Spettrometria di massa di foglia Spray: Una tecnica di ionizzazione ambiente rapido per valutare direttamente metaboliti dai tessuti vegetali

L'irrorazione fogliare MS è un metodo rapido per l'analisi qualitativa e semiquantitativa di tessuti vegetali intatti che ha un'ampia varietà di applicazioni. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il tessuto vegetale può essere analizzato direttamente senza praticamente alcuna preparazione del campione. Sebbene questo metodo fornisca buone informazioni sugli alcaloidi mesembrinici di Sceletium, può essere utilizzato anche per l'analisi di varie altre specie vegetali e sostanze chimiche esogene come i pesticidi.

Gli individui che non conoscono questo metodo possono trovarlo difficile perché è necessario ottimizzare il protocollo per ogni specie vegetale, tipo di tessuto e composto di interesse. Utilizzare una sorgente di nano spray modificata per l'irrorazione fogliare MS.As non sono necessari componenti fluidici per la MS di irrorazione fogliare, modificare la sorgente rimuovendo la sonda per cromatografia liquida dalla fonte. Il filo per spettrometria di massa spray fogliare che applicherà tensione al tessuto vegetale ha un perno che è stato saldato al filo su un'estremità e un morsetto che è stato saldato sull'altra estremità.

Se il sistema è stato utilizzato di recente, lasciarlo raffreddare al tatto prima di rimuovere qualsiasi fonte alternativa nel cono di spazzamento. Quindi collegare la sorgente MS spray per foglie nano spray. Infine, creare un file di ottimizzazione e un file di metodo come descritto nel protocollo di testo.

Indossare sempre i guanti e non utilizzare tessuti vegetali che sono stati maneggiati a mani nude. In caso contrario, gli ioni contaminanti come il polietilenglicole domineranno gli spettri. Portare i tessuti vegetali per l'analisi nella stessa stanza del sistema di spettrometria di massa per consentire un rapido campionamento.

Per i tessuti vegetali che non hanno una punta naturalmente appuntita, utilizzare una lama di rasoio su un vetrino per tagliare una punta affusolata. Tagliare le foglie di Sceletium tortuosum a 10 settimane dopo la germinazione in strisce sottili, ciascuna con un'estremità affusolata a formare una punta. Usa una pinza per selezionare delicatamente il tessuto vegetale all'estremità che verrà bloccato.

Tenendo il fazzoletto con una pinza, trasferirlo con cura nella pinza. Regolare il braccio flessibile e il filo con la pinza per posizionare il tessuto in linea con l'ingresso MS. Fare riferimento al testo per la distanza ottimale dall'ingresso ionico per ogni specifico spettrometro di massa.

Se i primi tentativi producono una bassa intensità del segnale, il tessuto vegetale può essere spostato più vicino all'ingresso degli ioni. Caricare il file del metodo. Assegnare un nome al file di dati e impostare la posizione di archiviazione dei file.

Quindi accendi il sistema MS facendo clic su Riproduci e fai clic su Avvia per iniziare ad acquisire i dati. Applicare un solvente utilizzando una pipetta con una punta di caricamento del gel per massimizzare la distanza tra l'alta tensione e le mani dell'utente per la protezione. Acquisire i dati finché il segnale persiste o fino a quando non sono stati raccolti gli spettri adeguati, in genere da 30 a 60 secondi.

Interrompere l'acquisizione dei dati e mettere in pausa il sistema MS. Dopo l'acquisizione, rimuovere il fazzoletto e lavare il morsetto con metanolo al 100% in un panno privo di lanugine. Apri il file di dati e ispeziona visivamente il cronogramma della massa di picco di base.

Verificare che l'intensità del segnale sia compresa tra 10 e 500 milioni circa. Crea un nuovo file di metodo con un elenco di inclusione di M su Z a quattro cifre decimali. Fare clic su elenchi globali e inclusione.

In proprietà di PRM, selezionare l'energia di frammentazione e altri parametri MS tandem. Per ottenere i dati MS tandem per gli alcaloidi mesembrinici, frammentare gli ioni a 276,1583 M su Z, 290,1742 M su Z e 292,1897 M su Z a un'energia di collisione normalizzata di 35. Quindi, carica il file del metodo MS tandem e un file di dati denominato.

Accendi il sistema MS e inizia ad acquisire i dati aggiungendo un solvente se necessario. Quando sono stati raccolti spettri adeguati, in genere dopo 30-60 secondi, interrompere l'acquisizione. Eseguire l'analisi dei dati come descritto nel protocollo di testo.

I risultati rappresentativi del profilo metabolico di Sceletium tortuosum mediante MS spray fogliare e ionizzazione positiva sono mostrati con l'inserto che mostra da 260 a 295 M Z.In questo studio, un totale di nove alcaloidi mesembrinici sono stati rilevati mediante MS spray fogliare e sono state effettuate identificazioni puditive. Il cronogramma della massa del conteggio totale degli ioni MS per l'irrorazione fogliare rappresenta un esperimento MS di irrorazione fogliare di successo in cui è stato mantenuto un segnale stabile per l'intera durata dell'acquisizione. Per ogni picco, il numero in alto è il tempo in minuti e il in basso è il M su Z.Gli spettri di massa tandem sono stati raccolti in ionizzazione positiva a partire da una foglia tagliata di Sceletium tortuosum con spray fogliare MS. Le identificazioni puntive degli alcaloidi sono state effettuate da un'accurata frammentazione di massa e massa per gli isomeri della mesembrina M e del mesembrenone M, della mesembrina e della mesembrina M diidro.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare lo spray fogliare MS per rilevare i metaboliti delle piante. La MS spray fogliare è stata utilizzata per rilevare composti endogeni e composti esogeni come i pesticidi.