Name: Spettrometria di massa di foglia Spray: Una tecnica di ionizzazione ambiente rapido per valutare direttamente metaboliti dai tessuti vegetali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Impara la spettrometria di massa leaf spray per analizzare metaboliti vegetali direttamente dai tessuti intatti. Questa tecnica rapida rileva alcaloidi e pesticidi senza preparazione del campione.

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Questo lavoro è stato finanziato dalla sovvenzione NSF Plant Genome Research Program IOS-1238812 e la borsa di studio post-dottorato in biologia IOS-1400818. Il lavoro inoltre è stato finanziato da una borsa di studente laureato di Monsanto di Katherine A. Sammons. Il programma Fulbright africano ricercatore studiosi (2017-2018) è ringraziato per finanziamenti accordati per Nokwanda P. Makunga. Noi apprezziamo molto la donazione di una fonte di nanospray da Jessica Prenni e l'impianto di proteomica e metabolomica presso la Colorado State University.

1. le modifiche all'origine Nanospray per foglia spruzzare MS
<ol><li>Utilizzare un'origine nanospray modificate per spruzzo del foglio MS. Come nessun componenti fluidici sono necessari per spruzzo del foglio MS, è possibile modificare l'origine rimuovendo la sonda LC dall'origine.</li>
	<li>Assemblare il filo MS di spruzzo di foglia si applicherà la tensione al tessuto della pianta con il perno adatto per collegare la sorgente. Saldare il perno a un'estremità di un filo isolato; un morsetto all'estremità opposta del filo di saldatura. Nota: Il morsetto (alligator clip tipo) può o non può avere i denti. Per piccolo tessuto, un morsetto senza denti è preferito. Un braccio flex opzionale con un morsetto può essere aggiunti all'origine nanospray per facilitare il posizionamento del tessuto vegetale. Nota che questo protocollo in particolare viene descritto come eseguire spruzzo del foglio MS su un analizzatore di massa di ibridi quadrupolo trappola ionica sistema MS (Vedi la Tabella materiali); Tuttavia, altri sistemi MS possono essere modificati per eseguire questa tecnica6. Spruzzo del foglio di accoppiamento MS con un'analisi chimica in tempo reale portatile spettrometro di massa può essere eseguita sul posto senza la necessità di trasportare il materiale vegetale per il laboratorio19,20.</li>
	<li>Posizionare un tappetino antistatico al piano sottostante l'origine per ridurre la scarica elettrica che può verificarsi dall'origine utilizzando alte tensioni.</li>
</ol>2. preparazione del sistema MS per foglia Spray MS
<ol><li>Se il sistema è stato recentemente in uso, lasciarlo raffreddare al tatto e rimuovere qualsiasi fonte alternativa e il cono di sweep. Associare la fonte di MS nanospray spruzzo di foglia.</li>
	<li>Creare un file tune con i parametri appropriati ionizzazione impostati come segue: guaina, ausiliare e gas di espulsione a 0; la tensione di spruzzo a 2-5 kV; la temperatura capillare a 150-250 ° C; e il livello di S-obiettivo RF a 50. Salvare il file di sintonia con i parametri desiderati8,13. Ottimizzare la tensione e la temperatura per l'ionizzazione migliore del tessuto e presenti di interesse. Nota: Sono buoni punti di partenza 4 kV e 200 ° C.</li>
	<li>Creare un file di metodo incluso il foglia spray MS tune file con: MS completo positivi e negativi; una risoluzione di 70.000; un obiettivo AGC di 1 x 106; un massimo di 200 ms; e l'intervallo di scansione desiderata m/z. In alternativa, utilizzare solo 1 polarità.</li>
</ol>3. preparazione dello strumento, solventi e tessuto vegetale
Nota: Sempre indossare guanti e non utilizzare tessuto vegetale che è stato gestito con le mani nude. In caso contrario, gli ioni di contaminanti come il polietilene glicole dominerà gli spettri.
<ol><li>Portare i tessuti vegetali per l'analisi per la stessa camera come il sistema MS consentono per un campionamento rapido.</li>
