Name: Analizzando le dimensioni, la forma e la direzionalità delle reti dei Astrocytes accoppiato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Impara a analizzare le reti astrocitarie nel cervello con ImageJFIJI. Questo metodo imparziale misura dimensioni, posizione e anisotropia vettoriale per studiare l'organizzazione cellulare in neuroscienza.

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Questo lavoro è finanziato da istituti canadesi di ricerca sanitaria, Grant/premio numero: 14392.

<ol><li>Condamine, S., Lavoie, R., Verdier, D., Kolta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+rhythmogenic+domains+defined+by+astrocytic+networks+in+the+trigeminal+main+sensory+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Functional rhythmogenic domains defined by astrocytic networks in the trigeminal main sensory nucleus.</a> Glia. 66 (2), 311-326 (2018).</li>
<li>Verkhratsky, A., Orkand, R. K., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+calcium%3A+homeostasis+and+signaling+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Review%22%5BJournal%5D)">Glial calcium: homeostasis and signaling function.</a> Physiological Review. 78 (1), 99-141 (1998).</li>
<li>Christensen, R. K., Petersen, A. V., Perrier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+do+glial+cells+contribute+to+motor+control%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">How do glial cells contribute to motor control?</a> Current Pharmaceutical Design. 19 (24), 4385-4399 (2013).</li>
<li>Verkhratsky, A., Steinhauser, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+channels+in+glial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Review%22%5BJournal%5D)">Ion channels in glial cells.</a> Brain Research Review. 32 (2-3), 380-412 (2000).</li>
<li>Harada, K., Kamiya, T., Tsuboi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gliotransmitter+Release+from+Astrocytes%3A+Functional%2C+Developmental%2C+and+Pathological+Implications+in+the+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Gliotransmitter Release from Astrocytes: Functional, Developmental, and Pathological Implications in the Brain.</a> Frontiers Neuroscience. 9, 499(2015).</li>
<li>Montero, T. D., Orellana, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemichannels%3A+new+pathways+for+gliotransmitter+release%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hemichannels: new pathways for gliotransmitter release.</a> Neuroscience. 286, 45-59 (2015).</li>
<li>Araque, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gliotransmitters+travel+in+time+and+space%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Gliotransmitters travel in time and space.</a> Neuron. 81 (4), 728-739 (2014).</li>
<li>Augustin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+anisotropic+panglial+networks+in+the+lateral+superior+olive%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Functional anisotropic panglial networks in the lateral superior olive.</a> Glia. 64 (11), 1892-1911 (2016).</li>
<li>Houades, V., Koulakoff, A., Ezan, P., Seif, I., Giaume, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junction-mediated+astrocytic+networks+in+the+mouse+barrel+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Gap junction-mediated astrocytic networks in the mouse barrel cortex.</a> Journal of Neuroscience. 28 (20), 5207-5217 (2008).</li>
<li>Roux, L., Benchenane, K., Rothstein, J. D., Bonvento, G., Giaume, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+astroglial+networks+in+olfactory+glomeruli%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+of+the+United+State+of+America%22%5BJournal%5D)">Plasticity of astroglial networks in olfactory glomeruli.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United State of America. 108 (45), 18442-18446 (2011).</li>
<li>Morquette, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+astrocyte-dependent+mechanism+for+neuronal+rhythmogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">An astrocyte-dependent mechanism for neuronal rhythmogenesis.</a> Nature Neuroscience. 18 (6), 844-854 (2015).</li>
<li>Brocard, F., Verdier, D., Arsenault, I., Lund, J. P., Kolta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+intrinsic+bursting+in+trigeminal+sensory+neurons+parallels+the+acquisition+of+mastication+in+weanling+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Emergence of intrinsic bursting in trigeminal sensory neurons parallels the acquisition of mastication in weanling rats.</a> Journal of Neurophysiology. 96 (5), 2410-2424 (2006).</li>
<li>Anders, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+properties+of+astrocyte+gap+junction+coupling+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological+Science%22%5BJournal%5D)">Spatial properties of astrocyte gap junction coupling in the rat hippocampus.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Science. 369 (1654), (2014).</li>
<li>Houades, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shapes+of+astrocyte+networks+in+the+juvenile+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron+Glia+Biology%22%5BJournal%5D)">Shapes of astrocyte networks in the juvenile brain.</a> Neuron Glia Biology. 2 (1), 3-14 (2006).</li>
<li>Rouach, N., Koulakoff, A., Abudara, V., Willecke, K., Giaume, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglial+metabolic+networks+sustain+hippocampal+synaptic+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Astroglial metabolic networks sustain hippocampal synaptic transmission.</a> Science. 322 (5907), 1551-1555 (2008).</li>
<li>Claus, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barreloid+Borders+and+Neuronal+Activity+Shape+Panglial+Gap+Junction-Coupled+Networks+in+the+Mouse+Thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+Cortex%22%5BJournal%5D)">Barreloid Borders and Neuronal Activity Shape Panglial Gap Junction-Coupled Networks in the Mouse Thalamus.</a> Cerebral Cortex. 28 (1), 213-222 (2018).</li>
