Name: Formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi NOG (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: Scopri l'imaging multimodale bioluminescente e PET/TC per studiare il mieloma multiplo engrafted nel midollo osseo di topi NOG. Questo metodo non invasivo consente analisi longitudinali dell'inibizione di mTOR.

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Questo lavoro è stato supportato da una grant1I01BX001532 di merito VA dagli Stati Uniti Dipartimento di veterani affari laboratorio ricerca biomedica e sviluppo servizio (uccelli) di P.F. ed E.C. riconosce il supporto dal servizio VA clinica scienza R & S ( I01CX001388 premio di merito) e riabilitazione VA R & D Service (Merit Award I01RX002604). Ulteriore supporto è venuto da una sovvenzione di seme facoltà di UCLA a J.K. Questi contenuti non rappresentano necessariamente le opinioni di US Department of Veterans Affairs o il governo degli Stati Uniti.

Tutte le procedure degli animali descritte di seguito sono state approvate dal istituzionale Animal Care e uso Committee (IACUC) del sistema Greater Los Angeles VA sanitario e sono state eseguite in condizioni sterili ed esenti da patogeni.
1. preparazione di cellule che esprimono Luciferase 8226 (8226-LUC)
<ol><li>Mantenere la linea cellulare umana MM, 8226, in RPMI-1640 supplementato con 10% siero bovino fetale (FBS) e 1% di penicillina-streptomicina a 37 ° C in atmosfera umidificata contenente 95% aria e 5% di anidride carbonica (CO2).</li>
	<li>Generare cellule reporter 8226 LUC-esprimendo stabili di transfezione 1 x 106 8226 cellule con un vettore reporter luciferasi seguita da una selezione con igromicina (100-350 mg/mL) come precedentemente descritto6.</li>
	<li>Mantenere le cellule in condizioni coltura sterile standard per 2-3 settimane, cambiando il mezzo ogni altro giorno, fino a quando l'istituzione di una linea cellulare 8226 stabilmente trasfettate è stato generato.</li>
	<li>Confermare l'attività in vitro luciferasi in 1 x 106 transfettate cellule/100 µ l di tampone fosfato salino (PBS) aggiungendo il substrato di luciferasi, D-luciferina (150 µ g/mL soluzione di lavoro nel terreno di coltura preriscaldato) e misurando la bioluminescenza delle cellule in una provetta o in piastra a 96 pozzetti utilizzando un luminometro6.</li>
</ol>2. modello dello xenotrapianto Orthotopic
<ol><li>Mantenere i topi NOG (4-6 settimane vecchie, maschile o femminile) in condizioni sterili/patogeno-gratuito in una struttura appropriata cura degli animali.</li>
	<li>Preparare i 8226 LUC-transfettati per iniezione IV in topi NOG (~ 5 x 106 cellule/mouse) il giorno dell'esperimento. Lavare le cellule 3 x in PBS ghiacciata, contarli e li risospendere in PBS ghiacciata (meno antibiotici e FBS) ad una concentrazione finale di 5 x 106 cellule/200 µ l di PBS) in una provetta sterile. Mantenere le cellule sul ghiaccio e sfidare i topi più presto (entro 30-120 min).</li>
	<li>Anestetizzare il mouse (con isoflurano, 1% - 3% in aria a 0,5 - 1 L/min) e posizionare l'animale in posizione supina su una piastra elettrica con la testa rivolta verso via. Controllare il livello di amputate pizzicando la punta. Applicare unguento oftalmico agli occhi.</li>
	<li>Iniettare le cellule 8226-LUC in topi tramite la vena di coda (200 µ l/iniezione) utilizzando una siringa da insulina 1 mL e un ago 26-G. Nota: Una lampada di calore può essere utilizzata per riscaldare la coda, quindi dilatare la vena e aumentando l'efficacia delle iniezioni.</li>
	<li>Restituire l'animale alla loro gabbia e monitorare gli animali fino a quando non hanno pienamente recuperato.</li>
	<li>Confermare il engraftment delle cellule 8226-LUC nello scheletro del mouse misurando la BLI in topi anestetizzati (descritto di seguito e illustrato nella Figura 1A). Nota: Gli essudati BM possono essere macchiati anche per espressione di CD45 umano mediante citometria a flusso (Figura 1B) o mediante immunoistochimica di osseo prelevato (Figura 1).</li>
</ol>3. misurazione di BLI In Vivo
Nota: In genere, BLI misurabili da engrafted tumori in topi possono essere osservati prima tra postchallenge di 10-20 giorni, ma questo potrebbe essere necessario essere determinati sperimentalmente.
<ol><li>Anestetizzare il mouse (con isoflurano, 1% - 3% in aria a 0,5 - 1 L/min) e controllare il livello di amputate pizzicando la punta. Applicare unguento oftalmico ai suoi occhi.</li>
	<li>Dare l'animale un'iniezione di IP (200 µ l/iniezione) di "in vivo-grade" substrato D-luciferina (30 mg/mL diluito in soluzione salina sterile).</li>
