Name: Repressione della crescita delle cellule di mieloma multiplo In Vivo di nanotubi di carbonio a parete singola (SWCNT)-consegnato oligo antisenso MALAT1 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Scopri un metodo di drug delivery con nanotubi di carbonio a parete singola per migliorare la consegna di oligonucleotidi antisenso MALAT1 nel trattamento del mieloma multiplo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori ringraziano il Lerner Research Institute proteomica, genomica e imaging core per la loro assistenza e supporto. Finanziamento: Questo lavoro è stato sostenuto finanziariamente da NIH/NCI grant R00 CA172292 (per J.J.Z.) e fondi di Start-up (a J.J.Z.) e la clinica e traslazionale Science Collaborative (CTSC) della Case Western Reserve University Core utilizzazione pilota Grant (a J.J.Z.). Questo lavoro utilizzata il microscopio confocale Leica SP8 che è stato acquistato con un finanziamento da istituti nazionali di salute SIG grant 1S10OD019972-01.

Tutti gli esperimenti che coinvolgono gli animali erano pre-approvati da la Cleveland Clinic IACUC (Comitato di uso e istituzionali Animal Care).
1. sintesi di SWCNTs funzionalizzati
<ol><li>Mescolare 1 mg di SWCNTs, 5mg di DSPE-PEG2000-ammina e 5 mL di acqua sterilizzata nucleasi-free in una fialetta di scintillazione (20 mL). Agitare bene per dissolvere completamente tutti i reagenti.</li>
	<li>Sottoporre ad ultrasuoni il flaconcino in un sonicatore vasca di acqua ad un livello di potenza di 40 W per 1 h a temperatura ambiente (RT, 20 min x 3, cambiare l'acqua ogni 20 min per evitare il surriscaldamento). E centrifugare a 24.000 x g per 6 h, quindi raccogliere il supernatante. Questa soluzione SWCNT funzionale può essere memorizzata a 4 ° C per 2 mesi.</li>
	<li>Aggiungere 1 mL di soluzione SWCNT dal passaggio 1.2 a un dispositivo di filtro centrifugo di MWCO kDa 100, seguita da 4 mL di acqua sterilizzata nucleasi-free. Centrifugare per 10 min 4.000 x g a RT per rimuovere extra DSPE-PEG2000-ammina. Ripetere l'aggiunta di 4 mL di acqua e la centrifugazione 5 x. Più di 0,5 mL di soluzione SWCNT residuo sarà lasciato nel filtro dopo ogni centrifugazione.</li>
	<li>Misurare la concentrazione della soluzione SWCNT avanzata nel filtro utilizzando uno spettrometro UV/VIS a 808 nm dopo il lavaggio finale. La concentrazione finale è in genere circa 50 mg/L (calcolati secondo il metodo sviluppato da Kam et al.18). Nota: Assicurarsi che SWCNTs DSPE-PEG-funzionalizzati sono solubili in acqua dopo passo 1.4 e sono stabili in diverse soluzioni biologiche senza aggregazione visibile dopo poche settimane.</li>
</ol>2. coniugazione del Anti-MALAT1 Gapmer DNA affiancata da 2'-O RNAs modificate per SWCNT funzionalizzati
<ol><li>Aggiungere 0,5 mg di Sulfo-LC-SPDP in 450 µ l di DSPE-PEG2000-ammina funzionalizzati SWCNT. Aggiungere 50 µ l di PBS 1x 10 e poi incubare per 2 h a TA.</li>
	<li>Per rimuovere extra Sulfo-LC-SPDP, aggiungere la reazione dal punto 2.1 a un dispositivo di filtro centrifugo di MWCO kDa 100, seguita da 4 mL di acqua priva di nucleasi. Centrifugare per 10 min a 4.000 x g a RT. Repeat l'aggiunta di 4 mL di acqua e la centrifugazione 5x.</li>
	<li>Aggiungere 200 nM del tiolo-modificato anti-MALAT1-Cy3 gapmer DNA in 1,5 mL di soluzione commerciale di DTT e incubare per 90 min a RT. purificare il prodotto con una colonna di NAP-5, dopo il protocollo del produttore. Eluire l'anti-MALAT1-Cy3 con 500 µ l di sterilizzato nucleasi-free 1 x PBS. Nota: Il SWCNT funzionalizzate possono essere memorizzati con DTT aggiunto, che potrebbe fendere i legami bisolfurico formati durante l'immagazzinaggio dei chitosani anti-MALAT1 gapmer del DNA. Il DTT aggiunto può essere rimosso da aNAP-5 colonna prima coniugazione con SWCNT.</li>
	<li>Raccogliere la soluzione DSPE-PEG2000-ammina SWCNT sulfo-LC-SPDP-trattati lasciato nel filtro e diluirla con 500 µ l di soluzione anti-MALAT1-Cy3. Quindi, viene quindi incubato a 4 ° C per 24 h. Il coniugato SWCNT-anti-MALAT1 possono essere memorizzati a 4 ° C per 3 settimane. Seguendo la stessa procedura, il SWCNT coniugati con oligo antisenso scramble può essere sintetizzato e utilizzato come SWCNT-controllo.</li>
</ol>3. coda vena iniezione di SWCNT-Anti-MALAT1
<ol><li>
Generare un modello di topo diffusa di MM.
	<ol>
