Name: Valutare gli effetti Neuroprotective di Glycyrrhizae Radix et Rhizoma estrarre utilizzando un modello murino di occlusione transitoria dellarteria cerebrale media (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Scopri gli effetti neuroprotettivi di Glycyrrhizae Radix et Rhizoma in un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media. Questo metodo migliora la riproducibilità per la ricerca sull'ictus.

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Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state approvate dal comitato etico dell'Università nazionale di Pusan (numero di omologazione, PNU-2016-1087). Una panoramica grafica di questo studio è illustrata nella Figura 1.
1. preparazione e somministrazione di GRex
Nota: Il GR utilizzato in questo studio è stato acquistato da una società farmaceutica commerciale.
<ol><li>Mettere 200 g di GR in 2.000 mL di metanolo e incubare a temperatura ambiente (25 ° C) per 5 giorni.</li>
	<li>Filtrare la miscela utilizzando carta da filtro con spessore di 0,26 mm e porosità di 5 µm e quindi rimuovere il surnatante. Aggiungere 1.000 mL di metanolo al residuo GR e filtrare nuovamente.</li>
	<li>Combinare i due surnatanti, filtrare attraverso carta da filtro, concentrato sotto vuoto e quindi liofilizzare il residuo per produrre GRex.</li>
	<li>Sciogliere il GRex in dimetilsolfossido (DMSO), diluire con soluzione fisiologica 0,9% e filtrare attraverso un filtro per siringa da 0,45 µm. Quindi, regolare la concentrazione finale di DMSO per < 5%.</li>
	<li>Amministrare GRex (300 mg/kg di peso corporeo) 1 h dopo la riperfusione di MCAO via orale mediante sonda gastrica. Amministrare il DMSO diluito in soluzione fisiologica (10 mL/kg di peso corporeo) solo al gruppo normale e gruppi di controllo, rispettivamente. Nota: La concentrazione di GRex utilizzati in questo esperimento è stata determinata secondo la concentrazione che è stata attiva attraverso il nostro precedente studio8.</li>
</ol>2. Mouse modello di MCAO
<ol><li>Uso di topi C57BL/6 maschi di età compresa tra 6 settimane e pesatura g. 22-25 fornire tutti gli animali con libero accesso al cibo standard, acqua e casa loro in un ambiente con temperatura controllata (22 ± 1 ° C) e un ciclo luce/buio di 12 h.<ol>
<li>Dividere i topi in gruppi di sei topi ciascuno, che dovrebbero consistere di falsità-azionati normale, controllo e gruppi di trattamento GRex.</li>
		<li>Eseguire un intervento chirurgico MCAO (modifica del metodo di Koizumi et al. 9) sul controllo e gruppi di trattamento GRex stereo-microscopio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Indurre l'anestesia per inalazione nei topi utilizzando 2% isoflurane in 70% N2O e 30% O2. L'anestesia è considerata sufficiente quando il mouse non risponde allo stimolo meccanico applicato alla sua coda. Mantenere la temperatura corporea dei topi a 36,5 ± 0,5 ° C, usando un corpo temperatura-tenuta coperta collegata ad un termometro.</li>
	<li>Rimuovere tutti i peli sul petto e collo dei topi da rasatura, seguita da uso di crema depilatoria, disinfezione il sito chirurgico della pelle con betadine scrub alternati con alcool per due volte e poi fare un'incisione di circa 2 cm lungo con chirurgica lama al centro del collo. Isolare accuratamente l'arteria carotide comune sinistra (LCCA), arteria carotide esterna e il ramo dell'arteria carotica interna dai tessuti connettivi circostanti.</li>
	<li>Legare l'arteria carotide esterna e l'arteria carotica comune con una sutura chirurgica (sutura seta 4-0, nodo mezzo collo) per bloccare temporaneamente il flusso sanguigno nell'arteria carotica interna durante il funzionamento.</li>
	<li>Inserire un suturare di nylon di silicio (8-0 monofilamento, 11 mm di lunghezza) attraverso l'arteria carotica interna all'origine del MCA di sinistra. Regolare lo spessore della parte di silicio del filamento ad una gamma di 0,10-0,12 mm.</li>
	<li>Misurare la riduzione del flusso sanguigno cerebrale relativo (rCBF) nel MCA usando un flussometro Doppler laser. MCAO verrà confermato quando il rCBF è mantenuto a < 20% dei valori di condizione di riposo durante l'intero periodo ischemico.</li>
