Name: Semplice induzione chirurgica della perdita delludito conduttiva con verifica utilizzando la visualizzazione dellotoscopio e la risposta di clap di clap di comportamento in ratto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Scopri un protocollo chirurgico per indurre perdita dell'udito conduttiva nel ratto mediante puntura della membrana timpanica, con verifica otoscopica e test comportamentale di risposta al rumore.

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Questo lavoro è stato sostenuto in parte dall'Hong Kong Research Grants Council, Early Career Scheme, Project #21201217 to C. L., per il progetto Brain mapping ha guidato l'elettrofisiologia con applicazioni nella ricerca sull'inquinamento acustico e acustico. Ringraziamo il Posgrado en Ciencias Biomédicas, l'Instituto de Neurobiologa dell'Universidad Nacional Autnoma de México (UNAM), il Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACyT) México per la Graduate Fellowship 578458 a FAM Manno.

L'attuale studio e le procedure sono stati approvati dai comitati etici della ricerca sugli animali della City University di Hong Kong, dell'Università di Hong Kong e del Dipartimento della Salute della Regione Amministrativa Speciale di Hong Kong.
1. Animali
<ol><li>Utilizzare ratti Sprague-Dawley (SD) di due mesi (N - 90, 200-250 g). NOTA: i roditori sono stati forniti dall'unità animale da laboratorio accreditata dell'Università di Hong Kong.</li>
	<li>Mantenere i ratti sotto una temperatura costante di 25 gradi centigradi e del 60-70% di umidità presso l'Unità di Ricerca Animale di Laboratorio.</li>
	<li>Casa roditori in cicli di luce / buio 12/12-h con accesso al cibo e acqua potabile, ad libitum.</li>
	<li>Acclimatarsi roditori per l'ambiente abitativo per almeno un giorno prima della chirurgia CHL.</li>
	<li>Raccogliere il roditore dal mischia e anesizzare il roditore con un cocktail di ketamina e xilarina (80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg, rispettivamente) tramite iniezione intraperitoneale (combinare 1,0 mL di ketamina con 0,5 mL di xilarcome concentrazione finale). NOTA: Utilizzare una siringa da 1 mL con un ago da 23-25G. Iniettare circa 0,2 mL per 100 g di peso corporeo del ratto per 30 min di anestesia.</li>
	<li>Eseguire il pizzico del dito del dito per verificare la sensazione di dolore e per corroborare l'anestesia corretta. Una reazione al pizzico dell'aldito profondo (per ritiro dell'arto posteriore) indica un'anestesia insufficiente.</li>
</ol>2. Configurazione chirurgica
<ol><li>Sterilizzare tutte le attrezzature in un autoclave o bicchiere caldo perline sterilizzatore prima di iniziare l'intervento chirurgico. Pulire l'area chirurgica con il 70% di etanolo.</li>
	<li>Utilizzare guanti di lattice e camice da laboratorio prima di iniziare la procedura.</li>
	<li>Posizionare un drappo chirurgico sterile sul banco pulito (Figura 1A).</li>
	<li>Sterilizzare microforbici e un otoscopio prima dell'intervento chirurgico per ridurre al minimo l'infezione dell'orecchio (Figura 1B).</li>
	<li>Posizionare le microforbici e l'otoscopio nell'area sterile.</li>
	<li>Posizionare il roditore nel campo chirurgico e in allineamento con il chirurgo.</li>
	<li>Procedere con l'induzione chirurgica di CHL.</li>
</ol>3. Induzione chirurgica della perdita dell'udito conduttiva
<ol><li>Posizionare la coda e la testa del roditore allineati in posizione prona, testa più vicina al chirurgo.</li>
	<li>Visualizzare l'orecchio sinistro e destro del roditore sotto l'otoscopio per garantire una sana membrana timpanica (Figura 2a). Valutare l'orecchio destro e sinistro di ogni roditore per verificare le condizioni sane prima dell'induzione della CHL.</li>
