Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti
18 novembre 2018
Qui, presentiamo un protocollo per raccogliere campioni di sangue dalla vena succlavia del ratto.
Puntura venosa succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue nei ratti. Dopo l'anestesia generale, mettere i ratti in posizione supina e sterilizzare lo spazio infraclavicolare con il 75% di etanolo. Identificare la fossa sternale superiore prima della puntura.
Individuare il sito di puntura, caudale verso la regione esterna di un terzo della clavicola nello stesso lato. La direzione dell'ago era posizionata verso la fossa sternale superiore e doveva quasi essere parallela alla clavicola, appena posteriore ad essa. Dopo la raccolta del sangue, premere il sito di puntura per uno o due minuti, per interrompere il sanguinamento.
La raccolta del sangue con volume sufficiente è sempre necessaria negli esperimenti sugli animali. La raccolta del sangue dalla vena della coda dei ratti è popolare e meno stressante di alcuni metodi aggressivi come la raccolta del campione di plesso orbitale retrò. Tuttavia, questo metodo è limitato dal tasso di successo.
Qui, introduciamo il nostro metodo per la raccolta del sangue con il volume di sangue desiderato dalla vena succlavia. I nostri risultati mostrano che questo metodo è sicuro e pratico e potrebbe essere considerato nel caso in cui il prelievo di sangue dalla vena della coda non sia riuscito. Per iniziare, preparare nastro adesivo, agente epilante, 75% etanolo, tubo di raccolta del sangue, siringa millilitro a due punti cinque, rasoio per capelli, scala elettronica, eparina e soluzione salina fisiologica.
Ratti di casa in condizioni standard, con libero accesso al cibo e all'acqua potabile, tenuti in gabbie di 530 centimetri quadrati con biancheria da letto da barba in legno. Indurre l'anestesia generale in tutti gli animali attraverso l'iniezione intraperitoneale prima della puntura. Posizionare il topo in posizione supina, fissare gli arti posteriori in una posizione comoda e fissare gli arti superiori paralleli al corpo, proprio accanto al tronco.
Pulire entrambi i lati dello spazio infraclavicolare per rimuovere la pelliccia e qualsiasi sporco visibile. Pulire il collo e la pelle toracica con il 75% di etanolo e mantenere l'area pulita e asciutta con garza. Entrambi i lati della vena succlavia sono adatti per la puntura, e qui, scegliamo il lato destro per la puntura.
Identificare la posizione e la direzione della clavicola destra con il pollice sinistro dell'operatore e individuare delicatamente la fossa sternale superiore con l'indice. Risciacquare la siringa con soluzione di eparina da 10 unità per millilitro. Individuare il sito di puntura, puntare cinque millimetri caudale alla regione esterna di un terzo della clavicola destra.
Spostare delicatamente la siringa nella pelle del sito di puntura. Una volta che l'ago entra nella pelle infraclavicolare, applicare una pressione attiva attraverso la mano destra dell'operatore. La direzione dell'ago è posizionata verso la fossa sternale superiore e dovrebbe quasi parallela alla clavicola, appena posteriore ad essa.
Di solito, la vena succlavia potrebbe essere raggiunta inserendo l'ago per circa due millimetri in questa direzione. Una volta che l'ago entra nella vena, il sangue entrerà nella siringa sotto una pressione attiva. Quindi la pressione attiva deve essere mantenuta fino a quando non viene prelevato un volume adeguato di sangue.
Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago della puntura e premere il sito di puntura per uno o due minuti per interrompere il sanguinamento. Prestare attenzione: la pressione deve essere molto delicata per prevenire lo strozzamento. Trasferire il campione di sangue in un tubo del vuoto antico coagulato con EDTA e centrifugare a 1600G per 10 minuti per raccogliere il plasma.
Aspirare il supernato a ripulire il tubo e conservare a meno 18 gradi Celsius. Per confrontare il tasso di successo tra gli operatori qualificati e i principianti, 20 ratti SD sono stati divisi in due gruppi in modo casuale. I risultati mostrano che attraverso la vena socclavia destra, ci sono riusciti rispettivamente nove ratti del gruppo abile e otto ratti del gruppo dei principianti.
Quindi la raccolta del sangue dai restanti tre ratti è riuscita attraverso il lato sinistro. Il tasso di successo non ha avuto differenze significative tra questi due gruppi. Il corso del tempo era leggermente diverso in questi due gruppi.
Non si sono verificate gravi complicazioni, come pneumotorace, emopneumotorace ed emorragia durante o dopo l'operazione. Tutti gli animali sopravvissero dopo il prelievo di sangue. Per dimostrare le difficoltà di apprendimento della procedura di puntura, abbiamo ulteriormente confrontato il numero di prelievi tra i gruppi qualificati e principianti.
Come mostrato nella tabella due, il numero medio di ritiri in gruppo qualificato è leggermente inferiore a quello dei principianti, ma non vi è alcuna significatività statistica. In conclusione, i nostri risultati mostrano che la strategia di puntura della vena succlavia per la raccolta del sangue è sicura e fattibile nei ratti. Questo metodo è prezioso, specialmente nelle occasioni in cui è necessaria una grande quantità di sangue.
Questo metodo potrebbe essere un'alternativa ottimale se il campionamento del sangue convenzionale fallisce.
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Panoramica
Questo articolo presenta un protocollo per il prelievo di campioni di sangue dalla vena subclavia del ratto. Il metodo prevede l'anestesia generale e un'attenta identificazione del sito di puntura per garantire un prelievo ematico di successo.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Fisiologia animale
- Tecniche di prelievo del sangue
Sfondo
- Il prelievo di sangue è fondamentale per vari studi fisiologici.