	<li>Misurare la BLI entro 5-10 min, dopo l'iniezione del substrato luciferina (anche se l'attività BLI può essere osservabile nei topi per fino a 45-60 min), mettendo l'animale anestetizzato in posizione supina in un sistema di imaging di piccoli animali (Figura 2 ). Selezionare luminescenti e analisi dei raggi x e acquisire immagini (Figura 3).<ol>
<li>Misurare la radianza media (/steradian di fotoni/s/cm2) in determinate regioni di interesse (ROI) utilizzando software di imaging (Figura 4).</li>
		<li>Restituire l'animale alla sua gabbia e monitorarlo finché non ha recuperato completamente (circa 15-20 min).</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. trattamento dei topi con terapia mirata
<ol><li>Misurare la previsione BLI e randomize gli animali in gruppi di trattamento (4-8 topi/gruppo).</li>
	<li>Trattare i topi con un'iniezione di IP (200 µ l/iniezione) di temsirolimus (0,2 - 40 mg/kg topo) usando un regime di cinque iniezioni giornaliere di IP seguita da 2 giorni di riposo e un ulteriori cinque iniezioni quotidiane11.</li>
	<li>Misurare l'attività luciferasica (/steradian di fotoni/s/cm2) 2 volte a settimana come descritto nella sezione 3 e trama la variazione del BLI nel tempo. Cambiamenti nel tumore BLI può essere presentato come immagini di serie dei topi (figura 5B). Nota: È consigliabile che il monitoraggio quotidiano degli animali essere eseguita fino a quando essi presentano i seguenti sintomi (in genere entro 45-60 giorni la sfida iniziale): peso perdita (perdita di oltre il 10% rispetto al peso prima dell'impianto) e/o posteriori paralisi degli arti, momento in cui essi dovrebbero essere euthanized utilizzando una camera di CO2 seguita da dislocazione cervicale.</li>
</ol>5. PET/CT analisi utilizzando 18F-FDG su misura cambia nel metabolismo del tumore
<ol><li>Veloce gli animali nella loro gabbia a casa togliendo loro cibo per 24 h prima dell'esperimento per evitare l'assorbimento di 18F-FDG in eccesso-non specifico.</li>
	<li>Preparare 18sonde radiomarcate F FDG PET (50-100 µ ci/iniezione in soluzione fisiologica sterile) il giorno dell'esperimento. Registrare il tempo e l'attività della sonda 18F-FDG con un calibratore di dose. Nota: Perché 18F ha un'emivita relativamente breve (~ 2 h), è necessario stabilire una preparazione accurata e la pianificazione per l'utilizzo di queste sonde.</li>
	<li>Anestetizzare l'animale (con isoflurano, 1% - 3% in aria a 0,5 - 1 L/min) e posizionarlo in posizione supina su una piastra elettrica con la testa rivolta verso via. Controllare il livello di amputate pizzicando la punta. Applicare unguento oftalmico ai suoi occhi.</li>
	<li>Iniettare la sonda tramite vena caudale (100 µ l/iniezione) utilizzando una siringa da insulina schermato 1 mL e un ago 26-G. Nota: Una lampada di calore può essere utilizzata per riscaldare la coda, quindi dilatare la vena e aumentando l'efficacia delle iniezioni.</li>
	<li>Misurare la radioattività residua in ago/siringa in un calibratore di dose e annotare l'attività e il tempo. Nota: La standardizzazione di incubazione del mouse, dosaggio e tempi è essenziale per assicurare la comparabilità e la riproducibilità dei dati.</li>
	<li>Mantenere i topi sotto anestesia e a 37 ° C, con un rilievo di riscaldamento durante l'intero periodo dell'assorbimento della sonda (~ 45-90 minuti). Nota: È importante che i topi rimangono quiescenti e a 37 ° C per evitare l'assorbimento non specifico della sonda.</li>
	<li>Scaglionare le iniezioni della sonda 18F-FDG si verificano a intervalli di circa 20 - 30 min per garantire tempi di etichettatura simili nei topi. Nota: Il corretto flusso di lavoro e la tempistica delle iniezioni sonda si tradurrà in condizioni ottimale e riproducibile imaging.</li>
	<li>Misurare l'attività di 18F-FDG in un sistema imaging piccoli animali di PET/CT in determinate regioni di interesse che corrispondono ai tumori engrafted (Figura 6). Nota: Inizialmente, si consiglia un'esposizione di PET statica di 10 min e un'esposizione di CT 2 min, ma i tempi di esposizione esatta potrebbero essere necessario essere determinati sperimentalmente.</li>
	<li>Restituire gli animali ai loro gabbie casa e monitorarli fino a completamente recuperato. Casa i topi in una sala dedicata di ritorno per 24 h, mentre i decadimenti di sonda ai livelli di fondo. Nota: A causa della breve emivita di 18F, misurazioni multiple usando una sonda fresca possono essere fatta con una frequenza 2 volte a settimana.</li>
</ol>

