Name: Occlusione dellarteria cerebrale centrale consentendo di riperfusione tramite riparazione dellarteria carotica comune nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Impara la tecnica chirurgica di riparazione dell'arteria carotica comune nei topi per migliorare la riperfusione nell'ictus sperimentale. Questo metodo riduce la variabilità dei risultati e aumenta il flusso sanguigno cerebrale.

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Questo lavoro è stato finanziato dal centro nazionale per la sostituzione, la raffinatezza e la riduzione degli animali nella ricerca (NC3Rs; NC/M000117/1 al centro di gravità). Gli autori ringraziano il personale della divisione di servizi biomediche, Università di Leicester, per la loro cura degli animali sperimentali e Maria Viskaduraki per la sua consulenza statistica. I risultati rappresentativi sono adattati con il permesso da modelli di malattia & meccanismi11.

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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Induzione di filamento di MCAO transitorio nei roditori è il più frequentemente usato modello sperimentale del colpo, in quanto permette riperfusione all'area colpita, che imita il verificarsi di eventi segue clinica dell'ictus ischemico7. È segnalato qui un approccio chirurgico alternativo al tradizionale metodo di MCAO transitorio filamento-indotta in topi. L'approccio alternativo, che coinvolge il trattamento di analgesia, l'evitare di legatura di ECA e CCA incisione riparazione, si traduce in una ridotta variabilità di LV quando valutata facendo uso di metodi colorazione istologica11e di MRI.
Gli approcci tradizionali per indurre MCAO in gran parte si basano sul transection, o almeno la legatura, della Corte dei conti, che ha dimostrato, nei ratti, di influenzare il comportamento bevente e un aumento nella perdita di peso del corpo seguendo la MCAO14. Il protocollo definito qui, nei topi, con l'evitare la legatura ECA e aggiunta di analgesia, ha suggerito una riduzione di perdita di peso corporeo dopo MCAO con nessun effetto sul volume della lesione. L'uso di analgesia è evitato, o almeno non segnalato, nella maggior parte degli studi sperimentali ictus, a causa di possibili effetti confondenti sui risultati sperimentali. Tuttavia, evitando completamente l'analgesia non è sempre giustificata e c'è la necessità di bilanciare le esigenze di benessere degli animali con il raggiungimento degli obiettivi scientifici.
Differenze nella dimensione animale, deformazione e anatomia cerebrovascolare, oltre alle variazioni di dimensioni e tipo di filamento, ha suggerite di influenzare colpo risultati23,24. L'approccio alternativo descritto qui evita la dipendenza la mucca durante la riperfusione, riducendo così, almeno in parte, la variabilità osservata tra gli animali in volume della lesione. Anatomia di mucca è altamente variabile in topi, in particolare nella C57BL /6 ceppo, che è spesso utilizzata negli studi di colpo sperimentale. 90% dei topi C57BL/6 hanno una mucca incompleta a causa di una variegata posteriore comunicante dell'arteria (PcomA) l'evidenza, che può avere un effetto sul volume di danno ischemico dovuto la perfusione insufficiente di strutture di fuori del territorio MCA13, 25. riparazione del CCA in topi, come illustrato di seguito, si traduce nel ristabilimento del sangue flusso tramite il CCA alla zona ischemica, come precedentemente descritto in ratti15. Qui i dati rappresentativi dimostrano che la riparazione del CCA aumenta riperfusione, anche se il flusso di sangue in CCA non è stato misurato direttamente. Tuttavia, è possibile per il chirurgo di visualizzare il CCA rifluisca con sangue dopo la riparazione del vaso, come si ritorna ad uno stato palpitante e completo lungo tutto il tronco, prossimale e distale rispetto alla posizione di riparazione. Questa conferma visiva, insieme a letture di flussometria Doppler laser della zona ischemica, può essere utilizzata per confermare la riuscita riparazione della nave. Il tempo tra l'applicazione di rilievo del tessuto e la rimozione della clip nave da CCA possono avere un impatto sulla pervietà risultante del CCA, come riducendo il tempo tra l'applicazione di rilievo del tessuto e la rimozione di clip impedirà il pad tessuto aderendo all'o lato di trecenteschi del CCA. Anche se tecnicamente impegnativi, la procedura alternativa di MCAO spiegata qui non richiede alcuna abilità supplementari rispetto a quelli necessari per eseguire l'induzione chirurgica di MCAO nei topi.