	<li>Difficoltà il filamento inserito per il vaso sanguigno per 2 h, mentre l'arteria cerebrale è occlusa e quindi estrarre delicatamente il filamento per ripristinare il flusso di sangue per 22 h di riperfusione. Suturare la pelle con una cucitura a 5 posti (sutura seta 3-0, due metà intoppi nodo) e consentire ogni mouse a risvegliarsi dall'anestesia.</li>
	<li>Nel gruppo normale, eseguire un'operazione finta seguendo la stessa procedura sopra (fino a 2.4), con la seguente eccezione. Legare l'arteria carotica comune e suturare il muscolo incisa e la pelle.</li>
</ol>3. misurazione del Volume del tessuto cerebrale danneggiato
<ol><li>Dopo l'eutanasia dei topi per la misura del danno cerebrale con inalazione di CO2 , accise il mouse cervelli 24 h dopo l'inizio di MCAO utilizzando forbici chirurgiche iris e forcipe angolato.<ol>
<li>Dopo aver rimosso la testa utilizzando le forbici, fare un'incisione nella pelle della linea mediana della testa per capovolgere la pelle dal cranio.</li>
		<li>Rompere le ossa parietali con forcipe angolato, staccava dura materia allo stesso tempo e quindi isolare il cervello con attenzione dal cranio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Taglia il tessuto asportato in sezioni (spessore 1 mm) utilizzando una matrice di cervello del mouse e quindi macchiare le sezioni per 17 min in una soluzione di 2% 2, 3,5-triphenyltetrazolium cloruro (TTC).</li>
	<li>Fissare le sezioni in formalina al 10% per almeno 2 h e poi fotografarli utilizzando una fotocamera digitale. TTC sarà osservato a macchiare il tessuto vitale rosso mentre le zone necrotiche sarà bianche.</li>
	<li>Analizzare e quantificare l'area di infarto cerebrale di ogni sezione using ImageJ.</li>
</ol>4. ematossilina ed eosina (H & E) e Cresyl Violet macchiatura delle sezioni istologiche
<ol><li>Eutanasia i topi per esame istologico per inalazione di CO2 e irrorare loro via con 10 mL di tampone fosfato salino (PBS), seguita da 10 mL di paraformaldeide al 4% (PFA). Isolare il cervello utilizzando la stessa procedura come sopra (3.1) e immergete il cervello in 10 mL di saccarosio 30% durante la notte.</li>
	<li>Incorporare il tessuto cerebrale in temperatura di taglio ottimale (OCT) composto e affettarlo coronalmente in sezioni di 15-µm di spessore utilizzando un criostato. Montare i profili sulle lastre di vetro, seguite da colorazione con ematossilina ed eosina (H & E) o viola di cresyl.</li>
	<li>Immergere i vetrini in etanolo di 80% per 1 min seguita dalla macchiatura in soluzione di ematossilina per 5 min.<ol>
<li>Immergere i vetrini in alcool acido 1% due volte, immergere in soluzione satura di carbonato del litio per 30 s, lavare con acqua corrente per 30 s e poi il colorante di contrasto in soluzione di eosina per 30 s.</li>
		<li>Sciacquare i vetrini in acqua di rubinetto, ammollo in 95% ed etanolo assoluto consecutivamente.</li>
		<li>Asciugare i vetrini, eliminarle in xilene per almeno 10 min e poi montare i vetrini coprioggetti utilizzando il mezzo di montaggio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Posizionare i vetrini in una diapositiva più caldo per almeno 1 h, seguito da immersione in 50% etanolo diluito con cloroformio durante la notte.<ol>
<li>Colorare i vetrini con la viola di cresyl 0,1% per 10 min in forno secco a 40 ° C.</li>
		<li>Immergere in etanolo al 95% per 30 minuti, quindi disidratare in etanolo assoluto per 2 volte.</li>
		<li>Chiara 2 volte in xilene per 5 min, quindi montare con mezzo di montaggio dopo essiccazione all'aria.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilizzando un microscopio, osservare i cambiamenti istologici che si sono verificati dopo il trauma cranico indotto da MCAO.</li>
</ol>5. elaborazione statistica
<ol><li>Esprimere i risultati sperimentali come mezzi ± deviazione standard e determinare la significatività statistica fra i gruppi utilizzando un unidirezionale analisi della varianza (ANOVA), seguita dall'analisi di post hoc di Tukey utilizzando un software di analisi dati.</li>
	<li>Impostare la significatività statistica a un p-value < 0.05.</li>
</ol>