<li>Cameron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+Incubation+of+Acute+Neuronal+Tissue+for+Electrophysiology+and+Calcium-imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (120), (2017).</li>
<li>Kafitz, K. W., Meier, S. D., Stephan, J., Rose, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+profile+and+properties+of+sulforhodamine+101--Labeled+glial+cells+in+acute+brain+slices+of+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Developmental profile and properties of sulforhodamine 101--Labeled glial cells in acute brain slices of rat hippocampus.</a> Journal of Neuroscience Methods. 169 (1), 84-92 (2008).</li>
<li>Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+for+liquid+junction+potentials+in+patch+clamp+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Correction for liquid junction potentials in patch clamp experiments.</a> Methods in Enzymology. , 123-131 (1992).</li>
<li>Giaume, C., Leybaert, L., Naus, C. C., Saez, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin+and+pannexin+hemichannels+in+brain+glial+cells%3A+properties%2C+pharmacology%2C+and+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Connexin and pannexin hemichannels in brain glial cells: properties, pharmacology, and roles.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 88(2013).</li>
<li>Torres, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Ca%282%29%28%2B%29+acts+as+a+mediator+of+communication+from+neurons+to+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Signaling%22%5BJournal%5D)">Extracellular Ca(2)(+) acts as a mediator of communication from neurons to glia.</a> Science Signaling. 5 (208), ra8(2012).</li>
<li>Ye, Z. C., Wyeth, M. S., Baltan-Tekkok, S., Ransom, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+hemichannels+in+astrocytes%3A+a+novel+mechanism+of+glutamate+release%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional hemichannels in astrocytes: a novel mechanism of glutamate release.</a> Journal of Neuroscience. 23 (9), 3588-3596 (2003).</li>
<li>Ma, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junction+coupling+confers+isopotentiality+on+astrocyte+syncytium%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Gap junction coupling confers isopotentiality on astrocyte syncytium.</a> Glia. 64 (2), 214-226 (2016).</li>
<li>Meme, W., Vandecasteele, M., Giaume, C., Venance, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+coupling+between+hippocampal+astrocytes+in+rat+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Electrical coupling between hippocampal astrocytes in rat brain slices.</a> Neuroscience Research. 63 (4), 236-243 (2009).</li>
<li>Ransom, B. R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+coupling%2C+without+dye+coupling%2C+between+mammalian+astrocytes+and+oligodendrocytes+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Electrical coupling, without dye coupling, between mammalian astrocytes and oligodendrocytes in cell culture.</a> Glia. 3 (4), 258-266 (1990).</li>
<li>Audesirk, G., Audesirk, T., Bowsher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variability+and+frequent+failure+of+lucifer+yellow+to+pass+between+two+electrically+coupled+neurons+in+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Variability and frequent failure of lucifer yellow to pass between two electrically coupled neurons in Lymnaea stagnalis.</a> Journal of Neurobiology. 13 (4), 369-375 (1982).</li>
<li>Ewadinger, N., Syed, N., Lukowiak, K., Bulloch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Tracer+Coupling+between+Pairs+of+Identified+Neurones+of+the+Mollusc+Lymnaea+Stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Differential Tracer Coupling between Pairs of Identified Neurones of the Mollusc Lymnaea Stagnalis.</a> Journal of Experimental Biology. 192 (1), 291-297 (1994).</li>
<li>Griemsmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Panglial+Gap+Junction+Networks+in+the+Thalamus%2C+Neocortex%2C+and+Hippocampus+Reveals+a+Unique+Population+of+Glial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+Cortex%22%5BJournal%5D)">Characterization of Panglial Gap Junction Networks in the Thalamus, Neocortex, and Hippocampus Reveals a Unique Population of Glial Cells.</a> Cerebral Cortex. 25 (10), 3420-3433 (2015).</li>
<li>Kuwajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ClearT%3A+a+detergent-+and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">ClearT: a detergent- and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140 (6), 1364-1368 (2013).</li>
<li>Gourine, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+control+breathing+through+pH-dependent+release+of+ATP%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Astrocytes control breathing through pH-dependent release of ATP.</a> Science. 329 (5991), 571-575 (2010).</li>
<li>Forsberg, D., Ringstedt, T., Herlenius, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+release+prostaglandin+E2+to+modify+respiratory+network+activity%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Astrocytes release prostaglandin E2 to modify respiratory network activity.</a> eLife. 6, (2017).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Esiste un numero di metodi elettrofisiologici per valutare funzionale accoppiamento tra astrociti23,24. Tuttavia, questi metodi non forniscono informazioni circa la disposizione anatomica delle reti astrocytic. Una serie di studi hanno già dimostrato che "tintura - o tracciante-accoppiamento", come fatto qui, si verifica solo in una frazione di accoppiato le cellule che vengono rilevate da metodi elettrofisiologici25,<sup class=...