	<li>Afferrare l'elica dell'orecchio ed estendere il canale uditivo esterno (ad esempio, canale uditivo, meatus uditivo esterno, qui canale uditivo) per far sì che l'interno diventi oscurato e annerito dalla profondità. Qui, il canale uditivo è reso perpendicolare alla superficie della TM. NOTA: Assicurarsi che il cannel uditivo sia direttamente parallelo ora e che la TM formi un angolo retto con l'asse di inserimento delle microforsors. Sarà visualizzato come un tubo nero senza luce. A volte il canale uditivo deve essere inclinato con una leggera angolazione, circa 15 gradi rispetto alla superficie planare del cranio. Questo assicura che la mano del chirurgo sia perpendicolare alla superficie della TM.</li>
	<li>Introdurre le micro forbici al centro del canale uditivo prestando attenzione a non sfiorare o graffiare il tessuto del canale uditivo e procedere leggermente, circa 5 mm dal centro dell'oscurità, spingendo in avanti delicatamente attraverso il centro della TM. NOTA: la foratura TM può essere confermata da un suono pop quando le punte micro-forbice perforano la TM. Il suono popping può essere ascoltato a circa 2 min 52 s nel video. Questo non è un suono forbice; questo è un suono di puntura TM. Come misurato dopo l'analisi, il "pop" è di circa 20 dB SPL maggiore del suono di sottofondo come registrato da un microfono ad alta frequenza. Non c'è bisogno di verificare il suono "pop" in questa misura, la visualizzazione dell'otoscopio è sufficiente. L'investigatore potrebbe dover praticare l'esentire di un "pop" durante ogni procedura di CHL.</li>
	<li>Aprire immediatamente le micro forbici a molla e ruotare tre volte dopo aver forato la TM per garantire lo spostamento della testa del malleus lontano dal TM (solo se si desidera lo spostamento malleo).</li>
	<li>Rimuovere le microfors afors e posizionare il roditore sotto l'otoscopio per la visualizzazione. NOTA: È importante notare che non dovrebbe verificarsi alcun sanguinamento significativo dopo la procedura chirurgica. Eutanasia il roditore e non procedere alla valutazione comportamentale se si verifica un sanguinamento.</li>
	<li>Indurre CHL bilaterale procedendo come sopra nell'orecchio opposto.</li>
</ol>4. Visualizzazione otoscopio
<ol><li>Confermare un intervento chirurgico CHL di successo con un otoscopio utilizzando uno speculum di piccolo diametro per visualizzare l'orecchio medio del roditore.</li>
	<li>Valutare ogni roditore prima e dopo la procedura chirurgica CHL sotto l'otoscopio. Garantire la conferma della normale TM (Figura 2a) e della TM danneggiata dopo l'induzione di CHL (Figura 2b).</li>
	<li>
Cura post-operatoria per il roditore
	<ol>
<li>Posizionare il roditore nella gabbia di casa sotto una lampada calda.</li>
		<li>Osservare l'induzione del roditore dopo la CHL fino a quando i diritti del roditore stesso.</li>
		<li>Iniettare il roditore con il siero di glucosio (dextrose/saline) per recuperare coscienza e mettere il roditore nella gabbia di casa per il recupero. NOTA: Utilizzare un ago da 23G con una siringa da 10 mL per iniettare 5 mL di salina dopo l'intervento chirurgico CHL.</li>
		<li>Iniettare il roditore via intramuscolare con Enrofloxacin antibatterico 0,05 mg/kg due volte durante il periodo di recupero di 24 ore.</li>
		<li>Osservare regolarmente il roditore per il comportamento del dolore o sintomi dopo l'intervento chirurgico.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Valutazione comportamentale (convalida dell'induzione della CHL) - risposta clap startle
<ol><li>Corroborato CHL (dopo la conferma dell'otoscopio) 24 ore dopo l'intervento chirurgico con la valutazione comportamentale costituita dal clap-startle-test.</li>
	<li>Posizionare il ratto indotto dalla CHL accanto a un ratto normale in due gabbie adiacenti separate.</li>
	<li>Mettere i roditori in una stanza silenziosa.</li>
	<li>Stare a circa 0,5 m di distanza dai roditori e procedere a applaudire con durate egualmente distanziate un certo numero di volte (5 applausi sono stati scelti e distanziati su 1 secondo). NOTA: L'applauso prodotto dall'applauso della mano misurato 40 dB SPL maggiore del suono di sottofondo come registrato da un microfono ad alta frequenza.</li>
</ol>

