Name: Ultrasuono ad alta frequenza per lanalisi dello sviluppo fetale e placentare In Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Scopri l'ecografia ad alta frequenza per l'analisi dello sviluppo fetale e placentare nei topi. Questa tecnica non invasiva permette di monitorare il flusso sanguigno materno e fetale durante tutta la gravidanza.

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Molte grazie per l'azienda di Imaging dello strumento (soprattutto a Magdalena Steiner, Katrin Suppelt e Sandra Meyer) per il loro supporto piacevole e veloce e per rispondere a tutte le nostre domande riguardanti il sistema di Imaging e il suo utilizzo subito e completamente. Siamo grati al Prof Hans-Reimer Rodewald e Dr. Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Germania) per fornire la colonia di Cpa3. Inoltre, ringraziamo Stefanie Langwisch, chi era incaricato delle colonie di mouse e chi ha generato le immagini nella figura 1.
Il lavoro e il sistema di Imaging sono stati finanziati mediante sovvenzioni dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) a A.C.Z (ZE526/6-1 e AZ526/6-2) che erano progetti incorporati nei DFG priorità programma 1394 "mastociti nella salute e nella malattia."

Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dal "Landesverwaltungsamt Sachsen Anhalt: 42502-2-1296UniMD."
1. procedura sperimentale
<ol><li>Compagno di 6 a 8-settimana-vecchio femmina MC-carenti C57BL/6J-Cpa3Cre /+ (Cpa3Cre /+) topi e MC-sufficiente C57BL/6J-Cpa3+/+ (controlli di Colonia; Cpa3+/+) con i maschi BALB/c.</li>
	<li>Definire il giorno di gestazione (gd) 0 dopo la conferma della spina vaginale e trattare le femmine immediatamente dopo la conferma di spina. Nota: Una spina è lo sperma del maschio nell'orifizio vaginale della femmina.<ol>
<li>Iniettare 250 µ l di PBS intraperitonealmente in controllo Cpa3+/+ femmine.</li>
		<li>Iniettare 250 µ l di anti-CD122 (0,25 mg) per via intraperitoneale in MC-carenti Cpa3Cre /+ femmine. Nota: Un'iniezione di 0,25 mg di anti-CD122 impoverisce NKs periferico e uNKs in Cpa3 MC-carentiCre /+ femmine come descritto in precedenza22.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Attendere gd5. Nota: Alle gd5, c'è la possibilità più in anticipo per l'analisi dell'impianto.<ol>
<li>Procedere con i passaggi 2-5 per l'analisi di ultrasuono.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Eseguire l'imaging ad ultrasuoni presso gd5, 8, 10, 12 e 14.</li>
</ol>2. preparazione del sistema ad ultrasuoni
<ol><li>Accendere il sistema (Figura 1A; alimentazione principale sul retro e computer standby presso il sito di sinistro), la piattaforma riscaldata (Figura 1B; presso il pad di controllo) e il gel più caldo (Figura 1). Nota: Il gel per ultrasuoni deve scaldare per circa 0,5 h.</li>
	<li>Assicurarsi che l'unità di isoflurane sta riempiendo sufficientemente (Figura 1).</li>
	<li>Aprire un Nuovo studio o una Nuova serie in uno studio esistente nel browser. Compilare tutte le informazioni richieste (proprietario, Studio nome, nome della serie, i dati animali) nella finestra Info di studiare . Fare clic su Ok.</li>
	<li>Dopo aver cliccato Ok, assicurarsi che viene visualizzata la finestra di imaging B-mode e l'imaging in B-mode inizia automaticamente.</li>
</ol>3. Mouse movimentazione
<ol><li>Amputate del mouse<ol>
<li>Posizionare il mouse nella casella di atterramento (Figura 1E), chiudere la finestra, aprire il tubetto di isoflurane alla casella di atterramento e accendere l'isoflurano (concentrazione 3,5%).</li>
		<li>Quando il mouse è anestetizzato, più bassa (a concentrazione 1,5%) e reindirizzare il flusso di isoflurane aprendo il tubo in direzione della piattaforma riscaldamento e chiudere il flusso alla casella di atterramento. Nota: Per raggiungere l'anestesia sufficiente, attendere un ulteriore 10 s dopo il mouse non si muove.</li>
		<li>Trasferire rapidamente il mouse dalla casella di knockout per la piattaforma di riscaldamento (Figura 1F) in posizione dorsale e appoggiate delicatamente il naso nel tubo naso anestesia che si trova sulla cima della piattaforma.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fissazione, depilazione e preparazione del mouse per la misurazione<ol>