<ol><li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rising+stroke+incidence+in+young+adults%3A+more+epidemiological+evidence%2C+more+questions+to+be+answered%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li>
<li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Article+in+Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li>
<li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Neurorehabilitation%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li>
<li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+exploration+of+licorice+metabolome%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li>
<li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Separation+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li>
<li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Yakushigaku+Zasshi%22%5BJournal%5D)">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li>
<li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Food%22%5BJournal%5D)">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li>
<li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li>
<li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention%3A+role+of+multimodal+combination+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li>
<li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li>
<li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+and+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li>
<li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329(2016).</li>
<li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li>
<li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%3A+translational+potential+at+present+and+in+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li>
<li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+animal+models+of+stroke%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li>
<li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+%28licorice%29%3A+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li>
<li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacological+activities+of+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+Medica%22%5BJournal%5D)">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li>
<li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-inflammatory+activity+of+licorice%2C+a+widely+used+Chinese+herb%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Biology%22%5BJournal%5D)">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Con la crescente prevalenza di malattie metaboliche come l'ipertensione cronica, diabete ed iperlipidemia, che sono i principali fattori di rischio per l'ictus, il trattamento e la prevenzione del colpo sono diventati un'importante area di ricerca medica12, 13. i deficit nel linguaggio e movimento dopo un ictus sono fortemente correlati con il grado di danneggiamento del tessuto14 del cervello e provocare una scarsa qualità di vita per i p...

Danni al cervello causati da ischemia e riperfusione di flusso sanguigno cerebrale conduce alla morte delle cellule nervose e perdita di tessuto cerebrale. Questo tipo di danno cerebrale continua ad aumentare con la crescente prevalenza di malattie cerebrovascolari a causa della diffusione di malattie metaboliche come l'obesità, ipertensione e diabete mellito1,2. Il numero assoluto di pazienti anziani con ictus è aumentato drammaticamente in tutto il mondo, e il costo delle cure mediche per questi pazienti, che spesso sono lasciati con disabilità a lungo termine, è un grave onere della società. Di conseguenza, disabilità secondaria dovrebbe essere attenuato per quanto possibile per ridurre l'onere economico1,2.
Il modello di roditore più comunemente usato di infarto cerebrale è il modello di occlusione (MCAO) arteria cerebrale media (MCA), in cui il MCA è occluso con un filamento di sutura chirurgico silicio per bloccare il flusso sanguigno, causando ictus ischemico3, 4. utilizzando un filamento di come il materiale di occlusione permette il controllo del tempo di occlusione e permanenza manipolando la durata dell'inserzione del filamento intra-luminale.
Gli studi precedenti hanno mostrato che anche quando viene utilizzato lo stesso modello MCAO roditore, il volume totale di infarto cerebrale varia tra esperimenti, causando scarsa riproducibilità degli studi. Per migliorare la riproducibilità, abbiamo ottimizzato lo spessore della zecca filamento usato nell'esperimento. I risultati di uno studio preliminare del periodo ischemico cerebrale e infarto indotto ha mostrato che un periodo ischemico più di 60 min ammessi regione volumetrica del danneggiato tessuto cerebrale per essere osservato e misurato.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), noto anche come liquirizia, è costituito da radici secche e rizomi di Glycyrrhiza uralensis e g. glabra. È stato utilizzato nella medicina tradizionale cinese e coreana per vari scopi incluso come un additivo alimentare e medicinale5,6,7.
In un precedente studio8, pre-trattamento con l'Estratto del metanolo GR (GRex) ha mostrato un effetto anti-apoptotico in topi MCAO, tra cui la prevenzione significativa della diminuzione nell'espressione della proteina di linfoma della B-cellula 2 (Bcl-2) e Bcl extra-large (Bcl-xL). Questo studio è stato condotto per migliorare la riproducibilità del modello del topo MCAO convenzionale valutando la sua efficienza nel determinare se il trattamento post-infartuale con GRex efficacemente ridotto il volume di infarto nel danno cerebrale indotto da MCAO.