Tradizionalmente associato con un'alta variabilità nelle misure di risultato, studi di colpo sperimentale possono avere la tendenza a essere sottodimensionato. Requisiti etici e di assistenza sociale in combinazione con preoccupazioni economiche e pratiche possono contribuire agli studi essere sottodimensionato. Riducendo la variabilità nel risultato e, di conseguenza, producendo esiti di lesione più coerente attraverso un gruppo sperimentale, i calcoli di potenza più efficaci possono essere eseguiti con l'obiettivo ultimo di studi viene alimentato in modo appropriato.
In conclusione, questa procedura di riparazione alternativa di CCA, nei topi, si traduce in minore variabilità nel volume della lesione sperimentale colpo seguente e calcoli di potenza più piccoli gruppi sperimentali consente di essere necessario per i test un effetto del trattamento quando appropriato vengono utilizzati.

Delle principali cause di ictus cerebrale è ischemia focale nel territorio dell'arteria cerebrale centrale. Attivatore tissutale del plasminogeno (tPA) è il trattamento farmacologico solo disponibile con efficacia provata, nonostante numerosi esperimenti clinici mirati a colpo ischemico1,2. Tuttavia, a causa di problemi di sicurezza e una ristretta finestra terapeutica (< 4,5 h), solo ~ 15% di tutti i pazienti colpiti da ictus sono idonei a ricevere tPA e i tassi di ricanalizzazione possono essere < 50%3,4.
Riproducibile e clinicamente rilevanti modelli animali del colpo sono considerati essenziali per informare lo sviluppo di trattamenti terapeutici di tempi nuovi e potenziali. Tuttavia, a causa di preoccupazioni per quanto riguarda la coerenza e la variabilità nei risultati con modelli animali, rimane importante affinare i modelli esistenti in vivo per migliorare la traduzione da studi preclinici per la clinica. La mancanza di traduzione dall'efficacia sperimentale preclinica di potenziali trattamenti per uso clinico è una preoccupazione costante per corsa ricerca5. Ragioni del fallimento della traduzione sono probabili essere più e possono essere correlati, ad esempio, la progettazione dello studio, ritardi di trattamento, eterogeneità clinica dell'ictus, e le limitazioni dei modelli animali utilizzati6. Una sfida chiave per la ricerca sull'ictus rimane lo sviluppo di trattamenti sicuri ed efficaci.
Occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) tramite l'inserzione di filamento intraluminal è il modello del roditore utilizzate più di frequente in vivo di colpo sperimentale. Questo modello permette il ripristino del flusso sanguigno dopo un'induzione di ischemia, che imita gli eventi che si verificano nel tratto umano7. Tuttavia, in particolare nei topi, volumi di lesione eterogenea con varie deviazioni standard si verificano anche se definito protocolli chirurgici sono applicate8,9,10. È tipico per vedere una distribuzione bimodale di striatal piccolo e grande lesione striato-corticali volumi11. Per indurre l'ischemia, il filamento viene in genere inserito attraverso un'incisione del CCA o ECA che poi rimangono permanentemente legato12. La legatura permanente del CCA previene il ristabilimento del flusso sanguigno nell'arteria carotica interna (AIC) e, successivamente, il territorio MCA. In questo modo riperfusione essere affidamento su rifornimento collaterale all'interno del cerchio di Willis (mucca). La struttura di mucca ha variabilità anatomica tra singoli animali, particolarmente in C57BL/6 topi-un ceppo in genere utilizzato in vivo corsa ricerca13. Un metodo alternativo, di inserimento di filamento attraverso l'ECA, consentire la perfusione continua attraverso il CCA, ma compromessi questo metodo il rifornimento arterioso per il territorio ECA, che ha dimostrato, nei ratti, di avere un effetto negativo sull'animale benessere14.
L'affidamento sulla mucca per rifornimento collaterale e la riperfusione nel modello di MCAO stabilito può, in parte, spiegare la variabilità del volume di lesione dopo l'occlusione. Descriviamo una procedura chirurgica murina alternativa dove la legatura ECA è evitata e l'incisione di CCA è riparata, permettendo così di riperfusione attraverso il CCA, indipendente della mucca. La riparazione dell'incisione CCA precedentemente è stata indicata in ratti per provocare una riperfusione di successo attraverso il CCA15. Abbiamo applicato questo approccio con successo in topi11 e riferire qui il protocollo che si traduce in una ridotta variabilità nel volume della lesione, la misura di esito principale utilizzata negli studi di colpo sperimentale.
