Name: Profilo di compatibilità biologica sui biomateriali per la rigenerazione ossea (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: Scopri una strategia multidisciplinare per testare la biocompatibilità di biomateriali ortopedici per la rigenerazione ossea. Questo metodo integra tecniche in vitro e in vivo per valutare efficacia e risposte immunitarie.

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Questo progetto di ricerca ha ricevuto finanziamenti settimo programma dell'Unione europea quadro (FP7/2007-2013) sotto la concessione contratto n. 263363.

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<li>Lo, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+a+critical-sized+calvarial+defect+model+using+adipose-derived+stromal+cells+harvested+from+lipoaspirate%5BTitle%5D)+AND+%22Jove-Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repair of a critical-sized calvarial defect model using adipose-derived stromal cells harvested from lipoaspirate.</a> Jove-Journal of Visualized Experiments. (68), (2012).</li>
<li>Gosain, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenesis+in+calvarial+defects%3A+contribution+of+the+dura%2C+the+pericranium%2C+and+the+surrounding+bone+in+adult+versus+infant+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Osteogenesis in calvarial defects: contribution of the dura, the pericranium, and the surrounding bone in adult versus infant animals.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 112 (2), 515-527 (2003).</li>
<li>Levi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dura+mater+stimulates+human+adipose-derived+stromal+cells+to+undergo+bone+formation+in+mouse+calvarial+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Dura mater stimulates human adipose-derived stromal cells to undergo bone formation in mouse calvarial defects.</a> Stem Cells. 29 (8), 1241-1255 (2011).</li>
<li>Wang, J., Glimcher, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+matrix-induced+osteogenesis+in+rat+calvarial+bone+defects%3A+II.+Origins+of+bone-forming+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Characterization of matrix-induced osteogenesis in rat calvarial bone defects: II. Origins of bone-forming cells.</a> Calcified Tissue International. 65 (6), 486-493 (1999).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Qui, ci mostrano un approccio multidisciplinare per la valutazione preclinica di biocompatibilità per biomateriali rappresentante sviluppato per la riparazione e rigenerazione ossea. Abbiamo testato le risposte di OBs, OCs, e la risposta di guarigione in vivo in un difetto critico dell'osso modello in topi come pure in vitro e in vivo le risposte immunitarie. Abbiamo mirato a dimostrare come le analisi lavoro e riepilogare i dati e le conclusioni derivate dall'esame dei biomateriali. Mostriamo ...

Riparazione dell'osso è un processo complesso che inizia con la formazione dell'ematoma, infiammazione, callo formazione e rimodellamento quindi1,2. Tuttavia, potenziale di rigenerazione dell'osso è limitata alla dimensione dell'osso frattura1,3. Per esempio, grandi fratture causate da traumi, cancro o l'osteoporosi non possono guarire e sono denominate fratture ossee non sindacale. Queste lesioni ossee richiedono spesso il trattamento per promuovere la rigenerazione e riparazione dell'osso fisiologico sano. Attualmente, il trapianto di osso autologo e allogenico è l'approccio di scelta4 con procedure di sostituzione ossea 2,2 milioni annualmente5. Se queste procedure hanno un alto tasso di successo, ci possono essere complicazioni, ad esempio, la disponibilità limitata di osso, infezione, morbilità del sito donatore e rifiuto4. Nuove alternative per l'ingegneria tissutale ossea vengono ricercate per affrontare queste sfide.
La progettazione di biomateriali basati su polimeri naturali o sintetici, bioceramics o metalli in combinazione con le cellule e molecole bioattive è il luogo6. Nostra attuale comprensione dell'osso fisiologica guarigione e guarigione nel contesto dei biomateriali dipende da molteplici fattori come proprietà meccaniche e molteplici fattori locali e sistematici, compreso le cellule dalla circolazione e luogo di frattura7 ,8,9. Biomateriali per la rigenerazione ossea mirano a promuovere osteogenicity e osteointegrazione10 e sono idealmente biocompatibile, biodegradabile e poroso (promuovere la migrazione cellulare, ossigeno e sostanze nutritive). Hanno anche bisogno di essere sufficientemente forte da sostenere il sito di frattura per alleviare il dolore. Inoltre, fattori infiammatori sono tenuti ad avviare il processo di guarigione. Tuttavia, se il biomateriale induce eccessiva infiammazione e risposte allergiche, questo potrebbe limitare o inibire11,12di guarigione ossea. Così, un approccio interdisciplinare è necessario valutare biomateriali sviluppati per riparazione ossea.
In questo studio, presentiamo una valutazione pre-clinica di materiali rappresentativi, 1) Orthovita Vitoss schiuma che è un sostituto di innesto di osso spongioso commercialmente disponibile composto da fosfato tricalcico composto di dimensioni nanometriche puro β-tricalcio particelle di fosfato (β-TCP) e collagene bovino di tipo 1 (C) (β-TCP/C schiuma) e 2) dischi di β-TCP. Qui illustriamo test di biocompatibilità di questi biomateriali utilizzando primario degli osteoblasti (OB) e dosaggi degli osteoclasti (OC), un modello in vivo di riparazione ossea, una valutazione immunologica che comprende in vitro la proliferazione dei linfociti T e produzione di citochine e in vivo l'immunogenicità e allergenicità, come precedentemente segnalato13.