<ol><li>Raab, M. S., Podar, K., Breitkreutz, I., Richardson, P. G., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19541364">Multiple Myeloma.</a> The Lancet. 374 (9686), 324-339 (2009).</li>
<li>Galson, D. L., Silbermann, R., Roodman, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Multiple+Myeloma+Bone+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Multiple Myeloma Bone Disease.</a> BoneKEy Reports. 1, 135(2012).</li>
<li>Anderson, K. C., Carrasco, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+Myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of Myeloma.</a> Annual Review of Pathology. 6, 249-274 (2011).</li>
<li>Reagan, M. R., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Navigating+the+Bone+Marrow+Niche%3A+Translational+Insights+and+Cancer-Driven+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Navigating the Bone Marrow Niche: Translational Insights and Cancer-Driven Dysfunction.</a> Nature Reviews Rheumatology. 12 (3), 154-168 (2016).</li>
<li>Frost, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+Target+of+Rapamycin+Inhibitors+Induce+Tumor+Cell+Apoptosis+in+Vivo+Primarily+by+Inhibiting+Vegf+Expression+and+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Mammalian Target of Rapamycin Inhibitors Induce Tumor Cell Apoptosis in Vivo Primarily by Inhibiting Vegf Expression and Angiogenesis.</a> Journal of Oncology. 2013, 897025(2013).</li>
<li>Mysore, V. S., Szablowski, J., Dervan, P. B., Frost, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+DNA-Binding+Molecule+Targeting+the+Adaptive+Hypoxic+Response+in+Multiple+Myeloma+Has+Potent+Antitumor+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A DNA-Binding Molecule Targeting the Adaptive Hypoxic Response in Multiple Myeloma Has Potent Antitumor Activity.</a> Molecular Cancer Research. 14 (3), 253-266 (2016).</li>
<li>Podar, K., Chauhan, D., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+Marrow+Microenvironment+and+the+Identification+of+New+Targets+for+Myeloma+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Bone Marrow Microenvironment and the Identification of New Targets for Myeloma Therapy.</a> Leukemia. 23 (1), 10-24 (2009).</li>
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<li>Miyakawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+New+Model+of+Human+Multiple+Myeloma+Using+Nod%2FScid%2FGammac%28Null%29+%28Nog%29+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Establishment of a New Model of Human Multiple Myeloma Using Nod/Scid/Gammac(Null) (Nog) Mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 313 (2), 258-262 (2004).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod%2FScid%2FGamma%28C%29%28Null%29+Mouse%3A+An+Excellent+Recipient+Mouse+Model+for+Engraftment+of+Human+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nod/Scid/Gamma(C)(Null) Mouse: An Excellent Recipient Mouse Model for Engraftment of Human Cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li>
<li>Frost, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Antitumor+Effects+of+the+Mtor+Inhibitor+Cci-779+against+Human+Multiple+Myeloma+Cells+in+a+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">In Vivo Antitumor Effects of the Mtor Inhibitor Cci-779 against Human Multiple Myeloma Cells in a Xenograft Model.</a> Blood. 104 (13), 4181-4187 (2004).</li>
<li>Asosingh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+Hypoxic+Bone+Marrow+Microenvironment+in+5t2mm+Murine+Myeloma+Tumor+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Role of the Hypoxic Bone Marrow Microenvironment in 5t2mm Murine Myeloma Tumor Progression.</a> Haematologica. 90 (6), 810-817 (2005).</li>
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<li>Czernin, J., Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positron+Emission+Tomography+Scanning%3A+Current+and+Future+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+Medicine%22%5BJournal%5D)">Positron Emission Tomography Scanning: Current and Future Applications.</a> Annual Review Medicine. 53, 89-112 (2002).</li>
<li>Pandey, M. K., Bhattacharyya, F., Belanger, A. P., Wang, S. Y., DeGrado, T. R. <a target="_blank" href="https://www.ahajournals.org/doi/abs/10.1161/circ.122.suppl_21.A12657">Pet Imaging of Fatty Acid Oxidation and Glucose Uptake in Heart and Skeletal Muscle of Rats: Effects of Cpt-1 Inhibition.</a> Circulation. 122 (21), (2010).</li>
<li>Wang, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+Vivo+Molecular+Imaging+Probe+%2818%29F-Annexin+B1+for+Apoptosis+Detection+by+Pet%2FCt%3A+Preparation+and+Preliminary+Evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">An in Vivo Molecular Imaging Probe (18)F-Annexin B1 for Apoptosis Detection by Pet/Ct: Preparation and Preliminary Evaluation.</a> Apoptosis. 18 (2), 238-247 (2013).</li>
</ol>