In questo protocollo, dimostriamo come intraprendere MCAO attraverso l'inserimento di filamento nave CCA seguita dalla riparazione del vaso CCA, che coinvolge un'applicazione di pad e sigillante di tessuto a consentire di riperfusione.

<table><tbody><tr><td>Sonda flessibile a fibra ottica singola da 0,7 mm</td><td>Moor Instruments, UK</td><td>P10d</td><td>Utilizzare con la sonda master Codice: VP10M200ST</td></tr><tr><td>7-0 monofilamento rivestito in silicone</td><td>Doccol, USA</td><td>701956PKRe</td><td>Articolo dipendente dalle dimensioni e dal peso dell'animale - utilizzare le linee guida del produttore. Il codice prodotto qui è stato utilizzato per i risultati rappresentativi mostrati nell'articolo.</td></tr><tr><td>9.4T Sistema di risonanza magnetica preclinica</td><td>Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA</td><td>MY11520101</td><td>Dotato di bobine a gradiente e RF adatte all'imaging cerebrale del topo</td></tr><tr><td>Apparecchiature per il monitoraggio e il gating degli animali</td><td>SA Instruments, Stony Brook, New York, USA</td><td>Monitoraggio della temperatura e della respirazione compatibile con la risonanza magnetica</td><td>22124005</td></tr><tr><td>Bupivacaine</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, Regno Unito</td><td>512345</td><td>Marcaine</td></tr><tr><td>C57BL/6 Mice</td><td>Charles River, Oxford, Regno Unito</td><td>B6JSIMA49D</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Norbrook Laboratories</td><td>143658</td><td>Carprieve 5% c/v Soluzione iniettabile per piccoli animali</td></tr><tr><td>Soluzione detergente per le mani clorexidina al 4%</td><td>VWR International Ltd, Lutterworth, Regno Unito</td><td>MOLN10008780</td><td>HibiScrub Detergente antimicrobico per le mani, Molnlycke Health Care</td></tr><tr><td>Cotton fioc</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, Regno Unito</td><td>213512</td><td>Qualsiasi corpo in plastica, punta del cotton fioc è adatto una volta reso sterile in autoclave.</td></tr><tr><td>Stereoscopio da dissezione</td><td>Carl Zeiss</td><td>OPMI99</td><td>Apparecchio residente. Sarà adatto qualsiasi stereoscopio da dissezione binoculare in grado di ingrandire x1-x5.</td></tr><tr><td>suture solubili 6-0 National</td><td>Veterinary Services, Stoke-on-trent, Regno Unito</td><td>9544</td><td>Suture assorbibili Ethicon Coated Vicryl 6/0 (codice Ethicon: W9981)</td></tr><tr><td>Porta sonda a ciambella</td><td>Moor Instruments, UK</td><td>PHDO</td><td>Supporto per sonda per topo, necessario da utilizzare con una sonda a fibra ottica singola quando viene utilizzato con una macchina per flussimetria laser doppler.</td></tr><tr><td>dumont #5 pinze</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Regno Unito</td><td>500342</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogeno e sigillante trombinico</td><td>Baxter, Berkshire, Regno Unito</td><td>1502243</td><td>TISSEEL Soluzioni pronte all'uso per sigillante 2 mL</td></tr><tr><td>Gel food</td><td>Datesand group, Manchester, Regno Unito</td><td>72065022</td><td>Diet Gel Recovery</td></tr><tr><td>Visualizzazione delle immagini e pacchetto software di misurazione</td><td>Affettatrice 3D</td><td>https://www.slicer.org/</td><td>Versione 4.0</td></tr><tr><td>Pacchetto software di visualizzazione e misurazione delle immagini</td><td>NIH, Maryland, USA</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td> Monitor <td>LDF NIH/ImageJ</td></tr><tr><td></td><td>Moor Instruments, Regno Unito</td><td>moorForbici VMS-LDF</td><td></td></tr><tr><td>micro vannas</td><td>InterFocus Ltd, Linton, Regno Unito</td><td>15000-08</td><td>In alternativa è possibile utilizzare altre forbici a molla microvannas, anche se sono necessarie punte fini.