	<li>Per tessuto vegetale che non dispone di una punta naturalmente, usare una lama di rasoio su un vetrino per tagliare un punto conico (Figura 2). Determinare la quantità di tessuto necessari per l'analisi basata sulla sensibilità dello strumento, tipo di tessuto e presenti di interesse (ad es., un giovane S. tortuosum foglia di ~ 5 mm di lunghezza).<ol>
<li>Taglio S. tortuosum lascia a 10 settimane post-germinazione in strisce sottili, ciascuno con un'estremità appuntita per formare un punto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilizzare pinze per selezionare delicatamente il tessuto della pianta alla fine che sarà bloccata. Tenendo il tessuto con il forcipe, trasferire con cautela al morsetto. Attenzione: Non toccare l'origine dello strumento se la tensione è su.</li>
	<li>Regolare il braccio flessibile e il filo con il morsetto per posizionare il tessuto in linea con l'ingresso di MS in modo che la distanza fra i tessuti vegetali e l'ingresso di ioni del MS è 5-10 mm per il triplo quadrupolo (ad es., TSQ) e trappola lineare quadrupolo (LTQ) e 10 -50 mm per la presa dello ione analizzatore di massa (ad es., orbitrap)8.<ol>
<li>Collegare l'estremità opposta del filo la fonte. Se i primi tentativi di produrre un'intensità di segnale basso, spostare il tessuto vegetale più vicino verso l'ingresso di ioni (fare riferimento alla discussione per ottimizzazione).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Caricare il file di metodo; nome del file di dati e impostare il percorso di archiviazione di file. Attivare il sistema MS facendo clic su Play , quindi fare clic su Start per iniziare l'acquisizione dei dati.</li>
	<li>Applicare un solvente (ad es., metanolo) utilizzando una pipetta con una punta di gel-caricamento per massimizzare la distanza tra le mani e l'alta tensione per proteggere l'utente. Nota: Il volume di solvente necessario dipende dalla dimensione, secchezza e trama del tessuto, in genere ~ 2-20 µ l. S. tortuosum foglie non richiedono alcun solvente da aggiungere. Applicare con cura il solvente e non toccare l'origine dello strumento quando la tensione è su. Utilizzare solventi grado LC-MS e lavori di vetro che è stato acido lavato ed è libero di detergenti. In alcuni tessuti, un segnale può essere osservato senza l'aggiunta di un solvente a causa del contenuto di acqua naturale del tessuto della pianta. Tuttavia, una maggiore intensità del segnale e la ridotta S/N in genere si ottiene applicando un solvente al tessuto.</li>
	<li>Acquisire dati, purché il segnale persiste o fino a quando gli spettri adeguati sono stati raccolti, in genere 30-60 s. Se necessario, applicare ulteriori solvente per mantenere un'alta intensità del segnale per una quantità di tempo maggiore. Fermare l'acquisizione di dati e mettere in pausa il sistema MS.</li>
	<li>Rimuovere il tessuto e lavare il morsetto con 100% di metanolo e un panno privo di lanugine. Pulire l'ingresso di ioni MS dopo circa 1-2 h dell'acquisizione di spruzzo del foglio MS secondo le specifiche del fornitore. Inoltre, pulire l'ingresso di ioni MS tra analisi di diversi tipi di tessuto.</li>
</ol>4. i dati valutazione di qualità
<ol><li>Aprire il file di dati e ispezionare visivamente il Cronogramma massa base picco. Verifica che l'intensità del segnale è ~1.0 x 107 a 5,0 x 108. Se il segnale è inferiore, è possibile spostare il tessuto più vicino verso l'ingresso di ioni. Se superiore, il front-end del sistema MS diventerà sporco, quindi spostare il tessuto più lontano l'ingresso di ioni.</li>
	<li>Basato sulla presenza o sull'assenza degli ioni di interesse in spettri di massa prodotta, alterare i parametri. Nota: Il protocollo può essere messo in pausa qui.</li>
</ol>5. tandem massa frammentazione
<ol><li>Decidere quali gli ioni sono di interesse per la frammentazione di massa tandem (MS/MS); un segnale di spettri di massa che è > 1,0 x 105 è sufficiente per la selezione di ioni per MS/MS.</li>
