Name: Una nuova tecnica chirurgica come una Fondazione per In Vivo parziale ingegneria del fegato nel ratto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 27 s
Description: Scopri una nuova tecnica chirurgica per la perfusione in vivo di un lobo epatico nel ratto. Questo metodo consente la sopravvivenza a lungo termine e rappresenta una base fondamentale per studi futuri sull'ingegneria epatica parziale.

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Gli autori vorrei ringraziare Jens Geiling dall'Istituto di anatomia I, ospedale universitario di Jena, per produrre i disegni schematici di anatomia del fegato del ratto.

L'alloggiamento e tutte le procedure effettuate erano in conformità con la legislazione tedesca sul benessere degli animali. Tutte le garze, rivestimento vestiti e strumenti chirurgici sono sterilizzati in autoclave e preparati prima dell'operazione. Tutte le procedure vengono eseguite in condizioni sterili.
1. preparazione del ratto per la procedura chirurgica
<ol><li>Posizionare il ratto in una camera di induzione e anestetizzare il topo con isoflurano vaporizzato il 4% e 100% ossigeno a 0,5 L/min per circa 3 minuti, fino a quando il ratto è completamente anestetizzato.</li>
	<li>Prendere il topo dalla camera di induzione e misurare il suo peso corporeo.</li>
	<li>Radere il pelo della regione chirurgica sull'addome.</li>
	<li>Posto sul retro degli animali nella camera di isoflurane per altri 2 minuti approfondire l'anestesia.</li>
	<li>Posizionare il ratto sul tavolo operatorio in posizione supina.</li>
	<li>Fissare la maschera di anestesia nella regione di bocca del ratto e tenere l'animale anestetizzato con un flusso continuo di gas del 2% vaporizzato isoflurano e 100% ossigeno ad una portata di 0,5 L/min.</li>
	<li>Difficoltà degli arti con pezzi di nastro.</li>
	<li>Applicare unguento veterinario su entrambi gli occhi per prevenire la secchezza.</li>
	<li>Amministrare la buprenorfina 0,05 mg/kg per via sottocutanea, per alleviare il dolore durante il periodo di funzionamento.</li>
	<li>Disinfettare il campo chirurgico dell'addome con 3 turni di tintura di iodio, seguita da 2 giri di alcol al 70%.</li>
	<li>Posto sterilizzato garza intorno alla zona dove l'incisione sarà fatto per lasciare solo il campo di funzionamento dell'addome esposto.</li>
	<li>Procedere per eseguire l'operazione quando il riflesso di punta-pizzico ritiro del ratto è assente.</li>
</ol>2. la laparotomia del ratto
<ol><li>Rendere un addominale del muscolo e della pelle incisione trasversale con delle forbici, un Coagulatore elettrico.</li>
	<li>Difficoltà e tirare il processo xifoideo verso la testa utilizzando una sutura in polipropilene 4-0. Nota: Prestare attenzione a sollevare il processo xifoideo verticalmente per esporre meglio il fegato, ma procedere con cautela per evitare il soffocamento e restrizione respiratoria severa.</li>
	<li>Aprire la cavità peritoneale tirando entrambi i lati delle pareti addominali verso la testa con due ganci subcostale per esporre il fegato.</li>
	<li>Coprire il duodeno e piccolo intestino nella cavità addominale con una garza inumidita per evitare la disidratazione.</li>
	<li>Sollevare i lobi spartitraffico destro e sinistro utilizzando una garza inumidita e li tengono contro il torace per esporre meglio l'ILO del fegato.</li>
	<li>Posto il ratto sotto uno stereomicroscopio (ingrandimento 8x).</li>
	<li>Cadere qualche soluzione salina calda nell'addome e sulla superficie del fegato e intestino ogni alcuni minuti, per evitare l'essiccazione durante l'intera procedura.</li>
</ol>3. creazione di un passaggio di Bypass all'interno del lobo laterale sinistro
<ol><li>Sezionare la sinistra della vena portale e lega i con una sutura in seta 6-0 alla base (Figura 2A).</li>
	<li>Bloccare l'arteria epatica sinistra, dotto biliare di sinistro insieme a sinistra vena portale mediana, l'arteria epatica sinistra mediana e dotto biliare mediano sinistro con micro pinze per impedire un flusso del perfusato al lobo mediano sinistro (Figura 2B).</li>
	<li>Separare il lobo laterale sinistro, tagliando i legamenti circostanti del lobo con micro-forbici.</li>
	<li>Bloccare la vena epatica laterale sinistra di bloccaggio alla base del lobo laterale sinistro con micro morsetti (Figura 2). Nota: Assicurarsi di non morsetto sinistro della vena pure per errore.</li>
	<li>Utilizzare dispositivi di bloccaggio della zanzara di tenere la legatura della vena portale sinistra e mantenere la vena con la giusta tensione per il successivo inserimento di una canula.</li>
