Name: Formato di Acinus ghiandola Hypopharyngeal misurazione in lavoratori ape del miele (mellifera di Apis) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 11 s
Description: Impara a misurare le ghiandole ipofaringee delle api operaie nutrici con colorazione Giemsa e analisi d'immagine. Questo metodo rivela l'impatto della dieta sulla salute delle colonie di Apis mellifera.

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Questo lavoro è stato supportato da fondi interni dal USDA-ARS (numero di progetto: 2022-21000-017-00-D). L'ARS/USDA è un datore di lavoro pari opportunità e il provider.

1. di dissezione e la macchiatura le ghiandole ipofaringee da infermiera lavoratori
<ol><li>Fare un piatto di dissezione di cera per fusione cera ambiente fresco in un piccolo (60 mm x 15 mm) o un bicchiere di grandi dimensioni (100 mm x 15 mm) piastra di Petri. Raffreddare la cera completamente prima di utilizzare la piastra per le dissezioni.</li>
	<li>Per ogni ape da elaborare, preparare 20 µ l di un 01:20 Giemsa soluzione di lavoro (01:20 v/v di preparati di Giemsa in tampone fosfato salino (PBS: 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mm Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4)). Attenzione: La colorazione di Giemsa contiene metanolo ed è infiammabile. È tossico se ingerito, inalato, o se viene a contatto con la pelle. Deve essere smaltito secondo le esigenze dell'ente locale. Nota: Assicurarsi sempre una soluzione fresca di lavoro solo per il batch corrente di campioni, perché la macchia di Giemsa degrada rapidamente una volta che esso viene diluito. Eliminare la macchia diluita se si sviluppa un precipitato.</li>
	<li>Pipettare 20 µ l di Giemsa nei pozzetti dei vetrini da microscopio e soluzione salina di 50 – 100 µ l nella diapositiva adiacente al pozzo.</li>
	<li>Staccare la testa da un'ape, usando le forbici di micro-primavera di 10 mm e incorporare la piastra di dissezione di cera utilizzando pinze e una penna di cera-intaglio lato anteriore testa fino. Fissare la testa nella piastra della cera per maggiore stabilità con l'inserimento di perni in uno in bocca e gli occhi.</li>
	<li>Con una lama di rasoio frangibile affilata fissata in una morsa di pin, fare un piccolo (~ 2 – 3 mm) incisione tra gli occhi e mandibole su ciascun lato della mascherina frontale. Delicatamente eseguire le micro forbici sotto la piastra anteriore e tagliare il nervo antennale che corre tra le antenne e il cervello.</li>
	<li>Utilizzando una pinzetta, afferrare la piastra di faccia per bocca, flip up e aggiungilo alla piastra di cera con pinze a punta fine e un pin. Se necessario, rimuovere il frontalino completamente.</li>
	<li>Pipettare 20 µ l PBS sul taglio aprire la sezione della testa. Nota: Le ghiandole possono galleggiare fino a questo punto o uno deve cercare per loro. Le ghiandole apparire come un filo di perle e si trovano in cima al cervello se intatto.</li>
	<li>Usare il forcipe punto super multa per rimuovere delicatamente una delle ghiandole ipofaringee (la ghiandola può rompere, che richiedono di essere rimosso in segmenti) e trasferire immediatamente la ghiandola per la colorazione di Giemsa della diapositiva di microscopia.</li>
	<li>Consentire la ghiandola Incubare nella soluzione Giemsa per 5 min e quindi utilizzare pinze per trasferire la ghiandola al pool di soluzione fisiologica nella stessa diapositiva. Se necessario, tagliare la ghiandola in piccoli pezzi con le forbici micro. Nota: Ciò contribuisce a rendere le ghiandole si trovano su un piano più piatto, rendendo così più facile per ottenere immagini chiare dei acini della ghiandola.</li>
</ol>2. misurazione hypopharyngeal Acini della ghiandola
<ol><li>Accendere il microscopio e aprire il programma di misurazione. Accendere la sorgente di luce per il microscopio se non è già su. Impostare l'ingrandimento del microscopio a 10x.</li>
	<li>Trovare le ghiandole e concentrarsi l'immagine ingrandita nell'oculare, senza il computer. Aumentare l'ingrandimento a 60 – 80 X e mettere a fuoco l'immagine nell'oculare.</li>
	<li>Sotto la scheda "Acquire", regolare e le ghiandole di concentrarsi sull'immagine dal vivo sul computer.</li>
	<li>Digitare immagine esempio di nome descrizione nella casella 'Nome immagine' e clicca 'Acquisire immagine' per prendere un'immagine delle ghiandole per ulteriori misure.</li>
	<li>Selezionare la scheda 'Analisi' selezionare la 'zona tool' (evidenziato in Figura supplementare 1A) e deseleziona 'valore' sotto 'Visualizza etichette', che sarà anche deselezionare 'unità'. Impostare tutte le altre impostazioni predefinite (Supplemental Figura 1A). Nota: Il software calibra automaticamente le misure di zona secondo il livello di ingrandimento affinché l'area ottenuta da un ingrandimento minore è lo stesso di quello ottenuto da un ingrandimento superiore.</li>
	<li>Misurare ogni acinus continuamente facendo clic o continuamente tenendo premuto il pulsante sinistro del mouse mentre si traccia il perimetro di acinus attentamente possibile. Misurare almeno 10 acini per ape. Nota: Più può essere necessaria a seconda dell'esperimento (veda la discussione). Si possono richiedere più immagini/sezioni della ghiandola per trovare abbastanza chiari, orientati correttamente i acini per misura.</li>
	<li>Una volta che tutti gli acini da una singola immagine sono stati misurati, selezionare "Crea Report". Accertarsi che le opzioni sono selezionate come mostrato in Figura supplementare 1B e fare clic su 'Export'.</li>
	<li>Salvare il report come desiderato. Se un file è già stato creato per il set di campioni e vengono aggiunti ulteriori misurazioni, assicurarsi che il file di report non è aperto in modo che i nuovi dati vengono aggiunti al file esistente.</li>
	<li>Una volta terminato, accendere il microscopio fotocamera e la sorgente di luce. Strofinare il liquido e ghiandole fuori le diapositive di microscopia e smaltire in modo sicuro qualsiasi materiale utilizzato. Sciacquare i vetrini con acqua distillata e pulire con etanolo (70% v/v in acqua) per il riutilizzo.</li>
</ol>