	<li>Fare un nuovo file di metodo con un elenco di inclusione di m/z fuori a 4 cifre decimali. Fare clic su elenchi globali e inclusione. In proprietà del PRM, selezionare l'energia di frammentazione [ad es., energia di collisione normalizzato (NCE) di 30-50 è una buona gamma per cominciare] e altri parametri di MS/MS.<ol>
<li>Per ottenere i dati di MS/MS per gli alcaloidi mesembrine, frammento i seguenti ioni, 276.1583 m/z, 290.1742 m/ze 292.1897 m/z, NCE 35. Nota: L'acquisizione di dati di MS/MS può essere eseguita immediatamente dopo la MS o in un secondo momento. Lo stesso tessuto spesso può rimanere bloccato dopo una MS completa e può essere riutilizzato per acquisire i dati di MS/MS. Tuttavia, se un accertati non fornisce un segnale sufficiente, utilizzare un nuovo tessuto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Caricare il file di metodo di MS/MS e un file di dati denominato. Accendere il sistema MS e inizia l'acquisizione di dati, eventualmente aggiungendo un solvente. Quando gli spettri adeguati sono stati raccolti, in genere dopo 30-60 s, interrompere l'acquisizione.</li>
	<li>Quando si assegnano gli ioni frammento, raccogliere frammentazione alle tante energie. Nota: Poiché spruzzo del foglio MS manca una separazione cromatografica, gli spettri di frammentazione sono suscettibili di contenere molti ioni e frammentazione alle diverse energie vi aiuterà a fare chiarezza.</li>
</ol>6. putativi identificazioni di frammentazione di massa massa accurata e Tandem
<ol><li>Fare identificazioni putativi facendo riferimento a precise misurazioni di massa da database di metabolita pubblicamente disponibile come Metlin21, Human Metabolome Database22, massa Banca23, mappe dei lipidi24, Istituto nazionale di Standard e tecnologia MS ricerca25, rispetto per i Phytochemicals26, o PNL27.</li>
	<li>Come questi database non sono esaustivi, di eseguire una revisione della letteratura sulle specie vegetali caratterizzati chimicamente come necessario.</li>
	<li>Corrispondenza tra gli ioni di frammentazione da foglia spruzzare MS/MS per i database di cui sopra quando sono disponibili informazioni di MS/MS, o alla letteratura. In alternativa, utilizzare un'interpretazione manuale degli ioni frammento MS/MS o una frammentazione di un autentico standard effettuate dall'iniezione diretta o LC-MS/MS.</li>
</ol>7. analisi dei dati
<ol><li>Convertire i file raw di MS mzXML file con lo strumento di msConvert da Proteowizard28.</li>
	<li>Utilizzare il pacchetto di software XCMS implementato in R per il prelievo di picco. Utilizzare un'infusione diretta l'elaborazione del metodo per lo spray foglia analisi MS. Nota: Il ben commentato scripts utilizzati per l'elaborazione dati può essere trovato alla https://github.com/HegemanLab/Leaf-Spray-Code.</li>
	<li>Per ottenere misure semi-quantitative, contabilità per la variabilità sperimentale, normalizzare l'intensità di ogni metabolita dalla corrente ionica totale (TIC), come lo spray di foglia MS l'intensità del segnale può variare, in parte a causa di lievi variazioni nel posizionamento dei la foglia nell'origine e le differenze di dimensioni e forma della foglia.</li>
	<li>In alternativa, utilizzare fornito dal fornitore di software per l'analisi dei dati o MZmine2 (per essere trovato alla http://mzmine.github.io/)29.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Il riuscito uso di questo protocollo si basa sull'ottimizzazione dei vari passaggi per la specie di piante, tipo di tessuto e presenti di destinazione di interesse. I parametri descritti nel protocollo forniscono un buon punto di partenza. Le seguenti decisioni sperimentali devono essere realizzati e testati: o meno all'uso (1) taglio o tessuto uncut e (2) solvente o nessun solvente, (3) quali solvente da utilizzare e in quale volume, (4) che cosa la distanza del tessuto dall'ingresso di ioni deve essere e (5) l'ampiezza...