<li>Per ottenere i migliori risultati di confronto, in modo casuale organizzare 14 cenno del capo. Topi di CB17-Prkdcscid/J (8 settimane) in versione di prova o controllo gruppi (sette in ogni gruppo) con lo stesso rapporto maschio/femmina.</li>
		<li>Pulire la panchina di operazione e sterilizzarlo con alcool al 70%.</li>
		<li>Utilizzare una lampada di riscaldamento per riscaldare il mouse per aiutare la coda della vena per apparire. Reprimere il mouse correttamente con un dispositivo di ritenuta iniezione di coda.</li>
		<li>Iniettare 5 x 106 MM.1S-Luc-mCherry cellule in 50 µ l di PBS tramite la vena della coda senza anestesia. Premere il sito di iniezione con un batuffolo imbevuto di alcool per 30 s. Mark il mouse iniettato e tornare a una gabbia pulita.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Iniziare il trattamento il giorno 7 dopo l'iniezione di cellule MM.1S.
	<ol>
<li>Iniettare 50 µ l di PBS contenente SWCNT-anti-MALAT1 nella vena della coda del mouse. Utilizzare PBS contenente SWCNT-controllo come un controllo.</li>
		<li>Premere il sito di iniezione con un batuffolo imbevuto di alcool per 30 s.</li>
		<li>Osservare l'emorragia locale sulla coda e il comportamento generale del mouse per 1 min e poi ritornare una gabbia pulita. Osservare tutto iniettati topi nuovamente prima di restituire la gabbia al rack, per assicurarsi che le iniezioni sono tollerate bene.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ripetere l'iniezione ogni 7 giorni fino al termine dell'esperimento.
	<ol>
<li>Terminare l'esperimento quando si degrada la salute generale del mouse: quando non mangiare o bere, la comparsa delle zampe di pallide, qualsiasi sanguinamento sottocutaneo, una mancanza di respiro, diminuita attività, una paralisi degli arti inferiori, e/o di una massa palpabile nella addome è osservato.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. valutazione della progressione della malattia
<ol><li>Valutare lo stato generale dei topi ogni giorno dopo l'iniezione di cellule MM.1S-Luc-mCherry. Prestare particolare attenzione se i topi sviluppano paralizza degli arti inferiori.</li>
	<li>
Valutare la crescita del tumore usando un sistema di imaging in vivo 1 volta a settimana, prima dell'iniezione di SWCNT-anti-MALAT1.
	<ol>
<li>Preparare fresco 15 mg/mL D-luciferina con PBS 1X.</li>
		<li>Anestetizzare i topi con un vaporizzatore di isoflurane (3 – 5% per induzione e 1-3% per la manutenzione, a seconda dello stato dei topi).</li>
		<li>Iniettare 150mg/kg D-luciferina in ogni mouse intraperitonealmente, 5 min prima di formazione immagine; quindi, l'immagine i topi in posizione prona con uno spettro sistema di imaging.</li>
		<li>Raccogliere immagini sequenziali dei topi ogni 2 min, fino a quando non viene raggiunta la saturazione di luminescenza. Regolare l'intervallo di tempo in base al D-luciferina assorbimento/segnale.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilizzare CO2 a sacrificare i topi una volta raggiunto il termine dell'esperimento.</li>
	<li>
Poiché si tratta di un modello diffuso MM, elaborare i topi come segue.
	<ol>
<li>Pesare il mouse prima della dissezione.</li>
		<li>Raccogliere il sangue periferico dal cuore per un dosaggio di esame emocromocitometrico completo (CBC) effettuato da una macchina di contatore di cellule del sangue. I conteggi dei globuli bianchi e globuli rossi, così come il rapporto dei linfociti, è indici primari.</li>
		<li>Isolare la milza e pesarlo. Calcolare il rapporto del peso della milza/corpo; Considera > 0.5% come ingrossamento della milza.</li>
		<li>Raccogliere i tessuti del midollo osseo, milza, linfonodi, rene e il tessuto con la metastasi visibile.</li>
		<li>Se il mouse ha sviluppato una paralisi degli arti inferiori, raccogliere la colonna vertebrale.</li>
		<li>Estrarre RNA e proteina da campioni di midollo osseo.</li>
		<li>Difficoltà tutti i rimanenti tessuti in formalina.</li>
		<li>Per la decalcificazione, immergere i campioni dell'osso in soluzione di EDTA 0,25 M (pH 8.0) per 5 giorni dopo 24 h di fissazione.</li>
		<li>Immergere tutti i campioni nell'alcool di 75% per l'archiviazione a lungo termine.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Confrontare la potenza del segnale della luciferasi allo stesso tempo punti in due gruppi. Da entrambi i gruppi, è necessario registrare le date di sacrificio di ogni mouse e calcolare le curve di sopravvivenza dei due gruppi con il software. Nota: Tutte le procedure sono riassunti nella Figura 1.</li>
</ol>