<table><tbody><tr><td>Biomaterials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-dischi di fosfato tricalcico (&beta;-TCP, 14 mm)</td><td></td><td></td><td>I dischi sono stati sinterizzati in un forno a muffola alla temperatura di 1150 &deg;C. Una descrizione dettagliata della produzione può essere trovata in Zimmer et al (doi: 10.1002/jbm.a.34639). I campioni sono stati irradiati con raggi UV (15 minuti per lato) prima di essere utilizzati in colture cellulari.</td></tr><tr><td>Orthovita Vitoss schiuma (&beta;-TCP/C schiuma)</td><td>Orthovita</td><td>2102-1405</td><td></td></tr><tr><td>Coltura di osteoblasti di topo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alizarin Red S</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5533</td><td></td></tr><tr><td>ALP assay buffer (2x) pH 10.4</td><td></td><td></td><td>Sciogliere 200 mM di glicina, 2 mM di cloruro di magnesio, 2 mM di cloruro di zinco in acqua ultrapura e regolare a pH 10.</td></tr><tr><td>Terreno di crescita ossea (BGM)</td><td></td><td></td><td>&alpha;-MEM + 10% FBS inattivato termicamente + 1% penicillina/streptomicina</td></tr><tr><td>Tampone di lisi cellulare: CyQuant tampone di lisi cellulare 20x concentrato</td><td>Thermo Scientific</td><td>C7027</td><td>Diluire il tampone concentrato di lisi cellulare 20 volte in acqua ultrapura.&nbsp;</td></tr><tr><td>Reagente per la vitalità cellulare: Reagente per la vitalità cellulare Presto Blue</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>A13261</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi di tipo IV da clostridium histolyticum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il dosaggio delle proteine DC II</td><td>Bio Rad</td><td>5000112</td><td>Il kit per il dosaggio delle proteine DC contiene il reagente A, il reagente B, il reagente S e BSA per lo standard di riferimento. Per il reagente A', aggiungere 20 &micro; L reagente S a 1000 &micro; L. reagente A.&nbsp;</td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td>Steril-filtro DMSO prima dell'uso.</td></tr><tr><td>Dispase II (proteasi neutra, grado II)</td><td>Kit</td> per il dosaggio della fosfatasi Roche <td>4942078001</td><td></td></tr><tr><td>EnzCheck per l'attività della fosfatasi alcalina&nbsp;</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>E12020</td><td>Il kit per il dosaggio della fosfatasi EnzCheck contiene 6,8-difluoro-4-metilumbelliferil fosfato (DiFMUP), N,N-dimetilformammide e 6,8-difluoro-7-idrossi-4-metilcumarina (DiFMU).&nbsp;</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di formalina tamponata neutra 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8898</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di esadecilpirdinio (cetilpiridinio) monoidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9002</td><td></td></tr><tr><td>Acido L-ascorbico 2-fosfato sale di sesquimagnesio idrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>MEM alfa medio (&alfa;-MEM)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>11900-073</td><td></td></tr><tr><td>Terreno di mineralizzazione osteogenico (MM)</td><td></td><td></td><td>&alfa;-MEM + 10% FBS inattivato a caldo + 1% penicillina-streptomicina + 50 &; g/mL di acido ascorbico + 5 mM di &beta;-glicerofosfato</td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 1x (PBS) pH 7,4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>Sigmafast BCIP/NBT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5655</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,5%), senza rosso fenolo (10x)</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15400054</td><td>Diluire la soluzione madre concentrata 10 volte in 1x PBS.</td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Acqua ultrapura: Acqua per colture cellulari apirogena VWR</td><td></td><td>L0970-500</td><td></td></tr><tr><td>Tampone</td><td></td><td></td> di lavaggio <td>Aggiungere&nbsp; 0,05% Tween20 a 1x PBS.</td></tr><tr><td>Cloruro di zinco</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.08816</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Glicerofosfato sale disodico idrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5422</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura in sospensione a 24 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>662102</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura tissutale a 24 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>Provetta conica da 50 mL</td><td>Greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Piastra nera a 96 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>655076</td><td></td></tr><tr><td>Piastra trasparente a 96 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>655001</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga: VWR Mega Star 600R</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2-Incubatore: HeraCell 240</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryovial 2 mL</td><td>Greiner bio-one</td><td>122263</td><td></td></tr><tr><td>Unità filtrante monouso FP30/0.2 CA-S</td><td>GE Healthcare Life Sciences Whatman</td><td>10462200</td><td>Per la filtrazione sterile di soluzioni enzimatiche.