Le piante contengono una vasta gamma di piccole molecole con proprietà chimiche diverse. MS è una tecnica potente per l'analisi dei composti vegetali perché può fornire composizioni elementale con un'alta sensibilità e specificità per la rilevazione e l'identificazione di metaboliti1. Più comunemente, MS viene eseguita su campioni estratti con solvente, che sono separati mediante cromatografia a prima analisi MS1. Tuttavia, l'uso della cromatografia liquida (LC) richiede tempi di analisi lunga e spesso è associato con un vasto campione preparazione1. Al contrario, analisi chimica diretta dei tessuti intatti che elude la cromatografia è una tecnica molto rapida, che necessitano di preparazione minima del campione2. Così, in casi dove possono essere rinunciati passaggi cromatografici, un'analisi chimica diretta può essere molto vantaggiosa.
Tipico di LC-MS per la ricerca di prodotti e metabolomica naturale si basa su estrazioni lunga massa di materiali secchi o surgelati vegetali contenenti più tessuti e delle cellule tipi3. In alternativa, analisi chimica diretta, ad esempio il rilevamento di MS di metaboliti da tessuto vegetale, possono isolare tipi cellulari ed evitare artefatti di preparazione4. Spruzzo del foglio MS, noto anche come tessuto-spray5,6, è una tecnica di ionizzazione ambiente diretto MS, che richiede essenzialmente, nessuna preparazione del campione5,7. Spruzzo del foglio che MS è collegato strettamente a spruzzo di carta MS, una tecnica di ionizzazione ambiente con caratteristiche di ionizzazione electrospray che consente il rilevamento degli analiti che si depositano sulla carta7. A dispetto del nome, spruzzo del foglio MS è applicabile ai vari tipi di tessuti vegetali, lascia non solo è stato dimostrato su frutta, semi, radici, tessuti floreali e tuberi, tra gli altri6,8,9, 10,11,12. La tecnica facilita l'ionizzazione di sostanze fitochimiche endogena direttamente da materiali vegetali nello spettrometro di massa per rilevamento8. Spruzzo del foglio MS può anche fornire informazioni sulla distribuzione spaziale delle sostanze chimiche nei tipi differenti del tessuto in piante13. Quando spruzzo del foglio MS viene confrontato con l'estrazione con solvente e LC-MS, i risultati indicano spruzzo del foglio che MS consente il rilevamento rapido dei metaboliti superficie da tipi di cella univoci come tricomi13. La figura 1 illustra la struttura sperimentale di foglia spray MS. Ionizzazione electrospray diretto si verifica solo le modifiche di origine secondaria. Un'alta tensione viene applicata al tessuto della pianta tramite una fascetta metallica, producendo uno spray di goccioline molto caricate formando un cono di Taylor che trasporta gli ioni e la presa dello ione della sig. ra Electrospray ionizzazione avviene dal liquido naturale della pianta o dal solvente appl IED a superficie della pianta. A punta sul tessuto facilita l'electrospray e possa essere naturalmente presenti in natura o creati dal taglio.
Spruzzo del foglio MS è un metodo veloce per l'analisi qualitativa e semiquantitativa di tessuti vegetali intatto che hanno trovato il programma di utilità per una vasta gamma di applicazioni. Ad esempio, la tecnica è stata utilizzata per rilevare composti endogeni per distinguere specie affini e anche per valutare i cambiamenti nella stessa specie coltivate in condizioni diverse. Studi precedenti hanno dimostrato questo approccio misurando metaboliti in beautyberry (Callicarpa L.) 12 e ginseng americano (Panax quinquefolium L.) 6. in quest'ultimo esempio, ginsenosidi, gli aminoacidi e gli oligosaccaridi potrebbero essere rilevati dopo aver bagnato del tessuto ginseng crudo. Ginseng americano coltivate e selvatiche sono stati differenziati da tubero fette6. Spruzzo del foglio successivo MS, che ha permesso per una successiva ispezione morfologica e microscopica6era preservare l'integrità di tubero di ginseng. Inoltre, possono essere individuati anche composti esogeni su campioni di piante. Un numero di pesticidi (acetamiprid, difenilammina, imazalil, linuron e tiabendazolo) è stato rilevato sulla buccia o polpa di frutta e verdura9. Mentre questi studi e molti altri hanno dimostrato l'utilità di spruzzo del foglio MS per vari scopi specifici, un protocollo dettagliato precedentemente non è stato segnalato.
Qui, la descrizione di protocollo non si concentrerà sull'ottimizzazione del metodo per un tessuto specifico o composti. Piuttosto, la rilevazione di mesembrine alcaloidi di Sceletium tortuosum (L.) N.E.Br. (Aizoaceae) viene utilizzata come esempio per discutere le misure di ottimizzazione necessarie che dovrebbero essere prese durante l'impostazione di un esperimento di MS foglia spray per una specie, tessuto, o presenti per la prima volta. S. tortuosum è una succulenta endemica nella regione di Karroo semi-aride del Sud Africa. Una medicina tradizionale del San e Khoi Khoi i popoli, è stato usato per la soppressione dell'appetito e della sete, anche per quanto riguarda i suoi effetti psicotropi e analgesici14,15. Attualmente, gli estratti standardizzati sono utilizzati per il trattamento di patologie neuropsichiatriche e neuropsicologiche16,17. I composti primari di interesse includono il mesembrine dell'alcaloide e suoi derivati, molti dei quali si trovano anche correlate Sceletium specie15. Popolazioni coltivate e selvatiche di S. tortuosum hanno concentrazioni variabili di alcaloidi mesembrine, presentando così un controllo di qualità sfida18. Un metodo per la determinazione rapida di alcaloidi mesembrine, come spruzzo del foglio MS, può essere utile nel monitoraggio Sceletium prodotti. Perché in precedenza, c' non era stato nessun protocollo sperimentale visual dettagliato per lo spray foglia tecnica MS, ci illustrerà il metodo utilizzando l'esempio di S. tortuosume viene descritto quanto segue: la modifica di un'origine nanospray, il selezione e preparazione dei tessuti vegetali, l'acquisizione dei dati, l'interpretazione dei risultati e l'ottimizzazione dei parametri MS.