<table><tbody><tr><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td><td>Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td><td></td><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td></tr><tr><td>Carta da filtro qualitativa</td><td>Advantec</td><td>Carta da filtro n. 2</td><td>Carta da filtro qualitativa</td></tr><tr><td>Dimetil solfossido (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418-250ML</td><td>Dimetil solfossido (DMSO)</td></tr><tr><td>Filtro per siringa (0,45 &; m)</td><td>Sigma</td><td>CLS431220</td><td>Filtro per siringa (0,45 &; micro; m)</td></tr><tr><td>Stereomicroscopio Stereomicroscopio</td><td>Leica</td><td>M50</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Nikon</td><td>SMZ745</td><td>Stereomicroscopio</td></tr><tr><td>Laser Doppler</td><td>Moor Strumento</td><td>moorVMS-LDF</td><td>Laser Doppler</td></tr><tr><td>Anestesia Staffa da tavolo con N2O & Sistema di flussimetro O2</td><td>Harvard Appratus</td><td>34-1352</td><td>Staffa da tavolo per anestesia con N2O& Sistema di flussimetro O2 Sistema</td></tr> di <tr><td>monitoraggio omeoretermico</td><td>Harvard Appratus</td><td>55-7020</td><td>Sistema di monitoraggio omeoreo</td></tr><tr><td>Fotocamera digitale</td><td>Canon</td><td>Eos-M2</td><td>Fotocamera digitale</td></tr><tr><td>Criostato</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td><td>Microscopio Criostato</td></tr><tr><td></td><td>Carl Zeiss</td><td>Zeiss Axio</td><td></td></tr><tr><td>Analisi dei dati</td> del microscopio <td>Systat Software Inc.</td><td>SigmaPlot versione 12</td><td>Analisi dei</td></tr><tr><td>dati Analisi dei dati</td><td>NIH Image</td><td>ImageJ</td><td>Analisi dei dati</td></tr><tr><td>Dieta del topo</td><td>Doo Yeol Biotech Standard</td><td>roditore chow</td><td>Dieta del topo</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>JOONGWAE</td><td>A02104781</td><td>Isoflurano</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>TROIKAA ISOTROY</td><td>100</td><td>Isoflurano</td></tr><tr><td>Sutura di seta (4-0 Seta nera)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>SK47510</td><td>Sutura di seta (4-0 Seta nera)&nbsp;</td></tr><tr><td>Sutura di seta (3-0 Seta bianca)&nbsp;</td><td>Baekjae</td><td>57</td><td>Sutura di seta (3-0 Seta bianca)&nbsp;</td></tr><tr><td>Sutura in nylon (monofilamento 8-0)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>NB825</td><td>Sutura in nylon (monofilamento 8-0)&nbsp;</td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877-25G</td><td>2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC)</td></tr><tr><td>Formalina (soluzione di formaldeide)</td><td>JUNSEI</td><td>69360-1263 20KG</td><td>Formalina (soluzione di formaldeide)</td></tr><tr><td>Ematossilina (Harris Hematoxylin)</td><td>YD Diagnostics</td><td>EasyStain</td><td>Ematossilina (Harris Hematoxylin)</td></tr><tr><td>Eosina (1% Eosina Y soluzione)</td><td>MUTO PURE CHEMICALS</td><td>3200-2</td><td>eosina (soluzione di eosina y all'1%)</td></tr><tr><td>Cresil viola (acetato)</td><td>Sigma</td><td>C5042-10G</td><td>Cresil viola (acetato)</td></tr><tr><td>Paraformaldeide&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-1KG</td><td>Paraformaldeide&nbsp;</td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>JUNSEI</td><td>31365-0350 1KG</td><td>Saccarosio</td></tr><tr><td>Temperatura di taglio ottimale (OCT) composto</td><td>Scigen</td><td>4583</td><td>Temperatura di taglio ottimale (OCT)</td></tr><tr><td>composto Coltello da sezione</td><td>Fine Science Tools</td><td>10055-12</td><td>Coltello da sezionamento</td></tr><tr><td>#4 Forcipe</td><td>Fine Science Tools</td><td>11241-30</td><td>#4 Forcipe</td> #</tr><tr><td>5 Forcipe</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>#5 Forcipe</td></tr> <tr><td># 6 Forcipe</td><td>Fine Science Tools</td><td>11260-20</td> <td># 6 Forcipe</td></tr> <tr><td># 7 Fine Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td> <td># 7</td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche</td> Fine Forcep <td>Fine Science Tools</td><td>14001-12</td><td>Forbici chirurgiche</td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn Forbici Fine Science</td><td>Tools</td><td>14084-08</td><td>Extra Fine Bonn Forbici</td></tr><tr><td>Moria Pascheff-Wolff Spring Forbici</td><td>Fine Science Tools</td><td>15371-92</td><td>Moria Pascheff-Wolff Forbici a molla</td></tr><tr><td>Vessel Dilating Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>18153-11</td><td>Vessel Dilating Forcep</td></tr></tbody></table>

valutare gli effetti neuroprotective di glycyrrhizae radix et rhizoma estrarre utilizzando un modello murino di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