<ol><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNase+non-sensitive+and+endocytosis+independent+siRNA+delivery+system%3A+delivery+of+siRNA+into+tumor+cells+and+high+efficiency+induction+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis.</a> Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).</li>
<li>Murakami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water-dispersed+single-wall+carbon+nanohorns+as+drug+carriers+for+local+cancer+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy.</a> Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).</li>
<li>Kam, N. W., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+protein+transporters%3A+generality+and+biological+functionality%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalization+of+carbon+nanotubes+via.+cleavable+disulfide+bonds+for+efficient+intracellular+delivery+of+siRNA+and+potent+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+transporters+for+proteins+and+DNA%3A+an+investigation+of+the+uptake+mechanism+and+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition+in+English%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).</li>
<li>Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+concepts+of+epigenetic+dysregulation+in+hematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies.</a> Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).</li>
<li>Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bright+side+of+dark+matter%3A+lncRNAs+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).</li>
<li>Ronchetti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+lncRNA+transcriptional+fingerprints+characterize+progressive+stages+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma.</a> Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).</li>
<li>Wong, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+silencing+of+a+long+non-coding+RNA+KIAA0495+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma.</a> Molecular Cancer. 14, 175(2015).</li>
<li>Schmidt, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+long+noncoding+MALAT-1+RNA+indicates+a+poor+prognosis+in+non-small+cell+lung+cancer+and+induces+migration+and+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Oncology%22%5BJournal%5D)">The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth.</a> Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).</li>
<li>Ji, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT-1%2C+a+novel+noncoding+RNA%2C+and+thymosin+beta4+predict+metastasis+and+survival+in+early-stage+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer.</a> Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).</li>
<li>Luo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+and+genomic+analysis+of+human+hepatocellular+carcinomas+and+hepatoblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas.</a> Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).</li>
<li>Guffanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transcriptional+sketch+of+a+primary+human+breast+cancer+by+454+deep+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing.</a> BMC Genomics. 10, 163(2009).</li>
<li>Cho, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT1+long+non-coding+RNA+is+overexpressed+in+multiple+myeloma+and+may+serve+as+a+marker+to+predict+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression.</a> BMC Cancer. 14, 809(2014).</li>
<li>Handa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+MALAT1+is+an+inducible+stress+response+gene+associated+with+extramedullary+spread+and+poor+prognosis+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma.</a> British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+MALAT1%2FPARP1%2FLIG3+complex+induces+DNA+damage+and+apoptosis+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Lennox, K. A., Behlke, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+localization+of+long+non-coding+RNAs+affects+silencing+by+RNAi+more+than+by+antisense+oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides.</a> Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).</li>
<li>Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+multifunctional+biological+transporters+and+near-infrared+agents+for+selective+cancer+cell+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).</li>
<li>Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+polyethylene+glycol+integrity+in+specific+receptor+targeting+of+carbon+nanotubes+to+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells.</a> Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).</li>
<li>Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+modifications+in+multiple+myeloma%3A+recent+advances+on+the+role+of+DNA+and+histone+methylation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Therapeutic+Targets%22%5BJournal%5D)">Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).</li>
<li>Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+theragnostics+for+the+clinical+management+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma.</a> Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).</li>
<li>Amodio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugging+the+lncRNA+MALAT1+via.+LNA+gapmeR+ASO+inhibits+gene+expression+of+proteasome+subunits+and+triggers+anti-multiple+myeloma+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Highleyman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+approves+fomivirsen%2C+famciclovir%2C+and+Thalidomide.+Food+and+Drug+Administration%5BTitle%5D)+AND+%22BETA%22%5BJournal%5D)">FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration.</a> BETA. 5, (1998).</li>
<li>Smith, R. J., Hiatt, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+new+drugs+for+homozygous+familial+hypercholesterolemia%3A+managing+benefits+and+risks+in+a+rare+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder.</a> JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).</li>
<li>Aartsma-Rus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+Approval+of+Nusinersen+for+Spinal+Muscular+Atrophy+Makes+2016+the+Year+of+Splice+Modulating+Oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acid+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides.</a> Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).</li>
<li>Nelson, S. F., Miceli, M. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28399245">FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy.</a> The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).</li>
<li>Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+chemistry+on+water-soluble+carbon+nanotubes+for+drug+loading+and+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery.</a> American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).</li>
<li>Ali-Boucetta, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiwalled+carbon+nanotube-doxorubicin+supramolecular+complexes+for+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+communications+%28Cambridge%29%22%5BJournal%5D)">Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics.</a> Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).</li>
<li>Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15672140">Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes.</a> Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).</li>
<li>Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+single-walled+carbon+nanotube+solubility+by+noncovalent+PEGylation+using+experimental+design+methods%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).</li>
<li>Padilla-Parra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+endosome+acidification+and+single+retrovirus+fusion+with+distinct+pools+of+early+endosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).</li>
<li>Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH-sensitive+poly%28histidine%29-PEG%2FDSPE-PEG+co-polymer+micelles+for+cytosolic+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery.</a> Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).</li>
<li>Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+polyion+complex+micelles+for+targeted+intracellular+delivery+of+PEGylated+antisense+oligonucleotides+containing+acid-labile+linkages%5BTitle%5D)+AND+%22Chembiochem%22%5BJournal%5D)">Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages.</a> Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).</li>
<li>Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+polyethylenimine-grafted+graphene+nanoribbon+for+cellular+delivery+of+locked+nucleic+acid+modified+molecular+beacon+for+recognition+of+microRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA.</a> Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).</li>
<li>Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+reduction+of+disulfide+bonds+in+lysosomes%3A+characterization+of+a+gamma-interferon-inducible+lysosomal+thiol+reductase+%28GILT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).</li>
<li>Lelimousin, M., Sansom, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+perturbation+by+carbon+nanotube+insertion%3A+pathways+to+internalization%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization.</a> Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).</li>
<li>Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertion+mechanism+and+stability+of+boron+nitride+nanotubes+in+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers.</a> J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+tracking+of+endocytosis+and+exocytosis+of+single-walled+carbon+nanotubes+in+NIH-3T3+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells.</a> Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+cellular+uptake+and+expulsion+of+single-walled+carbon+nanotubes%3A+single+particle+tracking+and+a+generic+uptake+model+for+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles.</a> American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).</li>
<li>Ruggiero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradoxical+glomerular+filtration+of+carbon+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