</td></tr><tr><td>Clip microvascolare</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Regno Unito</td><td>15911</td><td>10 G Vessel Clip</td></tr><tr><td>Supporti per clip microvascolari</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Regno Unito</td><td>14189</td><td></td></tr><tr><td>Software di acquisizione e analisi MRI</td><td>Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA</td><td>VnmrJ Versione 4.2</td><td>Revisione A</td></tr><tr><td>n. 15 bisturi</td><td>Forniture per laboratorio scientifico, Nottingham, Regno Unito</td><td>INS4678</td><td>Bisturi sterile n. 15 - numero di produzione P305. Sono disponibili altri fornitori.</td></tr><tr><td>Sutura 6-0 non disolubile</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, Regno Unito</td><td>W529</td><td>Ethicon Mersilk Sutures</td></tr><tr><td>Lubrificante oculare</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, Regno Unito</td><td>847288</td><td>Lacrilube (5100G13)</td></tr><tr><td>Gel ottico corrispondente</td><td>Moor Instruments, UK</td><td>PMG</td><td></td></tr><tr><td>Pulsossimetry Reader</td><td>Starr Life Sciences Corp., Oakmont, PA, USA</td><td>MouseOx</td><td>MouseOx - ratto & pulsossimetro per topo e monitor fisiologico Utilizzare con sensore coscia del mouse.</td></tr><tr><td>Gel reidratante</td><td>Datesand group, Manchester, Regno Unito</td><td>70015022</td><td>HydroGel</td></tr><tr><td>Tagliacapelli piccoli</td><td>vetproductsuk.com</td><td>HS61</td><td>Contura Rifinitore/tagliacapelli senza fili</td></tr><tr><td>Sterile 0,9 % Soluzione di NaCl</td><td>VWR International Ltd, Lutterworth, Regno Unito</td><td>LOCA3528286</td><td>CLORURO DI SODIO 0,9% P/V INFUSIONE ENDOVENOSA BP 500 ML IN ECOFLAC&frac12; Piastra</td></tr><tr><td>di Petri sterile</td> PLUS <td>VWR International Ltd, Lutterworth, Regno Unito</td><td>5168021</td><td>Piastra di Petri sterile da 50 mm. Qualsiasi marca è adatta. È richiesto un diametro minimo di 50 mm.</td></tr><tr><td>Adesivo topico per tessuti</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Regno Unito</td><td>503763</td><td>GLUture Adesivo topico per tessuti</td></tr><tr><td>Supercolla impermeabile</td><td>Loctite</td><td>Loctite Supercolla Precision Max</td><td>Disponibile nella maggior parte dei negozi di ferramenta.</td></tr><tr><td>Chip di carta bianca</td><td>Datesand group, Manchester, Regno Unito</td><td>CS1BPB</td><td>Pure-O'Cel</td></tr></tbody></table>

occlusione dell'arteria cerebrale centrale consentendo di riperfusione tramite riparazione dell'arteria carotica comune nei topi

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

L'ictus ischemico è delle principali cause di disabilità a lungo termine adulto e morte in tutto il mondo. I trattamenti correnti disponibili sono limitati, con solo attivatore tissutale del plasminogeno (tPA) come trattamento farmaco approvato per indirizzare i colpi ischemici. La ricerca attuale nel campo del colpo ischemico si concentra sulla migliore comprensione della patofisiologia del colpo, per sviluppare e studiare nuovi target per la farmaceutica. Modelli di colpo sperimentale affidabile sono cruciali per la progressione di potenziali trattamenti. Il modello di occlusione (MCAO) dell'arteria cerebrale centrale è clinicamente rilevante e il più delle volte usato modello chirurgico del colpo ischemico in roditori. Tuttavia, i risultati di questo modello, come il volume della lesione, sono associati con alti livelli di variabilità, in particolare nei topi. Il modello MCAO alternativo descritto qui permette la riperfusione dell'arteria carotica comune (CCA) e l'aspersione aumentata del territorio dell'arteria cerebrale centrale (MCA), utilizzando un pad di tessuto con sigillante a base di fibrinogeno per riparare la nave ed il miglioramento della benessere dei topi evitando la legatura dell'arteria carotica esterna (ECA). Questo riduce la dipendenza del cerchio di Willis, che è noto per essere altamente anatomicamente variabile nei topi. Dati rappresentativi indicano che usando questo metodo chirurgico alternativo fa diminuire la variabilità in volumi di lesione tra l'approccio MCAO tradizionale e l'approccio alternativo descritto qui.

