonie, la morfologia delle cellule, e citometria a flusso sono utilizzati per valutare la capacità dei progenitori di proliferare e differenziarsi lungo le varie linee ematopoietiche.

Formanti colonia cellulare (CFC) Analisi per cellule emopoietiche

Mentre i macrofagi infiltranti vengono reclutati continuamente nei tessuti adulti da precursori circolanti, i macrofagi residenti seminano il loro tessuto durante lo sviluppo, dove vengono mantenuti senza ulteriori input da progenitori. I progenitori per i macrofagi residenti sono stati recentemente identificati. Qui presentiamo metodi per la mappatura genetica dei fenomeni genetici dei progenitori macrofagi.

Identificazione di progenitori eritromieloidi e loro progenie nell&#39;embrione del mouse dalla citometria del flusso

Rilevazione della malattia residua minima o misurabile (MRD) è un biomarcatore prognostico importante per raffinazione di valutazione del rischio e la previsione di ricaduta in leucemia mieloide acuta (AML). Queste linee guida complete e consigli con le migliori pratiche di coerente e accurata individuazione e rilevazione del MRD, può essere di aiuto nel prendere le decisioni efficace trattamento di AML.

Protocollo completo del campione e del midollo osseo di processo per misurare la malattia residua misurabile e cellule staminali leucemiche nella leucemia mieloide acuta

Descriviamo un protocollo per rilevare l'espressione simultanea di marcatori di cellule staminali leucemia sulle cellule di leucemia mieloide acuta primaria tramite flusso cytometry. Vi mostriamo come quantificare tre popolazioni di cellule progenitrici e una popolazione di LSC putativa con crescente grado di maturazione. Abbiamo confermato la presenza di queste popolazioni in corrispondente paziente-derivato-xenotrapianti.

Il flusso Cytometry per stimare cellule staminali leucemia nella leucemia mieloide acuta primaria e negli xenotrapianti paziente-derivato, alla diagnosi ed al Follow Up

Descriviamo qui una semplice analisi dell'eterogeneità del compartimento delle cellule B immunitarie murine nel peritoneo, nella milza e nei tessuti del midollo osseo mediante citometria a flusso. Il protocollo può essere adattato ed esteso ad altri tessuti di topo.

Caratterizzazione citometrica a flusso dello sviluppo delle cellule B murine

Qui, descriviamo un semplice protocollo per l'isolamento e la colorazione delle cellule del midollo osseo murino al fenotipo delle cellule staminali emopoietiche e progenitrici insieme alle cellule staminali endoteliali e mesenchimali di nicchia di supporto. È incluso anche un metodo per arricchire le cellule situate nelle aree endostali e centrali del midollo osseo.

Analisi citometrica a flusso di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche del midollo osseo murino e cellule di nicchia stromale

Qui viene presentata una tecnica basata sulla citometria a flusso che consente di misurare simultaneamente il numero di divisioni cellulari, il fenotipo cellulare di superficie e la parentela cellulare. Queste proprietà possono essere testate statisticamente utilizzando un framework basato sulla permutazione.

Valutazione simultanea di parentela, numero di divisione e fenotipo tramite citometria a flusso per cellule staminali e progenitrici ematopoietiche

Qui viene presentato un protocollo dettagliato per isolare e caratterizzare le popolazioni microambientali del midollo osseo da modelli murini di sindromi mielodisplastiche e leucemia mieloide acuta. Questa tecnica identifica i cambiamenti nella nicchia del midollo osseo non ematopoietico, comprese le cellule stromali endoteliali e mesenchimali, con progressione della malattia.

Identificazione delle popolazioni microambientali del midollo osseo nella sindrome mielodisplastica e nella leucemia mieloide acuta

Il presente protocollo descrive un metodo economico per purificare, espandere e caratterizzare cellule staminali mesenchimali (BMSC) altamente omogenee del midollo osseo dai topi. Questo approccio facilita l'acquisizione di grandi quantità di BMSC con un elevato potenziale di proliferazione e differenziazione, supportando i modelli murini e facendo progredire la ricerca preclinica.

Fenotipizzazione basata sulla purificazione, espansione e citometria a flusso di cellule staminali mesenchimali del midollo osseo derivate dal topo

Questo è un metodo rapido e completo di immunofenotipizzazione cellule derivate mieloidi soppressore (MDSC) e arricchimento...

Preparazione di cellule derivate mieloidi soppressore (MDSC) da Naive e Pancreatiche topi affetti da tumore in citometria a flusso e di smistamento automatico magnetico cellulare Attivato (AutoMACS)

Impara la citometria di flusso multiparametrica per diagnosticare le sindromi mielodisplastiche con maggiore precisione. Questo metodo riduce la soggettività dell'analisi e permette di quantificare le differenze nelle popolazioni cellulari mieloidi.

Citometria di flusso di database-Guida per la valutazione della maturazione delle cellule mieloidi del midollo osseo

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