Il taglio e il metodo di galleggiamento per tessuto paraffina-incastonato per il sezionamento

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo morfologico, come il sezionamento della paraffina. Il vantaggio principale di questa tecnica è che culmina il taglio e la procedura di piegatura ed evita il processo di trasferimento richiesto dal metodo convenzionale. Per iniziare, raccogli tutte le parti prefabbricate in una cappa aspirante.

Usa il cloroformio per combinare le sette tavole acriliche, come mostrato qui. Il prodotto finale sarà una vasca dotata di un canale di sezione e di un bagno d'acqua. Installare l'elemento riscaldante elettrico tubolare attraverso il foro nel pannello acrilico numero due.

Usando un trapano elettrico, fai un piccolo foro nella tavola acrilica numero sette e installa un termostato digitale sul serbatoio, assicurandoti che sia almeno un centimetro sotto il livello della superficie dell'acqua prevista, che è indicato dal punto nero sul serbatoio. Regolare la tensione in modo che sia inferiore a 24 volt prima di accendere l'apparecchiatura. Rimuovere la sezione vassoio dei rifiuti dal microtomo.

Quindi, utilizzare sigillante siliconico neutro per collegare il canale delle sezioni al portalama del microtomo, assicurandosi di non far entrare alcun sigillante sopra la parte superiore della lama. Lasciare asciugare il set durante la notte per dare al cloroformio e al sigillante siliconico neutro il tempo di solidificarsi. Il giorno successivo, installare la lama nel portalama.

Aggiungere acqua al bagnomaria, assicurandosi che la superficie dell'acqua tocchi appena la parte superiore della lama. Dopo aver eseguito il sezionamento convenzionale della paraffina, accendere l'apparecchiatura per iniziare un migliore sezionamento della paraffina. Utilizzare l'interruttore di rilevamento della temperatura per aprire il riscaldatore.

Imposta la temperatura desiderata tra 38 gradi Celsius e 40 gradi Celsius per un'ora per riscaldare l'acqua. Usa un coltello per modificare il blocco di paraffina acquisito dall'incorporazione della paraffina. Quindi, posizionare il blocco sul morsetto della cassetta del microtomo e bloccarlo.

Tagliare le sezioni più spesse per avvicinarsi rapidamente al campione. Regolare a uno spessore di sezione adatto ai campioni. Ruotando il volantino si caricheranno automaticamente le sezioni in sezioni canale e bagno.

Quindi, sezionare il campione con una corsa di taglio lenta e uniforme. Guidare le sezioni nella camera del bagno in modo che galleggino in linea. Se la sezione della testa aderisce alla parete della camera, utilizzare una guida a spazzola per mantenerla flottante.

Dopo che le sezioni si sono completamente aperte nel bagnomaria, usa una pinzetta per separarne diverse, quindi raccoglile su un vetrino da microscopio. Trasferire le diapositive in un forno impostato a 42 gradi Celsius per asciugarle durante la notte. I vetrini possono quindi essere conservati a temperatura ambiente a tempo indeterminato fino al momento dell'analisi.

Quando si è pronti per l'analisi, utilizzare la colorazione ematossilina-eosina per valutare le sezioni utilizzando il metodo migliorato. In questo studio, viene utilizzato un metodo migliorato per preparare sezioni di paraffina per il tessuto ippocampale di topo adulto, i reni di topo adulto, il cervello embrionale di topo e gli occhi di zebrafish. Come mostrato qui, il nuovo metodo evita la perdita di sezioni e aumenta la percentuale di sezioni intatte in ogni tipo di tessuto esaminato.

Quando si esegue il sezionamento di intere serie, si ritiene che questo metodo acceleri la velocità di sezionamento della paraffina in tutti i campioni testati. In altre parole, questo metodo fornisce una sezione di paraffina di qualità superiore in meno tempo rispetto al metodo convenzionale. Sezioni in serie della retina ottica del pesce zebra vengono quindi osservate mediante colorazione con ematossilina-eosina.

Si ritiene che le sezioni raccolte con il metodo migliorato abbiano una migliore integrità rispetto a quelle raccolte con il metodo convenzionale di sezionamento della paraffina. Sebbene non ci siano differenze significative nella qualità della maggior parte delle sezioni raccolte quando si confrontano questi due metodi, alcune sezioni raccolte con il metodo convenzionale si ritiene abbiano una qualità relativamente bassa. Non dimenticare che lavorare con il cloroformio può essere estremamente pericoloso e che durante l'esecuzione di questa procedura è necessario prendere sempre precauzioni come la cappa aspirante.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che aggiungere acqua con attenzione ed evitare il riempimento eccessivo.