La prova ha indicato che lncRNAs prendere parte nella regolazione di numerose procedure fisiologiche e patofisiologiche nei cancri, compreso MM7,8,9; Essi hanno il potenziale per essere mirati per il trattamento del cancro, che può essere realizzato da oligonucleotidi antisenso20,21,22. L'US Food and Drug Administration (FDA) ha approva...

Il SWCNT è un nanomateriale romanzo in grado di fornire vari tipi di droghe, come acidi nucleici, proteine e piccole molecole stabile ed efficiente con ideale tollerabilità e minima tossicità in vitro1 e vivo in2. Un SWCNT funzionalizzati ha solubilità ottima biocompatibilità e acqua, può essere utilizzato come un servizio di navetta per molecole più piccole e può portarli per penetrare la membrana cellulare3,4,5.
lncRNAs sono un cluster di RNA (> 200 nt) che sono trascritti dal genoma al mRNA ma non può essere tradotto in proteine. La prova aumentante ha dimostrato che lncRNAs partecipano alla regolazione dell' espressione di gene6 e sono coinvolti nell'iniziazione e progressione della maggior parte dei tipi di cancro, tra cui MM7,8,9. MALAT1 è una trascrizione nucleare arricchito non codificante, 2 (NEAT2) e un lncRNA altamente conservato10. MALAT1 è inizialmente riconosciuto in metastatico del polmone non a piccole cellule (NSCLC) cancro11, ma ha stato sovraespresso in numerosi tumori5,12,13; è uno della più altamente espressi lncRNAs ed è correlata con una prognosi difficile in MM8,14. Il livello di espressione di MALAT1 è significativamente più alto in pazienti con MM extramedullary corso mortale rispetto a quelli diagnosticati solo come MM15.
In uno studio precedente, abbiamo confermato che anti-MALAT1 oligos robustamente portare a danni al DNA e l'apoptosi in MM16 utilizzando oligonucleotidi antisenso di DNA gapmer MALAT1 di targeting (anti-MALAT1) in cellule di MM. Il DNA di gapmer è composto di DNA antisenso e collegato da 2'-OMe-RNA, che ha potuto richiamare MALAT1 fenditura da RNasi H attività una volta legato17. L'efficienza di consegna in vivo di oligo antisenso ancora limita il suo uso clinico.
Per verificare la consegna effetto di SWCNT per anti-MALAT1 gapmer i oligos, l'anti-MALAT1 gapmer DNA è coniugato a DSPE-PEG2000-ammina funzionalizzati SWCNT. SWCNT-anti-MALAT1 allora è iniettato per via endovenosa in un modello di topo diffusa MM; un'inibizione notevole è osservata dopo quattro trattamenti.