</td></tr><tr><td>Scanner piano: Epson Perfection 1200 Photo</td><td>Epson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Infinite M200 Pro lettore di micropiastre</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Provetta per microcentrifuga: Eppendorf provetta safe-lock 0,5 mL</td><td>VWR</td><td>20901-505</td><td></td></tr><tr><td>Provetta per microcentrifuga: Eppendorf tube safe-lock 1,5 mL</td><td>VWR</td><td>21008-959</td><td></td></tr><tr><td>Shaker Swip (orbitale e orizzontale)&nbsp;</td><td>Edmund Buehler&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubatore a scuotimento GFL3032</td><td>GFL&nbsp;</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta monouso: pipetta per siero</td><td>Greiner bio-one</td><td>612301</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti sterili (forbici, pinzette, pinze curve)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura tissutale (10 cm)</td><td>Greiner bio-one</td><td>664960</td><td></td></tr><tr><td>Co-coltura di osteoblasti-osteoclasti di topo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1&alpha;,25- Diidrossivitamina D3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17936</td><td>1000x stock concentrato (10 &micro; M in etanolo 100%)</td></tr><tr><td>Acetone</td><td>VWR Chemicals</td><td>22065.327</td><td></td></tr><tr><td>Terreno di crescita ossea (BGM)</td><td></td><td></td><td>&alpha;-MEM + 10% FBS inattivato a caldo + 1% penicillina-streptomicina</td></tr><tr><td>Acqua distillata</td><td>Carl Roth</td><td>3478.4</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo (100% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>20821.365</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo (70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>Sale LB rosso viola veloce</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3381</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di formalina tamponata neutra 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>MEM alpha Medium (&alpha;-MEM)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>11900-073</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Dimetilformammide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4551</td><td></td></tr><tr><td>Naftolo AS-MX fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4875</td><td></td></tr><tr><td>Terreno di differenziazione degli osteoclasti (DM)</td><td></td><td></td><td>&alfa;-MEM + 10% FBS inattivato a caldo + 1% penicillina-streptomicina + 1 nM 1,25-(OH)2-vitamina D3 + 1 &; M prostaglandina E2&nbsp;</td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 1x (PBS) pH 7,4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>Prostaglandine E2 (PGE2)</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>9003016</td><td>1000x stock concentrato (1 mM in etanolo 100%)</td></tr><tr><td>Acetato di sodio triidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7670</td><td></td></tr><tr><td>Tartrato di sodio bibasico diidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8640</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti sterili (forbici, pinze, bisturi)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TRAP tampone pH 5,0</td><td></td><td></td><td>Sciogliere 40 mM di acetato di sodio, 10 mM di tartrato di sodio in acqua ultrapura e regolare a pH 5.</td></tr><tr><td>Acqua ultrapura: Acqua per colture cellulari apirogena</td><td>VWR</td><td>L0970-500</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura in sospensione a 24 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>662102</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura tissutale a 24 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>Provetta conica da 50 mL</td><td>Greiner bio-one</td><td></td> 227261 <td></td></tr><tr><td>Centrifuga: VWR Mega Star 600R</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubatore a CO2: HeraCell 240</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lama per wafer diamantata (10,2 cm x 0,3 cm)</td><td>Sega a bassa velocità Buehler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isomet</td><td></td> Piastra di Petri Buehler <td></td><td></td></tr><tr><td>(6 cm)</td><td>Greiner bio-one</td><td>628.161</td><td></td></tr><tr><td>Tappo a vite Flacone in vetro 20 mL</td><td>Carl Roth</td><td>EXY4.1</td><td></td></tr><tr><td>Siringa sterile monouso 1 mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta monouso: pipetta per siero</td><td>Greiner bio-one</td><td>612301</td><td></td></tr><tr><td>Ago sterile: Ago ipodermico RW 27 G x 