Molti studi hanno descritto come il dialogo di neuroni-astrociti a livello sub-cellulare o sinaptico può avere implicazioni in funzioni neuronali e trasmissione sinaptica. È affermato che gli astrociti sono sensibili ai circostanti attività neuronale; Infatti, essi hanno recettori per neurotrasmettitori molti tra cui glutammato, GABA, acetilcolina e ATP (Vedi recensioni precedentemente pubblicate2,3,4). In cambio, astrocitari elabora elementi sinaptica Sheath e attività neuronale influenza entrambe c'e presso siti extrasynaptic regolazione dell'omeostasi ionica extracellulare e rilasciando diversi fattori o trasmettitori quali glutammato, D-serina e ATP 5 , 6 , 7.
L'idea che gli astrociti possono anche modulare la funzione di un neurone a livello di rete è emerso, con evidenza che accoppiamento astrocytic spazialmente è regolata e corrisponde a un neurone segmentazione in aree caratterizzate da un chiaro anatomico compartimentazione (come le zone con le rappresentazioni sensoriali), che indica che gli astrociti saranno accoppiare ad altri astrociti che servono la stessa funzione, piuttosto che solo quelli che sono nelle vicinanze. Nell'oliva superiore laterale, ad esempio, reti più astrocytic sono orientati ortogonalmente al tonotopico asse8, considerando che nei glomeruli barile corteccia o olfactoty, è molto più forte all'interno di botti o glomeruli comunicazione tra astrociti e più debole tra adiacente quelli9,10. In entrambi i casi, le reti astrocytic sono orientate verso il centro del glomerulo o canna9,10.
Recentemente abbiamo dimostrato che attività astrocytic modula il firing neuronale diminuendo la concentrazione di Ca extracellulare2 + ([Ca2 +]e), presumibilmente attraverso il rilascio di S100β, a Ca2 +-binding proteina11. Questo effetto, che è stato dimostrato in una popolazione di neuroni trigeminali rhythmogenic nella parte dorsale della sensitiva del trigeminal principale nucleo (NVsnpr, pensato per svolgere un ruolo importante nella generazione di movimenti masticatori), deriva dal fatto che ritmica infornamento in questi neuroni dipende da un Na persistente+ attuale che è promosso da diminuzioni della [Ca2 +]t11,12. Ritmica infornamento in questi neuroni può essere suscitata "fisiologicamente" da stimolazione dei loro ingressi o artificiale diminuzione della [Ca2 +]e. Abbiamo ulteriormente dimostrato che astrocytic accoppiamento è stato richiesto per firing neuronale ritmica1. Ciò ha sollevato la possibilità che reti astrocytic possono formare circoscritte domini funzionali dove le attività di un neurone può essere sincronizzato e coordinato. Per valutare questa ipotesi, abbiamo prima bisogno di sviluppare un metodo per documentare rigorosamente l'organizzazione di queste reti all'interno di NVsnpr.
Gli studi precedenti sulle reti astrocytic sono descritti principalmente nella misura dell'accoppiamento in termini di numero delle cellule e la densità e l'area coperta. Tentativi di valutare la forma delle reti astrocytic e la direzione della tintura-accoppiamento per la maggior parte sono stati eseguiti confrontando le dimensioni delle reti lungo due assi (x e y) nella canna corteccia9, ippocampo13,14, 15, barreloid campi il talamo16, laterale superiore oliva8, glomeruli olfattivi10e corteccia14. I metodi descritti qui abilitare imparziali conteggi delle cellule con etichettate in una rete e una stima dell'area che coprono. Abbiamo inoltre sviluppato strumenti per definire l'orientamento preferito di accoppiamento all'interno di una rete e per valutare se l'orientamento preferito è verso il centro del nucleo o in una direzione diversa. Rispetto ai metodi precedenti, questo protocollo fornisce un mezzo per descrivere l'organizzazione e l'orientamento delle reti astrocytic in strutture come il nucleo sensitivo principale del trigemino dorsale che non dispongono di un conosciuto Chiara anatomico compartimentalizzazione. Negli studi di cui sopra, l'orientamento della rete è descritto come una relazione tra la forma della struttura stessa che è già documentata (ad es., strati di barreloid nel talamo, barili nella corteccia, nell'ippocampo e nella corteccia, glomeruli in il bulbo olfattivo, ecc.). Inoltre, analisi vettoriale consente comparazioni di orientamenti ha rivelati in diverse condizioni di accoppiamento. Per analizzare se questi parametri cambiati secondo la posizione della rete all'interno del nucleo, abbiamo anche sviluppato un metodo per sostituire ogni rete in riferimento i confini del nucleo. Questi strumenti possono essere facilmente adattati ad altre aree per le reti d'istruttore delle cellule accoppiate.

