Name: Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Impara la puntura della vena succlavia come metodo alternativo per la raccolta del sangue nei ratti. Questa tecnica offre un approccio sicuro e pratico per ottenere campioni ematici di volume adeguato.

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Questo studio è stato approvato dal comitato etico University South Central per ricerca animale dall'ospedale Xiangya secondo (Changsha, Cina). Il manoscritto è stato preparato secondo ARRIVE (Animal Research: Reporting di In Vivo esperimenti) linee guida9.
1. materiale e animale preparazione
<ol><li>Preparare i materiali richiesti: nastro adesivo, agente di epilazione, 75% etanolo, tubo di raccolta sangue, 2,5 mL siringa collegata con ago (24 G, 0,6 mm x 25 mm), capelli rasoio, bilancia elettronica e calibro (Vedi Tabella materiali).</li>
	<li>Utilizzare 20 ratti Sprague-Dawley (deviazione standard), invecchiate 8-10 settimane e pesatura 153-200 g (Vedi Tabella materiali). Mantenere ratti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio10.</li>
	<li>Ratti a casa in condizioni standard con accesso gratuito per cibo e acqua potabile. Tenerli in gabbie di2 cm 530 con biancheria da letto di rasatura di legno (2 ratti per gabbia). Mantenere gli animali in una temperatura ambiente temperatura controllata intorno ai 25 ° c.</li>
	<li>Indurre l'anestesia generale (sodio pentobarbital 40 mg/kg) in tutti gli animali tramite l'iniezione intraperitoneale prima della puntura della vena succlavia.</li>
	<li>Posto il ratto in posizione supina. Difficoltà arti posteriori in una posizione comoda e difficoltà dell'arto superiore parallela all'asse del corpo appena al lato del tronco. Nota: Nessuna ventilazione meccanica è necessaria per questa procedura (Figura 1).</li>
	<li>Pulire entrambi i lati dello spazio infraclavicular rimuovere pelliccia (con capelli rasoio e agente di epilazione, Vedi Tabella materiali) e lo sporco visibile. Pulire il collo e la pelle toracica con etanolo al 75%. Mantenere l'area per la puntura pulito e asciutto con una garza.</li>
</ol>2. procedura di raccolta del sangue
Nota: Entrambi i lati della vena subclavian sono adatti per la puntura, e qui abbiamo scelto il lato destro per la puntura. La posizione e la direzione della clavicola di destra sono identificati da pollice sinistro dell'operatore (Figura 2). I fossae di suprasternal sono toccati delicatamente con il dito indice come i fossae di suprasternal è nella direzione dell'ago (Figura 2).
<ol><li>Sciacquare una siringa sterile da 2,5 mL con soluzione di eparina (10 IU/mL).</li>
	<li>Individuare il sito di puntura 0,5 mm caudale nella regione di 1/3 esterno della clavicola di destra (Figura 3). Spostare delicatamente la siringa nella pelle del sito di puntura. Una volta che l'ago entra nella pelle infraclavicular, applicare una pressione negativa con la mano destra dell'operatore (Figura 4). Nota: Il volume di sangue medio e massimo sono mL 1,0 e 1,4 mL, rispettivamente. La direzione dell'ago è posizionata verso i fossae di suprasternal e dovrebbe essere quasi parallela alla clavicola appena posteriormente ad esso. Di solito, la vena succlavia è raggiungibile inserendo l'ago di circa 2 mm in questa direzione. Una volta che l'ago entri la vena, sangue nella siringa entrerà sotto pressione negativa.<ol>
<li>Mantenere la pressione negativa fino a quando viene disegnato un volume sufficiente di sangue (Figura 5).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Se non viene completata la raccolta di sangue della vena subclavian, ritirare l'ago alla zona sottocutanea e regolare la direzione dell'ago leggermente interno allo sterno.<ol>
<li>Se tre tentativi falliscono, evitare la vena succlavia dallo stesso lato e utilizzare l'arto controlaterale per il prelievo di sangue.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago di puntura e applicare pressione al sito della puntura per 1-2 minuti fermare l'emorragia. Nota: La pressione deve essere molto delicata per evitare il soffocamento.</li>
</ol>3. trattamento del campione di sangue
<ol><li>Trasferire il campione di sangue in un tubo a vuoto rivestite con anticoagulante (con EDTA) e centrifugare per 10 min 1600 x g per la raccolta del plasma.</li>
	<li>Aspirare il surnatante in una provetta pulita e conservare a-80 ° C (Figura 6).</li>
</ol>