<ol><li>Kulhanek, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/00218839.2017.1344496">A national survey of managed honey bee 2015-2016 annual colony losses in the USA.</a> Journal of Apicultural Research. 56 (4), 328-340 (2017).</li>
<li>Jacques, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pan-European+epidemiological+study+reveals+honey+bee+colony+survival+depends+on+beekeeper+education+and+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A pan-European epidemiological study reveals honey bee colony survival depends on beekeeper education and disease control.</a> PLoS One. 12 (3), e0172591(2017).</li>
<li>Zee, R. vd, et al. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.3896/IBRA.1.53.1.02">Results of international standardised beekeeper surveys of colony losses for winter 2012-2013: analysis of winter loss rates and mixed effects modelling of risk factors for winter loss.</a> Journal of Apicultural Research. 53 (1), 19-34 (2014).</li>
<li>Decourtye, A., Mader, E., Desneux, N. <a target="_blank" href="https://www.apidologie.org/articles/apido/abs/2010/03/m09128/m09128.html">Landscape enhancement of floral resources for honey bees in agro-ecosystems.</a> Apidologie. 41 (3), 264-277 (2010).</li>
<li>Vaudo, A. D., Tooker, J. F., Grozinger, C. M., Patch, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bee+nutrition+and+floral+resource+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Bee nutrition and floral resource restoration.</a> Current Opinion in Insect Science. 10, 133-141 (2015).</li>
<li>Snodgrass, R. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSnodgrass%2C+RE+%22Anatomy+of+the+Honey+Bee%22">Anatomy of the Honey Bee</a>. , Comstock Pub. Associates. (1984).</li>
<li>Winston, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWinston%2C+ML+%22The+Biology+of+the+Honey+Bee%22">The Biology of the Honey Bee</a>. , Harvard University Press. (1987).</li>
<li>Johnson, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Division+of+labor+in+honeybees%3A+form%2C+function%2C+and+proximate+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology+and+Sociobiology%22%5BJournal%5D)">Division of labor in honeybees: form, function, and proximate mechanisms.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 64 (3), 305-316 (2010).</li>
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<li>Pernal, S. F., Currie, R. W. <a target="_blank" href="https://www.apidologie.org/articles/apido/abs/2000/03/m0305/m0305.html">Pollen quality of fresh and 1-year-old single pollen diets for worker honey bees (Apis mellifera L).</a> Apidologie. 31 (3), 387-409 (2000).</li>
<li>DeGrandi-Hoffman, G., Chen, Y., Huang, E., Huang, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+diet+on+protein+concentration%2C+hypopharyngeal+gland+development+and+virus+load+in+worker+honey+bees+%28Apis+mellifera+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">The effect of diet on protein concentration, hypopharyngeal gland development and virus load in worker honey bees (Apis mellifera L).</a> Journal of Insect Physiology. 56 (9), 1184-1191 (2010).</li>
<li>Corby-Harris, V., Snyder, L., Meador, C., Ayotte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bee+%28Apis+mellifera%29+nurses+do+not+consume+pollens+based+on+their+nutritional+quality%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Honey bee (Apis mellifera) nurses do not consume pollens based on their nutritional quality.</a> PLoS One. 13 (1), e0191050(2018).</li>
<li>Corby-Harris, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional%2C+translational%2C+and+physiological+signatures+of+undernourished+honey+bees+%28Apis+mellifera%29+suggest+a+role+for+hormonal+factors+in+hypopharyngeal+gland+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transcriptional, translational, and physiological signatures of undernourished honey bees (Apis mellifera) suggest a role for hormonal factors in hypopharyngeal gland degradation.</a> Journal of Insect Physiology. 85, 65-75 (2016).</li>
<li>Corby-Harris, V., Jones, B. M., Walton, A., Schwan, M. R., Anderson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+markers+of+sub-optimal+nutrition+in+developing+Apis+mellifera+nurse+workers%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptional markers of sub-optimal nutrition in developing Apis mellifera nurse workers.</a> BMC Genomics. 15, 134(2014).</li>
<li>Sagili, R. R., Pankiw, T., Zhu-Salzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+soybean+trypsin+inhibitor+on+hypopharyngeal+gland+protein+content%2C+total+midgut+protease+activity+and+survival+of+the+honey+bee+%28Apis+mellifera+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of soybean trypsin inhibitor on hypopharyngeal gland protein content, total midgut protease activity and survival of the honey bee (Apis mellifera L).</a> Journal of Insect Physiology. 51 (9), 953-957 (2005).</li>
<li>Sagili, R. R., Pankiw, T. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00265-007-0379-1">Effects of protein-constrained brood food on honey bee (Apis mellifera L.) pollen foraging and colony growth.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 61 (9), 1471-1478 (2007).</li>
<li>Hrassnigg, N., Crailsheim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+hypopharyngeal+gland+development+to+the+brood+status+of+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Adaptation of hypopharyngeal gland development to the brood status of honeybee (Apis mellifera L.) colonies.</a> Journal of Insect Physiology. 44 (10), 929-939 (1998).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature Methods. 9, 671(2012).</li>
<li>Jack, C. J., Uppala, S. S., Lucas, H. M., Sagili, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+pollen+dilution+on+infection+of+Nosema+ceranae+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of pollen dilution on infection of Nosema ceranae in honey bees.</a> Journal of Insect Physiology. 87, 12-19 (2016).</li>
<li>Crailsheim, K. <a target="_blank" href="https://hal.archives-ouvertes.fr/hal-00890873/document">The protein balance of the honey bee worker.</a> Apidologie. 21, 417-429 (1990).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Hypopharyngeal ghiandola dimensione è sensibile alla quantità di proteina e polline nella dieta ed è un indicatore critico di nutrimento in giovani api adulte. Qui, dimostriamo di sezionare e misurare questo tessuto in modo riproducibile e poco costoso. Questi tessuti possono essere difficili da sezionare, ma con la pratica, si possono ottenere sempre più pulitore dissezioni con il tessuto relativamente intatto. Il vantaggio principale del metodo presentato qui è che il tessuto è macchiato, che consente al ricercatore di...