<ol><li>Shargorodsky, J., Curhan, S. G., Curhan, G. C., Eavey, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+prevalence+of+hearing+loss+in+US+adolescents%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Change in prevalence of hearing loss in US adolescents.</a> The Journal of the American Medical Association. 304 (7), 772-778 (2010).</li>
<li>Lucas, J. W., Schiller, J. S., Benson, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Summary+health+statistics+for+U.S.+adults%3A+National+health+interview+survey%2C+2001%5BTitle%5D)+AND+%22National+Center+for+Health+Statistics.+Vital+and+health+statistics%22%5BJournal%5D)">Summary health statistics for U.S. adults: National health interview survey, 2001.</a> National Center for Health Statistics. Vital and health statistics. 10 (218), 1-134 (2004).</li>
<li>Gaffney, M., Green, D. R., Gaffney, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newborn+hearing+screening+and+follow-up%3A+Aare+children+receiving+recommended+services%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Health+Reports%22%5BJournal%5D)">Newborn hearing screening and follow-up: Aare children receiving recommended services?</a> Public Health Reports. 125 (2), 199-207 (2010).</li>
<li>Xu, H., Kotak, V. C., Sanes, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conductive+hearing+loss+disrupts+synaptic+and+spike+adaptation+in+developing+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Conductive hearing loss disrupts synaptic and spike adaptation in developing auditory cortex.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (35), 9417-9426 (2007).</li>
<li>Buran, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+period+for+the+impact+of+hearing+loss+on+auditory+perception%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A sensitive period for the impact of hearing loss on auditory perception.</a> The Journal of Neuroscience. 34 (6), 2276-2284 (2014).</li>
<li>Finck, A., Sofouglu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+sensitivity+of+the+Mongolian+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Auditory+Research%22%5BJournal%5D)">Auditory sensitivity of the Mongolian gerbil.</a> The Journal of Auditory Research. 6, 313-319 (1966).</li>
<li>Finck, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+sensitivity+of+the+Mongolian+Gerbil+%28Merionesunguiculatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Auditory sensitivity of the Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus).</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 41 (60), 1579(1967).</li>
<li>Finck, A., Schneck, C. D., Hartman, A. F. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+auditory+function+in+the+Mongolian+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Development of auditory function in the Mongolian gerbil.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 46 (1A), 107(1969).</li>
<li>Ryan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+sensitivity+of+the+Mongolian+gerbil%2C+Meriones+Unguiculatis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Hearing sensitivity of the Mongolian gerbil, Meriones Unguiculatis.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 59, 1222-1226 (1976).</li>
<li>Dallos, P., Harris, D., Ozdamar, O., Ryan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral%2C+compound+action+potential%2C+and+single+unit+thresholds%3A+relationship+in+normal+and+abnormal+ears%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Behavioral, compound action potential, and single unit thresholds: relationship in normal and abnormal ears.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 64 (1), 151-157 (1978).</li>
<li>Kelly, J. B., Potash, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directional+responses+to+sounds+in+young+gerbils+%28Meriones+unguiculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Psychology%22%5BJournal%5D)">Directional responses to sounds in young gerbils (Meriones unguiculatus.</a> Journal of Comparative Psychology. 100 (1), 37-45 (1986).</li>