L'autore Kevin Francis è un dipendente della Perkin-Elmer.

Nonostante una varietà di modelli preclinici dello xenotrapianto di MM6,9,11,12,13, la capacità di studiare le interazioni tumore/BM all'interno del microambiente BM rimane difficile 14. le tecniche qui descritte consentono il rapido e riproducibile engraftment delle cellule di tumori 8226-LUC nello scheletro dei topi NOG.
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MM è una malattia incurabile costituita da plasma maligno B-cellule che infiltrano il BM e causare la distruzione dell'osso, l'anemia, insufficienza renale e infezione. MM rende fino al 10% - 15% di tutte le neoplasie ematologiche1 ed è il cancro più frequente di coinvolgere lo scheletro2. Lo sviluppo del MM deriva dalla trasformazione oncogena longeve delle cellule di plasma che vengono stabilite in centri germinali dei tessuti linfoidi prima alla fine homing al BM3. Il BM è caratterizzata da nicchie altamente eterogenei; tra cui componenti cellulari diversi e critici, regioni di basso pO2 (ipossia), ricca vascolarizzazione, complesse matrici extracellulari e reti di citochine e fattori di crescita, che contribuiscono a MM dimostato4. Così, lo sviluppo di un modello di xenotrapianto MM diffuso caratterizzato da tumori che sono rigorosamente innestati in BM sarebbe uno strumento molto potente e clinicamente rilevante per lo studio MM patologia in vivo5,6. Tuttavia, numerosi ostacoli tecnici possono limitare l'efficacia della maggior parte dei modelli dello xenotrapianto, che li rende costosi e difficili da applicare. Questo include problemi connessi con il engraftment coerenti e riproducibili del tumore all'interno della nicchia di BM, un tempo prolungato per lo sviluppo del tumore e le limitazioni nella capacità di direttamente osservare e misurare le variazioni della crescita del tumore/sopravvivenza senza dover sacrificio di topi nel corso dell'esperimento7,8.
Questo protocollo utilizza un modello di xenotrapianto modificate che inizialmente è stato sviluppato da Miyakawa et al. 9, in cui una sfida per via endovenosa (IV) con cellule di mieloma si traduce in "diffusi" tumori che costantemente e riproducibile attecchire nei topi BM di NOD/SCID/IL-2γ(null) (NOG)10. La visualizzazione in situ di questi tumori è raggiunto mediante la trasfezione stabile della 8226 umano linea cellulare MM con un allele LUC e in serie misurano l'evoluzione della BLI prodotta da queste cellule di tumore engrafted6. D'importanza, questo modello può essere ampliato per utilizzare vari altri che esprimono LUC MM linee cellulari umane (ad es., U266 e OPM2) con una tendenza simile a specificamente interdigitate nello scheletro dei topi NOG. L'identificazione dei tumori da bioluminescenti imaging dei topi è seguita misurando la captazione del radiofarmaci sonde (ad esempio 18F-FDG) di PET/CT. insieme, in questo modo ulteriore caratterizzazione dei critici biochimico vie (cioè, le alterazioni nel metabolismo, cambiamenti in ipossia e l'induzione di apoptosi) all'interno del microambiente del tumore/BM. I principali punti di forza di questo modello può essere evidenziate dalla disponibilità di una vasta gamma di sonde radioattive, bioluminescenti e fluorescente e marcatori che possono essere usati per studiare la progressione MM e patologia in vivo.