Un totale di 24 topi C57BL/6 maschio adulto, peso compreso tra 24 – 31 g al momento della chirurgia, sono stati utilizzati nello studio. Un animale è morto dopo l'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) e uno è stato escluso a causa di complicazioni chirurgiche. I dati qui presentati sono presi da un lavoro precedentemente pubblicato dagli autori. Questi sono stati utilizzati per illustrare l'effetto della riparazione del vaso su MCAO risultati11. Tutti i dati sono espressi come thr media ± deviazione standard. I dati sono stati valutati statisticamente per la normalità con il test di normalità omnibus D'Agostino-Pearson. Dati parametrici sono stati confrontati usando di Student t-test (per due mezzi) e One-way ANOVA con il test di Sidak (mezzi multipli). Dati non-parametrici sono stati confrontati con il test U di Mann-Whitney. La variabilità dei dati parametrici è stata valutata utilizzando un F-prova, e la variabilità dei dati non-parametrica è stata valutata utilizzando il test di Levene.
In genere, nelle procedure di MCAO, il filamento d'occlusione viene inserito il CCA e la Corte dei conti è legato per impedire questo filamento di transito verso la Corte dei conti, piuttosto che la ICA. Un'elusione della legatura di ECA e l'aggiunta di analgesia ha mostrato una tendenza verso la perdita di peso ridotta a 48 h post-MCAO, rispetto ai dati da precedenti studi condotti dallo stesso chirurgo per lo stesso tempo MCAO mediante legatura ECA con nessun analgesia, considerando che il LV sono sembrato inalterati, Vedi Figura 1.
Topi hanno subito un'ischemia indotta da MCAO 60 min seguita da riperfusione con riparazione del vaso CCA o con la legatura tipica dell'approccio CCA. Un disegno schematico del CCA riparato legato e deossiHb è illustrato nella Figura 2.
Flussometria del laser Doppler è stato utilizzato per confermare il flusso aspersione di anima nel territorio del MCA a MCAO, prima e dopo la riparazione del vaso CCA. Nella figura 3 viene illustrato che 5 minuti dopo la rimozione del filamento, il flusso sanguigno cerebrale regionale (rCBF) aumentato significativamente nella regione del cervello del MCA. La perfusione è stata mantenuta fino alla riparazione del vaso, con un aumento della perfusione nel territorio di MCA mostrato dopo la riparazione di nave CCA, suggerendo che la riparazione CCA ha permesso un'aspersione di anima aumentata al territorio ischemico rispetto all'affidamento su il cerchio di Willis da solo.
T2-weighted MRI è stato usato per determinare il totale LV e DTI scansioni sono stati utilizzati per determinare il nucleo LV, 48 h dopo la MCAO. Figura 4A non mostra nessuna differenza significativa nel LV totale o core tra la riparazione e la procedura dei gruppi. Tuttavia, la variabilità dei dati sia per totale e core LV, come valutato tramite test di Edgar per non parametrica o F-test per dati parametrici, è stata ridotta significativamente all'interno del gruppo di riparazione CCA. Il totale LV è stato suddiviso in LV corticali e sottocorticali, come mostrato in Figura 4B. La porzione corticale era significativamente meno variabile nel gruppo di riparazione del CCA, considerando che la parte sub-corticale della lesione era inalterata fra i due gruppi procedurali.
