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DOI: 10.3791/58192-v
Ivanna Karina Olivares-Marin1, Juan Carlos González-Hernández2, Carlos Regalado-Gonzalez1, Luis Alberto Madrigal-Perez3
1Department of Chemistry,Universidad Autónoma de Querétaro, 2Department of Biochemical Engineering,Instituto Tecnológico de Morelia, 3Department of Biochemical Engineering,Instituto Tecnológico Superior de Ciudad Hidalgo
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Qui presentiamo un protocollo per stimare il metabolismo respiratorio e fermentativo inserendo la crescita esponenziale di Saccharomyces cerevisiae per l'equazione di crescita esponenziale. Calcolo dei parametri cinetici permette per lo screening delle influenze di sostanze/composti sulla fermentazione o respirazione mitocondriale.
Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo biotecnologico e biomedico come quali sono le basi molecolari dietro gli effetti di Warburg e Crabtree. Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente lo studio ad alta produttività degli effetti di alcune sostanze nel metabolismo respiratorio e fermentativo. Inizia inoculando un tubo conico da 15 millilitri contenente tre millilitri di estratto di peptone destrosio fresco e sterile al 2%, o brodo YPD, con 250 microlitri di cellule di lievito S.cerevisiae conservate nel glicerolo a -20 gradi Celsius.
Incubare il lievito durante la notte in uno shaker orbitale a 30 gradi Celsius e 200 giri/min. per striature su una piastra di Petri piena di agar da 60 millilitri, riempita di agar 2%YPD la mattina successiva. Coltura il piatto a 30 gradi Celsius fino a quando non si osservano colonie isolate.
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