<table><tbody><tr><td>SWCNTs</td><td>Millipore-Sigma</td><td>704113</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000-Ammina</td><td>Avanti Polarizzazione dei lipidi polari</td><td>880128</td><td></td></tr><tr><td>bagnoschiumatore</td><td>VWR</td><td>97043-992</td><td></td></tr><tr><td>Filtro centrifugo da 4 mL</td> Spettrometro UV/VIS <td>Millipore-Sigma</td><td>Z740208-8EA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>accuSkan GO Spettrofotometro</td> <td>UV/Vis per micropiastrecoefficiente di estinzione di 0,0465 L/mg/cm a 808 nm</td></tr><tr><td>Sulfo-LC-SPDP</td><td>ProteoChem</td><td>c1118</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione DTT</td><td>Millipore-Sigma</td><td>43815</td><td></td></tr><tr><td>NAP-5 colonna</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0853-01</td><td></td></tr><tr><td>sistema di imaging in vivo</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NOD. CB17-Prkdcscid/J topi</td><td>Charles River lab</td><td>250</td><td></td></tr><tr><td>Citometro a flusso</td><td>Becton Dickinso</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamina</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Lipofectamin2000</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>RMPI-1640 medio</td><td>Invitrogen</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>MALAT1-QF:</td> <td>sintetizzato da IDT Azienda</td><td></td><td>5'- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'</td></tr><tr><td>MALAT1-QR:</td> <td>sintetizzato da IDT Company</td><td></td><td>5'- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QF:</td> <td>sintetizzato da IDT Company</td><td></td><td>5'- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QR:</td> <td>sintetizzato da IDT Company</td><td></td><td>5'- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'</td></tr><tr><td>PCR quantitativa utilizzando la master mix SYBR Green PCR</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A25780</td><td></td></tr><tr><td>RevertAid kit di sintesi di cDNA di primo supporto</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>K1621</td><td></td></tr><tr><td>anti-MALAT1</td><td>sintetizzato da IDT Company</td><td></td><td>5'-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T *G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'</td></tr><tr><td>Kit di analisi della vitalità cellulare</td><td>Promega Corporation</td><td>G7570</td><td>Kit di analisi della vitalità cellulare luminescente</td></tr><tr><td>accuSkan GO Spettrofotometro per micropiastre UV/Vis</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtro centrifugo</td><td>Millipore-Sigma</td><td>UFC910008</td><td></td></tr><tr><td>SPSS Software</td><td>IBM</td><td>versione 24.0</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Millipore-Sigma</td><td>L9504</td><td></td></tr></tbody></table>

repressione della crescita delle cellule di mieloma multiplo in vivo di nanotubi di carbonio a parete singola (swcnt)-consegnato oligo antisenso malat1

Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube (SWCNT)-delivered MALAT1 Antisense Oligos