API del miele sono essenziali per l'agricoltura perché impollinano una varietà di colture che sono consumati dagli esseri umani e animali. Molta attenzione è stato pagato al declino delle popolazioni di API del miele come Colonia perdite al passaggio del mouse intorno 30-40% ogni anno negli Stati Uniti d'America1 e 10 – 15% in Europa2,3. Molteplici fattori, tra cui accesso limitato all'alta qualità del foraggio, probabile atto insieme a compromettere la salute delle API di miele. Monocoltura, siccità, pratiche di apicoltura insostenibile e altri fattori diminuiscono la diversità e la quantità di Pollini naturale disponibile a colonie4,5. Poiché le API il miele quasi tutte le loro proteine alimentari e lipidi derivano da polline, accesso ridotto al polline può limitare severamente la salute individuale e Colonia.
Le ghiandole ipofaringee sono secretive strutture situate nella testa dell'ape tra gli occhi e il cervello6. In circostanze normali, la traiettoria evolutiva e funzionale delle ghiandole specchio che l'ape si trovano in. A circa 5 – 10 giorni di età, l'ape esegue comportamenti di professione d'infermiera nell'alveare. In questo stesso momento, le ghiandole ipofaringee raggiungono loro dimensioni massime e la capacità secretiva, producendo la frazione di proteina principale dell'alimento di covata o gelatina alimentati per lo sviluppo di larve e altri adulti, come la regina. In questa dimensione di picco le ghiandole assomigliare ad un grappolo d'uva dove ogni acino è una struttura di lobo discreti conosciuta come il acinus (plurale: acini). Come l'ape operaia età e assume diversi compiti nell'alveare, le ghiandole ipofaringee strizzacervelli e assumono funzioni diverse, come abbattere gli zuccheri in nettare7,8. Le ghiandole ipofaringee pertanto sono correlate con l'età l'ape e il loro compito di età-collegato.
Dimensione della ghiandola infermiera hypopharyngeal è sensibile alla quantità e qualità delle proteine nella loro dieta9,10,11. Quando le API infermiere sono ben nutrite, le loro ghiandole sono grandi. Considerando che, le ghiandole sono piccole quando l'ape è privata di polline, specialmente nella prima settimana di sviluppo adulto. Al fine di determinare lo stato nutrizionale di un ape di infermiere, i ricercatori in genere misurano le ghiandole ipofaringee, sia misurando direttamente la ghiandola acinus dimensione11,12,13,14 o proteina contenuto15,16 o misurando la proteina contenuto11 o peso fresco17 dell'intera testa in cui si trovano. Ogni metodo ha i suoi pro e contro. Noi preferiamo la risoluzione ottenuta dalla misurazione dei acini della ghiandola, anche se questo metodo può essere impegnativo in due modi principali. La prima sfida è correttamente identificare e sezionare la ghiandola. Il secondo è l'ottenimento di una misura accurata di ogni acinus. Microscopio ottico per dissezione, le ghiandole appaiono chiaro o lattiginoso bianco e i bordi degli acini possono essere difficili da definire. Avere strumenti per meglio definire il bordo degli acini e per aumentare la probabilità di ottenere misurazioni accurate della ghiandola è vantaggioso per chi studia miele ape nutrizione.
Qui, indichiamo i ricercatori interessati come sezionare, macchia, immagine e misurare le ghiandole ipofaringee affinché misure accurate delle dimensioni di acinus possono essere raggiunto. Il metodo che descriviamo offre ai ricercatori un metodo semplice, accurato e replicabile per realizzare misurazioni multiple di ghiandola in un relativamente breve periodo di tempo una volta che lo sperimentatore è sufficientemente praticato. Uno potrebbe misurare con fiducia le ghiandole di quasi 10 individui in poco più di un'ora. Offriamo dettagli sul metodo e materiali necessari per ottenere queste misurazioni. La corretta dissezione e colorazione delle ghiandole sono gli aspetti più importanti dei metodi descritti di seguito. Anche se abbiamo catturare le immagini ingrandite e misurare gli acini con software commerciale, i metodi che vi presentiamo possono essere facilmente adattati per altre piattaforme18.