	<li>Attentamente, fare un'incisione nella parete anteriore della vena portale sinistra da puntura con un catetere di ago-abitazione-24G ( Figura 3A). Nota: Per creare un bypass, sono necessari punti di accesso vascolare su sinistro della vena e la vena epatica di sinistra. Per questo passaggio, è preferibile creare l'accesso vascolare i vasi di puntura con un ago, piuttosto che fare una grande incisione con le forbici. Questo riduce il rischio di sanguinamento e successiva stenosi.</li>
	<li>Ritirare il catetere e prendere l'ago fuori il catetere per ottenere un catetere senza ago 24-G.</li>
	<li>Collegare il catetere ad un tubo di aspersione, di cui l'altro endpoint si connette a una siringa da 20 mL con 15 mL di 40 U/mL eparinizzata su una pompa di perfusione.</li>
	<li>Accendere la pompa per che irrora il tubo per espellere l'aria fuori dal tubo e il catetere senza ago.</li>
	<li>Spegnere la pompa di perfusione.</li>
	<li>Ancora una volta, inserire il catetere senza ago alla sinistra della vena portale tramite l'incisione forato sulla vena (Figura 3B). Nota: A causa del fatto ci è spazio molto limitato per il fissaggio del catetere, non viene risolto a questo punto. Pertanto, il chirurgo deve prestare attenzione per evitare lo spostamento del catetere cannulato.</li>
	<li>Raccomandiamo di prestare un'altra incisione al margine della regione esposta della vena epatica sinistra laterale da puntura con un catetere di ago-abitazione di 22 o 24 G (Figura 3). Nota: È consigliabile che il catetere sia leggermente più piccolo del vaso.</li>
	<li>Ritirare il catetere e prendere l'ago fuori il catetere per ottenere un catetere senza ago 22-G.</li>
	<li>Accendere la pompa di perfusione per irrorare eparinizzata in lobo laterale sinistro tramite il 24 G cannulato senza ago catetere della vena portale sinistro ad una portata di 0,5 mL/min.</li>
	<li>Usare garza asciutta per assorbire il liquido fuori-fluente dei rifiuti intorno all'area di incisione della vena epatica laterale sinistra.</li>
	<li>Incannulare la vena epatica di sinistra laterale tramite l'incisione forato della vena con il catetere senza ago 22-G, per generare un fluido deflusso per minimizzare la contaminazione intra-addominale (Figura 3D). Nota: È tecnicamente difficile fissare il catetere cannulato al lobo del fegato. Pertanto, il chirurgo dovrebbe prestare attenzione per evitare lo spostamento del catetere. In alternativa, senza inserimento di una canula della vena epatica laterale sinistra con un catetere, fluido dei rifiuti può anche essere assorbito alla regione di incisione della vena solo con una garza asciutta.</li>
	<li>Tenere che irrora il lobo laterale sinistro con soluzione fisiologica eparinizzata per circa 20 min (gruppo 1) e poi solo con soluzione fisiologica per 2 h, 3 h o 4 h (gruppo 2, gruppo 3, gruppo 4, rispettivamente).</li>
	<li>Spegnere la pompa per interrompere la perfusione.</li>
</ol>4. fisiologico riperfusione del lobo laterale sinistro
<ol><li>Togliere entrambi i cateteri da sinistro della vena e la vena epatica laterale sinistra.</li>
	<li>Chiudere l'incisione della vena portale sinistra con una sutura di poliammide 11-0.</li>
	<li>Chiudere l'incisione della vena epatica laterale sinistra con una sutura di poliammide 11-0 pure.</li>
	<li>Sbloccare la vena epatica laterale sinistra.</li>
	<li>Sbloccare la vena portale mediana sinistra, sinistro del dotto biliare e arteria epatica di sinistra.</li>
	<li>Tagliare la legatura sul sinistro della vena di riaprire la vena.</li>
</ol>5. chiusura della parete addominale
<ol><li>Chiudere lo strato muscolare della parete addominale suturando interrotto con una sutura assorbibile polyglactin 910 4-0.</li>
	<li>Chiudere lo strato della pelle della parete addominale suturando interrotto con una sutura assorbibile polidioxanone 4-0.</li>
	<li>Dopo la chiusura dell'addome, disinfettare l'incisione cutanea con alcool al 70%.</li>
</ol>6. postoperatorio trattamento del ratto
<ol><li>Metti l'animale su un tappetino riscaldante per la rianimazione per circa 10 min e poi metterlo in una nuova gabbia.</li>
	<li>Amministrare la buprenorfina 0,05 mg/kg per via sottocutanea 2 volte al giorno per un 3 d consecutivi postoperatorio a sollevare dal dolore.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Bloccando e incannulamento sinistro della vena con un catetere come un fluido in entrata e la vena epatica laterale sinistra con un altro catetere come un fluido in uscita, abbiamo generato con successo un bypass in vivo fluido all'interno del lobo laterale sinistro, che indica che anche se la tecnica è altamente impegnativa a causa le piccole dimensioni dei vasi per inserimento di una canula e un elevato rischio di sanguinamento, è fattibile. Perfino i ratti sottoposti a un periodo lungo di aspersione di 4 ore ...