<table><tbody><tr><td>8226 linea cellulare di mieloma umano</td><td>ATCC</td><td>CCL-155</td><td></td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Topi (NOG)</td><td>Jackson Labs</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>VivoGlo Luciferin substrato</td><td>Promega</td><td>P1041</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxyprobe-1Kit</td><td>HPL</td><td>HP1-100</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45 (clone H130)</td><td>BD Biosciences</td><td>555483</td><td>Utilizzato per la citometria a flusso per identificare le cellule tumorali CD45+ umane nell'essudato BM</td></tr> di <tr><td>coniglio anti-umano CD45 (clone D3F8Q)</td><td>Segnalazione cellulare Tecnologia</td><td>70527</td><td>Anticorpo primario utilizzato per l'immunoistochimica dell'osso asportato</td></tr><tr><td>IgG di capra anti-coniglio (HRP coniugato)</td><td>ABCAM</td><td>ab205718</td><td>Anticorpo Seconday utilizzato per l'immunoistochimica dell'osso asportato</td></tr><tr><td>Sistema di analisi reporter a doppia luciferasi</td><td>Promega</td><td>E1910</td><td></td></tr><tr><td>pGL4.5 Luciferasi Reporter vettore</td><td>Promega</td><td>E1310</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina XRMS In Sistema di imaging Vivo</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sofie G8 Sistema di imaging PET/CT</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi nog

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Mieloma multiplo (MM) tumori attecchire nel midollo osseo (BM) e la loro sopravvivenza e la progressione dipendono da complesse interazioni molecolari e cellulari che esistono all'interno di questo microambiente. Ancora il microambiente BM non può essere facilmente replicato in vitro, che potenzialmente limita la rilevanza fisiologica di molti modelli sperimentali in vitro ed ex vivo . Questi problemi possono essere superati utilizzando un modello di xenotrapianto in cui luciferasi (LUC)-cellule trasfettate 8226 MM saranno specificamente interdigitate nello scheletro del mouse. Quando questi topi sono dato il substrato appropriato, D-luciferina, gli effetti della terapia sulla crescita del tumore e la sopravvivenza può essere analizzata misurando i cambiamenti nelle immagini bioluminescenti (BLI) prodotto dai tumori in vivo. Questi dati BLI combinato con analisi di tomografia (PET/CT) emissione positronica tomografia/calcolo utilizzando l'indicatore metabolico 2-deoxy - 2-(18F) fluoro-D-glucosio (18F-FDG) è utilizzato per monitorare i cambiamenti nel metabolismo del tumore nel tempo. Queste piattaforme imaging consentono misurazioni non invasive più all'interno del microambiente del tumore/BM.