<li>Posizionare la protezione degli occhi crema in ogni occhio del mouse per impedire gli occhi asciutti.</li>
		<li>Depositare una goccia di gel per elettrodi su ciascuna delle quattro aree rame sulla piattaforma riscaldata (Figura 1F).</li>
		<li>Toccare le zampe con nastro chirurgico sulle zone degli elettrodi gel-rivestita della piattaforma riscaldamento.</li>
		<li>Verifica ECG [valore ottimale = 450-550 battimenti/minuto (BPM)] e fisiologia respiratoria in ogni momento. Nota: Usando una sonda rettale, della temperatura corporea è possibile, ma non necessario.</li>
		<li>Posto depilatorio crema all'addome del mouse, strofinare la crema con un batuffolo di cotone e attendere circa 1 minuto togliere la crema con un impacco impregnati d'acqua. Ripetere questo passaggio se non tutti i peli sono andati.</li>
		<li>Applicare il gel per ultrasuoni pre-riscaldato sulla pelle depilata.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. misure e acquisizione di immagini e video
<ol><li>Tenere il trasduttore (Figura 1) con la mano o bloccarla nel dispositivo di tenuta (Figura 1 H; detenzione dispositivo è consigliato).</li>
	<li>Identificare la vescica con il trasduttore e usarlo come punto di riferimento. Spostare il trasduttore per i siti di sinistro e destro dell'addome per gli impianti di traccia.</li>
	<li>B-modalità per la visualizzazione delle strutture anatomiche in 2D in scala di grigi<ol>
<li>Spostare il trasduttore o riscaldamento piattaforma tavolo dove il mouse è fissato fino a quando il primo impianto è visibile sullo schermo alle sue dimensioni più grandi.<ol>
<li>Selezionare L'etichetta dell'immagine e digitare un nome, o Frame Store (deposito senza nome) per memorizzare singoli fotogrammi o Cine Store per memorizzare un cineloop per le misurazioni dell'intero impianto.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Spostare il trasduttore o tabella per portare la placenta in una posizione dove il flusso sanguigno nell'area di memoria superiore è visibile. Memorizzare un singolo fotogramma o cineloop (Vedi punto 4.3.1.1) per misurazioni placentare. Nota: Misure placentare sono possibili da gd10 in poi.</li>
		<li>Continuare con tutti gli impianti utilizzando lo stesso metodo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Modo di doppler di colore per visualizzare e determinare la direzione del flusso sanguigno<ol>
<li>Premere il pulsante di colore .</li>
		<li>Spostare la casella di colore (in questa zona, il segnale è visibile) nella posizione desiderata utilizzando il trackball. Se necessario, modificare le dimensioni della casella premendo aggiornamento e spostare la trackball (a destra/verso l'alto = più grande; per lo sinistro lato/basso = più piccolo). Quando la casella ha la giusta dimensione, premere Select.</li>
		<li>Memorizzare i singoli fotogrammi o cineloops come descritto al punto 4.3.1.1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Modo di doppler di onda di impulso (PW) per quantificare il flusso di sangue attraverso i vasi in uterina di Arteria (arteria uterina, UA) e UmA<ol>
<li>Individuare l'area di interesse per l'acquisizione di doppler di colore. Nota: La UA si trova caudale alla vescica, e l'UmA è situato tra il feto e la placenta.</li>
		<li>Premere PWe una linea tratteggiata apparirà. Spostare questa linea di vaso sanguigno di interesse e regolare l'angolo della linea tramite la manopola "Doppler angolo" in linea con il flusso di sangue. Premere Update. Nota: L'angolo tra la direzione del flusso sanguigno e il trasduttore deve essere coerenza in tutti gli animali, soprattutto quando si utilizzano gli angoli superiori a 60° (qui, sono stati utilizzati i 70° di UAs e 45° per UmAs).</li>
		<li>Memorizzare un cineloop delle linee doppler che appare nella finestra di acquisizione doppler PW.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Revisione e acquisizione dati di finitura e una serie di risparmio
<ol><li>Per rivedere i dati, premere Gestione studio. Scorrere l'immagine di anteprima di interesse e fare doppio clic su aggiornamento.</li>
	<li>Premere prima Studio Gestione quindi Chiudi nella finestra del browser per finire di acquisizione dati e salvare una serie registrata. Nota: Dopo la chiusura di una serie, non è possibile memorizzare più cornici o cineloops in questa serie.</li>