3/4''</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003340</td><td></td></tr><tr><td>Mouse calvarial defect model</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analgesia: Buprenorphine (Bupaq)</td><td>Richter Pharma AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anestesia: Ketamina (Ketamidor), Xilazina (Rompun)</td><td>Richter Pharma AG/Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzante a freddo: SafeSept Max</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9882765</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo (70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>Unguento per gli occhi: VitA POS 5 g</td><td>Ursapharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina normale (soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%)</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 1x (PBS) pH 7,4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>Soluzione di iodio povidone: Braunol 1000 mL</td><td>B. Braun</td><td>3864154</td><td></td></tr><tr><td>Roti-Histofix 4,5% formalina tamponata</td><td>Carl Roth</td><td>2213.6</td><td></td></tr><tr><td>Adesivo tissutale: Histoacryl 5 x 0,5 mL&nbsp;</td><td>B. Braun Surgical</td><td>1050060</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivi di protezione individuale: guanti chirurgici, berretto e maschera, camice</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>1045073, 1026614, 9009062, 370406</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti sterili (bisturi, forbici, pinze, porta aghi)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aghi sterili: aghi ipodermici RW 27 G x 3/4'' e 30 G x 1/2''</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003340, 9003630</td><td></td></tr><tr><td>Siringa sterile monouso 1 mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante: Physitemp</td><td>Rothacher Medical</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Tamponi di garza sterili</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>220192</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi monouso sterile (Figur 20)</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9008957</td><td></td></tr><tr><td>Trapano chirurgico/dentale: Implantmed SI-923</td><td>W& H Dentalwerk B&uuml; rmoos GmbH</td><td>16929000</td><td></td></tr><tr><td>Manipolo tipo S-II</td><td>W& H Dentalwerk B&uuml; rmoos GmbH</td><td>30056000</td><td></td></tr><tr><td>Trephine, diametro 4 mm</td><td>Hager& Meisinger GmbH</td><td>229040</td><td></td></tr><tr><td>Set di tubi per irrigazione 2,2 m</td><td>W& H Dentalwerk B&uuml; rmoos GmbH</td><td>4363600</td><td></td></tr><tr><td>Elevatore periostale 2 mm / 3 mm</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>472683</td><td></td></tr><tr><td>Sutura non riassorbibile: Poliestere verde, DS19, met. 1,5, USP 4/0 75 cm</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>300715</td><td></td></tr><tr><td>In vitro risposte immunitarie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anestesia per l'eutanasia: Ketamina (Ketamidor), Xilazina (Rompun)</td><td>Richter Pharma AG/Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proliferazione cellulare ELISA, BrdU (colorimetrico) Kit di dosaggio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11647229001</td><td>Il kit contiene la soluzione di marcatura BrdU, la soluzione di fissazione (FixDenat), la soluzione anticorpale Anti-BrdU, il tampone di lavaggio e la soluzione di substrato.</td></tr><tr><td>Concanavalin A (ConA)</td><td>MP Biomedicals</td><td>150710</td><td></td></tr><tr><td>Terreno di coltura splenociti</td><td></td><td></td><td>RPMI medium + 10% FBS inattivato a caldo + 1% soluzione di penicillina-streptomicina + 0,1% gentamicina + 0,2% &szlig;-mercaptoetanolo + 1% aminoacidi non essenziali</td></tr><tr><td>Etanolo (70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific& nbsp;</td><td></td><td></td>10500064</tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>15750037</tr><tr><td>Mouse IL-1&beta; ELISA pronto-PARTENZA-via!</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>88-7013-88</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-2 ELISA MAX Standard</td><td>BioLegend</td><td>431001</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-4 ELISA MAX Standard</td><td>BioLegend</td><td>431101</td><td></td></tr><tr><td>Mouse INF-&gamma; ELISA MAX Standard</td><td>BioLegend</td><td>430801</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di aminoacidi non essenziali</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>11140050</tr><tr><td>Penicillina-streptomicina</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>15140122</tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 1x (PBS) pH 7,4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>tampone per la lisi dei globuli rossi (RBC): BD Pharm Lyse</td><td>BD