<table><tbody><tr><td>Pin Conn Il</td> pin <td>Digi-Key elctronics</td><td>WM2563CT-ND</td><td>si inserisce nella sorgente Thermo Scientific per fornire tensione</td></tr><tr><td>morsetto piccolo</td><td>Digi-Key elctronics</td><td>314-1018-ND</td><td>CLIP MICRO ALLIGATOR COPPER 5A</td></tr><tr><td>morsetto grande</td><td>Digi-Key elctronics</td><td>290-1951-ND</td><td>CLIP A COCCODRILLO NICHELATO STRETTO 5A</td></tr><tr><td>Termorestringente</td><td>Digi-Key elctronics</td><td>Q2Z1-KIT-ND</td><td>per giunti di saldatura del coperchio</td></tr><tr><td>Sorgente NSI Nanospray Sorgente ionica</td><td>Thermo scientific</td><td>NA</td><td>Un'altra marca funzionerà se non si utilizza uno strumento Thermo Q</td></tr><tr><td>Exactive- quadrupolo ibrido Orbitrap</td><td>Thermo scientific</td><td>NA</td><td>Un'altra marca funzionerà se non si utilizza uno strumento Thermo Tune</td></tr><tr><td>Software</td><td>Thermo scientific</td><td></td><td>Un'altra marca funzionerà se non si utilizza uno strumento Thermo</td></tr><tr><td>Xcalibur Software</td><td>Thermo scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Impianto di interesse - S. tortousum</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