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<li>Heffner, R. S., Koay, G., Heffner, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Audiograms+of+five+species+of+rodents%3A+implications+for+the+evolution+of+hearing+and+the+perception+of+pitch%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Audiograms of five species of rodents: implications for the evolution of hearing and the perception of pitch.</a> Hearing Research. 157 (1-2), 138-152 (2001).</li>
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<li>Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+conductive+hearing+loss+on+gerbil+central+auditory+system+activity+in+silence%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of conductive hearing loss on gerbil central auditory system activity in silence.</a> Hearing Research. 155, 124-132 (2001).</li>
<li>Cook, R. D., Hung, T. Y., Miller, R. L., Smith, D. W., Tucci, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+conductive+hearing+loss+on+auditory+nerve+activity+in+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of conductive hearing loss on auditory nerve activity in gerbil.</a> Hearing Research. 164, 127-137 (2002).</li>
<li>Albuquerque, A. A., Rossato, M., Oliveira, J. A., Hyppolito, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+anatomy+of+ears+from+guinea+pigs+and+rats+and+its+use+in+basic+otologic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Otorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Understanding the anatomy of ears from guinea pigs and rats and its use in basic otologic research.</a> Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 75, 43-49 (2009).</li>
<li>Li, P., Gao, K., Ding, D., Salvi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+anatomical+structures+of+rat+temporal+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otology%22%5BJournal%5D)">Characteristic anatomical structures of rat temporal bone.</a> Journal of Otology. 10, 118-124 (2015).</li>
<li>Judkins, R. F., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+anatomy+of+the+rat+middle+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngology-Head+and+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical anatomy of the rat middle ear.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 117, 438-447 (1997).</li>
<li>Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+rat+middle+ear.+A+study+under+the+dissection+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anatomica+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the rat middle ear. A study under the dissection microscope.</a> Acta Anatomica (Basel). 112, 346-352 (1982).</li>
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<li>Li, P., Ding, D., Gao, K., Salvi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+surgical+approaches+to+ear+surgery+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otology%22%5BJournal%5D)">Standardized surgical approaches to ear surgery in rats.</a> Journal of Otology. 10, 72-77 (2015).</li>
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<li>Wang, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+chronic+tympanic+membrane+perforation%3A+Ventilation+tube+with+mitomycin+C+and+dexamethasone%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+PediatricOtorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Rat model of chronic tympanic membrane perforation: Ventilation tube with mitomycin C and dexamethasone.</a> International Journal of PediatricOtorhinolaryngology. 80, 61-68 (2016).</li>
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<li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+conductive+hearing+loss+in+early+life+impairs+spatial+memory+of+rats+in+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Temporary conductive hearing loss in early life impairs spatial memory of rats in adulthood.</a> Brain and Behavior. 8, e01004(2018).</li>
</ol>