Ischemia seguita da riperfusione di flusso sanguigno cerebrale dopo un ictus conduce alla morte delle cellule nervose e perdita di tessuto cerebrale. Il modello animale più comunemente usato per lo studio di colpo è il modello di occlusione (MCAO) dell'arteria cerebrale media. Precedenti studi di ricerca sono riportati dimensioni differenti infarto anche quando la stessa specie animale sperimentale è stato usato in condizioni simili di MCAO. Di conseguenza, abbiamo sviluppato un metodo sperimentale migliore per affrontare questa discrepanza. Topi sono stati sottoposti a MCAO utilizzando un filamento di come il materiale di occlusione per simulare condizioni di colpo umano e lo spessore del filamento è stato ottimizzato per stabilire più volume di infarto riproducibile. Topi trattati con un metanolo Estratto di Glycyrrhizae Radix et Rizoma (GRex) dopo induzione di colpo ha mostrato un volume di infarto totale significativamente in diminuzione e aumento del numero di sopravvivere cellule riguardante il gruppo di controllo non trattato. Questo modificato protocollo sperimentale con successo e riproducibile ha dimostrato l'effetto benefico di GRex il colpo ischemico.

Nel gruppo normale di falsità-azionati, nessun infarto cerebrale si osserva mentre nel gruppo di controllo, si osserva una gamma piuttosto ampia di aree danneggiate. Nei topi GRex amministrato 300 mg/kg nel gruppo modello MCAO, una riduzione statisticamente significativa nella zona danneggiata è osservato (Figura 2).
I cambiamenti istologici sono studiati dalla macchiatura sezioni di cervello ischem...

In questo studio, modifichiamo un metodo sperimentale esistente per ottenere più risultati riproducibili, stabilendo un modello murino di occlusione (MCAO) dell'arteria cerebrale media. La somministrazione orale di Glycyrrhizae Radix et Estratto del metanolo di Rizoma (GR) (GRex), dopo induzione di colpo, diminuito significativamente il volume di infarto totale rispetto al gruppo di controllo non trattato.

Valutare gli effetti Neuroprotective di Glycyrrhizae Radix et Rhizoma estrarre utilizzando un modello murino di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nei campi di ricerca delle neuroscienze e della medicina orale tradizionale sugli screening per i composti naturali neuroprotettivi rilevanti per il Modello. Il principale vantaggio di questa tecnica è che la maggiore producibilità del volume dell'infezione è in conformità con la dose di temporizzazione ischemica. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto è tipico inserire un attrezzo molto sottile nell'arteria cerebellare originale e centrale utilizzando un microscopio sterile.A dimostrare la procedura sarà Se-Eun Lee, uno studente di scuola che studia nel mio laboratorio. Per preparare l'estratto di Glycyrrhizae Radix et Rhizome, o GRex, aggiungere prima 200 grammi di Glycyrrhizae Radix et Rhizome, o GR, a due litri di metanolo per un'incubazione di cinque giorni a temperatura ambiente. Al termine dell'incubazione, filtrare la soluzione attraverso carta filtrante spessa 0,26 millimetri con una dimensione dei pori di cinque micrometri.Aggiungere il residuo GR a un litro di metanolo fresco e filtrare nuovamente la soluzione. Unire i due filtrati e filtrarli attraverso un nuovo pezzo di carta da filtro.

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Dell'arteria cerebrale media (MCA) legatura è una tecnica per lo studio ischemia cerebrale focale in modelli animali. In questo metodo, l'arteria cerebrale media è esposta da craniotomia e legato da cauterizzazione. Questo metodo dà volumi infarto altamente riproducibili e un aumento post-operatorio tassi di sopravvivenza rispetto ad altri metodi disponibili.