spettrometria di massa di foglia spray: una tecnica di ionizzazione ambiente rapido per valutare direttamente metaboliti dai tessuti vegetali

Leaf Spray Mass Spectrometry: A Rapid Ambient Ionization Technique to Directly Assess Metabolites from Plant Tissues

Le piante producono migliaia di piccole molecole che sono diversi nelle loro proprietà chimiche. Spettrometria di massa (MS) è una tecnica potente per l'analisi dei metaboliti vegetali perché fornisce pesi molecolari con alta sensibilità e specificità. Spruzzo del foglio MS è una tecnica di ionizzazione ambientale cui tessuto vegetale è utilizzato per l'analisi chimica diretta tramite electrospray, eliminando cromatografia dal processo. Questo approccio alla degustazione di metaboliti permette di essere rilevati simultaneamente dai tessuti vegetali intatto, riducendo al minimo la quantità di preparazione dei campioni necessari per una vasta gamma di classi chimiche. Quando viene utilizzato con una MS di massa ad alta risoluzione, accurata, spruzzo del foglio MS facilita il rilevamento rapido di metaboliti di interesse. È anche possibile raccogliere dati di frammentazione tandem massa con questa tecnica per facilitare un'identificazione di composta. La combinazione di misure accurate di massa e la frammentazione è utile nel confermare identità composta. Lo spray di foglia tecnica MS richiede solo piccole modifiche a una sorgente di ionizzazione nanospray ed è uno strumento utile per espandere ulteriormente le funzionalità di uno spettrometro di massa. Qui, il tessuto fresco foglia da Sceletium tortuosum (Aizoaceae), una pianta medicinale tradizionale dal Sud Africa, è analizzato; numerosi mesembrine alcaloidi vengono rilevati con spruzzo del foglio MS.