Le indicazioni per trapianto dell'organo sono in continua espansione. Al contrario, tassi di donazione di organi e la qualità complessiva degli organi sono in declino, che conduce ad una crescente domanda per gli innesti. Il numero di candidati aggiunto alla lista d'attesa di trapianto di fegato ha continuato ad aumentare (ad es., negli Stati Uniti, 11.340 pazienti sono stati aggiunti nel 2016, confrontato con 10.636 nel 2015)1. Nonostante i notevoli sforzi, il numero di organi disponibili non soddisfa le esigenze cliniche. A causa dell'incidenza aumentata di malattia epatica, molti pazienti con stadio finale muore di malattie del fegato in lista d'attesa di trapianto prima di un organo del donatore diventa disponibile. Per soddisfare l'enorme richiesta di innesti di fegato da donatore, approcci alternativi usando il tessuto del fegato, principi di ingegneria sono stati attivamente perseguito2. Al giorno d'oggi, una nuova concezione tecnica biologica di ingegneria del fegato potrebbe potenzialmente superare questa carenza.
Ingegneria del fegato è costituito da due passaggi: la generazione di un'impalcatura acellulare, seguita da un ripopolamento dell'impalcatura. Per ottenere un'impalcatura del fegato acellulare biologica, il fegato espiantato è irrorato tramite il sistema vascolare con detergenti ionici e non ionici, in grado di rimuovere il materiale cellulare dal fegato. Nella maggior parte degli studi precedente, un'impalcatura di fegato acellulare biologica è stata realizzata tramite aspersione del fegato con una combinazione di solfato dodecilico di sodio e TritonX100. Di conseguenza, tutte le cellule sono state rimosse, mentre è stata mantenuta la struttura della matrice extracellulare. I ponteggi di organo erano reseeding con cellule mature, danno epatocellulare, nonché linee di cellule endoteliali ed epatociti primari con o senza l'applicazione simultanea di cellule endoteliali o cellule staminali mesenchimali (MSC). Maggior parte dei focus di ricercatori sulla ex vivo del fegato ingegneria3,4,5,6,7,8,9,10, 11,12,13,14. Tuttavia, nella maggior parte degli studi precedente, solo piccoli pezzi di cubi ripopolato patibolo sono stati trapiantati in siti di impianto heterotopic differenti. In alcuni studi, impalcature ripopolate parziale sono state trapiantate come un innesto ausiliario. Tuttavia, il tempo di sopravvivenza massima segnalata era solo 72 h8,14. Per quanto ne sappiamo, trapianto ortotopico di un innesto completo del fegato ripopolato non ancora è stato eseguito o pubblicato su. La funzione a lungo termine e il trapianto di organi ingegnerizzati sono ancora nella loro infanzia. Pertanto, è necessario un approccio alternativo all'ingegneria ex vivo del fegato.
In vivo del fegato ingegneria può rappresentare un'alternativa per lo studio di ripopolamento epatico in condizioni fisiologiche. I vantaggi dell'ingegneria in vivo del fegato rispetto all' ex vivo del fegato ingegneria sono molteplici. L'impalcatura parziale del fegato in vivo ripopolata è sottoposto alla perfusione fisiologico del sangue con temperatura adeguata, sufficiente ossigeno, sostanze nutritive e fattori di crescita in contrasto con ex vivo aspersione con terreno di coltura artificiale. Inoltre, il rimanente fegato normale parziale mantiene la funzione epatica, principalmente permettendo la sopravvivenza a lungo termine. Poiché un impiantato ex vivo progettato dell'innesto del fegato è ancora incapace di sostenere la sopravvivenza a lungo termine degli animali da esperimento tramite la funzione epatica8, immaginiamo che in vivo parziale del fegato engineeringwould diventare in definitiva un modello promettente per approfondire ulteriormente l'evoluzione dei fegati ingegnerizzati con osservazioni di sopravvivenza più lunghe rispetto ex vivo.
Recentemente, un gruppo di ricerca (Pan e colleghi) ha presentato, per la prima volta, una tecnica di fegato in vivo 15di ingegneria. Hanno raggiunto l'aspersione isolata del lobo inferiore di destra del fegato in ratti viventi nonostante sfide Anatomiche e tecniche. Hanno riferito i primi risultati intraoperative di ripopolamento in vivo utilizzando una linea cellulare degli epatociti primari di ratto. Tuttavia, il modello di aspersione chirurgica in vivo di Pan et al. ha svantaggi. Hanno raggiunto la perfusione di singolo lobo del fegato in ratti a scapito di bloccare completamente la vena portale e la vena cava inferiore, che può causare gravi danni all'animale. I ratti sperimentali sono stati sacrificati dopo solo 6 ore di tempo di osservazione intraoperatoria. Pertanto, la tecnica di aspersione del lobo del fegato in vivo ha bisogno di ulteriore miglioramento ai fini della sopravvivenza postoperatoria.
Abbiamo sviluppato un modello di sopravvivenza romanzo per in vivo di aspersione lobo del fegato, sulla base di precedenti studi di anatomia epatica del ratto16, la tecnica di inserimento di una canula della vena portale per il monitoraggio emodinamico in topi17e Bioingegneria del fegato 18 , 19. i passaggi principali per la procedura sono illustrati in Figura 1A - 1E.
Questa tecnica è adatta per chi desidera utilizzare questo modello sperimentale in vivo di aspersione per ricerca di base sul trattamento parziale dell'organo da infusione con le droghe, in vivo decellularizzazione come una resezione chimica per le malattie dell'organo (per esempio. , cancro del fegato), in vivo coltura cellulare in una matrice decellularizzata confrontando ex vivo bidimensionale e tridimensionale delle cellule cultura sistemi20,21,22,23 , 24 , 25 , 26e in vivo del fegato di ingegneria di decellularizzazione e ripopolamento.

