Name: Nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con Polyethyleneimine come un veicolo per la consegna di piccolo RNA interferente ai macrofagi In Vitro e In Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Scopri come trasfettare macrofagi con nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con PEI per la consegna di siRNA. Questo metodo consente il silenziamento genico efficace in vitro e in vivo per applicazioni terapeutiche.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato supportato dal National Natural Science Foundation of China (81772308) e nazionali chiave di ricerca e sviluppo programma della Cina (n. 2017YFA0205502).

Tutti i metodi che coinvolgono animali vivi sono stati eseguiti in conformità con l'animale con cautela e linee guida di Southeast University, Cina.
1. preparazione del PEI-SPIONs
<ol><li>
Preparazione dell'acido oleico-modificato SPIONs
	<ol>
<li>Sciogliere FeCl3•6H2O e FeSO4•7H2, O nell'acqua sotto la protezione di N2.<ol>
<li>Aggiungere 28 g di FeCl3•6H2O e 20 g di FeSO4•7H2O in 80 mL di acqua deionizzata in un becher. Introdurre l'acqua attraverso una condotta di vetro N2 e mescolare fino a sciolta la materia solida.</li>
			<li>Riscaldare la miscela di reazione a 72 ° C ad una velocità di agitazione di 800 giri/min, seguita dalla aggiunta di 40 mL di acqua ammoniacale (28%). Mescolare per 5 min.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Aggiungere goccia a goccia 9 mL di acido oleico nella soluzione di cui sopra e mescolate a 72 ° C per 3 h.</li>
		<li>Raffreddare la soluzione risultante a temperatura ambiente (TA). Precipitare la soluzione tramite separazione magnetica.</li>
		<li>Lavare il precipitato contenente SPIONs 3 x con alcool etilico assoluto e, quindi, disperdere il precipitato in 100 mL di N-esano.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparazione di dimercaptosuccinic acido-modificati SPIONs
	<ol>
<li>Aggiungere 800 mg di acido oleico (OA)-modificato SPIONs distribuiti in 200 mL di N-esano, e 400 mg di acido dimercaptosuccinic (DMSA) dispersi in 200 mL di acetone, in un pallone a tre colli in un bagno di acqua a 60 ° C. Nota: Per determinare la concentrazione di OA-modificato SPION ottenuti nel passaggio precedente, prendere un piccolo volume (ad es. 1 mL) della dispersione SPION, volatilizzare il N-esano e pesare la polvere risultante.</li>
		<li>Aggiungere 200 µ l di trietilammina goccia a goccia nella soluzione di cui sopra con agitazione a 1.000 giri/min e riflusso.</li>
		<li>Dopo 5 h di agitazione e di riflusso, è possibile ottenere un precipitato nero di separazione magnetica.</li>
		<li>Regolando il pH della soluzione con idrossido di tetrametilammonio si disperdono in modo omogeneo la SPIONs idrofile in acqua deionizzata.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparazione di PEI-SPIONs
	<ol>
<li>Aggiungere goccia a goccia soluzione colloidale SPION DMSA-modificato nella soluzione di PEI (10 kDa) in un matraccio da tre colli di 500 mL sotto agitazione meccanica a 1.000 giri/min per 2h (WFe: WPEI = 1:3). Nota: Il costo e le dimensioni di PEI-SPIONs variano a seconda della percentuale di WFe a WPEI. Il WFe: WPEI rapporto di 1:3 può essere un buon punto di partenza per la sintetizzazione PEI-SPIONs adatto per la consegna di siRNA.</li>
		<li>Aggiungere la soluzione risultante in una provetta di ultrafiltrazione avendo un peso molecolare di taglio di 100 kDa e un contenuto di 15 mL; quindi, centrifugare a 5.400 x g per 10 min fino a quando la soluzione rimanente è di 1 mL. Aggiungere acqua deionizzata alla soluzione per rendere il volume 15ml nuovamente e ripetere la procedura sopra 10 x per ottenere il prodotto finale. Quindi, filtrare la soluzione attraverso un filtro di 0,22 μm e conservare il prodotto finale a 4 ° C.</li>