Negli studi pilota iniziali, iniezioni IV delle cellule 8226-LUC in topi NOD/SCID non hanno sviluppato i tumori BM-engrafted MM, anche se squamose MM tumori erano facilmente formati (100% tasso di successo). Al contrario, sfide IV con 8226 cellule nei topi NOG generato (nel raggio di 15-25 giorni) tumori nello scheletro (e soli raramente formati tumori nei tessuti muscolo-scheletrici, come il fegato o la milza). Poiché i tumori nello scheletro visivamente non potrebbero essere confermati ...

Qui usiamo bioluminescenti, raggi x ed emissione di positroni tomografia/computato tomografia imaging per studiare l'attività come inibitore di mTOR urta i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in un modello dello xenotrapianto. Questo permette analisi fisiologicamente pertinenti, non invasivo e multimodale dell'effetto anti-mieloma di terapie designando i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in vivo.

Formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi NOG

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

Questo metodo può essere utilizzato per rispondere a domande chiave sul ruolo del micro-ambiente del midollo osseo e sulla sopravvivenza dei tumori del mieloma innestati. Il vantaggio principale di questa procedura è che può essere applicato a studi longitudinali anti-farmaci e utilizzato per saggiare più vie biochimiche in modo non invasivo. Il giorno dell'esperimento lavare per la prima volta le 8226 cellule trasfatte luciferasi tre volte in PBS ghiacciato a 200 RCF per cinque minuti per centrifigazione e rimescolare il pellet in PBS freddo ghiaccio fresco a cinque volte dieci al sesto cellule per 200 microlitri di PBS ghiacciato per topo.Successivamente confermare una mancanza di risposta al dito del dito in un topo NOG anestetizzato di quattro o sei settimane e applicare un unguento oftalmico agli occhi dell'animale. Caricare le cellule in una siringa per insulina da un millilitro dotata di un ago calibro 26. Iniettare l'intero volume di cellule nella vena di coda dell'animale, prima di riportare il mouse nella sua gabbia, monitorando fino al pieno recupero.Da dieci a venti giorni dopo la sfida, iniettare ogni animale innestato con 200 microlitri di substrato D-luciferina di gr

multimodal-bioluminescent-positronic-emission-tomographycomputational

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Luciferasi modificati xenotrapianti di tumori al cervello umano può essere stabilita intracranially in topi atimici, con successivo monitoraggio della crescita tumorale e la risposta alla terapia con l'imaging bioluminescenza. In combinazione con l'analisi di sopravvivenza, il monitoraggio bioluminescenza è uno strumento di ricerca indispensabile per test pre-clinici di terapie che sono considerati per il trattamento dei tumori cerebrali.

Stabilire intracranica xenotrapianti Brain Tumor Con successiva analisi della crescita tumorale e risposta alla terapia con Imaging bioluminescenza

Un modello murino sperimentale di metastasi ossee è stata fondata dopo la consegna intracardiaca di cellule tumorali che esprimono luciferasi mammarie. Sviluppo del tumore e ha portato lesione osteolitica sono stati monitorati longitudinalmente con bioluminescenza e micro-TC.

Monitoraggio metastasi tumorali e lesioni osteolitiche con bioluminescenza e Micro CT Imaging

L'imaging bioluminescenza di ipossia-inducibile fattore 1α attività è applicata a monitorare lo sviluppo del tumore ipossia cerebrale in un modello di cancro al seno del mouse metastasi al cervello.