<table><tbody><tr><td>Pompa di</td><td></td><td></td><td></td>perfusione</tr><tr><td>Perfusor VI</td><td>B. Braun,</td> catetere Melsungen <td></td><td></td></tr><tr><td></td> Versatus-W&nbsp;<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Catetere</td><td>Terumo</td><td>SR+DU2419PX</td><td>24G, 0,74&volte; 19mm</td></tr><tr><td>Versatus-W&nbsp; Catetere</td><td>Terumo</td><td>SR+DU2225PX</td><td>22G, 0,9&volte; Micro</td></tr><tr><td>strumento</td><td></td><td></td><td></td>chirurgico</tr> da 25 mm <tr><td>micro forbici</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>n. 14058-09</td><td></td></tr><tr><td>micro serrefine</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>No.18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Applicatore di micro morsetti</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>n. 18057-14</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinza diritta</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>n. 00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinza curva</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>No. 00649-11</td><td></td></tr><tr><td>micro porta aghi</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>No. 12061-01</td><td></td></tr><tr><td>strumenti</td><td></td><td></td><td></td>chirurgici generali</tr><tr><td>sissors standard</td><td>F&middot; S&middot; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>morsetto per zanzare</td><td>F&middot; S&middot; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>pinza seghettata</td><td>F&middot; S&middot; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>pinza dentata</td><td>F&middot; S&middot; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>porta aghi</td><td>F&middot; S&middot; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>sutura</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-0 prolene</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-0 ETHICON*II</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 silk</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>11-0 poliammide</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

una nuova tecnica chirurgica come una fondazione per in vivo parziale ingegneria del fegato nel ratto

