26 ottobre 2019
Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un'induzione della perdita dell'udito conduttiva replicabile tramite la puntura chirurgica della membrana tipopanica e la verifica mediante la visualizzazione dell'otoscopio e la valutazione comportamentale tramite clap startle.
L'obiettivo generale di questo studio è quello di stabilire un'induzione affidabile della perdita dell'udito tramite puntura chirurgica della membrana timpanica e verifica mediante visualizzazione dell'otoscopio e valutazione comportamentale da parte di clap startle. Lo scopo del nostro pratico è quello di sviluppare un modello per i disturbi conduttivi dell'udito umano. Dimostriamo nella pratica, la procedura chirurgica conduttiva di perdita dell'udito, che è una semplificazione nella rimozione del malleo, il metodo per verificare la perdita dell'udito conduttiva tramite visualizzazione dell'otoscopio e una semplice startle comportamentale dell'applauso, che convalida che si è verificata una perdita dell'udito conduttiva.
Il principale vantaggio della procedura che abbiamo descritto sono le procedure non invasive, la verifica della perdita dell'udito conduttiva mediante otoscopio e la convalida mediante clap startle. Il presente studio e le procedure sono stati approvati dal comitato etico per la ricerca sugli animali e dalla City University di Hong Kong, dall'Università di Hong Kong e dal Dipartimento della Salute della regione amministrativa speciale di Hong Kong. Per il presente protocollo, scegliamo ratti, ma puoi scegliere qualsiasi roditore.
Pesare gli animali per garantire un'anestesia adeguata per l'iniezione IP. Per l'anestesia, è importante che gli animali abbiano la dose corretta. Prendi il tuo topo per la trasandata.
Assicurarsi la dose corretta di chetamina e xiazina per iniezione IP e iniettare. Assicurarsi di eseguire il pizzicotto per verificare che non si verifichi la sensazione di dolore. Per la configurazione chirurgica è costituito dal topo anestetizzato, dai microscissori e dall'otoscopio.
Si prega di pulire accuratamente l'area chirurgica con etanolo. Posizionare il drappo chirurgico sulla panca pulita. Successivamente introduci le forbici, l'otoscopio e il ratto.
La dimensione delle forbici dipenderà dalle dimensioni del roditore. Sotto otoscopio, visualizzare l'orecchio sinistro e destro del ratto per garantire una membrana timpanica sana. Afferra l'elica ed estendi il canale uditivo esterno per diventare oscurato e annerito.
Qui introdurrete i microscissori. Introdurre i microscissori al centro del canale uditivo, prestando molta attenzione a non intasare il tessuto. Ascolta il suono pop, quindi gira per assicurarti lo spostamento del malleo.
La conferma di un intervento chirurgico di perdita dell'udito conduttiva di successo, deve essere effettuata con un otoscopio. Valutare ogni orecchio di ratto prima e dopo l'intervento chirurgico con un otoscopio con uno speculum di piccolo diametro. Quando viene visualizzato con un otoscopio, devono essere studiate le differenze tra una normale membrana timpanica e una membrana timpanica perforata.
Qui, la normale membrana timpanica a sinistra ha la testa del malleo in posizione ed è drasticamente diversa dalla membrana timpanica perforata a destra. La membrana timpanica perforata, dopo l'intervento conduttivo di perdita dell'udito, ha il malleo spostato e la pars tensa interrotta con l'umbo del malleo e la testa completamente mancanti. Cura postoperatoria per i roditori.
Posizionare il roditore nella gabbia domestica sotto una lampada calda e iniettare agenti antibatterici e glucosio. Corroborare la perdita dell'udito connettiva con la startle del clap comportamentale. Il ratto CHL è posto accanto a un topo normale in due gabbie adiacenti.
Questi sono collocati in una stanza silenziosa. Stare a mezzo metro di distanza e applaudire in durate equamente distanziate un numero specifico di volte. Qui, ne scegliamo cinque.
Qui, i nostri risultati comportamentali rappresentativi. Si noti che il topo nella parte inferiore non salta al suono forte dell'applauso. Il topo nella parte superiore dello schermo è sorpreso da questi forti suoni di applausi.
Si prega di studiare la differenza prima e dopo l'applauso per questi due ratti. Mancata indurzione dell'ipoacusia conduttiva. La mancata indurzione della perdita dell'udito conduttiva potrebbe essere causata da sanguinamento in una o entrambe le orecchie.
E in questo caso, il roditore dovrebbe essere eutanasiato. Ciò indicherebbe che le forbici non hanno avuto contatto con la membrana timpanica. Un suono senza spunta durante la procedura.
Un suono senza sboccamento indicherebbe che la procedura di perdita dell'udito conduttiva era scarsa e non pulita. Un suono senza popping significherebbe che i tuoi microscissori non hanno avuto un contatto diretto con la membrana timpanica. Visualizzazione dell'otoscopio.
Se, durante la visualizzazione tramite otoscopio, la membrana timpanica appare normale, ciò indicherebbe che non si è verificato alcun CHL. Una risposta al forte clap sound test. Ciò indicherebbe che non si è verificato alcun CHL e che il roditore non ha perdita dell'udito conduttiva.
Ciò si verificherebbe quando un topo salta o è sorpreso da un forte segnale acustico. Il principale vantaggio della procedura che abbiamo descritto sono le procedure non invasive, la verifica della perdita dell'udito conduttiva mediante otoscopio e la convalida tramite clap startle. Dopo aver fatto il pratico, puoi indurre la perdita dell'udito conduttiva in un modello di roditore ed esplorare le manifestazioni comportamentali e psicofisiche di questo disturbo dell'udito.
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Lo studio stabilisce un protocollo affidabile per indurre una perdita udittiva di tipo conduttivo nei roditori mediante perforazione chirurgica della membrana timpanica. Attraverso la visualizzazione con otoscopio e valutazioni comportamentali, il metodo verifica l'induzione della perdita udittiva, fornendo un modello per lo studio dei disturbi conduttivi nell'uomo.
Modelli rodentici affidabili di perdita udittiva conduttiva (CHL) sono essenziali per ridurre i rischi nella scoperta precoce di bersagli uditivi e per valutare le conseguenze comportamentali e neurali del deficit uditivo. Questo protocollo consente l'induzione e la verifica riproducibile della CHL, sostenendo la ricerca traslazionale e lo sviluppo di modelli preclinici per i percorsi di disturbi uditivi. L'approccio facilita la valutazione standardizzata di interventi per la perdita udittiva e studi meccanicistici in sistemi pertinenti alla malattia.
Questo protocollo di induzione e verifica di CHL si colloca all'interfaccia tra la fase iniziale della scoperta e lo sviluppo di modelli preclinici, consentendo test ipotetici solidi e la preparazione dei saggi per portafogli di ricerca nell'ambito dell'udito.