Gli autori non dichiarano conflitti di interessi finanziari o non finanziari.

Descriviamo una semplice induzione chirurgica di CHL con verifica utilizzando la visualizzazione dell'otoscopio e la risposta comportamentale dell'applauso nel ratto. Qui dimostriamo il metodo sul ratto e in precedenza questo metodo è stato applicato a gerbilli e topi. Il metodo può essere facilmente adottato per altri roditori. L'induzione di CHL consente lo studio di una sottile forma di perdita dell'udito che si manifesta nelle alterazioni corticali uditive e nei risultati comportamentali psicofisici...

La prevalenza della perdita dell'udito nei bambini e negli adulti è di circa il 19,5%1 e 15,2%2 rispettivamente. Tuttavia, circa il 39,3% di tutti i neonati con uno screening acustico anomalo non riceve un trattamento correttivo come riportato dai Centers for Disease Control3. La perdita dell'udito è una condizione ampiamente studiata e il roditore è un modello robusto per studiare i normali disturbi dell'udito e dell'udito4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Disturbi dell'udito come la perdita dell'udito conduttiva (CHL) portano ad un aumento della depressione sinaptica a breve termine nella corteccia uditiva4, che si traduce in pendenze psicometriche meno profonde associate a soglie di rilevamento della modulazione di frequenza 5. I modelli di perdita dell'udito conduttivi mediante rimozione/spostamento chirurgico della malleus, della puntura della membrana timpanica (TM) o del tappo per le orecchie sono facilmente impiegabili e consentono la rapida induzione del modello di perdita dell'udito5,14 ,15,16,17,18. L'obiettivo del presente protocollo e metodo è quello di dimostrare un modello CHL semplice e riproducibile nei roditori.
L'attuale protocollo è poco costoso (300 USD con tutti gli strumenti) e facilmente modificabile per le diverse attività di ricerca. Il ratto ha avuto valutazioni dettagliate dell'anatomia dell'orecchio medio19,20,21,22,23, approcci chirurgici24, modelli in otite media25, 26,27 e TM rigenerazione foratura16,17,18,28,29,30, che lo rende un modello ideale per studiare perdita dell'udito. Qui, una semplice procedura di induzione di CHL è descritta con la verifica tramite otoscopio e valutazione comportamentale con risposta clap startle nel ratto, che poi può essere utilizzata per esplorare ulteriori sequele di perdita dell'udito. La procedura CHL è indotta dalla puntura chirurgica della TM. La verifica della procedura CHL viene eseguita dalla visualizzazione dell'otoscopio per determinare l'assenza della TM. La valutazione comportamentale viene eseguita da un livello di pressione sonora (SPL) ad alto decibel (dB). Questo metodo è stato applicato in precedenza in una varietà di roditori. È facile da replicare, produce robuste differenze psicometriche e cambiamenti nelle risposte fisiologiche neurali4,5,16,17,18.

<table><tbody><tr><td>Guanti in lattice, polivinile o nitrile</td><td>AMMEX</td><td></td><td>Utilizzare guanti senza polvere Forbici</td></tr> a molla Micro da 8 mil <tr><td>(vedi Fig. 1b)</td><td>RWD Life Science</td><td>S11035-08</td><td>Lunghezza totale 8,0 cm, con tagliente da 3,5 mm, o micro pinze simili. Le pinzette standard con azione a molla saranno sufficienti</td></tr><tr><td>Otoscopio mini 3000</td><td>HEINE&nbsp;</td><td>D-008.70.120M</td><td>L'otoscopio LED standard sarà sufficiente</td></tr><tr><td>per ratti o topi</td><td>JAX labs</td><td></td><td>Qualsiasi piccolo roditore</td></tr><tr><td>Piccola gabbia per roditori</td><td>Tecniplast</td><td>1284L</td><td>Servono due gabbie per separare il roditore CHL dal roditore udente. Se i roditori sono a diretto contatto tra loro, si spaventeranno a vicenda. Dimensioni della gabbia 365 x 207 x 140 mm, superficie del pavimento: 530 cm2/82,15 in2</td></tr></tbody></table>

semplice induzione chirurgica della perdita dell'udito conduttiva con verifica utilizzando la visualizzazione dell'otoscopio e la risposta di clap di clap di comportamento in ratto

Simple Surgical Induction of Conductive Hearing Loss with Verification Using Otoscope Visualization and Behavioral Clap Startle Response in Rat

L'ipoacusia conduttiva (CHL) è un'imposizione uditiva prevalente negli esseri umani. L'obiettivo del protocollo è descrivere una semplice procedura chirurgica per indurre CHL nei roditori. Il protocollo dimostra CHL da puntura a membrana timpanica. La verifica della chirurgia CHL è stata effettuata mediante esame di otoscopio e valutazione comportamentale mediante risposta clap startle, sia replicabile che affidabile, e sono semplici metodi per dimostrare che si è verificata la perdita dell'udito. La semplice procedura CHL è vantaggiosa per la sua riproducibilità e flessibilità nei diversi inseguimenti nella ricerca sulla perdita dell'udito. I limiti di indurre CHL con un approccio chirurgico sono associati alla curva di apprendimento per eseguire la procedura chirurgica e la fiducia nell'esame audiologico. L'induzione di un'ipoacusia da parte della CHL consente di studiare facilmente le manifestazioni neurali e gli esiti comportamentali della perdita dell'udito.