</ol>6. gestione di acquisizione dei dati del Mouse
<ol><li>Rimuovere il gel dall'animale anestetizzato con l'aiuto di impacchi asciutti.</li>
	<li>Rimuovere con cautela il nastro chirurgico dalle zampe.</li>
	<li>Chiudere il tubo di isoflurane (concentrazione 0%).</li>
	<li>Procedere con la seguente analisi di ultrasuono a gd5, 8, 10 e 12.<ol>
<li>Metti l'animale da solo in una gabbia per un minimo di 5 min quindi ha tempo di svegliarsi e orientarsi.</li>
		<li>Posizionare il mouse nella gabbia originale. Nota: Non spegnere l'isoflurano prima di rimuovere il gel e nastro chirurgico, come topi si sveglia molto rapidamente (circa 20 s) dopo aver spento l'isoflurano.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Procedere con la seguente analisi di ultrasuono a gd14.<ol>
<li>Sacrificare la femmina prima che si svegli di dislocazione cervicale. Aprire l'animale, rimuovere l'utero, separare i feti e placente e misurare pesi fetali e placentari.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. copiare e importare i dati
<ol><li>Contrassegnare una o più serie facendo clic su Esporta e scegliere lo spazio di archiviazione per copiare i dati su un disco rigido.</li>
	<li>Aprire il software a un computer e fare clic su Copia da e selezionare la serie di studio/dal disco rigido a importare una studio/serie nel software.</li>
	<li>Analizzare i dati con il software.</li>
</ol>

<ol><li>Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/abstract/10.1055/s-0032-1312759">Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren?</a> Ultraschall in der Medizin. 33 (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).</li>
<li>Jones, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echolocation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Echolocation.</a> Current Biology. 15 (13), R484-R488 (2005).</li>
<li>Simmons, J. A. <a target="_blank" href="https://nyaspubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/j.1749-6632.1971.tb13095.x">The sonar receiver of the bat.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).</li>
<li>Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-dependent+modulation+of+ultrasonic+vocalizations+in+house+mice+%28Mus+musculus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+ONE%22%5BJournal%5D)">Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus).</a> Public Library of Science ONE. 12 (12), e0188647(2017).</li>
<li>Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+Socio-Affective+Communication+in+Rats+through+Playback+of+Ultrasonic+Vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations.</a> Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).</li>
<li>Hasiniaina, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+frequency%2Fultrasonic+communication+in+a+critically+endangered+nocturnal+primate%2C+Claire%27s+mouse+lemur+%28Microcebus+mamiratra%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra).</a> American Journal of Primatology. , e22866(2018).</li>
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<li>Blank, W., Schuler, A. <a target="_blank" href="https://econtent.hogrefe.com/doi/full/10.1024/1661-8157/a002703">Sonografie der Schilddrüse - Update 2017.</a> Praxis. 106 (12), 631-640 (2017).</li>
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<li>Older, R. A., Watson, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+anatomy+of+the+normal+male+reproductive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Ultrasound%22%5BJournal%5D)">Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract.</a> Journal of Clinical Ultrasound. 24 (8), 389-404 (1996).</li>
<li>Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transrectal+real-time+ultrasound+scanning+of+the+cow+reproductive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract.</a> Theriogenology. 21 (3), 485-494 (1984).</li>
<li>Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+gall+bladder+by+endoscopic+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10 (1), 10-15 (2018).</li>
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<li>Shirinifard, A., Thiagarajan, S., Johnson, M. D., Calabrese, C., Sablauer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Absolute+Blood+Perfusion+in+Mice+Using+Dynamic+Contrast-Enhanced+Ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring Absolute Blood Perfusion in Mice Using Dynamic Contrast-Enhanced Ultrasound.</a> Ultrasound in Medicine & Biology. 43 (8), 1628-1638 (2017).</li>
