PCR quantitativa del batteriofago T7 da Biopanning

Questo metodo potrebbe aiutare a rispondere ai problemi chiave nei campi della virologia e della microbiologia relativi all'enumerazione di batteriofagi da campioni complessi e diagnostica e terapie basate su batteriofagi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente una quantificazione efficiente in termini di tempo e accurata di un gran numero di campioni provenienti da esperimenti di biopanning di visualizzazione del fago non fattibili con saggi tradizionali. A dimostrare la procedura saranno Rashmi Mohanty e Jasmim Leal, studenti laureati del mio laboratorio.

Dopo aver progettato i primer e aver creato una concentrazione di stock, ottenere il DNA del fago T7 di riferimento ad una concentrazione di 0,1 microgrammi per microlitro. Utilizzando acqua ultrapura, diluire serialmente questo DNA dieci volte, da un milione di femtogrammi per microlitro a un femtogramma per microlitro in tubi PCR da 0,2 millilitri. Preparare 20 microlitri di ogni concentrazione, assicurandosi di cambiare le punte delle pipette e vortice i tubi tra ogni fase della diluizione.