Costruzione di un foglio di multistrato delle cellule staminali mesenchimali con un sistema di cultura dinamica 3D

La terapia con cellule staminali è stata ampiamente segnalata come un trattamento promettente per molte malattie. E le tecniche delle schede cellulari sono state sviluppate per migliorare la ritenzione della cellula e la sopravvivenza anche all'interno degli obiettivi. Durante la costruzione dei fogli cellulari, l'insufficiente apporto nutrizionale rimane un problema chiave per la perdita della funzione delle cellule staminali ed è una proprietà insoddisfacente delle cellule staminali che finalmente in effettirebbe gli effetti terapeutici in vivo.

Il nostro scopo di preparare il prodotto disponibile in lamiera di cellule staminali multistrato, il nostro team ha sviluppato l'impalcatura a pali, pericardio e lamiera cellulare cellularizzata. Sulla base dell'impalcatura, l'avviamento delle cellule multistrato sarebbe rapidamente costruito con idrogeno nonapeptide e viene utilizzato un sistema di perfusione dinamica per garantire l'alimentazione della cellula staminale in vitro. Eseni un'impalcatura DBP essiccata e mettila al centro della base nera.

Mettere un anello di tensione bianco sull'impalcatura DBP e apporrlo nel portapassutale. Assicurarsi che l'impalcatura DBP sia totalmente fissata nel portapassutale. Aggiungere 100 mezzi di coltura di microlitri sull'impalcatura DBP.

Mettere l'impalcatura nell'incubatore di 37 gradi Celsius e lasciare in ammollo per 15 minuti. Togliere le cellule dall'incubatrice, rimuovere i mezzi di coltura dal piatto di coltura, lavare delicatamente le cellule con due millilitri di PBS caldo. Rimuovere tutto il PBS dal piatto di coltura e assicurarsi che non rimanga liquido.

Aggiungere due millilitri alla soluzione di tripside all'1,25% al piatto e incubare le cellule per tre minuti. Interrompere l'effetto tripina aggiungendo due mezzi di coltura millilitri. Lavare delicatamente le cellule dal piatto.

Trasferire le sospensioni cellulari in un nuovo tubo centrifugo da 15 millilitri. Centrifugate le cellule a 220 volte la gravità per cinque minuti, e ottenete sedimenti cellulari. Rimuovere il supernatante e spazzare via il sedimento cellulare.

Sospendere di nuovo le cellule con una soluzione di saccarosio al 10% da tre millilitri. Aspira la sospensione cellulare di 10 microlitri e il numero di cella del contenuto legge un emocitometro, estrae tre milioni di cellule e trasferisce nel nuovo tubo centrifugo da 1,5 millilitri. Centrifugare le cellule a 220 volte la radice quadrata per cinque minuti, rimuovere completamente i supernatanti e ottenere il sedimento cellulare.

Preparare 20 microlitri soluzione di saccarosio al 10%. Sospendere delicatamente le cellule e ottenere una sospensione uniforme. Aggiungere 20 microliter peptide hydro gel nella parte superiore della sospensione mescolare delicatamente il peptide hydro gel, e le cellule sospensione con la T, esettare l'impalcatura DBP, lasciando il portapatico, quindi aspirare delicatamente la mediana dei calcoli con una T.Aspirare la miscela la miscela e aggiungere uniformemente all'impalcatura DBP.

Aggiungere un millilitro calciedetato sul fondo del portavimenta. Aggiungere delicatamente quattro millilitri nel piatto di coltura e quindi emergere il foglio cellulare. Metti le cellule nell'incubatrice per due ore lasciache la coltura.

Il sistema dinamico di perfusione comprende un contenitore di coltura perfusione che scambia gas e una bottiglia di vetro. Gli assemblamenti sono sistemi di perfusione dinamici come mostrato nella figura. Aggiungere due mezzine di coltura idro millilitri nella bottiglia di vetro.

Inserire il foglio cellulare nella camera del contenitore di coltura, aggiungere tre mediane di coltura millilitri nel contenitore, inserire i sistemi di perfusione dinamica negli incubatori e iniziare a pompare. Aprire il contenitore delle impostazioni cultura nel reclinato bipositivo. Estraete il foglio cellulare dal contenitore della coltura e mettetelo nel piatto della coltura.

Utilizzare una forza per immobilizzare il porta tessuto e utilizzare altre due forcep per separare l'anello di tensione bianco dalla base nera. Infine, ottenere il foglio cellulare multistrato. L'impalcatura DBP è trasparente.

Le rivendite SEM mostrano che i college catturati e i componenti sono completamente riservati. I fogli cellulari possono essere ottenuti e tenuti da forcep per una breve conservazione. Questi fogli cellulari potrebbero essere trasferiti in un tubo cilindriforme da 1,5 millilitri.

Come modello ad esempio a partire dalle dimostrazione cellulari di BMFC altamente positivo per il marcatore delle cellule staminali CD 9O e CD 29. Dopo la costruzione della cella, il BMFC'S che esce dal foglio cellulare rimane ad alti livelli di espansione del CD 90 e del CD 29. La costruzione della struttura cellulare a più tipi è il passaggio critico del protocollo.

Il tempo di pan richiede quattro gel idro quando il valore ph cambia da SA a neutro, quindi, è importante lavare la cella con soluzione di saccarosio per rimuovere gli ioni superficiali. Inoltre, il rapporto volume della sospensione cellulare e del panthihydrogel non è un buon amico per la costruzione della struttura temporanea multistrato. Dopo la formazione della struttura delle cellule staminali 3D, vedrai che il sistema di perfusione dinamica è importante per stabilizzare la struttura multistrato e mantenere le viabilità delle cellule staminali.

L'infiltrazione dinamica della mediana di coltura potrebbe facilitare le cellule staminali a proliferare ed estrapolare il contesto cellulare all'interno della struttura multistrato anche i termometri a coltura dinamica dovrebbero essere regolati in base ai diversi tipi di cellule staminali.