<table><tbody><tr><td>Cera per fissaggi freddi</td><td>Grobet USA</td><td>21.450</td><td></td></tr><tr><td>Capsula di Petri in vetro, piccola</td><td>VWR</td><td>89000-310</td><td></td></tr><tr><td>Capsula di Petri in vetro, grande</td><td>VWR</td><td>89000-314</td><td></td></tr><tr><td>Super Max Wax Pen</td><td>Eurotool</td><td>PEN-520.00</td><td></td></tr><tr><td>Lamette da barba frangibili</td><td>Microscopia elettronica Scienze</td><td>72004</td><td></td></tr><tr><td>morsa a spillo</td><td>BioQuip</td><td>4845</td><td></td></tr><tr><td>2A-SA pinza a punta piatta/arrotondata</td><td>Rubis/BioQuip</td><td>4522</td><td></td></tr><tr><td>Pinza a punta fine</td><td>Rubis/BioQuip</td><td>4523</td><td></td></tr><tr><td>5A-SA pinza a punta super fine</td><td>Rubis/BioQuip</td><td>4525</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a micro molla da 10 mm</td><td>BioQuip</td><td>4715</td><td></td></tr><tr><td>Forbici Vannas a micro molla da 3 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-5610</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini a depressione, cavità singola</td><td>GSC International</td><td>4-13057-DZ-12</td><td></td></tr><tr><td>compresse PBS</td><td>VWR</td><td>97062-730</td><td></td></tr><tr><td>Colorazione Giemsa, soluzione modificata</td><td>Sigma</td><td>Aldrich 32884</td><td></td></tr><tr><td>Perni per insetti</td><td>ENTO SPHINX S.R.O.</td><td>02.02</td><td></td></tr><tr><td>Leica Applications Suite Software di misura</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>È possibile utilizzare qualsiasi software di misura, incluso il software gratuito</td></tr></tbody></table>