<li>Quaia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+tissue+perfusion+by+contrast-enhanced+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22European+Radiology%22%5BJournal%5D)">Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound.</a> European Radiology. 21 (3), 604-615 (2011).</li>
<li>Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+hemodynamic+wall+shear+stresses+in+human+umbilical+vessels+from+normal+and+intrauterine+growth+restricted+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. , (2018).</li>
<li>Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+growth+restriction+is+associated+with+prioritization+of+umbilical+blood+flow+to+the+left+hepatic+lobe+at+the+expense+of+the+right+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe.</a> Pediatric Research. 66 (1), 113-117 (2009).</li>
<li>Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+blood+flow+in+pregnancies+complicated+by+intrauterine+growth+retardation%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation.</a> Obstetrics and Gynecology. 69 (6), 895-902 (1987).</li>
<li>Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+blood+flow+velocity+waveforms+as+predictors+of+growth+retardation%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation.</a> Obstetrics and Gynecology. 70 (1), 7-10 (1987).</li>
<li>Meyer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chymase-producing+cells+of+the+innate+immune+system+are+required+for+decidual+vascular+remodeling+and+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth.</a> Scientific Reports. 7, 45106(2017).</li>
<li>Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Ablation+of+Uterine+Natural+Killer+Cells+and+Uterine+Mast+Cells+in+Mice+Leads+to+Poor+Vascularization+and+Abnormal+Doppler+Measurements+That+Compromise+Fetal+Well-being%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1913(2017).</li>
<li>Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+color+Doppler+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Interface+Focus%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic color Doppler imaging.</a> Interface Focus. 1 (4), 490-502 (2011).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Utilizzando il nostro sistema di ultrasuono, abbiamo dimostrato la restrizione della crescita fetale nelle madri MC/NK-carenti da gd10 su. Inoltre, a gd10 e 12, abbiamo osservato ridotte dimensioni placentari e alle gd14 l'assenza o la reversione del flusso diastolico fine in UmAs di alcuni feti dei topi uMC/uNK-carenti. Questo segno di scarsa vascolarizzazione è stato associato con un indice di resistenza significativa delle arterie che indica IUGR. Risultati confermano il ruolo importante di uMCs e uNKs in gravidanza e...

L'ultrasuono è le onde sonore con frequenze di sopra della gamma udibile dell'orecchio umano, superiore a circa 20 kHz1. Animali come i pipistrelli, Galles, delfini2,3,4di topi, ratti5e mouse lemuri6 tutti utilizzare gli ultrasuoni per orientamento o comunicazione. Gli esseri umani prendono vantaggio degli ultrasuoni per diverse applicazioni tecniche e mediche. Un apparecchio a ultrasuoni è in grado di creare l'onda sonora e distribuire e rappresentano il segnale. Se l'ultrasuono incontra un ostacolo, il suono si riflette, assorbito o può passare attraverso di essa. L'applicazione degli ultrasuoni come un metodo di imaging, chiamato l'ecografia, viene utilizzato per l'analisi dei tessuti organici in medicina umana o veterinaria come il cuore (ecocardiografia)7,8, polmone9, ghiandola tiroide10 , reni11e urinario e riproduttivo12,13; rilevamento di calcoli biliari14 e tumori15; e la valutazione di aspersione di vasi sanguigni o organi16,17. Ultrasuono è un metodo standard di cura prenatale durante la gravidanza e disabilità dello sviluppo fetale o i danni possono essere riconosciuti presto. In particolare, la crescita di un feto è strettamente monitorata ad intervalli regolari per riconoscere un possibile IUGR. Infine, il flusso di sangue fetale possa essere monitorato, come questo può sottolineare la crescita restrizioni18,19,20,21.