La semplice procedura CHL è stata eseguita su 90 ratti e da questo gruppo 2 ha avuto sanguinamento significativo e 2 non hanno avuto perdita dell'udito il giorno successivo, come valutato da clap startle comportamentale. Questi quattro ratti sono stati scartati. I ratti dovrebbero essere scartati come descritto dai motivi della discussione a causa di complicazioni. L'induzione di foratura e/o malleus spostamento/rimozione di malleus (Figura 2B) provoca CHL, c...

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un'induzione della perdita dell'udito conduttiva replicabile tramite la puntura chirurgica della membrana tipopanica e la verifica mediante la visualizzazione dell'otoscopio e la valutazione comportamentale tramite clap startle.

Semplice induzione chirurgica della perdita dell'udito conduttiva con verifica utilizzando la visualizzazione dell'otoscopio e la risposta di clap di clap di comportamento in ratto

Conductive hearing loss (CHL) is a prevalent hearing impairment in humans. The goal of the protocol is to describe a simple surgical procedure for ...

L'obiettivo generale di questo studio è quello di stabilire un'induzione affidabile della perdita dell'udito tramite puntura chirurgica della membrana timpanica e verifica mediante visualizzazione dell'otoscopio e valutazione comportamentale da parte di clap startle. Lo scopo del nostro pratico è quello di sviluppare un modello per i disturbi conduttivi dell'udito umano. Dimostriamo nella pratica, la procedura chirurgica conduttiva di perdita dell'udito, che è una semplificazione nella rimozione del malleo, il metodo per verificare la perdita dell'udito conduttiva tramite visualizzazione dell'otoscopio e una semplice startle comportamentale dell'applauso, che convalida che si è verificata una perdita dell'udito conduttiva.Il principale vantaggio della procedura che abbiamo descritto sono le procedure non invasive, la verifica della perdita dell'udito conduttiva mediante otoscopio e la convalida mediante clap startle. Il presente studio e le procedure sono stati approvati dal comitato etico per la ricerca sugli animali e dalla City University di Hong Kong, dall'Università di Hong Kong e dal Dipartimento della Salute della regione amministrativa speciale di Hong Kong. Per il presente protocollo, scegliamo ratti, ma puoi scegliere qualsiasi roditore.Pesare gli animali per garantire un'anestesia adeguata per l'iniezione IP. Per l'anestesia, è importante che gli animali abbiano la dose corretta. Prendi il tuo topo per la trasandata.Assicurarsi la dose corretta di chetamina e xiazina per iniezione IP e iniettare. Assicurarsi di eseguire il pizzicotto per verificare che non si verifichi la sensazione di dolore. Per la configurazione chirurgica è costituito dal topo anestetizzato, dai microscissori e dall'otoscopio.Si prega di pulire accuratamente l'area chirurgica con etanolo. Posizionare il drappo chirurgico sulla panca pulita. Successivamente introduci le forbici, l'otoscopio e il ratto.La dimensione delle forbici dipenderà dalle dimensioni del roditore. Sotto otoscopio, visualizzare l'orecchio sinistro e destro del ratto per garantire una membrana timpanica sana. Afferra l'elica ed estendi il canale uditivo esterno per diventare oscurato e annerito.Qui introdurrete i microscissori. Introdurre i microscissori al centro del canale uditivo, prestando molta attenzione a non intasare il tessuto. Ascolta il suono pop, quindi gira per assicurarti lo spostamento del malleo.La conferma di un intervento chirurgico di perdita dell'udito conduttiva di successo, deve essere effettuata con un otoscopio. Valutare ogni orecchio di ratto prima e dopo l'intervento chirurgico con un otoscopio con uno speculum di piccolo diametro. Quando viene visualizzato con un otoscopio, devono essere studiate