Un test In Vitro per rilevare attività di tRNA-Isopentenyl Transferase

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di caratterizzare biochimicamente l'attività tRNA-Isopentenil Transferasi in vitro. Questo metodo è utile per il rilevamento e la caratterizzazione in vitro dell'attività tRNA-isopentenil transferasi degli enzimi ricombinanti purificati. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è un saggio semplice e diretto usato per rilevare una modifica covalente dell'RNA.

Sebbene questo metodo fornisca informazioni sull'attività tRNA-isopentenil transferasi, è potenzialmente adattabile per la caratterizzazione biochimica di enzimi di modifica a vasta gamma o RNA. Il primo passo di questa procedura è pulire accuratamente le lastre di vetro che verranno utilizzate per la fusione del gel. Lavare i piatti con acqua e sapone, risciacquare bene con acqua deionizzata, quindi pulire i piatti con isopropanolo e salviette senza pelucchi.