Un vantaggio importante di formazione immagine di ultrasuono rispetto ad altri metodi come la radiografia è innocuità del suono dei tessuti da analizzare. Questo metodo facile e veloce è non invasiva, indolore e può essere utilizzato un numero di volte. L'esborso iniziale di un apparecchio a ultrasuoni è costoso; Tuttavia, i materiali di consumo necessari sono a buon mercati. Il sistema a ultrasuoni utilizzato in questo manoscritto è adatto per una gamma di modelli animali (cioè, topi e pesce) mentre per gli esseri umani un apparecchio a ultrasuoni richiede una frequenza di 3-15 mHz, una frequenza di 15-70 mHz è richiesta per i topi.
Il presente manoscritto descrive un protocollo per l'utilizzo di B-mode, modo di doppler di colore e modo di doppler di onda di impulso. La descrizione comprende la preparazione dei topi come pure prestazioni, acquisizione dati e archiviazione. Questo metodo è stato ceppi murini applicata con successo per diversi giorni a tutti gestazionale e può essere utilizzato per indagare lo sviluppo fetale e placenta così come i parametri del sangue materno e fetale. Qui, tutte le applicazioni sono spiegate basata sui nostri studi che impiegano incinto topi MC/NK-carenti e controllo.

<table><tbody><tr><td>FOGLIA anti-Maus CD122 (IL-2Rb)</td><td>BioLegend</td><td>123204</td><td>Klon TM-&beta; 1; 500 & micro; g</td></tr><tr><td>Sistema Vevo 2100</td><td>&nbsp; FujiFilm VisualSonics Inc.</td><td></td><td>Trasduttore&nbsp; MS550D-0421</td></tr><tr><td>Vevo LAB Software</td><td>&nbsp; FujiFilm VisualSonics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Baxter</td><td>PZN: 6497131</td><td></td></tr><tr><td>Gel per elettrodi</td><td>Parker</td><td>12_8</td><td></td></tr><tr><td>Nastro chirurgico</td><td>3M Transpore</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>Crema per gli occhi</td><td>Bayer</td><td>PZN: 1578675</td><td></td></tr><tr><td>Applicatori con punta in cotone</td><td>Raucotupf</td><td>11969</td><td>100 pezzi</td></tr><tr><td>Crema depilatoria</td><td>Reckitt Benckiser</td><td></td><td></td>2077626</tr><tr><td>Compresse</td><td>Nobamed Paul Danz AG</td><td>856110</td><td>10 x 10 cm</td></tr><tr><td>Gel per ultrasuoni</td><td>Gello GmbH</td><td>246000</td><td></td></tr></tbody></table>

ultrasuono ad alta frequenza per l'analisi dello sviluppo fetale e placentare in vivo

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Formazione immagine di ultrasuono è un metodo diffuso usato per rilevare anomalie organo e tumori in tessuti umani e animali. Il metodo è non invasiva, innocua e indolore, e l'applicazione è facile, veloce e può essere fatto ovunque, anche con dispositivi mobili. Durante la gravidanza, l'imaging ad ultrasuoni come standard viene utilizzato per monitorare attentamente lo sviluppo del feto. La tecnica è importante valutare la restrizione della crescita intrauterina (IUGR), una complicazione della gravidanza con breve e lungo termine conseguenze di salute per la madre ed il feto. Comprensione del processo di IUGR è indispensabile per lo sviluppo di strategie terapeutiche efficaci.