In Imaging bioluminescenza in vivo di Dinamica Tumore ipossia di metastasi cerebrali cancro al seno in un modello murino

Diffuse la tomografia di fluorescenza offre un approccio relativamente a basso costo e potenzialmente ad alta dappertutto per...

Tomografia Computerizzata guidata nel dominio del tempo Tomography Diffuse fluorescenza in animali di piccola taglia per la localizzazione dei biomarcatori tumorali

Descriviamo un metodo integrato per la precisione, l'impianto stereotassico di cellule umane di glioblastoma multiforme nel cervello di topi nudi e seriali...

Stereotassica impianto intracranico e<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent di xenotrapianti di tumori in un sistema modello del mouse di Glioblastoma Multiforme

In questo video, descriviamo la tomografia molecolare a fluorescenza o FMT per l'imaging in vivo di xenotrapianti di glioblastoma marcati con proteine fluorescenti in modelli murini. La tecnica è utile per chiarire gli effetti delle terapie antitumorali a livello molecolare.

Tomografia molecolare a fluorescenza: una tecnica di imaging per l'imaging in vivo di xenotrapianti di glioblastoma con marcatura proteica fluorescente in un modello murino

Fonte: Clark, A.J., et al. Imaging a bioluminescenza di un modello animale immunocompetente per il glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Questo video mostra l'imaging a bioluminescenza per monitorare la progressione del glioblastoma in un modello murino immunocompetente, utilizzando cellule tumorali che esprimono luciferasi e luciferina per quantificare la crescita tumorale in modo non invasivo.

Imaging a bioluminescenza di un modello murino immunocompetente per il glioblastoma

L'impianto di innesti ossei autologhi e allogenici costituiscono accettato approcci per trattare la perdita di massa ossea cranio-facciale. Eppure l'effetto della composizione trapianto sull'interazione tra neovascolarizzazione, la differenziazione cellulare e la formazione delle ossa non è chiaro. Vi presentiamo un protocollo di imaging multimodale mira a chiarire l'interdipendenza angiogenesi-osteogenesi in prossimità dell'innesto.

Tomografia Computerizzata e Optical Imaging di osteogenesi-angiogenesi Accoppiamento per valutare l&#39;integrazione di craniche Bone Autoinnesti e Alloinnesti

Qui, presentiamo un protocollo per utilizzare iniezione ultrasuono-guida del neuroblastoma (NB) e cellule (ES) il sarcoma di Ewing (stabilito linee cellulari e cellule tumorali derivate dal paziente) biologicamente rilevanti siti per creare modelli preclinici affidabili per il cancro ricerca.

L'utilizzo degli ultrasuoni guidati l'impianto cellulare diretto del tessuto per l'istituzione degli xenotrapianti del tumore metastatico biologicamente rilevanti

Questo lavoro preconfigura un protocollo avanzato per valutare con precisione il carico del tumore rilevando segnali di proteina fluorescente e bioluminescenza verdi, nonché l'integrazione della tecnica di rilevamento molecolare quantitativo.

Studiare il cancro al seno triplo negativo utilizzando il modello di cancro al seno ortotopico

La traduzione dei risultati della microscopia intravitale è messa a dura prova dalla sua penetrazione a bassa profondità nei tessuti. Qui descriviamo un modello murino a camera a finestra dorsale che consente la co-registrazione della microscopia intravitale e delle modalità di imaging clinicamente applicabili (ad es. TC, MRI) per la correlazione spaziale diretta, semplificando potenzialmente la traduzione clinica dei risultati della microscopia intravitale.

Un modello murino tumorale della camera della finestra delle pliche cutanee dorsali per la microscopia intravitale combinata e la risonanza magnetica nella ricerca traslazionale sul cancro

Scopri l'imaging multimodale bioluminescente e PET/TC per studiare il mieloma multiplo engrafted nel midollo osseo di topi NOG. Questo metodo non invasivo consente analisi longitudinali dell'inibizione di mTOR.

Formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi NOG (Video) | JoVE Journal

Formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi NOG

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