I nanotubi di carbonio a parete singola (SWCNT) sono un nuovo tipo di nanoparticelle, che sono stato utilizzato per fornire più tipi di farmaci nelle cellule, come proteine, oligonucleotidi e droghe sintetiche della piccolo-molecola. Il SWCNT ha dimensioni personalizzabili, un'ampia area superficiale e non può vincolare in modo flessibile con farmaci attraverso diverse modifiche sulla sua superficie; Pertanto, è un sistema ideale per il trasporto di farmaci nelle cellule. RNA lunghi non codificanti (lncRNAs) è un cluster di RNA non codificante più di 200 nt, che non può essere tradotto in proteina, ma svolgono un ruolo importante nei processi biologici e fisiopatologici. Trascrizione di adenocarcinoma polmonare metastasi-collegata 1 (MALAT1) è un lncRNA altamente conservata. È stato dimostrato che i livelli elevati di MALAT1 sono relazionati con la prognosi difficile di vari cancri, compreso il mieloma multiplo (MM). Abbiamo rivelato che MALAT1 regola la morte delle cellule e la riparazione del DNA in MM; così, MALAT1 può essere considerato come un obiettivo terapeutico per MM. Tuttavia, la consegna efficiente dell'oligo antisenso per inibire/atterramento MALAT1 in vivo è ancora un problema. In questo studio, abbiamo modificare il SWCNT con PEG-2000 e coniugato un oligo di anti-MALAT1 ad esso, testare la consegna di questo composto in vitro, iniettare per via endovenosa un modello di topo MM diffuso e osservare un'inibizione significativa di progressione di MM, che indica tale SWCNT è una navetta di consegna ideale per gapmer anti-MALAT1 del DNA.

Per dimostrare l'effetto di inibizione di anti-MALAT1 gapmer DNA in MM, abbiamo buttato giù l'espressione di MALAT1 e usato in cellule H929 e MM.1S. Quarantotto ore più tardi, le cellule sono stati raccolti per l'analisi dell'efficienza di abbattimento e lo stato di apoptosi in cellule trasfettate con anti-MALAT1 gapmer o controllo del DNA. risultati di qRT-PCR ha mostrati che anti-MALAT1 gapmer DNA abbattuto l'espressione di MALAT1 in cellule H929 e MM.1S in modo efficiente (<strong clas...

Questo manoscritto descrive la sintesi di un nanotubo di carbonio a parete singola (SWCNT)-coniugato MALAT1 gapmer antisenso del DNA oligonucleotide (SWCNT-anti-MALAT1), che dimostra la consegna affidabile del SWCNT e il potente effetto terapeutico di anti-MALAT1 in vitro e in vivo. Metodi utilizzati per la sintesi, la modifica, la coniugazione e iniezione di SWCNT-anti-MALAT1 sono descritti.

Repressione della crescita delle cellule di mieloma multiplo In Vivo di nanotubi di carbonio a parete singola (SWCNT)-consegnato oligo antisenso MALAT1

The single-wall carbon nanotube (SWCNT) is a new type of nanoparticle, which has been used to deliver multiple kinds of drugs into cells, such as ...