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Chemicals</td><td>S671-3</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Chemicals</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher Chemicals</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Fisher Chemicals</td><td>M65-500</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Chemicals</td><td>S233-500</td><td></td></tr><tr><td>C6H12O6 Destrosio anidro</td><td>Fisher Chemicals</td><td>D16-500</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 disidratato</td><td>Sigma</td><td>C70-500</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Sigma</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Acido D-gluconico sale di potassio</td><td>Sigma</td><td>G45001</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 anidro</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>ATPTris Sale</td><td>Sigma</td><td>A9062</td><td></td></tr><tr><td>GTPTris Sale</td><td>Sigma</td><td>G9002</td><td></td></tr><tr><td>Biocitina</td><td>Sigma</td><td>B4261</td><td></td></tr><tr><td>Carbenoxolone sale disodico</td><td>Sigma</td><td>C4790</td><td></td></tr><tr><td>complesso avidina-biotina : Kit ABC</td><td>Vestor laboratories</td><td>PK-4000</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidina-alexa 594</td><td>Sonde molecolari</td><td>S11227</td><td></td></tr><tr><td>Triton</td><td>Fisher Chemicals</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher Chemicals</td><td>X5-1</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di montaggio acquoso 1 : Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Terreno di montaggio in resina sintetica a base di toluen : Permount</td><td>Fisher Chemicals</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Banco di essiccazione per vetrini</td><td>Fisherbrand</td><td>11-474-470</td><td></td></tr><tr><td>Vibratomo</td><td>Leica</td><td>VT 1000S</td><td></td></tr><tr><td>Vetro di copertura per microscopio</td><td>Fisherbrand</td><td>12-544A</td><td></td></tr><tr><td>Vetrino per microscopio ColorFrost</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-413</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Fisherchemicals</td><td>04042-500</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocale Olympus FluoView FV 1000</td> Lente ad immersione in acqua <td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>40X Lente ad immersione in acqua</td><td>Olympus</td><td>LUMPLFLN40XW</td><td></td></tr><tr><td>20X Lente ad immersione in acqua</td><td>Olympus</td><td>XLUMPLFL20XW</td><td></td></tr><tr><td>4X</td><td>XLFLUOR4X</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropipetta estrattore</td><td>Sutter Instrument</td><td>P97</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipolatore</td><td>Sutter Instrument</td><td>MP 225</td><td></td></tr><tr><td>Camera CCD</td><td>Sony</td><td>CX-ST50</td><td></td></tr><tr><td>Monitor in bianco e nero</td><td>Sony</td><td>SSM-125</td><td></td></tr><tr><td>Digidata</td><td>Molecular devices</td><td>1322A</td><td></td></tr><tr><td>Patch Clamp amplificatore</td><td>Axon instrument</td><td>Mulitclamp 700A</td><td></td></tr><tr><td>Software di acquisizione elettrofisiologica</td><td>Dispositivi molecolari</td><td>pClamp 8</td><td></td></tr><tr><td>Software di analisi elettrofisiologica</td><td>Dispositivi molecolari</td><td>Clampfit 8</td><td></td></tr><tr><td>Software di analisi di imaging</td><td>ImageJFIJI</td><td>Software open source. Versione FIJI con pacchetto plug-in.</td><td></td></tr><tr><td>Editor di immagini vettoriali</td><td>Adobe</td><td>Illustrator CS4</td><td></td></tr><tr><td>Applicazione per fogli di calcolo</td><td>Microsoft Office</td><td>Excel 2010</td><td></td></tr></tbody></table>