<ol><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology%2C+Pharmacotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies%3A+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li>
<li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheterization+of+the+carotid+artery+and+jugular+vein+to+perform+hemodynamic+measures%2C+infusions+and+blood+sampling+in+a+conscious+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).</li>
<li>Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Repeated+Tail+Clip+and+Saphenous+Vein+Phlebotomy+on+Rats+Used+in+Toxicology+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies.</a> Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).</li>
<li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).</li>
<li>Cochran, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+Glucose+Metabolism+Kinetics+Using+18F-FDG+Micro-PET%2FCT%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).</li>
<li>Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drawing+blood+from+rats+through+the+saphenous+vein+and+by+cardiac+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture.</a> Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).</li>
<li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+Blood+Collection+from+Tail+Vein+of+Non-Anesthetized+Rats+with+a+Vacuum+Blood+Collection+System%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).</li>
<li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+bioscience+research+reporting%3A+ARRIVE-ing+at+a+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).</li>
<li>National Institute of Health. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).</li>
<li>Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axillary+vein+puncture+without+contrast+venography+for+pacemaker+and+defibrillator+leads+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Pacing+and+Clinical+Electrophysiology%22%5BJournal%5D)">Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation.</a> Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).</li>
<li>Luis, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+magnetic+resonance+imaging+of+the+thoracic+venous+system+in+rats+with+congenital+diaphragmatic+hernia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Surgery+International%22%5BJournal%5D)">Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia.</a> Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
</ol>

Questo lavoro è stato supportato dalla concessione dal National Natural Science Foundation di Cina n. 81670269, n. 81500355 e n. 81500226.

Qui, presentiamo un metodo alternativo per l'estrazione del sangue dalla vena succlavia e mostriamo che questo metodo è fattibile, sicura e applicabile per il prelievo di sangue in ratti. Questo metodo è derivato dalla puntura della vena succlavia in impianto di piombo dello stimolatore cardiaco per pazienti11. La vena succlavia si trova solo posteriore e caudale alla clavicola ed è una continuazione della vena ascellare. Va dal confine esterno della prima nervatura il bordo mediale del muscolo sc...

Raccolta del sangue è essenziale nella ricerca animale. Le vene di destinazione per la raccolta del sangue includono il plesso di retro-orbitale, la vena giugulare, la vena safena, coda vasi sanguigni e l'arteria carotica1,2,3,4. A volte, potrebbe essere ottenuto sangue dall'aorta addominale, della vena cava o anche il cuore5,6,7. In tali occasioni, gli animali devono essere sacrificati e non possono essere utilizzati per l'osservazione successiva; così, questi metodi sono utilizzati meno nel quotidiano lavoro sperimentale. Raccolta del sangue dalla vena della coda dei ratti è popolare e meno stressante rispetto ad i suddetti metodi8.
Tuttavia, prelievo di sangue dalla vena caudale molte volte è limitato da un tasso di successo insoddisfacente. In alcuni casi, è anche difficile da ottenere abbastanza volume di sangue da questo metodo. Come la vena succlavia è abbastanza grande e si trova appena sotto l'osso della clavicola, puntura della vena succlavia può essere un metodo alternativo per il campionamento di sangue se i metodi di raccolta sistematica di anima non hanno esito positivo. Qui, presentiamo un metodo di raccolta del sangue mediante puntura della vena succlavia in ratti.