formato di acinus ghiandola hypopharyngeal misurazione in lavoratori ape del miele (mellifera di apis)

Measuring Hypopharyngeal Gland Acinus Size in Honey Bee (Apis mellifera) Workers

Le ghiandole ipofaringee infermiera producono la frazione proteica del lavoratore e pappa reale che viene alimentata per lo sviluppo di larve e regine. Queste ghiandole accoppiate che si trovano nella testa dell'ape sono altamente sensibili alla quantità e qualità del polline e polline sostituisce che consuma l'ape infermiera. Le ghiandole diventano più piccole quando gli infermieri sono alimentati le diete carenti e sono grandi quando sono alimentati le diete complete. Perché infermiere hypopharyngeal ghiandola dimensione è un indicatore robusto di nutrizione di infermiera, è essenziale che coloro che studiano miele ape nutrizione sanno come misurare queste ghiandole. Qui, forniamo metodi dettagliati per dissezione, colorazione, imaging e ghiandole ipofaringee delle API di infermiere di misura. Vi presentiamo i confronti del tessuto macchiato e non macchia e dati che sono stati usati per studiare l'impatto di polline sulle dimensioni della ghiandola. Questo metodo è stato utilizzato per testare come dieta impatti dimensioni ghiandole ipofaringee ma ha ulteriore uso per comprendere il ruolo di queste ghiandole nella salute di alveare.

Ghiandole ipofaringee sono stati sezionati da infermiera lavoratori e visualizzati con e senza macchia a 60 – 80 ingrandimenti (Figura 1). Nel tessuto senza macchia, è difficile trovare adeguato contrasto completamente a fuoco e definire i bordi degli acini. Nel tessuto macchiato, i bordi degli acini sono nitide a causa del contrasto migliorato tra il tessuto macchiato e lo sfondo bianco.
<img alt="...

Dimensione di acinus ghiandole ipofaringee è una misura robusta di nutrizione di ape miele infermiera. Qui, forniamo un protocollo dettagliato per dissezione, colorazione, imaging e misurazione dei acini infermiera ape hypopharyngeal ghiandola.

Formato di Acinus ghiandola Hypopharyngeal misurazione in lavoratori ape del miele (mellifera di Apis)

The nurse hypopharyngeal glands produce the protein fraction of the worker and royal jelly that is fed to developing larvae and queens. These paired ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della nutrizione delle api mel honey, sul legame tra cattiva alimentazione e crescita e sviluppo della ghiandola ipofaringea. Il principale vantaggio di questa tecnica è che si può usare per macchiare, visualizzare e misurare facilmente le ghiandole ipofaringee delle ape. Generalmente, gli individui nuovi a questo metodo avranno difficoltà perché le ghiandole ipofaringee possono essere difficili da individuare e sezionare senza guida visiva.Prima di iniziare la procedura, versare la cera di impostazione fredda fusa in una piastra di Petri di vetro. Aggiungere 20 microlitri di macchia di Giemsa appena preparata in un unico pozzo e da 50 a 100 microlitri di soluzione salina in un pozzo adiacente di uno scivolo al microscopio, per ape operaia da elaborare. Quando la cera si è impostata, utilizzare forbici a micro spring da 10 millimetri per rimuovere la testa dalla prima ape e utilizzare le forcep, un microscopio sezionato e una penna da intaglio di cera per incorporare la testa frontale nella piastra di dissezione della cera.Inserire perni negli occhi e nella bocca per fissare la testa al piatto e utilizzare una lama a

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Dimostriamo come implementare un metodo di farmacologia comportamentale in un paradigma di condizionamento appetitivo olfattivo nelle api (Apis mellifera) mediante l'applicazione sistemica di farmaci. Questo metodo permette di indagine del processo di apprendimento dei meccanismi di base e formazione della memoria in modo semplice e affidabile.