Un'analisi di potenza ha indicato che un minor numero di animali per gruppo di trattamento sarebbe necessari per dimostrare una riduzione del 30% nel LV dopo MCAO utilizzando CCA riparazione contro la tipica procedura CCA-legati, Vedi tabella 1. Un presupposto di potenza 1-β = 0,8 e livello di significatività α = 0.05 e una previsione di riduzione del 30% nel LV tra l'ipotetico controllo e prova i gruppi sono stati usati per l'analisi di potenza. Inoltre, è stato presupposto un'uguale varianza tra i gruppi. La tabella 1 Mostra il numero di animali necessari per il test e gruppi di controllo quando viene utilizzato il metodo CCA-legati tipico o il metodo di riparazione CCA aggiornato, come descritto qui, è usato. Nota che il gruppo di test fa riferimento a un ipotetico gruppo trattato di animali e il gruppo di controllo si riferisce ad un ipotetico controllo gruppo; entrambi i gruppi subirebbe MCAO.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig1v2.jpg"> Figura 1: combinato trattamento l'analgesia e l'omissione della legatura di ECA sugli esiti dopo MCAO. (A) peso corporeo, indicato come percentuale del peso di pre-MCAO, diminuito il primo 2 d seguendo la MCAO per entrambi i gruppi. Il gruppo ECA-deossiHb (analgesia-trattati con nessuna legatura ECA a MCAO) ha mostrato una tendenza verso la perdita di peso ridotta il secondo giorno successivo il MCAO. (B), questo pannello mostra il volume di lesione (mm3) misurato dal cloruro di triphenyltetrazolium standard (TTC) colorazione 48 h dopo la MCAO. I dati riportati sono la media ± deviazione standard. ECA legato: n = 17, ECA deossiHb: n = 10. Questa figura è stata modificata da Trotman-Lucas et al. 11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig1v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig2.jpg"> Figura 2: schema mostrando il metodo standard di CCA e il CCA alternativo ripara metodo dopo MCAO. (A) questo schema raffigura un CCA permanentemente legato con punti di sutura non dissolvable applicati a entrambi i lati dell'incisione CCA, conseguente la legatura permanente del CCA giusto. (B), questo schema descrive il metodo di riparazione alternativo di CCA. Un pad piccolo tessuto rivestito con fibrinogeno e trombina sigillante viene utilizzato per coprire l'incisione di CCA, tenuta a consentire la perfusione completa del diritto CCA. Questa figura è stata modificata da Trotman-Lucas et al. 11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig3.jpg"> Figura 3: parametri di flusso (rCBF) sanguigno cerebrale regionale dopo MCAO. Il rCBF ha cambiato 5 min dopo la rimozione di filamento MCAO per entrambi i CCA-legati e CCA-riparato gruppi (post-MCAO), riguardante il rCBF misurato durante MCAO. Questo pannello mostra i dati di rCBF immediatamente prima della riparazione di nave CCA (pre-ripristino) e 5 min dopo la riparazione CCA (post-riparazione). Un aumento significativo del rCBF è mostrato 5 min dopo la rimozione del filamento (post-MCAO) in entrambi i gruppi. Un ulteriore aumento del rCBF è indicato dopo la riparazione CCA (post-riparazione) nel gruppo di riparazione CCA. Nessuna differenza nel rCBF è indicata fra 5 min post-MCAO e pre-riparazione. I dati riportati sono condensati dai dati di tempo-corso analizzati segnalazione punti chiave temporale, qui come media ± deviazione standard. CCA legato: n = 10, CCA riparato: n = 10; P &lt; 0.01, * * *P &lt; 0,001, ns: non significativo. Questa figura è stata modificata da Trotman-Lucas et al. 11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig4.jpg"> Figura 4: analisi del volume lesione ottenuti mediante tecniche di MRI. (A) questo pannello mostra il volume di lesione (LV; mm3) a 48 h dopo MCAO, LV totale tratte da immagini di T2-weighted MRI (Totale LV) e il nucleo LV sottratti DTI scansioni e analisi (Core LV). Immagini rappresentative mostrano il volume di lesione totale da un'immagine di fetta di scansione T2 con la DTI core lesione volume maschera applicata. La variabilità all'interno dei gruppi è stata significativamente ridotta per entrambi il LV totale (P = 0,015, riparazione CCA: n = 10, CCA legato: n = 10, F-test) e il nucleo LV (P = 0,043, riparazione CCA: n = 9, CCA legato: n = 6, prova di Edgar), valutata facendo uso di un F-test per dati parametrici o test di Levene per dati non parametrici. (B) questo pannello mostra il LV a 48 h dopo MCAO, tratte da immagini di T2-weighted MRI e diviso in aree corticali e subcortical lesione. La riparazione CCA ha ridotto significativamente la variabilità di dati (P = 0,03, F-prova) nella porzione corticale della lesione, ma nessun effetto sui dati è stata indicata la variabilità nella porzione della lesione subcortical. Riparazione CCA: n = 10, CCA legato: n = 10. I dati riportati sono la media ± deviazione standard. # P &lt; 0.05 (F-prova), xP &lt; 0.05 (prova di Edgar). Questa figura è stata modificata da Trotman-Lucas et al. 11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Approccio</td>