Il sistema a ultrasuoni utilizzato in questo manoscritto è un apparecchio a ultrasuoni prodotto per l'analisi di piccoli animali e può essere utilizzato in vari campi di ricerca, compresa la ricerca di gravidanza. Qui descriviamo l'utilizzo del sistema per l'analisi in vivo dei feti da natural killer (NK) delle cellule/delle cellule di albero (MC)-carenti le madri che partoriscono cuccioli crescita-limitata. Il protocollo comprende la preparazione del sistema, manipolazione dei topi prima e durante le misurazioni e l'utilizzo di B-mode, doppler modalità colore e modo di doppler di onda di impulso. Dimensione fetale, placentare e rifornimento di sangue al feto sono stati analizzati. Abbiamo trovato l'impianto ridotte dimensioni e più piccole placente in topi NK/MC-carenti da metà gestazione in poi. Inoltre, MC/NK-carenza è stata associata all'assenza e invertito il flusso diastolico fine il fetale umbilicalis di Arteria(UmA) e un indice di elevata resistenza. I metodi descritti nel protocollo possono essere utilizzati facilmente per argomenti di ricerca correlati e non correlati.

Singoli componenti del sistema ad ultrasuoni utilizzati in questo manoscritto sono mostrati nella Figura 1. La figura 2 Mostra rappresentante immagini ecografiche acquisite in B-mode a gd5, 8, 10 e 12 (B) e misura di zona corrispondente impianto risultati (A), dimostrando una zona significativa riduzione impianto di anti-CD122-trattati Cpa3Cre / + topi da gd10 in poi.
<p class="jov...

Qui descriviamo la tecnica degli ultrasuoni ad alta frequenza per l'analisi in vivo dei feti in topi. Questo metodo consente il follow-up dei feti e l'analisi dei parametri placentari come pure il flusso di sangue materno e fetale durante la gravidanza.

Ultrasuono ad alta frequenza per l'analisi dello sviluppo fetale e placentare In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Questo metodo è molto importante per rispondere a domande chiave nei settori dell'oncologia, della neuro-biologia, della cardiologia e dello sviluppo fetale, e naturalmente è anche importante nell'area della ricerca riproduttiva. I principali vantaggi di questa tecnica sono che non è invasiva, indolore, facile, veloce e consente il follow-up dei feti nei punti di tempo gestazionali rilevanti durante la gravidanza. Almeno mezz'ora prima della procedura di imaging, accendere il sistema ad ultrasuoni, la piattaforma riscaldata e lo scalda gel.Aprire un nuovo studio o una nuova serie in uno studio esistente nel browser. Immettere tutte le informazioni richieste nella finestra delle informazioni di studio. Fare clic su OK e verificare che venga visualizzata la finestra di imaging in modalità B.Quando l'ecografia è pronta, confermare la mancanza di risposta al dito del dito in un topo anestetizzato e applicare un unguento agli occhi dell'animale. Posizionare una goccia di elettro gel su ciascuna delle 4 sezioni di rame della piattaforma riscaldata e fissare le zampe alle sezioni rivestite di gel elettrico della piattaforma. Rimuovere i capelli dall'addome dell'animale con crema depilatoria e un batuffolo di cotone, lavando la crema dalla pelle depilata dopo un minuto con un impacco imbevuto d'acqua.Quindi applicare il gel ad ultrasuoni preri riscaldato sull'area esposta. Una delle ragioni della bassa intensità del segnale può essere la bassa quantità di gel posta tra il mouse e il fascio ultrasonico. Nella nostra esperienza, una quantità piuttosto grande di gel è necessaria per una buona qualità del segnale.Quando l'animale è pronto, posizionare il trasduttore sopra la vescica per utilizzarlo come punto di riferimento e spostare il tavolo della piattaforma di riscaldamento ai lati sinistro e destro dell'addome per tracciare gli impianti fetali in modalità B 2D, regolando il trasduttore o la piattaforma se necessario fino a quando il primo impianto non è visibile sullo schermo, alle sue dimensioni più grandi. Selezionare Etichetta immagine e immettere un nome per il file di immagine. Regolare la posizione