Farmacologia Comportamentale nel condizionamento classico della risposta estensione proboscide in api ( Apis mellifera)

In questo protocollo si mostra come condizione sfruttata api a stimoli tattili e introdurre un 2D tecnica del motion capture per analizzare la cinematica di fine scala modello di campionamento antenne.

Condizionata tattile e Analisi del Movimento di strategie di campionamento antennale di api mellifere (<em&gt; Apis mellifera</em&gt; L.)

In questo protocollo, si descrive due strategie che sopprimono contemporaneamente due geni (doppia knockdown gene) di api mellifere. Poi ci presentiamo come usare la risposta estensione proboscide (PER) test per studiare l'effetto di doppio knockdown gene sul miele d'api percezione gustativa.

RNAi mediato doppia Gene atterramento e gustative Percezione misura di api mellifere (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

Il protocollo di condizionamento Proboscis Extension Response (PER), sviluppato per l'ape mellifera (Apis mellifera), fornisce un mezzo ecologicamente rilevante e facilmente quantificabile per studiare diversi meccanismi di apprendimento in molte specie di insetti.

Una proboscide risposta estensione Protocollo per Indagare plasticità comportamentale in Insetti: Applicazione di base, biomedica e ricerca agricola

Viene descritto un nuovo test comportamentale per studiare le risposte gustative a breve termine dell'apparato boccale dei bombi che si muovono liberamente (Bombus terrestris) nei confronti di nutrienti e tossine in soluzione.

A Novel comportamentale test per Indagare Risposte gustativa individuale, liberamente rigiro bombi (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Qui si descrive il nostro protocollo dettagliato per la preparazione di colonie di api singola coorte - uno strumento utile per analizzare la fisiologia dei lavoratori di ruolo associati. Descriviamo anche protocolli dettagliati per il trattamento di lavoratori con ormone giovanile e ecdysone per valutare il coinvolgimento di questi ormoni nella regolazione del comportamento dei lavoratori e / o la fisiologia.

Preparazione di singole colonie-coorte e trattamento ormonale di lavoratore api per analizzare Fisiologia associati con il ruolo e / o sistema endocrino

Questo manoscritto descrive diversi protocolli per la somministrazione di agenti farmacologici alle api, tra cui semplici metodi non invasivi per le api in volo libero, così come le varianti più invasive che consentono preciso trattamento localizzato delle api trattenuti.

Manipolazione neurofarmacologico di sobrio e-volo libero api mellifere,<em&gt; Apis mellifera</em

Qui vi presentiamo   un metodo per alimentare antiparassitario alimenti contaminati sia un individuo ape e una colonia alveare. La procedura valuta l'effetto dei pesticidi sulle singole api mellifere in vivo l'alimentazione della dieta larvale di base e anche la condizione naturale della colonia dell'alveare.

Valutare l&#39;effetto delle sostanze chimiche ambientali su Honey Bee sviluppo dall&#39;individuo alla colonia Livello

Le dosi subletali di pesticidi possono influire sulle colonie in modi che sono difficili da rilevare utilizzando solo metodi periodici o visual. Metodi per misurare la massa totale dell'ape adulta, nidiata e le risorse alimentari di pesatura alveari e parti di alveare, fotografare fotogrammi e l'installazione di sensori, sono fornite. Analisi dei dati si rivolge anche.

Monitoraggio effetti Colonia-livello di esposizione dell'antiparassitario subletali sulle API di miele

Qui descriviamo due protocolli: in primo luogo per propagare, estrarre, purificare e quantificare grandi quantità di particelle virali non avvolte dalle api da miele, incluso un metodo per rimuovere le pupe delle api da miele e in secondo luogo per testare gli effetti dell'infezione virale utilizzando un biotest in gabbia altamente ripetibile e ad alto rendimento.

Preparazione dell'inoculo arricchito da virus per l'infezione orale delle api mellifere (Apis mellifera)

I metodi immunoistochimici sono utili nella ricerca sulle api per rilevare e valutare il livello di apoptosi e necrosi nell'intestino medio e nelle ghiandole ipofaringee delle api adulte.

Nozioni di base sull'istologia e rilevamento della morte cellulare nel tessuto delle api

Impara a misurare le ghiandole ipofaringee delle api operaie nutrici con colorazione Giemsa e analisi d'immagine. Questo metodo rivela l'impatto della dieta sulla salute delle colonie di Apis mellifera.

Formato di Acinus ghiandola Hypopharyngeal misurazione in lavoratori ape del miele (mellifera di Apis)

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