			<td>Volume della lesione (LV; mm3; media ± s.d.)</td>
			<td>Potenza</td>
			<td>Livello di significatività</td>
			<td>Anticiapted differenza</td>
			<td>Dimensione di gruppo richiesta</td>
		</tr>
<tr>
<td>CCA legato (approccio tradizionale)</td>
			<td>94.08 ± 53,79</td>
			<td>0,8</td>
			<td>0.05</td>
			<td>30%</td>
			<td>
n = 58</td>
		</tr>
<tr>
<td>CCA riparato (nuovo approccio)</td>
			<td>51.73 ± 22,78</td>
			<td>0,8</td>
			<td>0.05</td>
			<td>30%</td>
			<td>
n = 35</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 1: analisi della potenza rappresentativa confrontando la legatura tradizionale di CCA con l'alternativa di CCA riparazione metodo spiegato qui. Questa tavola mostra l'analisi di potenza condotta per calcolare la dimensione di gruppo previsto richiesta per rilevare una differenza significativa nel LV tra un gruppo di controllo, l'approccio tradizionale o alternativo (nuovo) e un gruppo di test (preannunciata). La tabella mostra il gruppo dimensioni come richiesto se presuppone una potenza pari a 0.8, viene applicato un livello di significatività di 0,05 e se il gruppo di test previsto presenta una differenza di 30% in LV rispetto al gruppo di controllo. La tabella mostra i risultati per entrambi gli approcci MCAO (CCA-legati e CCA-riparato) per determinare se c'è una differenza nel numero di animali necessari per ottenere una differenza di 30% in LV. Per entrambi i metodi, si presume una varianza uguale tra il test e il gruppo di controllo. Questa figura è stata modificata da Trotman-Lucas et al. 11.

L'occlusione di filamento intraluminal dell'arteria cerebrale centrale è il modello più utilizzato in vivo di colpo sperimentale nei roditori. Approccio chirurgico alternativo per consentire la riparazione dell'arteria carotica comune avviene qui, che permette la riperfusione dell'arteria carotica comune e un completo riperfusione nel territorio dell'arteria cerebrale media.

Occlusione dell'arteria cerebrale centrale consentendo di riperfusione tramite riparazione dell'arteria carotica comune nei topi

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del tratto sperimentale, ad esempio come ridurre l'associato a questi modelli e come migliorare la riproducibilità. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente la ri-perfusione attraverso l'arteria carotide comune, e quindi non dipende dal cerchio di Willis, che può variare anatomicamente tra gli animali, e quindi può contribuire alla variabilità vista nelle misure di esito sperimentale. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, poiché le fasi di riparazione della nave CCA sono difficili da imparare a causa della difficoltà tecnica che comporta l'utilizzo del sigillante per garantire che il CCA sia completamente brevettato, dopo la riparazione.Per iniziare, preparare e anestetizzare il mouse secondo il protocollo di test. Quindi utilizzare una lama bisturi numero 15 per fare un'incisione della linea mediana di 1,5 cm sul collo ventrale esposto. Utilizzando tecniche di dissezione smussata, ritrarre delicatamente le ghiandole salivari di lato, per esporre la trachea.Quindi sezionare l'arteria carotide comune, o CCA, libera dal tessuto circostante e dal nervo vagale. Dopo questo, passare due piccole sezioni di una sutura 6-0 non dissolubile sotto il CCA, dorsale al CCA e ventrale al nervo vagale. Disegna una cravatta di seta più vicino al chirurgo e legala liberamente intorno al CCA.Quindi legare liberamente una seconda cravatta di seta verso la biforcazione delle arterie carotide interne ed esterne. Quindi, applicare una clip microvascolare appena sopra la cravatta distale, assicurando che la biforcazione non sia ostruita. Utilizzare micro forbici venose per fare un piccolo foro nel CCA.Inserire un micro filamento rivestito in silicone 7-0 nel CCA e spostarlo verso la clip microvascolare. Quindi stringere la cravatta distale per fissare il filamento in posizione. E utilizzare i porta clip per rimuovere la