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

Ingegneria dell'organo è una nuova strategia per generare sostituti di organo del fegato che possono essere potenzialmente utilizzati nel trapianto. Recentemente, in vivo del fegato di ingegneria, compreso in vivo decellularizzazione organo seguita da ripopolamento, è emerso come un promettente approccio sopra ingegneria ex vivo del fegato. Tuttavia, la sopravvivenza postoperatoria non è stata realizzata. Lo scopo di questo studio è quello di sviluppare una nuova tecnica chirurgica di in vivo aspersione selettiva lobo del fegato in ratti come prerequisito per l'ingegneria in vivo del fegato. Generiamo un circuito di bypass solo attraverso il lobo laterale sinistro. Quindi, lobo laterale sinistra è irrorato con soluzione fisiologica eparinizzata. L'esperimento è eseguito con 4 gruppi (n = 3 ratti per gruppo) basato su tempi diversi aspersione di 20 min, 2h, 3h e 4h. sopravvivenza, come pure il cambiamento in modo macroscopico visibile di colore e istologicamente determinato assenza di cellule del sangue nella triade portale e i sinusoids, è considerato un indicatore per una struttura di modello di successo. Dopo aspersione selettiva del lobo laterale sinistro, osserviamo che il lobo laterale sinistra, infatti, trasformato da rosso a giallo debole. In una valutazione istologica, non le cellule del sangue sono visibili nel ramo della vena portale, la vena centrale e sinusoidi. Il lobo laterale sinistro diventa rosso dopo la riapertura dei vasi bloccati. 12/12 ratti è sopravvissuto la procedura per più di una settimana. Siamo i primi a segnalare un modello chirurgico per in vivo di aspersione singolo lobo del fegato con un periodo di sopravvivenza lunga di più di una settimana. In contrasto con il rapporto precedentemente pubblicato, il vantaggio più importante della tecnica presentata qui è che l'aspersione del 70% del fegato è mantenuto durante tutta la procedura. L'istituzione di questa tecnica fornisce una base per in vivo parziale ingegneria del fegato in ratti, tra cui decellularizzazione e ricellularizzazione.

Maschio di dodici (all'età di 12 - 13 settimane) Lewis ratti sono stati usati per valutare l'effetto della perfusione selettiva lobo del fegato. L'esperimento è stato effettuato in quattro gruppi (n = 3 ratti per gruppo). Utilizzando perfusione diversi periodi di 20 minuti, 2 ore, 3 ore e 4 ore, seguendo la procedura descritta sopra, abbiamo realizzato con successo in vivo di aspersione singolo lobo.
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Stabiliamo una nuova tecnica chirurgica per un modello di aspersione del singolo lobo del fegato in vivo nel ratto come prerequisito per ulteriormente lo Studio in vivo fegato parziale Ingegneria in futuro.

Una nuova tecnica chirurgica come una Fondazione per In Vivo parziale ingegneria del fegato nel ratto