dell'immagine, fino a quando il flusso sanguigno all'interno dell'arteria ombelicale della placenta è in vista, e conservare un singolo fotogramma o cineloop per misurazioni placentari.Affinché l'imaging Doppler a colori determini la direzione del flusso sanguigno, premere il pulsante Colore e utilizzare la trackball per spostare la casella di colore nella posizione appropriata, facendo clic su Aggiorna per regolare le dimensioni della scatola in base alle esigenze. Quando la casella ha le dimensioni corrette, fare clic su Seleziona e archiviare l'immagine come appropriata in modo sperimentale. Per la quantificazione doppler dell'onda pulsata del flusso sanguigno attraverso i vasi, individuare la regione di interesse nella modalità di acquisizione Doppler del colore e fare clic su Pulse Wave.Apparirà una linea tratteggiata. Spostare la linea sul vaso sanguigno di interesse e utilizzare la manopola dell'angolo Doppler per regolare l'angolo della linea per allinearlo al flusso sanguigno. Per le misurazioni Doppler ad onda pulsata, è importante guardare l'angolo tra la direzione del flusso sanguigno e il fascio ultrasonico.Angoli troppo alti o angoli diversi tra gli animali nello stesso esperimento possono portare a misurazioni imprecise della velocità. Quindi, fate clic su Aggiorna (Update) e memorizzate il cineloop delle linee Doppler visualizzate nella finestra di acquisizione Doppler ad onda pulsata. Per esaminare i dati, fare clic su Gestione studi, scorrere fino all'immagine di anteprima di interesse e fare doppio clic su Aggiorna, quindi di nuovo su Gestione studi e quindi su Chiudi per chiudere la finestra del browser per completare l'acquisizione dei dati e salvare una serie registrata.Per esportare i dati, connettere un disco rigido, fare clic su Esporta in, per contrassegnare una o più serie di dati e selezionare lo spazio di archiviazione per copiare i dati sul disco rigido. Qui vengono mostrate immagini ecografiche rappresentative acquisite in modalità B nei giorni gestazionali 5, 8, 10 e 12 e i corrispondenti risultati di misurazione dell'area di impianto, rivelando una significativa riduzione dell'area di impianto nei topi anti-CD122 trattati carenti di mast cellulari dal giorno gestazionale 10 in poi. L'imaging in modalità B facilita l'imaging e la misurazione di singole parti di un impianto.Ad esempio, gli animali carenti di mast-cell trattati anti-CD122 dimostrano una significativa riduzione dell'area placentare, dello spessore e del diametro rispetto ai topi non trattati nei giorni gestazionali 10 e 12. Al contrario, l'area placentare e il diametro sono simili tra i gruppi al giorno gestazionale 14 e lo spessore placentare, un aumento significativo degli animali transgenici trattati anti-CD122 rispetto ai topi non trattati nel giorno gestazionale 14. L'imaging Doppler ad onda pulsata dell'arteria uterina per la misurazione della velocità sistolica di picco e della velocità diastolica, e l'indice di resistenza calcolato, rivelano valori simili tra gli animali trattati e non trattati.L'indice di resistenza dell'arteria ombelicale negli animali carenti di masto cell trattati anti-CD122, tuttavia, è significativamente aumentato rispetto ai topi non trattati. Durante il tentativo di questa procedura, è importante tenere a mente che dovresti farlo a giorni diversi da ogni giorno, per evitare lo stress e il rischio di narcotizzazione ripetitiva degli animali. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altre misurazioni, come la misurazione 3D, la visualizzazione e la quantificazione del movimento dei tessuti nel tempo, misurazioni della pressione sanguigna e anche iniezioni guidate da ultrasuoni.Dopo il suo sviluppo, questo metodo ha spianato la strada a medici e ricercatori nell'area dell'assistenza ostetrica e prenatale, perché è possibile seguire lo sviluppo fetale e riconoscere possibili anomalie durante la gravidanza.

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

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