Il metodo che stiamo usando qui può aiutare a confezionare oligonucleotide con nanotubo di carbonio a parete singola, che è un nuovo tipo di nanoparticella per la somministrazione di farmaci. Il principale vantaggio di questa tecnica è la somministrazione più efficiente di farmaci oligonucleotidi nelle cellule in vivo. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla ricerca del mieloma multiplo, perché ha introdotto la nanoparticella per migliorare la consegna dei farmaci oligonucleotidi.Attraverso questo metodo può fornire informazioni sul trattamento per mieloma multiplo. Può anche essere applicato ad altre malattie e coniugato con altri carichi, come proteine e piccole molecole. In primo luogo, mescolare un milligrammo di nanotubi di carbonio a parete singola, cinque milligrammi di ammina DSPE-PEG 2000 e cinque millilitri di acqua sterilizzata priva di nucleasi in una fiala a scintillazione di vetro da 20 millilitri.Sonicare il flaconcino in un sonicatore a bagno d'acqua a un livello di potenza di 90 watt per un'ora a temperatura ambiente. Dopo la sonicazione, centrifugare il flaconcino a 24.000 volte g per sei ore. Quindi raccogliere la soluzione supernatante.Aggiungere un millilitro della soluzione di nanotubo di carbonio a parete singola a un dispositivo di filtro centrifugo cutoff a peso molecolare da 100 kilodalton seguito da quattro millilitri di acqua sterilizzata priva di nucleasi. Centrifugare per 10 minuti a 4.000 volte g a temperatura ambiente per rimuovere l'ammina in eccesso. Aggiungere 0,5 milligrammi di Sulfo-LC-SPDP a 450 microlitri del nanotubo di carbonio a parete singola funzionalizzato all'ammina.Quindi aggiungere 50 microlitri di 10x PBS e incubare per due ore a temperatura ambiente. Successivamente, aggiungere la miscela di reazione a un dispositivo di filtro centrifugo tagliato a peso molecolare da 100 kilodalton, seguito da quattro millilitri di acqua priva di nucleasi. Centrifugare il campione per 10 minuti a 4.000 volte g a temperatura ambiente per rimuovere l'eccesso di Sulfo-LC-SPDP.Raccogliere la soluzione di nanotubo di carbonio a parete singola trattata Con Sulfo-LC-SPDP lasciata nel filtro e diluirla con 500 microlitri di soluzione anti-MALAT1-Cy3 precedentemente preparata. Quindi incubare il campione a quattro gradi Celsius durante la notte. Per ottenere i migliori risultati del confronto, organizzare casualmente 14 topi in gruppi di prova o di controllo con sette in ogni gruppo e con lo stesso rapporto maschio-femmina in ogni gruppo.Quindi, pulire il banco operativo e sterilizzarlo con alcool etilico al 70%. Usa una lampada riscaldante per riscaldare uno dei topi per aiutare la vena della coda ad apparire. Trattenere correttamente il mouse con un limitatore di iniezione della coda.Iniettare cellule MM.1S-luc/mCherry in 50 microlitri di PBS attraverso la vena della coda. Premere il sito di iniezione con un tampone alcolico per 30 secondi. Quindi contrassegnare il topo iniettato e restituirlo in una gabbia pulita.Il settimo giorno, dopo l'iniezione cellulare MM1S, iniettare 50 microlitri di PBS contenenti nanotubo di carbonio a parete singola anti-MALAT1 nella vena di coda del topo. Quindi premere il sito di iniezione con un tampone alcolico per 30 secondi. Osservare il sanguinamento locale sulla coda e il comportamento generale del topo per un minuto, quindi restituirlo in una gabbia pulita.Osservare nuovamente tutti i topi iniettati prima di riportare la gabbia al rack per assicurarsi che le iniezioni siano tollerate bene. Pesare ogni mouse prima della dissezione. Raccogliere il sangue periferico dal cuore per un test completo dell'emotere eseguito da una macchina per il contatore delle cellule del sangue.Successivamente, raccogliere i tessuti del midollo osseo, della milza, del linfonodo, del rene e del tessuto con metastasi visibile. Estrarre RNA e proteine dai campioni di midollo osseo. Fissare tutti i tessuti rimanenti in formalina.Dopo 24 ore di fissazione, immergere i campioni ossei in una soluzione EDTA 0,5 molare per cinque giorni per la decalcificazione. Quindi immergere tutti i campioni in alcol etilico al 75% per la conservazione a lungo termine. I risultati della QRT PCR hanno mostrato che il DNA gapmeR anti-MALAT1 ha abbattuto l'espressione MALAT1 e ha indotto l'apoptosi in modo significativo nelle cellule H929 e MM.1S.Il nanotubo di carbonio a parete singola anti-MALAT1-Cy3 è stato consegnato nel nucleo delle cellule MM e ha soppresso significativamente il livello endogeno di MALAT1 sia nelle cellule H929 che MM.1S. La vitalità della cellula BMEC-1 non ha alcuna differenza significativa dopo il trattamento del nanotubo di carbonio a parete singola anti-MALAT1-Cy3 o il controllo a diversi dosaggi e timepoint. Ciò indica che la tossicità del nanotubo di carbonio a parete singola anti-MALAT1-Cy3 ha una tossicità limitata e accettabile per le cellule normali ad alto dosaggio.È stato istituito un modello di topo umano diffuso in MM per valutare gli effetti di trattamento del nanotubo di carbonio a parete singola anti-MALAT1 in vivo. I segnali di luciferone dei topi nel gruppo di trattamento anti-MALAT1 a nanotubo di carbonio a parete singola erano notevolmente inferiori rispetto al controllo dopo 21 giorni di trattamento. Da questi risultati, si è concluso che il trattamento anti-MALAT1 a nanotubo di carbonio a parete singola tramite iniezione endovenosa poteva fornire efficacemente gli oligo anti-MALAT1 alle cellule tumorali.Non sono stati osservati effetti collaterali significativi del trattamento, indicando che l'iniezione anti-MALAT1 di nanotubo di carbonio a parete singola è un trattamento sicuro per i topi. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che la composizione della molecola cellulare influenzerà il parto, l'efficienza e l'effetto terapeutico dei farmaci oligonucleotidi. Seguendo questa procedura, altri metodi come la coniugazione di proteine o piccole molecole possono essere eseguiti per rispondere a domande aggiuntive.Come usare nanotubi di carbonio a parete singola per fornire altri farmaci.

repression-multiple-myeloma-cell-growth-vivo-single-wall-carbon

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Mieloma multiplo (MM), le cellule umane richiedono il microambiente favorevole cellule mesenchimali e componenti della matrice extracellulare per la sopravvivenza e la proliferazione. Abbiamo stabilito un vivo pollo modello embrione con cellule di mieloma e mesenchimali umane trapiantate per studiare gli effetti dei farmaci anti-tumorali sulla crescita del tumore, l'invasione e l'angiogenesi.