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

Negli ultimi anni, l'ingegneria del fegato è diventata un argomento caldo in tutto il mondo a causa del suo potenziale di generare innesti epatici trapiantati. Per quanto praticabile sia la funzione a lungo termine e il trapianto di organi ingegnerizzati sono ancora una visione del futuro. Recentemente la profusione di lobi epatici in vivo è diventata una strategia promettente per iniziare l'ingegneria del fegato.Uno dei principali vantaggi di questa tecnica è che l'impalcatura epatica parziale ripopolata in vivo ha sottoposto a profusione di sangue scatologico. Ciò fornisce all'impalcatura la temperatura corretta, l'ossigeno sufficiente, i nutrienti e i fattori di crescita in contrasto con la profusione ex-vivo con mezzo di coltura artificiale. Un altro vantaggio è che il fegato rimanente mantiene la funzione epatica e quindi consente principalmente la sopravvivenza a lungo termine.Tuttavia, il modello di profusione di lobi singoli in vivo è tecnicamente impegnativo e la sopravvivenza post operatoria deve ancora essere raggiunta. Qui presenteremo un altro modello chirurgico con sopravvivenza a lungo termine come base per un'ulteriore ingegneria del lobo epatico singolo in vivo. Prima di dimostrare il modello chirurgico, vorremmo fare una breve introduzione all'anatomia del fegato di ratto.Per stabilire il nostro modello di profusione di lobi epatici singoli abbiamo selezionato il lobo laterale sinistro. Questo è l'unico lobo epatico con un distinto apporto vascolare e drenaggio che consente di creare un bypass. Questa è una ricostruzione 3D del sistema venoso portale nel ratto.Il nostro focus qui è sulla vena del portale sinistro che in seguito fungerà da ingresso fluido. Questa è una ricostruzione 3D del sistema venoso epatico nel ratto. Qui il nostro focus è sulla vena epatica laterale sinistra che in seguito servirà come uscita fluida.Questa illustrazione dell'anatomia vascolare epatica evidenzia i punti di accesso vascolari utilizzati per il modello di perfusione parziale. Questa animazione illustra lo schema di generazione del modello di perfusione del lobo epatico sinistro in vivo. Per stabilire il modello chirurgico genereremo un bypass del circuito all'interno del lobo laterale sinistro.A questo scopo abbiamo bisogno di bloccare i seguenti vasi la vena del portale sinistro, l'arteria epatica sinistra, il condotto biliare sinistro, la vena protale mediana sinistra, l'arteria epatica e il condotto biliare e la vena epatica laterale sinistra. Quindi dobbiamo cannulate la vena del portale sinistro con un catetere da 24 gage. Successivamente la vena epatica laterale sinistra viene cannulata usando un catetere a 22 gage.Quindi il catetere nella vena del portale sinistro è collegato a una pompa perfusione. La garza secca viene posta all'uscita del catetere nella vena epatica laterale sinistra per assorbire il fluido di scarto. In questo modo viene creato un bypass.Quindi il lobo laterale sinistro perfuso con soluzione salina eparinizzata Ad una portata di 0,5 millilitri al minuto. La perfusione fisiologica al lobo laterale sinistro viene ripristinata dopo la riapertura dei vasi bloccati. Ora viene stabilito il modello di perfusione chirurgica.Tutte le procedure dimostrate in questo video sono state valutate e approvate dalle autorità locali. Il campo operativo dell'addome viene disinfettato con tre cicli di tintura di iodio seguiti da due colpi di alcol al 70%. La garza sterile viene posizionata sull'addome lasciando esposto solo il campo operativo.Un'incisione trasversale viene fatta sulla parete addominale del topo. Una sutura di prolene 4-0 viene utilizzata per fissare il processo xifoide e tirarlo verso la testa. Entrambi i lati delle pareti addominali superiori vengono retratti usando due ganci subcoastali per raggiungere la piena esposizione dell'organo.Poi possiamo vedere i lobi del fegato. Ecco il lobo laterale sinistro che viene utilizzato per la perfusione selettiva. Copriamo il duodeno e l'intestino tenue nella cavità addominale con garza inumidita alla secchezza ovoidosa.Esponiamo l'hilum del fegato sollevando i lobi mediani con garza inumidita. Il topo viene posto al microscopio sterile. Sezioniamo la vena del portale sinistro.Quindi lighiamo la vena protale sinistra con una sutura di seta 6-0. L'arteria epatica sinistra, il condotto biliare sinistro, così come la vena mediana sinistra del portale, l'arteria epatica mediana sinistra e il condotto biliare mediano sinistro sono bloccati usando micro-morsetti. Blocchiamo la vena epatica laterale sinistra con micro-morsetti alla base del lobo laterale sinistro.Per creare l'ingresso del fluido, il gambo della vena porta viene perforato con un catetere per l'abitazione dell'ago da 24 gage. Ma il catetere non è