A 10 settimane che post-germinazione, appena raccolti coltivati in serra, S. tortuosum foglie sono stati analizzati da spruzzo del foglio MS. Il flusso di lavoro sperimentale per la rilevazione di metaboliti da S. tortuosum lascia utilizzando spruzzo del foglio che MS è illustrata nella Figura 2. Una foglia è stata selezionata, tagliata in una striscia sottile con un'estremità appuntita per formare un punto e serrata con lo spray di foglia M...

Spettrometria di massa di foglia spray è una tecnica di analisi chimica diretta che riduce al minimo la preparazione del campione ed Elimina cromatografia, consentendo per la rilevazione rapida di piccole molecole da tessuti vegetali.

Spettrometria di massa di foglia Spray: Una tecnica di ionizzazione ambiente rapido per valutare direttamente metaboliti dai tessuti vegetali

Plants produce thousands of small molecules that are diverse in their chemical properties. Mass spectrometry (MS) is a powerful technique for analyzing ...

L'irrorazione fogliare MS è un metodo rapido per l'analisi qualitativa e semiquantitativa di tessuti vegetali intatti che ha un'ampia varietà di applicazioni. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il tessuto vegetale può essere analizzato direttamente senza praticamente alcuna preparazione del campione. Sebbene questo metodo fornisca buone informazioni sugli alcaloidi mesembrinici di Sceletium, può essere utilizzato anche per l'analisi di varie altre specie vegetali e sostanze chimiche esogene come i pesticidi.Gli individui che non conoscono questo metodo possono trovarlo difficile perché è necessario ottimizzare il protocollo per ogni specie vegetale, tipo di tessuto e composto di interesse. Utilizzare una sorgente di nano spray modificata per l'irrorazione fogliare MS.As non sono necessari componenti fluidici per la MS di irrorazione fogliare, modificare la sorgente rimuovendo la sonda per cromatografia liquida dalla fonte. Il filo per spettrometria di massa spray fogliare che applicherà tensione al tessuto vegetale ha un perno che è stato saldato al filo su un'estremità e un morsetto che è stato saldato sull'altra estremità.Se il sistema è stato utilizzato di recente, lasciarlo raffreddare al tatto prima di rimuovere qualsiasi fonte alternativa nel cono di spazzamento. Quindi collegare la sorgente MS spray per foglie nano spray. Infine, creare un file di ottimizzazione e un file di metodo come descritto nel protocollo di testo.Indossare sempre i guanti e non utilizzare tessuti vegetali che sono stati maneggiati a mani nude. In caso contrario, gli ioni contaminanti come il polietilenglicole domineranno gli spettri. Portare i tessuti vegetali per l'analisi nella stessa stanza del sistema di spettrometria di massa per consentire un rapido campionamento.Per i tessuti vegetali che non hanno una punta naturalmente appuntita, utilizzare una lama di rasoio su un vetrino per tagliare una punta affusolata. Tagliare le foglie di Sceletium tortuosum a 10 settimane dopo la germinazione in strisce sottili, ciascuna con un'estremità affusolata a formare una punta. Usa una pinza per selezionare delicatamente il tessuto vegetale all'estremità che verrà bloccato.Tenendo il fazzoletto con una pinza, trasferirlo con cura nella pinza. Regolare il braccio flessibile e il filo con la pinza per posizionare il tessuto in linea con l'ingresso MS. Fare riferimento al testo per la distanza ottimale dall'ingresso ionico per ogni specifico spettrometro di massa.Se i primi tentativi producono una bassa intensità del segnale, il tessuto vegetale può essere spostato più vicino all'ingresso degli ioni. Caricare il file del metodo. Assegnare un nome al file di dati e impostare la posizione di archiviazione dei file.Quindi accendi il sistema MS facendo clic su Riproduci e fai clic su Avvia per iniziare ad acquisire i dati. Applicare un solvente utilizzando una pipetta con una punta di caricamento del gel per massimizzare la distanza tra l'alta tensione e le mani dell'utente per la protezione. Acquisire i dati finché il segnale persiste o fino a quando non sono stati raccolti gli spettri adeguati, in genere da 30 a 60 secondi.Interrompere l'acquisizione dei dati e mettere in pausa il sistema MS. Dopo l'acquisizione, rimuovere il fazzoletto e lavare il morsetto con metanolo al 100% in un panno privo di lanugine. Apri il file di dati e ispeziona visivamente il cronogramma della massa di picco di base.Verificare che l'intensità del segnale sia compresa tra 10 e 500 milioni circa. Crea un nuovo file di metodo con un elenco di inclusione di M su Z a quattro cifre decimali. Fare clic su elenchi globali e inclusione.In proprietà di PRM, selezionare l'energia di frammentazione e altri parametri MS tandem. Per ottenere i dati MS tandem per gli alcaloidi mesembrinici, frammentare gli ioni a 276,1583 M su Z, 290,1742 M su Z e 292,1897 M su Z a un'energia di collisione normalizzata di 35. Quindi, carica il file del metodo MS tandem e un file di dati denominato.Accendi il sistema MS e inizia ad acquisire i dati aggiungendo un solvente se necessario. Quando sono stati raccolti spettri adeguati, in genere dopo 30-60 secondi, interrompere l'acquisizione. Eseguire l'analisi dei dati come descritto nel protocollo di testo.I risultati rappresentativi del profilo metabolico di Sceletium tortuosum mediante MS spray fogliare e ionizzazione positiva sono mostrati con l'inserto che mostra da 260 a 295 M Z.In questo studio, un totale di nove alcaloidi mesembrinici sono stati rilevati mediante MS spray fogliare e sono state effettuate identificazioni puditive. Il cronogramma della massa del conteggio totale degli ioni MS per l'irrorazione fogliare rappresenta un esperimento MS di irrorazione fogliare di successo in cui è stato mantenuto un segnale stabile per l'intera durata dell'acquisizione. Per ogni picco, il numero in alto è il tempo in minuti e il in basso è il M su Z.Gli spettri di massa tandem sono stati raccolti in ionizzazione positiva a partire da una foglia tagliata di Sceletium tortuosum con spray fogliare MS. Le identificazioni puntive degli alcaloidi sono state effettuate da un'accurata frammentazione di massa e massa per gli isomeri della mesembrina M e del mesembrenone M, della mesembrina e della mesembrina M diidro.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare lo spray fogliare MS per rilevare i metaboliti delle piante. La MS spray fogliare è stata utilizzata per rilevare composti endogeni e composti esogeni come i pesticidi.

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Ionizzazione ablazione laser elettrospray (LAESI) è una pressione atmosferica sorgente di ioni per la spettrometria di massa. Nella modalità di imaging, un medio infrarosso sonde laser le distribuzioni delle molecole attraverso una sezione di tessuto o di un biofilm. Questa tecnica presenta un nuovo approccio per diversi studi bioanalitici effettuata sotto natale condizioni sperimentali.

Pressione atmosferica Imaging molecolare di tessuti biologici e biofilm da LAESI Spettrometria di Massa

Non mirati metabolomica fornisce una ipotesi la generazione di un'istantanea di un profilo di metabolico. Questo protocollo dimostrerà la estrazione e l'analisi delle metaboliti provenienti da cellule, siero, o tessuto. Una gamma di metaboliti vengono intervistati usando l'estrazione in fase liquido-liquido, microflusso UltraPerformance liquida cromatografia in fase / ad alta-risoluzione di massa spettrometria di (UPLC-HRMS) accoppiato ad software di analisi differenziale di.

Metabolomica non mirati da fonti biologiche Uso UltraPerformance cromatografia liquida-spettrometria di massa ad alta risoluzione (UPLC-HRMS)

Mass spettrometria di imaging (MSI) è un potente strumento che può essere utilizzato per scoprire e identificare le varie specie chimiche nei tessuti intatti, preservando i composti nel loro ambiente naturale, in grado di fornire nuove intuizioni in processi biologici. Qui un metodo MSI sviluppato per l'analisi di piccole molecole è descritto.