clip microvascolare.Successivamente, avanzare il filamento nell'arteria carotide interna, o ICA. Una volta che la testa del filamento passa la cravatta distale, tirare la cravatta più stretta, per prevenire la perdita di sangue. Usando la cravatta di seta distale, sollevare e tirare il CCA sul lato esterno del corpo del mouse e guidare il filamento verso la piega, oltre l'apertura dell'arteria pterygopalatina, o PPA.Una volta che il filamento è in posizione, fissarlo stringendo ulteriormente la cravatta di seta distale. Alla fine del periodo MCAO, ritrarre il filamento fino a quando la testa del filamento bianco è chiaramente visibile. Quindi allentare la cravatta CCA distale quanto basta per rimuovere la testa del filamento per la maggior parte della strada, fuori dal vaso.Quindi, rimuovere completamente la testa del filamento dal vaso. Successivamente, posizionare una clip microvascolare in posizione orizzontale, verso la biforcazione CCA e accanto alla cravatta distale. Quindi posizionare un'altra clip sotto la cravatta CCA prossimale, verso il chirurgo.Utilizzare con cura le forcelle Dumont 5 per rimuovere entrambe le cravatte di seta. E asciugare l'area usando cotton fioc sterili. Quindi aggiungere fibrinogeno e thrombin soluzioni sigillante uno e due, a una piastra di Petri sterile.Utilizzando micro forbici venose e tecnica di dissezione smussata, ottenere una sottile fetta ventrale di muscolo sternocleidomastoideo. Quindi, utilizzando le forcelle Dumont 5, prendi il cuscinetto tissutale e mescolalo uniformemente attraverso le soluzioni di sigillante Fibrinogen e Thrombin. Qui è importante assicurarsi che il cuscinetto tissutale sia abbastanza grande da coprire l'incisione CCA.E una volta miscelato tra le due soluzioni, deve essere immediatamente posizionato sopra l'incisione, per prevenire la sovra coagulazione e la scarsa adesione. Una volta miscelato tra le due soluzioni, rimuovere il cuscinetto tissutale all'incisione CCA. Posizionare il cuscinetto di tessuto piatto sull'incisione con media pressione e aprire le forcelle.Rimuovere rapidamente la clip microvascolare distale, tenendo il cuscinetto tissutale in posizione. Successivamente, alleviare lentamente la pressione dal cuscinetto tissutale, permettendo al sangue di fluire sotto l'area di incisione. Ora, rilasciare lentamente e delicatamente la pressione dalla clip microvascolare prossimale, quindi rimuovere completamente.La rimozione della clip superiore consente una piccola quantità di sangue per attivare il sigillante. Un rilascio costante della clip distale consente un graduale aumento della pressione nel sito di incisione, attivandosi ulteriormente e contribuendo a prevenire una riparazione fallita. Infine, una volta sigillato il vaso, suturare la ferita con suture dissolubili 6-0.In questo protocollo, l'occlusione dell'arteria cerebrale media, o MCAO, è stata eseguita su 24 topi maschi adulti. Evitare la legazione della Corte dei conti europea e l'aggiunta di analgesia ha mostrato una tendenza alla riduzione della perdita di peso a 48 ore dopo l'MCAO. Cinque minuti dopo la rimozione del filamento, il flusso sanguigno cerebrale regionale è aumentato significativamente nella regione cerebrale dell'MCA.La perfusione è stata mantenuta fino alla riparazione della nave, con un aumento della perfusione nel territorio MCA, dopo la riparazione della nave CCA. Ciò suggerisce che la riparazione della CCA permise una maggiore perfusione di sangue nel territorio ischemico, rispetto alla dipendenza dal solo cerchio di Willis. Una risonanza magnetica ponderata T2 è stata utilizzata per determinare le scansioni LV e DTI totali per determinare il LV di base a 48 ore dopo MCAO.Non c'era alcuna differenza significativa tra questi due gruppi. È interessante notare che una variabilità per l'LV totale e core è stata significativamente ridotta nel gruppo di riparazione CCA. La nostra analisi ha indicato che sarebbe stato necessario un minor numero di animali per gruppo di trattamento per dimostrare una riduzione del 30% dell'LV, a seguito dell'MCAO, utilizzando la riparazione CCA, rispetto alla tipica procedura legata CCA.Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di assicurarsi che la confezione tissutale sia di dimensioni sufficienti per coprire l'incisione CCA. Inoltre, la velocità è importante, per evitare che il sigillante sovracocinazione, prima di posizionare il pad sul CCA.

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