Bioscience</td><td>555899</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium, HEPES</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>52400025</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoetanolo</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>31350010</tr><tr><td>provetta conica da 50 mL</td><td>Greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>piastra per coltura tissutale a 96 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>655180</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga: VWR Mega Star 600R</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell strainer 40 &; m</td><td>BD Bioscience</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Infinite M200 Pro Lettore di micropiastre</td><td>Siringa</td> sterile monouso Tecan <td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici sterili (pinze, vetrini)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><forte>Modello intraperitoneale ad alta produttività</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anestesia: Ketamina (Ketamidor), Xilazina (Rompun)</td><td>Richter Pharma AG/Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzante a freddo: SafeSept Max</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9882765</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo (70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>Unguento per gli occhi: VitA POS 5 g</td><td>Ursapharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-1&beta; ELISA pronto-PARTENZA-via!</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>88-7013-88</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-2 ELISA MAX Standard</td><td>BioLegend</td><td>431001</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-4 ELISA MAX Standard</td><td>BioLegend</td><td>431101</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 1x (PBS) pH 7.4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>Soluzione di iodio povidone: Braunol 1000 mL</td><td>B. Braun</td><td>3864154</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Rapid-Chrome Kwik-Diff Staining Kit</td><td>Thermo Scientific</td><td>9990700</td><td>Per la conta cellulare differenziale.</td></tr><tr><td>Piastra riscaldante: Physitemp</td><td>Rothacher Medical</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Emocitometro: Camera Neubauer</td><td>Carl Roth</td><td>PC72.1</td><td></td></tr><tr><td>Sutura non riassorbibile: Ethibond Excel 4-0</td><td>Ethicon</td><td>6683H</td><td></td></tr><tr><td>Sutura riassorbibile: Polysorb</td><td>Covidien</td><td>SL-5628</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga Shandon per citopsina</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siringa sterile monouso 1 mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>Tamponi di garza sterili</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>220192</td><td></td></tr><tr><td>Aghi sterili: Aghi ipodermici RW 27 G x 3/4'' e 25 G</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003340, 420939</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici sterili (bisturi, forbici, pinze, porta aghi)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di tripano blu 0,4%</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Modello sottocutaneo subcronico</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anestesia: Ketamina (Ketamidor), Xilazina (Rompun)</td><td>Richter Pharma AG/Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzante a freddo: SafeSept Max</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9882765</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>Unguento per gli occhi: VitA POS 5 g</td><td>Ursapharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 1x (PBS) pH 7,4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>Soluzione di iodio povidone: Braunol 1000 mL</td><td>B. Braun</td><td>3864154</td><td></td></tr><tr><td>Roti-Histofix 4,5% formalina tamponata</td><td>Carl Roth</td><td>2213.6</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante: Physitemp</td><td>Rothacher Medical</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Sutura non riassorbibile: Ethibond Excel 4-0</td><td>Ethicon</td><td>6683H</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivi di protezione individuale: chirurgici guanti, berretto e maschera, camice</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>1045073, 1026614, 9009062, 370406</td><td></td></tr><tr><td>Siringa sterile monouso 1 mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>Tamponi di garza sterili</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>220192</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti sterili (bisturi, forbici, pinze, porta aghi)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ago sterile: Aghi ipodermici RW 27 G x 3/4''&nbsp;</td><td>Henry Schein Salute degli animali</td><td>9003340, 420939</td><td></td></tr></tbody></table>