Istituzione di un mieloma multiplo umano Xenograft modello nel pollo per studiare la crescita del tumore, invasione e l&#39;angiogenesi

Qui, descriviamo un metodo di microscopia time-lapse a lungo termine per tracciare longitudinalmente singole cellule in risposta a terapie antitumorali.

Attraverso lo specchio: Time-lapse Microscopia e longitudinale monitoraggio di singole cellule allo Studio Therapeutics anti-cancro

Qui descriviamo la consegna del microRNA usando un virus ricombinante adeno-associato sierotipo 9 in un modello murino di una malattia neuromuscolare. Una singola somministrazione periferica nei topi ha provocato la sovraespressione di miRNA sostenuta nel muscolo e motoneuroni, offrendo l'opportunità di studio miRNA funzione e potenziale terapeutico in vivo.

Consegna sistemica di MicroRNA usando ricombinanti Virus Adeno-associato sierotipo 9 per trattare malattie neuromuscolari in roditori

Qui usiamo bioluminescenti, raggi x ed emissione di positroni tomografia/computato tomografia imaging per studiare l'attività come inibitore di mTOR urta i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in un modello dello xenotrapianto. Questo permette analisi fisiologicamente pertinenti, non invasivo e multimodale dell'effetto anti-mieloma di terapie designando i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in vivo.

Formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi NOG

Questo protocollo descrive i modelli murini xenoinpito e ortotopici della tumorigenesi tiroidea umana come piattaforma per testare i trattamenti inibitori basati su microRNA. Questo approccio è ideale per studiare la funzione degli RNA non codificanti e il loro potenziale come nuovi obiettivi terapeutici.

In vivivo Inibizione del MicroRNA per diminuire la crescita tumorale nei topi

terapeutica di miRNA hanno un potenziale significativo nella regolazione della progressione del cancro. Ha dimostrato qui approcci analitici utilizzati per l'identificazione dell'attività di un trattamento di combinatoria miRNA nell'arrestare il ciclo cellulare e l'angiogenesi.

Analisi di miRNA combinatoria trattamenti per regolare il ciclo cellulare e l'angiogenesi

Questo lavoro descrive la sintesi e la caratterizzazione di un omo-PROTAC bimalidomide a base di pomalimmide come un nuovo approccio per indurre l'ubiquitinazione e la degradazione della cereblon della ligase dell'ubiquitina E3 (CRBN), l'obiettivo degli analoghi di talidomide.

Inattivazione chimica dell'E3 Ubiquitin Ligase Cereblon da parte di Homo-PROTAC con sede a Pomeredomide

Qui, descriviamo un metodo per fornire farmaci al sistema nervoso centrale del ratto impiantando un catetere nello spazio lombare intrateco della colonna vertebrale. Ci concentriamo sulla consegna di oligonucleotidi antisenso, anche se questo metodo è adatto per la consegna di altre modalità terapeutiche pure.

Consegna intratecala di Oligonucleotidi Antisense nel Rat Central Nervous System

Qui, descriviamo il protocollo per la somministrazione in vivo di nanoparticelle magnetiche di ossido di ferro che trasportano oligomeri di RNA al carcinoma mammario metastatico in modelli animali, fornendo un approccio clinicamente valido per il silenziamento terapeutico di acidi nucleici oncogenici.

Monitoraggio dell'accumulo di nanofarmaci nelle metastasi del carcinoma mammario murino

La barriera emato-encefalica è un ostacolo significativo nella somministrazione di terapie per il glioblastoma, una malattia per la quale non esiste una cura. Qui, riportiamo una nano piattaforma terapeutica di ossido di ferro guidata da immagini in vivo che può bypassare questa barriera fisiologica in virtù delle dimensioni e accumularsi nel tumore.

Consegna di nanoparticelle di un carico utile di oligonucleotidi in un modello animale multiforme di glioblastoma

Scopri un metodo di drug delivery con nanotubi di carbonio a parete singola per migliorare la consegna di oligonucleotidi antisenso MALAT1 nel trattamento del mieloma multiplo.

Repressione della crescita delle cellule di mieloma multiplo In Vivo di nanotubi di carbonio a parete singola (SWCNT)-consegnato oligo antisenso MALAT1 (Video) | JoVE Journal

Repressione della crescita delle cellule di mieloma multiplo In Vivo di nanotubi di carbonio a parete singola (SWCNT)-consegnato oligo antisenso MALAT1

Esplora altri video