analizzando le dimensioni, la forma e la direzionalità delle reti dei astrocytes accoppiato

Analyzing the Size, Shape, and Directionality of Networks of Coupled Astrocytes

È diventato sempre più chiaro che gli astrociti modulano la funzione di un neurone non solo a livello sinaptico e cella singola, ma anche a livello di rete. Gli astrociti sono fortemente collegati tra loro attraverso giunzioni di gap e accoppiamento attraverso queste giunzioni è dinamico e altamente regolato. Un concetto emergente è che funzioni astrocytic sono specializzate e adattate per le funzioni del circuito neuronale a cui sono associati. Pertanto, metodi per misurare i vari parametri delle reti astrocytic sono necessari per meglio descrivere le regole che disciplinano la loro comunicazione e l'accoppiamento e per capire meglio le loro funzioni.
Qui, utilizzando il software di analisi di immagine (ad es., ImageJFIJI), descriviamo un metodo per analizzare immagini confocal di reti astrocytic rivelati da tintura-accoppiamento. Questi metodi consentono di 1) un rilevamento automatizzato e imparziale delle cellule con etichettate, 2) calcolo della dimensione della rete, 3) calcolo dell'orientamento preferenziale della tintura diffuse all'interno della rete e 4) riposizionamento della rete all'interno dell'area di interesse .
Questa analisi consente di caratterizzare astrocytic reti di una particolare area, confrontare reti di diverse aree associate a funzioni diverse o reti ottenute in condizioni diverse che hanno effetti diversi sull'accoppiamento. Queste osservazioni potrebbero portare a importanti considerazioni funzionali. Per esempio, analizziamo le reti astrocytic di un nucleo trigeminale, dove precedentemente abbiamo indicato che accoppiamento astrocytic è essenziale per la capacità dei neuroni di passare loro schemi di attivazione da tonico per rottura ritmica1. Misurando le dimensioni, confinamento e orientamento preferenziale delle reti astrocytic in questo nucleo, possiamo costruire ipotesi sui domini funzionali che circoscrivono. Parecchi studi suggeriscono che diverse altre aree cerebrali, tra cui la corteccia barile, oliva superiore laterale, glomeruli olfattivi e sensoriali nuclei nel talamo e corteccia visiva, per citarne alcuni, possono beneficiare di una simile analisi.