inserito. Rimuoviamo quindi l'ago dal catetere e colleghiamo il catetere a una pompa perfusione.Per espellere l'aria dal tubo e dal catetere, perfondiamo con salina eparinata per un minuto. Accendiamo quindi la pompa. Successivamente il catetere privo di ago, che ora è collegato alla pompa perfusione, viene inserito nella vena del portale sinistro.In questo modo riduciamo al minimo le manipolazioni del vaso cannulato. Ecco una regione esposta della vena epatica laterale sinistra che cannulateremo in modo simile. Per prima cosa creiamo un foro di drenaggio nella vena epatica laterale sinistra forandosi con un catetere per l'abitazione dell'ago da 22 gage o 24 gage.Si consiglia che il catetere sia leggermente più piccolo della nave. Iniziamo quindi a perfondere il lobo laterale sinistro con soluzione salina eparinizzata ad una portata di 0,5 millilitri al minuto. Il fluido di scarto che scorre fuori viene assorbito con una garza.Per ridurre al minimo la contaminazione intraabdominale con fluido di scarto reinseriamo il catetere privo di ago nella vena epatica laterale sinistra. Quindi la vena epatica laterale sinistra cannulata funge da uscita fluida. Continuiamo a perfondere il lobo laterale sinistro con soluzione salina eparinizzata.Il liquido insanguinato può essere visto gocciolare dall'uscita. La freccia indica che il lobo laterale sinistro è diventato giallo durante la perfusione con soluzione salina eparinizzata. Al termine della perfusione i cateteri vengono portati fuori dai vasi.L'apertura di drenaggio sulla vena epatica laterale sinistra è chiusa con una singola sutura inquinante 11-0. L'apertura dell'ingresso sulla vena del portale sinistro è chiusa anche con una sutura inquinante 11-0. La perfusione inizia con il riflusso dalla vena cava sopraepatica dopo aver rimosso il morsetto sulla vena epatica laterale sinistra.La perfusione fisiologica viene ulteriormente ripristinata dopo aver rimosso il morsetto dall'arteria epatica sinistra e dal condotto biliare, nonché dalle strutture vascolari mediane sinistra. La rifusione completa si ottiene dopo aver riaperto la vena del portale sinistro come indicato da un cambio di colore in rosso scuro. Perfusione di lobo sinistro successivo.La freccia bianca in questa immagine indica che il lobo epatico bersaglio è stato effettivamente perfuso selettivamente. Qui le frecce bianche mostrano che i lobi rimanenti, che rappresentano circa il 70% del fegato, hanno mantenuto la perfusione fisiologica durante l'intera procedura. Rifusione del lobo laterale sinistro.Qui la freccia rossa indica che il lobo laterale sinistro viene fisiologicamente perfuso dopo la riapertura dei vasi bloccati. La freccia blu mostra che il lobo mediano sinistro ha sostenuto l'ischemia. Il lobo laterale sinistro perfuso selettivamente è stato esaminato istologicamente utilizzando la colorazione H E.La figura A mostra che nel lobo laterale sinistro perfuso non sono rilevabili cellule del sangue nel ramo della vena portale e nei sinusoidi. Come previsto i globuli rossi sono visibili nel ramo dell'arteria epatica. Nella figura B il lobo caudato inferiore funge da controllo.Le cellule del sangue sono chiaramente visibili e i rami della vena protale e dell'arteria epatica, nonché i sinusoidi. La figura C dimostra che nel lobo laterale sinistro perfuso non ci sono cellule del sangue visibili nella vena centrale. Al contrario, la figura D dimostra che nel controllo le cellule del sangue del lobo caudato inferiore sono visibili nella vena centrale.Abbiamo raggiunto un tasso di sopravvivenza del 100% a una settimana in 12 procedure consecutive. Abbiamo confrontato il nostro modello di perfusione di lobi epatici in vivo con il modello di Pan e colleghi. Le principali differenze nella metodologia e nei risultati tra Pan e il nostro gruppo sono: hanno selezionato il lobo inferiore destro mentre abbiamo scelto il lobo laterale sinistro come lobo epatico bersaglio;hanno bloccato la vena cava e la vena porta principale che porta all'ipertensione portale.Al contrario, abbiamo mantenuto la perfusione portale del 70% del fegato;hanno sacrificato i ratti in modo operativo mentre il nostro tasso di sopravvivenza di una settimana è del 100%I vantaggi del nostro nuovo modello chirurgico sono:che è tecnicamente impegnativo ma fattibile;e che è ben tollerato come dimostrato dal tasso di sopravvivenza al 100%. Tuttavia una limitazione è che il lobo mediano sinistro ha sostenuto l'ischemia a causa del blocco della vena porta. Le potenziali applicazioni della nostra tecnica includono:che può essere utilizzato per il trattamento parziale in vivo degli organi per perfusione con farmaci;decellularizzazione parziale in vivo degli organi come resezione chimica;sistema di coltura cellulare in vivo rispetto all'ex vivo;e ingegneria epatica in vivo.