le differenze tra una normale membrana timpanica e una membrana timpanica perforata.Qui, la normale membrana timpanica a sinistra ha la testa del malleo in posizione ed è drasticamente diversa dalla membrana timpanica perforata a destra. La membrana timpanica perforata, dopo l'intervento conduttivo di perdita dell'udito, ha il malleo spostato e la pars tensa interrotta con l'umbo del malleo e la testa completamente mancanti. Cura postoperatoria per i roditori.Posizionare il roditore nella gabbia domestica sotto una lampada calda e iniettare agenti antibatterici e glucosio. Corroborare la perdita dell'udito connettiva con la startle del clap comportamentale. Il ratto CHL è posto accanto a un topo normale in due gabbie adiacenti.Questi sono collocati in una stanza silenziosa. Stare a mezzo metro di distanza e applaudire in durate equamente distanziate un numero specifico di volte. Qui, ne scegliamo cinque.Qui, i nostri risultati comportamentali rappresentativi. Si noti che il topo nella parte inferiore non salta al suono forte dell'applauso. Il topo nella parte superiore dello schermo è sorpreso da questi forti suoni di applausi.Si prega di studiare la differenza prima e dopo l'applauso per questi due ratti. Mancata indurzione dell'ipoacusia conduttiva. La mancata indurzione della perdita dell'udito conduttiva potrebbe essere causata da sanguinamento in una o entrambe le orecchie.E in questo caso, il roditore dovrebbe essere eutanasiato. Ciò indicherebbe che le forbici non hanno avuto contatto con la membrana timpanica. Un suono senza spunta durante la procedura.Un suono senza sboccamento indicherebbe che la procedura di perdita dell'udito conduttiva era scarsa e non pulita. Un suono senza popping significherebbe che i tuoi microscissori non hanno avuto un contatto diretto con la membrana timpanica. Visualizzazione dell'otoscopio.Se, durante la visualizzazione tramite otoscopio, la membrana timpanica appare normale, ciò indicherebbe che non si è verificato alcun CHL. Una risposta al forte clap sound test. Ciò indicherebbe che non si è verificato alcun CHL e che il roditore non ha perdita dell'udito conduttiva.Ciò si verificherebbe quando un topo salta o è sorpreso da un forte segnale acustico. Il principale vantaggio della procedura che abbiamo descritto sono le procedure non invasive, la verifica della perdita dell'udito conduttiva mediante otoscopio e la convalida tramite clap startle. Dopo aver fatto il pratico, puoi indurre la perdita dell'udito conduttiva in un modello di roditore ed esplorare le manifestazioni comportamentali e psicofisiche di questo disturbo dell'udito.

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Determinazione del comportamento della discriminazione Coppia stimolo acustico stimoli uditivi e elettrica utilizzando un condizionamento classico e alla frequenza cardiaca approccio

Un metodo veloce ed economico per la determinazione del comportamento di sentire parametri come soglie uditive, uditive o percezioni fantasma (tinnito soggettivo) è descritto. Esso utilizza pre-impulso di inibizione della risposta agli stimoli acustici e può essere facilmente implementato in un personal computer utilizzando un programmabile AD / DA-convertitore e un sensore piezoelettrico.

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Diversi rivestimenti degli elettrodi influiscono sulle prestazioni di registrazione neurale attraverso modifiche alle proprietà elettrochimiche, chimiche e meccaniche. Confronto di elettrodi in vitro è relativamente semplice, tuttavia confronto della risposta in vivo è tipicamente complicata da variazioni di distanza elettrodo / neurone e tra animali. Questo articolo fornisce un metodo robusto per confrontare elettrodi di registrazione neurali.

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