Accoppiamento tra le cellule del cervello non è statico ma piuttosto dinamicamente regolato da molti fattori. I metodi descritti sono stati sviluppati per analizzare reti astrocytic ha rivelati in condizioni diverse e a capire la loro organizzazione in NVsnpr. Questi risultati sono stati già pubblicati1. Abbiamo effettuato biocitina riempimento dei astrocytes singolo nella parte dorsale del NVsnpr in tre diverse condizioni: a riposo (in condizioni di controllo in a...

Qui presentiamo un protocollo per valutare l'organizzazione di reti astrocytic. Il metodo descritto riduce al minimo la distorsione per fornire misure descrittivi di queste reti come il conteggio delle cellule, dimensioni, area e posizione all'interno di un nucleo. Anisotropia è valutato con un'analisi vettoriale.

Analizzando le dimensioni, la forma e la direzionalità delle reti dei Astrocytes accoppiato

It has become increasingly clear that astrocytes modulate neuronal function not only at the synaptic and single-cell levels, but also at the network ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave riguardanti l'organizzazione di reti astrocitiche nelle strutture cerebrali. Il principale vantaggio di questa tecnica è che propone un metodo imparziale per contare le cellule etichetta e documentare la loro organizzazione anatomica all'interno di una struttura definita. Aprire ImageJFIJI, selezionare il file desiderato e fare clic su OK nella finestra delle opzioni di importazione del formato bio.Per ridefinire una pila Z che conterrà solo le fette ottiche necessarie per lo stack Z finale, selezionare prima il progetto STK e Z, quindi fare clic sulla manopola dello stack nella barra degli strumenti. Selezionate intensità massima nell'impostazione del tipo di proiezione. Salvare il file e denominarlo file stack.Se il file di imaging contiene più canali, utilizzare il colore dell'immagine e i canali divisi per visualizzare solo il canale con l'immagine della rete astrocitica. Controllare le impostazioni dei pixel dell'immagine selezionando immagine, proprietà, pixel, con uno per la dimensione dei pixel. Quindi utilizzare lo strumento sottrai sfondo aprendo il processo e sottrarre lo sfondo per rimuovere l'etichettatura della b

analyzing-size-shape-directionality-networks-coupled

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Qui si descrive un adattamento dei protocolli usati per indurre plasticità omeostatica nei neuroni per lo studio della plasticità dei recettori accoppiati a proteina G astrociti. Utilizzati di recente per esaminare i cambiamenti nel gruppo astrociti I mGluRs nei topi giovani, il metodo può essere applicato per misurare il ridimensionamento di diversi GPCR astrocitiche, in tessuto dai topi adulti in situ e in vivo, e di ottenere un migliore apprezzamento della sensibilità dei recettori...

Indurre Plasticità di astrociti recettori per manipolazione del neuronali di cottura Prezzi

Gli astrociti nel SNC cambiano le loro proprietà funzionali e strutturali in risposta a stimoli dannosi. Questo rapporto presenta un protocollo per la valutazione della morfologia tridimensionale degli astrociti in condizioni di malattia o dopo interventi terapeutici.