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Un metodo per l'identificazione delle specie di materiale botanico mediante l'analisi diretta nel settore della spettrometria di massa risoluzione tempo-alta e l'analisi statistica multivariata è presentato.

Rapid high-throughput Specie Identificazione del materiale botanico Utilizzando l&#39;analisi diretta in tempo reale ad alta risoluzione Spettrometria di Massa

Viene presentato un protocollo per l'estrazione totale dei lipidi, dei metaboliti e delle proteine ​​dai tessuti biologici utilizzando un campione.

Un semplice metodo di estrazione frazionata per l&#39;analisi completa dei metaboliti, dei lipidi e delle proteine ​​da un singolo campione

Questo protocollo descrive un singolo throughput per complementari tecniche analitiche e omiche che culmina in una caratterizzazione completamente accoppiato di sostanza organica naturale e proteomica microbica in ecosistemi differenti. Questo approccio permette confronti robusti per identificare vie metaboliche e trasformazioni importanti per descrivere la produzione di gas serra e predire le risposte al cambiamento ambientale.

Singolo-velocità effettiva complementari ad alta risoluzione tecniche analitiche per la caratterizzazione di miscele complesse di sostanza organica naturale

Viene presentato un metodo per l'analisi non mirata di metaboliti e lipidi di grano. Il protocollo include un metodo di estrazione dei metaboliti dell'acetonitricolo e la metodologia di cromatometria liquida-massa di fase invertita, con l'acquisizione in modalità di ionizzazione elettrospray positive e negative.

Analisi metabolomica a base di cromomia liquida non mirata del grano di grano di grano

Questo metodo utilizza l'imaging della spettrometria di massa (MSI) per comprendere i processi metabolici nelle foglie di S. alba quando esposte agli xenobiotici. Il metodo consente la localizzazione spaziale dei composti di interesse e dei loro metaboliti previsti all'interno di tessuti specifici e intatti.

Indagine sul metabolismo degli xenobiotici nelle foglie di Alba Salix tramite imaging della spettrometria di massa

In questo studio, viene presentata una serie di metodi per preparare campioni DESI-MSI dagli impianti e viene descritta in dettaglio una procedura di installazione dell'assemblaggio DESI, acquisizione dei dati MSI ed elaborazione. Questo protocollo può essere applicato in diverse condizioni per l'acquisizione di informazioni sul metaboloma spaziale nelle piante.

Visualizzazione dei metaboliti identificati nel metaboloma spaziale della medicina tradizionale cinese utilizzando DESI-MSI

Il metodo sviluppato della marcatura del 13C6-glucosio combinato con la cromatografia liquida e la spettrometria di massa ad alta risoluzione è versatile e pone le basi per studi futuri sugli organi primari e sui percorsi coinvolti nella sintesi di metaboliti secondari nelle piante medicinali, nonché sull'utilizzo completo di questi metaboliti secondari.

13Marcatura del C6-glucosio associata a LC-MS: identificazione degli organi primari delle piante nella sintesi di metaboliti secondari

Presentiamo un metodo per l'annotazione e la classificazione rapida basata sulla spettrometria di massa (MS) e sulla spettrometria di massa (MS) degli alcaloidi tropanici, utile sia per la dereplicazione preliminare di campioni contenenti tropani che per la scoperta di nuovi alcaloidi per l'isolamento.

Applicazioni della cromatografia liquida Spettrometria di massa tandem nella ricerca sui prodotti naturali: alcaloidi tropanici come caso di studio

Impara la spettrometria di massa leaf spray per analizzare metaboliti vegetali direttamente dai tessuti intatti. Questa tecnica rapida rileva alcaloidi e pesticidi senza preparazione del campione.

Spettrometria di massa di foglia Spray: Una tecnica di ionizzazione ambiente rapido per valutare direttamente metaboliti dai tessuti vegetali (Video) | JoVE Journal

Spettrometria di massa di foglia Spray: Una tecnica di ionizzazione ambiente rapido per valutare direttamente metaboliti dai tessuti vegetali

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