- I metodi tradizionali possono presentare limitazioni in determinati allestimenti sperimentali.
- La puntura della vena succlavia offre un approccio alternativo.
- Una tecnica corretta è essenziale per minimizzare le complicazioni.
Scopo dello studio
- Fornire un protocollo dettagliato per il prelievo di campioni ematici nei ratti.
- Migliorare l'affidabilità dei metodi di prelievo ematico nella ricerca.
- Migliorare il benessere animale riducendo al minimo lo stress durante le procedure.
Metodi Utilizzati
- I ratti vengono posizionati in posizione supina dopo l'anestesia.
- Lo spazio infraclavicolare viene sterilizzato con etanolo al 75%.
- La fossa sternale superiore viene identificata come punto di repère per la puntura.
- L'ago viene posizionato parallelamente alla clavicola per un accesso ottimale.
Risultati principali
- È stata raggiunta una raccolta del sangue con successo e complicazioni minime.
- Il metodo ha dimostrato efficacia rispetto alle tecniche tradizionali.
- È stata attuata una cura post-prelievo per garantire la sicurezza dell'animale.
- Il feedback dei ricercatori ha indicato un'elevata soddisfazione riguardo al protocollo.
Conclusioni
- Il metodo di puntura della vena succlavia è un'alternativa praticabile per il prelievo di sangue nei ratti.
- Una formazione adeguata e una tecnica corretta sono fondamentali per il successo.
- Questo protocollo può migliorare i risultati della ricerca in vari studi.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
Il prelievo ematico affidabile nei modelli preclinici di roditori è fondamentale per generare dati di alta qualità sulla farmacocinetica e sui biomarcatori. Il metodo di puntura della vena subclavia rappresenta un'alternativa quando l'accesso alla vena della coda non ha successo, sostenendo la continuità nei flussi di lavoro di scoperta e traduzione. Questo approccio migliora l'affidabilità dell'acquisizione dei campioni, riducendo il rischio di insuccesso della procedura e favorendo la generazione di dati solidi per le decisioni relative al portafoglio.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione dell'Obiettivo
- Permette la raccolta costante di un volume ematico sufficiente per analisi molecolari e biochimiche successive.
- Riduce il rischio di perdita del campione, favorendo studi di convalida degli obiettivi senza interruzioni.
- Semplifica la riduzione del rischio biologico assicurando un accesso affidabile ai biomarcatori sistemici.
- Supporta la previsione affidabile nelle valutazioni farmacologiche e tossicologiche delle fasi iniziali.
Sviluppo di screening e saggi
- Fornisce un campione di input validato per lo sviluppo e la standardizzazione dei saggi.
- Migliora la riproducibilità dei risultati quantitativi riducendo al minimo i prelievi falliti.
- Permette la scalabilità per studi che richiedono campioni multipli o di grande volume.
- Supporta i flussi di lavoro di screening garantendo l'integrità del campione e la costanza del volume.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Si allinea agli studi traslazionali sui biomarcatori che richiedono plasma o siero da modelli rodentistici.
- Mantiene la continuità dalla fase di scoperta fino alla validazione preclinica, riducendo i collo di bottiglia procedurali.
- Supporta un avanzamento proporzionato al rischio, minimizzando le lacune nei dati dovute a fallimenti del campionamento.
- Migliora la riduzione del rischio predittiva negli studi sulla correlazione tra esposizione sistemica e biomarcatori.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Il metodo di puntura della vena succlavia si inserisce nel flusso di lavoro preclinico come misura di emergenza per il prelievo di sangue, collegando le fasi di scoperta iniziale, identificazione dei composti promettenti e ricerca traslazionale.
- Biologia della scoperta: Garantisce che i test delle ipotesi e l'analisi dei percorsi non siano compromessi da fallimenti nell'acquisizione dei campioni.
- Screening: Fornisce campioni ematici quantitativi e riproducibili pronti per la validazione e l'esecuzione dei saggi.
- Analisi: Fornisce plasma o siero affidabili per analisi comparative tra diverse condizioni sperimentali.
- Ricerca traslazionale: Supporta l'allineamento e la continuità dei biomarcatori nei modelli preclinici.
- Riutilizzo aziendale: Offre un protocollo standardizzato e riutilizzabile per il prelievo di sangue in diversi studi e tra diversi team.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva e riduce l'ambiguità meccanicistica garantendo la disponibilità del campione.
- Valore operativo: Standardizza il prelievo di sangue, migliorando la riproducibilità e la scalabilità tra gli studi.
- Valore strategico: Permette decisioni più accurate di prosecuzione/cessazione riducendo la perdita di dati dovuta a fallimenti procedurali.
- Impatto sul portafoglio: Supporta la priorizzazione corretta rispetto al rischio riducendo il rischio biologico in fase avanzata derivante da set di dati incompleti.
Considerazioni relative all'implementazione
- Richiede un addestramento dell'operatore per ottenere tassi di successo costanti e ridurre al minimo le complicazioni.
- Necessita di attrezzature di laboratorio standard, inclusi siringhe, tubi anticoagulanti e capacità di centrifugazione.
- Richiede una standardizzazione tra i diversi team per garantire riproducibilità e confrontabilità dei dati.
- Adattabile sia a operatori esperti che principianti, con differenze minime nei tassi di successo.
- Limitato dalla necessità di anestesia generale e di un attento monitoraggio post-procedura per prevenire complicazioni.