Protocollo per tridimensionale confocale morfometrica Analisi di astrociti

Questo protocollo descrive l'indiretta co-coltura di neuroni-astrociti per l'analisi compartimenti stagni delle interazioni neuroni-glia.

La indiretto Neuron-astrociti co-coltura saggio: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Set-up per l&#39;indagine dettagliata delle Interazioni neuroni-glia

Presenteremo lo sviluppo di auto-assemblati, tridimensionale fasci di somata astrocytic allineati longitudinalmente e processi all'interno di un encasement romanzo biomateriale. Questi ingegnerizzato "ponteggi vivente", che esibiscono micron-scala diametro ancora estendere centimetri di lunghezza, può servire come banchi di prova per lo studio dei meccanismi dello sviluppo neurologico o facilitare la neurorigenerazione di regia della migrazione neuronale e/o assonale path-finding.

Tessutale tridimensionale allineato Astrocyte reti per ricapitolare i meccanismi dello sviluppo e facilitare la rigenerazione del sistema nervoso

Il protocollo AWESAM descritto qui è ottimo per la coltura di astrociti murini in isolamento da altre cellule del cervello in modo veloce, semplice ed economica. Gli astrociti AWESAM esibiscono spontanea Ca2 + segnalazione, morfologia e gene expression profili simili a astrociti in vivo.

Coltura In Vivo-piace murini astrociti utilizzando il protocollo AWESAM veloce, semplice e poco costoso

In questo protocollo, ci proponiamo di descrivere un metodo riproducibile per combinare dissociato pluripotenti umane su cellule staminali neuroni e astrociti insieme in 3D sfera cocultures, mantenendo queste sfere in condizioni galleggiante libera e successivamente misurazione dell'attività sinaptica circuito delle sfere con immunoanalysis e registrazioni di matrice multielettrodo.

Microcircuito sinaptica modellazione con 3D Cocultures di astrociti e neuroni da cellule staminali pluripotenti umane

Gli astrociti sono cellule morfologicamente complesse, esemplificate dai loro molteplici processi e territori cespugliosi. Per analizzare la loro morfologia elaborata, presentiamo un protocollo affidabile per eseguire iontoforesi gialla di Lucifero intracellulare in tessuto leggermente fissato.

Visualizzazione della morfologia degli astrociti utilizzando Lucifero Giallo Iontoresis

Qui descriviamo un metodo in vitro di imaging dal vivo per visualizzare il trasporto intracellulare di organelli e il traffico di proteine della membrana plasmatica negli astrociti murini. Questo protocollo presenta anche una metodologia di analisi delle immagini per determinare gli itinerari e la cinetica nel trasporto merci.

Visualizzazione e analisi del trasporto intracellulare di organelli e di altri carichi in Astrociti

La combinazione della trasduzione del vettore virale e della compensazione del cervello utilizzando il metodo CLARITY consente lo studio di un gran numero di neuroni e astrociti contemporaneamente.

Indagine sull'interazione spaziale tra astrociti e neuroni nel cervello eliminato

Questo protocollo descrive i metodi per il sezionamento, la colorazione e l'imaging di sezioni di tessuto fluttuanti del cervello del topo, seguito da una descrizione dettagliata dell'analisi del volume del territorio degli astrociti e della sovrapposizione o della piastrellatura del territorio degli astrociti.

Analisi del volume e della piastrellatura del territorio degli astrociti in sezioni di tessuto fluttuanti spesse

Impara a analizzare le reti astrocitarie nel cervello con ImageJFIJI. Questo metodo imparziale misura dimensioni, posizione e anisotropia vettoriale per studiare l'organizzazione cellulare in neuroscienza.

Analizzando le dimensioni, la forma e la direzionalità delle reti dei Astrocytes accoppiato

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