profilo di compatibilità biologica sui biomateriali per la rigenerazione ossea

Biological Compatibility Profile on Biomaterials for Bone Regeneration

Grande pseudoartrosi fratture sono una sfida significativa nell'ambulatorio ortopedico. Anche se auto - e gli innesti dell'osso allogenico sono eccellenti per la guarigione di tali lesioni, esistono potenziali complicazioni con il loro uso. Così, scienziati dei materiali sono lo sviluppo di biomateriali sintetici, biocompatibili per superare questi problemi. In questo studio, presentiamo una piattaforma multidisciplinare per la valutazione di biomateriali per riparazione ossea. Abbiamo unito le competenze da biologia dell'osso e immunologia per sviluppare una piattaforma incluso in vitro degli osteoclasti (OC) e le analisi degli osteoblasti (OB) e in vivo modelli murini di riparazione ossea, immunogenicità e allergenicità. Dimostriamo come eseguire gli esperimenti, riepilogare i risultati e relazione sulla biocompatibilità di biomateriale. In particolare, abbiamo testato la vitalità di OB, differenziazione e mineralizzazione e redditività OC e differenziazione nel contesto dei dischi di β-tricalcio fosfato (β-TCP). Abbiamo provato anche una schiuma di β-TCP/collagene (β-TCP/C) che è un materiale commercialmente disponibile usato clinicamente per la riparazione dell'osso in un modello murino di difetto critico dimensioni osso calvarial per determinare gli effetti sulle prime fasi di guarigione ossea. In esperimenti paralleli, abbiamo valutato le risposte immunitarie e allergiche nei topi. Il nostro approccio genera un profilo di compatibilità biologica di un biomateriale osseo con una gamma di parametri necessari per la predizione della biocompatibilità dei biomateriali utilizzati per la guarigione dell'osso e riparazione nei pazienti.

Per valutare la β-TCP per la sua efficacia come un biomateriale per riparazione ossea, abbiamo usato in vitro e in vivo i metodi di screening. In primo luogo, abbiamo misurato le risposte di OB per i dischi di β-TCP rispetto ai comandi da solo medio della linea di base. Nella figura 2 viene illustrato l'attuabilità di OB in risposta ai dischi di β-TCP alle 7 e 14 giorni di cultura. Attuabilità delle cellule misurata da cellule metabolicament...

Il numero di nuovi biomateriali ingegnerizzati per la riparazione di lesioni dell'osso grande è in continua espansione con l'obiettivo di migliorare la guarigione ossea e superare le complicazioni connesse con trapianto osseo. Qui, presentiamo una strategia multidisciplinare per test di biocompatibilità pre-clinico di biomateriali per riparazione ossea.

Profilo di compatibilità biologica sui biomateriali per la rigenerazione ossea

Large non-union bone fractures are a significant challenge in orthopedic surgery. Although auto- and allogeneic bone grafts are excellent for healing such ...

Questi metodi possono aiutare a rispondere alle domande chiave nel campo dei biomateriali. In particolare per la rigenerazione ossea. Sono usati per valutare l'efficacia dei biomateriali e le potenziali risposte immunitarie.Il vantaggio principale di questa piattaforma multidisciplinare è che fornisce una serie di parametri per prevedere la biocompatibilità dei biomateriali utilizzati per la riparazione ossea. Le implicazioni di queste tecniche ossee in vitro e in vivo si estendono verso altri disturbi ossei. A causa della necessità di screening preclinico di nuovi biomateriali ortopedici.La metodologia dermatologica può fornire approfondimenti sui biomateriali per la guarigione ossea, può anche essere applicata alle valutazioni dei biomateriali per qualsiasi altra indicazione clinica. Aspirare il mezzo di coltura dagli osteoblasti primari 14 giorni dopo l'aggiunta del mezzo di mineralizzazione osteogenica. Risciacquare due volte con 0,5 millilitri di 1X PBS.Quindi fissare le cellule aggiungendo 0,5 millilitri di soluzione di formalina tamponata al 10% e incubando a temperatura ambiente per 10 minuti. Dopo 10 minuti, aspirare la formalina tamponata al 10% con una pipetta monouso e

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Bioingegneria

Un metodo migliore per meccanicamente prova l'ancoraggio osseo alle superfici implantari candidati viene presentato. Questo metodo consente l'allineamento della forza perturbazione esattamente perpendicolare o parallelo al piano della superficie dell'impianto, e fornisce un mezzo preciso per dirigere le forze interruzione una regione peri-implantari esatta.