<table><tbody><tr><td>ratti</td><td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, provincia di Hunan, Cina)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS</td><td>Statistics 17</td><td></td><td></td></tr><tr><td>agente epilante</td><td>Francia Yi Sha Cosmetics Co., Ltd (Guangzhou, provincia del Guangdong, Cina)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>siringa da 2,5 ml</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, provincia di Shandong, Cina)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>rasoio per capelli</td><td>Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd (Shanghai, Cina)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>nastro adesivo</td><td>3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germania)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital sodico</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>75% etanolo</td><td>Dipartimento di Farmacia,Il Secondo Ospedale Xiangya del Centro Sud Univesità</td><td></td><td></td></tr><tr><td>tubo per la raccolta del sangue</td><td>Hubei Jinxing Technology& Development Co., Ltd (Wuhan Hubei Province, Cina) (2ml)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>bilancia elettronica</td><td>Dongguan Shengheng Electronics Co., Ltd (Dongguan, Guangdng Province, Cina)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>guanti di tela</td><td>per anestesia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hepain</td><td>Nanjing Xinbai Pharmaceutical&nbsp; Co., Limited (Nanjing, Jiangsu Province, Cina) (2mL, 12500 UI)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>soluzione</td> <td>fisiologicaHunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd (Yueyang, provincia di Hunan, Cina) (100 ml)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Raccolta di sangue con abbastanza volume di sangue è essenziale negli esperimenti sugli animali. Raccolta del sangue dalla vena della coda dei ratti è popolare e meno stressante rispetto ad altri metodi più aggressivi come retro-orbitale plesso raccolta dei campioni. Tuttavia, questo metodo di raccolta di sangue a volte è limitato da un tasso di successo insoddisfacente. Qui, presentiamo un metodo per la raccolta del sangue attraverso la puntura della vena succlavia. La vena succlavia si trova appena sotto la clavicola e questa vena è grande abbastanza per soddisfare i requisiti di volume della raccolta del sangue. I nostri risultati indicano che questo metodo è sicuro e applicabile per il campionamento di raccolta di sangue con il volume di sangue necessario. Raccolta del sangue attraverso la puntura della vena succlavia potrebbe servire come un metodo di raccolta di sangue alternativi in caso di prelievo di sangue della vena della coda non riuscita in ratti.

Un totale di 20 ratti di SD (maschio n = 10, femmina n = 10) sono stati usati qui. Collectionwas di sangue eseguito da operatori specializzati, che si sono esibiti più di 20 campionamenti di sangue dalla vena succlavia in ratti e dagli operatori principianti, che non hanno nessuna puntura della vena succlavia esperienza nei ratti o altri animali. Prima delle operazioni, i principianti guardato almeno 3 procedure fare da operatori specializzati.
<p class="jove_content" fo:keep-together...

Qui, presentiamo un protocollo per raccogliere campioni di sangue dalla vena succlavia del ratto.

Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Puntura venosa succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue nei ratti. Dopo l'anestesia generale, mettere i ratti in posizione supina e sterilizzare lo spazio infraclavicolare con il 75% di etanolo. Identificare la fossa sternale superiore prima della puntura.Individuare il sito di puntura, caudale verso la regione esterna di un terzo della clavicola nello stesso lato. La direzione dell'ago era posizionata verso la fossa sternale superiore e doveva quasi essere parallela alla clavicola, appena posteriore ad essa. Dopo la raccolta del sangue, premere il sito di puntura per uno o due minuti, per interrompere il sanguinamento.La raccolta del sangue con volume sufficiente è sempre necessaria negli esperimenti sugli animali. La raccolta del sangue dalla vena della coda dei ratti è popolare e meno stressante di alcuni metodi aggressivi come la raccolta del campione di plesso orbitale retrò. Tuttavia, questo metodo è limitato dal tasso di successo.Qui, introduciamo il nostro metodo per la raccolta del sangue con il volume di sangue desiderato dalla vena succlavia. I nostri risultati mostrano che questo metodo è sicuro e pratico e potrebbe essere considerato nel caso in cui il prelievo di sangue dalla vena della coda non sia riuscito. Per iniziare, preparare nastro adesivo, agente epilante, 75% etanolo, tubo di raccolta del sangue, siringa millilitro a due punti cinque, rasoio per capelli, scala elettronica, eparina e soluzione salina fisiologica.Ratti di casa in condizioni standard, con libero accesso al cibo e all'acqua potabile, tenuti in gabbie di 530 centimetri quadrati con biancheria da letto da barba in legno. Indurre l'anestesia generale in tutti gli animali attraverso l'iniezione intraperitoneale prima della puntura. Posizionare il topo in posizione supina, fissare gli arti posteriori in una posizione comoda e fissare gli arti superiori paralleli al corpo, proprio accanto al tronco.Pulire entrambi i lati dello spazio infraclavicolare per rimuovere la pelliccia e qualsiasi sporco visibile. Pulire il collo e la pelle toracica con il 75% di etanolo e mantenere l'area pulita e asciutta con garza. Entrambi i lati della vena succlavia sono adatti per la puntura, e qui, scegliamo il lato destro per la puntura.Identificare la posizione e la direzione della clavicola destra con il pollice sinistro dell'operatore e individuare delicatamente la fossa sternale superiore con l'indice. Risciacquare la siringa con soluzione di eparina da 10 unità per millilitro. Individuare il sito di puntura, puntare cinque millimetri caudale alla regione esterna di un terzo della clavicola destra.Spostare delicatamente la siringa nella pelle del sito di puntura. Una volta che l'ago entra nella pelle infraclavicolare, applicare una pressione attiva attraverso la mano destra dell'operatore. La direzione dell'ago è posizionata verso la fossa sternale superiore e dovrebbe quasi parallela alla clavicola, appena posteriore ad essa.Di solito, la vena succlavia potrebbe essere raggiunta inserendo l'ago per circa due millimetri in questa direzione. Una volta che l'ago entra nella vena, il sangue entrerà nella siringa sotto una pressione attiva. Quindi la pressione attiva deve essere mantenuta fino a quando non viene prelevato un volume adeguato di sangue.Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago della puntura e premere il sito di puntura per uno o due minuti per interrompere il sanguinamento. Prestare attenzione: la pressione deve essere molto delicata per prevenire lo strozzamento. Trasferire il campione di sangue in un tubo del vuoto antico coagulato con EDTA e centrifugare a 1600G per 10 minuti per raccogliere il plasma.Aspirare il supernato a ripulire il tubo e conservare a meno 18 gradi Celsius. Per confrontare il tasso di successo tra gli operatori qualificati e i principianti, 20 ratti SD sono stati divisi in due gruppi in modo casuale. I risultati mostrano che attraverso la vena socclavia destra, ci sono riusciti rispettivamente nove ratti del gruppo abile e otto ratti del gruppo dei principianti.Quindi la raccolta del sangue dai restanti tre ratti è riuscita attraverso il lato sinistro. Il tasso di successo non ha avuto differenze significative tra questi due gruppi. Il corso del tempo era leggermente diverso in questi due gruppi.Non si sono verificate gravi complicazioni, come pneumotorace, emopneumotorace ed emorragia durante o dopo l'operazione. Tutti gli animali sopravvissero dopo il prelievo di sangue. Per dimostrare le difficoltà di apprendimento della procedura di puntura, abbiamo ulteriormente confrontato il numero di prelievi tra i gruppi qualificati e principianti.Come mostrato nella tabella due, il numero medio di ritiri in gruppo qualificato è leggermente inferiore a quello dei principianti, ma non vi è alcuna significatività statistica. In conclusione, i nostri risultati mostrano che la strategia di puntura della vena succlavia per la raccolta del sangue è sicura e fattibile nei ratti. Questo metodo è prezioso, specialmente nelle occasioni in cui è necessaria una grande quantità di sangue.Questo metodo potrebbe essere un'alternativa ottimale se il campionamento del sangue convenzionale fallisce.

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Disegno di sangue di ratti attraverso la vena safena e da puntura cardiaca

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Ripetuto il prelievo di sangue dalla vena di coda dei ratti Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto

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Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

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