L&#39;applicazione di permanente legatura dell&#39;arteria cerebrale media nel mouse

Fonte: Zheng, Y., et al. Modelli sperimentali per studiare la neuroprotezione del postcondizionamento acido contro l'ischemia cerebrale. J. Vis. Exp. (2017)Questo video mostra l'applicazione del postcondizionamento acido (APC) per valutare i suoi effetti neuroprotettivi contro il danno ischemico in un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO). Delinea le fasi coinvolte nella riperfusione nel modello MCAO e l'applicazione dell'APC durante la riperfusione per mitigare...

 Valutazione degli effetti neuroprotettivi del postcondizionamento acido in un modello murino di ischemia cerebrale

Fonte: Lee, S. E., et al. Valutazione degli effetti neuroprotettivi dell'estratto di Glycyrrhizae radix et rizoma utilizzando un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media transitoria. J. Vis. Exp. (2018)Questo video mostra la procedura per valutare l'effetto neuroprotettivo di un composto di prova in un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media. Il composto entra nel cervello, previene la morte neuronale e riduce il volume dell'infarto, confermando il suo effetto...

Valutazione degli effetti neuroprotettivi di un composto di prova in un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media

Questo protocollo descrive il precondizionamento ipossico ripetitivo, o brevi esposizioni all'ipossia sistemica che riducono i volumi di infarto e l'interruzione della barriera emato-encefalica a seguito di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media nei topi. Descrive inoltre la doppia quantificazione del volume dell'infarto e dell'interruzione della barriera emato-encefalica dopo l'ictus per valutare l'efficacia della protezione neurovascolare.

Quantificazione della Protezione Neurovascular seguito ripetitivo ipossico precondizionamento e transitoria occlusione dell&#39;arteria cerebrale media nei topi

Per comprendere la fisiopatologia di ictus, è importante utilizzare modelli affidabili. Questo documento descrive uno dei modelli di ictus più frequentemente utilizzati nei topi, chiamato il modello cerebrale media occlusione dell'arteria (MCAO) (anche chiamato il filamento intraluminale o modello di sutura) con riperfusione.

Approccio chirurgico per occlusione dell&#39;arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

l'occlusione chirurgica di un ramo distale dell'arteria cerebrale media (MCAO) è un modello di uso frequente nella ricerca ictus sperimentale. Questo manoscritto descrive la tecnica base di MCAO permanente, combinata con l'inserimento di una finestra cranica laterale, che offre la possibilità di longitudinale microscopia intravitale nei topi.

Laterale cronica cranica finestra Preparazione Attiva In Vivo Condizioni seguito distale Medio occlusione dell'arteria cerebrale nei topi

Descriviamo un modello murino di ictus indotto dall'occlusione dell'arteria cerebrale media utilizzando una sutura rivestita di silicone. Il protocollo può essere applicato per indurre un'occlusione permanente o un'ischemia temporanea, seguita da riperfusione.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

Qui, descriviamo un modello di topo di ischemia retinica mediante occlusione bilaterale transitoria comune dell'arteria carotide usando suture semplici e un morsetto. Questo modello può essere utile per comprendere i meccanismi patologici dell'ischemia retinica causati da anomalie cardiovascolari.

Un modello murino di lesione retinica ischemica indotta dall'occlusione dell'arteria carotide comune transiente

Questo protocollo dimostra un modello unico di ictus del topo con un infarto di medie dimensioni e un eccellente tasso di sopravvivenza. Questo modello consente ai ricercatori preclinici sull'ictus di estendere la durata dell'ischemia, utilizzare topi anziani e valutare gli esiti funzionali a lungo termine.

Un modello modificato di occlusione dell'arteria cerebrale media transcranica per studiare gli esiti dell'ictus nei topi anziani

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media distale (dMCAO) attraverso l'elettrocoagulazione transcranica in topi C57BL/6J e valutare il successivo comportamento neurologico e le caratteristiche istopatologiche.

Induzione di ictus ischemico acuto nei topi utilizzando la tecnica di occlusione dell'arteria media distale

Scopri gli effetti neuroprotettivi di Glycyrrhizae Radix et Rhizoma in un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media. Questo metodo migliora la riproducibilità per la ricerca sull'ictus.

Valutare gli effetti Neuroprotective di Glycyrrhizae Radix et Rhizoma estrarre utilizzando un modello murino di occlusione transitoria dellarteria cerebrale media (Video) | JoVE Journal

Valutare gli effetti Neuroprotective di Glycyrrhizae Radix et Rhizoma estrarre utilizzando un modello murino di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media

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