Una migliorata meccanica metodo di prova per valutare osso-impianto Anchorage

Descriviamo qui come preparare a medio-bone condizionata (BCM) e testare la sua attività in vitro.

Bone mezzo condizionato: Preparazione e Bioassay

Viene presentato un processo generico passo-passo per creare un modello simile a un osso con micro-canali ingegnerizzati. Le elevate capacità di assorbimento e ritenzione del modello sono dimostrate dall'azione capillare tramite microcanali.

Modelli Distinctive capillare azione da micro-canali in osso, come può migliorare reclutamento di cellule per il Restauro di grande Bony difetto

Biomateriali drogati con Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) sono stati utilizzati come una nuova strategia terapeutica per guarire fratture ossee non sindacale. Per superare gli effetti collaterali derivanti da un'incontrollabile rilascio del fattore, vi proponiamo una nuova strategia per sito-direttamente immobilizzare il fattore, creando così materiali con migliorate capacità osteogeniche.

Site-Directed immobilizzazione della proteina morfogenetica ossea 2 a superfici solide di Click Chemistry

Qui, presentiamo un protocollo per la valutazione di biofilm orali su materiali di titanio e ossido di zirconio per i pilastri di protesi dentarie, compresa l'analisi di attuabilità delle cellule batteriche e caratteristiche morfologiche. Un modello in situ associato con tecniche di microscopia potente viene utilizzato per l'analisi di biofilm orale.

Formazione di Biofilm orali su differenti materiali per impianti dentali

Introduciamo tre metodi di coltura diretta, coltura a esposizione diretta e coltura di esposizione per valutare la citocompatibilità in vitro di materiali implantari biodegradabili. Questi metodi in vitro imitano diverse interazioni cellula-impianto in vivo e possono essere applicati per studiare vari materiali biodegradabili.

Metodi di coltura diretta e indiretta per lo studio di materiali implantari biodegradabili in vitro

In questo studio, descriviamo in dettaglio i metodi di decellularizzazione, caratterizzazione fisica, imaging e impianto in vivo di biomateriali a base vegetale, nonché metodi per la semina e la differenziazione cellulare negli scaffold. I metodi descritti consentono la valutazione di biomateriali di origine vegetale per applicazioni di ingegneria del tessuto osseo.

Scaffold decellularizzati derivati da mele per l'ingegneria del tessuto osseo in vitro e in vivo

Il protocollo proposto prevede un approccio globale per valutare la formazione ossea nel contesto della rigenerazione ossea utilizzando analisi multimodali. Ha lo scopo di fornire informazioni qualitative e quantitative sulla formazione di nuovo osso, migliorando il rigore e la validità delle indagini di base e precliniche.

Caratterizzazione completa della mineralizzazione tissutale in un modello ex vivo

Questo studio ha stabilito un modello di difetto semisegmentale femorale nel ratto per valutare le prestazioni meccaniche e osteogeniche dei materiali sostitutivi ossei in condizioni portanti, senza l'uso di fissazioni interne o esterne.

Modello di difetto osseo diafisario semi-segmentale nei ratti per la valutazione delle prestazioni di sostituto osseo nelle regioni portanti

Proponiamo un protocollo per valutare la rigenerazione ossea a vari livelli gerarchici. Questo approccio multimodale consente un'analisi strutturale su diverse scale di lunghezza, affrontando efficacemente le sfide nella preparazione del campione. Fornisce inoltre un flusso di lavoro affidabile per valutare l'efficacia dei biomateriali nel promuovere la rigenerazione ossea.

Approccio multimodale per valutare la rigenerazione ossea e le prestazioni dell'impalcatura

Scopri una strategia multidisciplinare per testare la biocompatibilità di biomateriali ortopedici per la rigenerazione ossea. Questo metodo integra tecniche in vitro e in vivo per valutare efficacia e risposte immunitarie.

Profilo di compatibilità biologica sui biomateriali per la rigenerazione ossea

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