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Vi presentiamo uno facile da stabilire revisione della classica due-bracciale tecnica di trapianto di fegato nel ratto.

Trapianto di fegato in ratti

Trapianto di fegato nei ratti è un modello sperimentale indispensabile per la ricerca biomedica. Qui vi presentiamo le nostre procedure chirurgiche per il trapianto ortotopico di fegato di ratto con la ricostruzione arteriosa epatica con un trapianto parziale del 50%.

Procedure chirurgiche per un modello di Rat parziale trapianto di fegato con la ricostruzione arteriosa epatica

Descriviamo il design del dispositivo "quick-linker" per il trapianto di fegato di ratto ortotopico più facile.

Dispositivi di produzione e strumenti per una più facile Rat Liver Transplantation

Un modello di morsetto ilare unico fegato di ratto è stato sviluppato per studiare l'impatto di molecole farmacologiche nel migliorare danno da ischemia-riperfusione. Questo modello include incannulazione diretta della fornitura portale per il segmento epatico ischemico tramite un ramo della vena porta, consentendo la consegna epatica diretta.

Metodo di consegna diretta segmentale intra-epatico utilizzando un modello di fegato di ratto Hilar morsetto

Abbiamo descritto un protocollo per l'esecuzione di epatectomia parziale (PHx) e trapianto di cellule via della milza nel cenno del capo. SCID (CENNO DEL CAPO. CB17-Prkdcscid/j) topi. In questo protocollo, un'incisione è fatta per esporre e resecare il lobo sinistro del fegato seguito da un'altra incisione per il trapianto di cellule intrasplenic.

Intrasplenic trapianto di epatociti dopo epatectomia parziale in NOD. Topi SCID

Qui, un protocollo che coinvolge il trapianto di fegato parziale ri-arterialized ratto è presentato. In particolare, 70% fegato è stato resecato in vivo utilizzando una tecnica aggiornata di hepatectomy orientato alla nave. L'arteria epatica è stato ricostruito in maniera fine--lato. La tecnica del polsino è stata modificata per accorciare i tempi di anastomosi della vena cava infrahepatic.

Ri-Arterialized trapianto parziale di fegato del ratto con un in vivo vaso-Oriented 70% Hepatectomy

La ricostruzione della vena cava suprahepatic (SHVC) rimane un passo difficile nel trapianto orthotopic del fegato del ratto. In questo articolo, vi mostriamo un protocollo passo-passo per la ricostruzione di SHVC in ratti facendo uso di una tecnica di anastomosi magnetico romanzo.

Un modello del ratto di orthotopic del trapianto del fegato usando una tecnica novella dell'anastomosi magnetico per la ricostruzione della Vena Cava Suprahepatic

Qui, presentiamo un nuovo metodo per la resezione parziale del lobo epatico di sinistra in topi neonatali (giorno 0). Questo nuovo protocollo è adatto per lo studio delle lesioni epatiche acute e risposta di lesione in ambito neonatale.

Epatectomia parziale lobulare: Un modello chirurgico per rigenerazione epatica morfologica

Qui, descriviamo una piattaforma che consente l'imaging non invasivo in vivo di sferoidi epatici innestati nella camera anteriore dell'occhio del topo. Il flusso di lavoro spazia dalla generazione di sferoidi da cellule epatiche primarie al trapianto nell'occhio di topo e all'imaging in vivo a risoluzione cellulare mediante microscopia confocale.

Imaging in vivo di sferoidi epatici trapiantati nella camera anteriore dell'occhio del topo

Il protocollo di trapianto di fegato ausiliario eterotopico di ratto qui descritto offre uno strumento sperimentale pratico per esplorare i meccanismi di rigetto dell'allotrapianto epatico. Questo modello aiuta ad alleviare gli ostacoli chirurgici e lo stress animale del trapianto di fegato ortotopico nei ratti.

Modello di trapianto di fegato intero di ratto ausiliario eterotopico che utilizza un'epaticoureterostomia per studi di rigetto dell'allotrapianto

Scopri una nuova tecnica chirurgica per la perfusione in vivo di un lobo epatico nel ratto. Questo metodo consente la sopravvivenza a lungo termine e rappresenta una base fondamentale per studi futuri sull'ingegneria epatica parziale.

Una nuova tecnica chirurgica come una Fondazione per In Vivo parziale ingegneria del fegato nel ratto

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