		<li>Determinare la concentrazione di Fe di PEI-SPIONs con il metodo colorimetrico utilizzando fenantrolina17. PEI-SPIONs di diluire con acqua deionizzata sterile ad una concentrazione di 1 mg Fe/mL e conservarla a 4 ° C.</li>
		<li>Diluire 10 μL della soluzione di PEI-SPION (1 mg Fe/mL) a 1 mL con acqua deionizzata; quindi, verificare le dimensioni idrodinamico e potenziale zeta da un dispositivo dinamico di luce-dispersione. Nota: Preparare il PEI-SPIONs nella gamma di circa 30-50 nm. In questo intervallo di grandezza, l'effetto della dimensione del NP sull'associazione di siRNA e l'assorbimento cellulare non sembra essere significativo. PEI-SPIONs cuscinetto un potenziale zeta media oltre + 37 mV può essere tossico nell'intervallo delle dosi per la transfezione, e dovrebbe essere effettuata un'analisi di citotossicità per garantire la sicurezza. La carica superficiale e idrodinamica dimensioni delle nanoparticelle possono essere controllati all'interno di un intervallo desiderato regolando la percentuale di PEI.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. preparazione ed elettroforesi del Gel dell'agarosi di PEI-SPION/siRNA NPs
<ol><li>SiRNA diluito con acqua priva di RNAsi per ottenere una concentrazione finale di 20 μM (0,26 μg/μL).</li>
	<li>Preparare le provette microcentrifuga RNAsi-libera cinque etichettati 0, 1, 2, 4 e 8. Le etichette rappresentano rapporti di peso diverso Fe: siRNA. Dispensare 3 μL di soluzione di siRNA a tutte le provette (~0.8 μg di siRNA/tubo).</li>
	<li>Aggiungere 0, 0.8, 1.6, 3.2, e 6,4 μg di Fe sottoforma di PEI-SPIONs ai tubi etichettati 0, 1, 2, 4 e 8, rispettivamente. Tenere il volume totale del campione di ogni tubo meno di 20 μL. Mescolare pipettando delicatamente su e giù.</li>
	<li>Incubare le miscele a temperatura ambiente per 30 minuti per permettere la formazione di complessi di PEI-SPION/siRNA. Durante questo periodo, fare un 3% di agarosio gel con elevata purezza dell'agarosi. Nota: Ulteriori PEI-SPION/siRNA complessi con altri rapporti di Fe: siRNA (ad esempio, 5 o 6) possono essere preparati e testati.</li>
	<li>Aggiungere 1 μL di tampone di DNA-caricamento a 5 μL di campione: 6x e mescolare con cautela. Caricare tutti i campioni ed eseguire l'elettroforesi a 5 V/cm fino a quando il blu di bromofenolo migra fino a due terzi della lunghezza del gel. Macchia il gel con bromuro di etidio (EB) per 15-20 min. Nota: Il tampone di elettroforesi preparati al momento e la soluzione EB deve essere utilizzati.</li>
	<li>Visualizzate le fasce di siRNA sotto un UV sistema di imaging. Controllare i rapporti di Fe: siRNA a quali complessi di forme di siRNA con PEI-SPIONs e, di conseguenza, le bande che rappresentano gratis siRNA sono ritardati o non rilevabili.</li>
</ol>3. la transfezione di macrofagi RAW 264.7 In Vitro
<ol><li>Macrofago-come le cellule RAW 264.7 di cultura del mouse in un piatto di 10 cm utilizzando DMEM completano Media contenente 10% siero bovino fetale (FBS) a 100 U/mL di penicillina per 100 μg/mL streptomicina a 37 ° C in un incubatore di 5% CO2 .</li>
	<li>Un giorno prima la transfezione, aspirare medio dalle cellule e risciacquarli con soluzione tampone fosfato (pH 7,4). Aggiungere 1 mL di tripsina 0,25% per il piatto di 10 cm. Tripsinizzano RAW 264.7 celle per circa 5-10 min a 37 ° C in un incubatore di 5% CO2 .</li>
	<li>Quando la maggior parte delle cellule hanno staccato (dopo 5-10 min), aggiungere 5 mL di terreno completo DMEM al piatto per inattivare la tripsina. Dispensare su e giù per disperdere i mazzi delle cellule in cellule singole.</li>
	<li>Trasferire la sospensione cellulare in una provetta conica sterile di 15 mL. Centrifugare a 300 x g per 3 min a RT. rimuovere il surnatante.</li>
	<li>Risospendere le cellule con 5 mL di terreno completo nuovo DMEM e contare le celle.</li>
	<li>Cellule di4 piastra 9 x 10 per bene in una piastra a 6 pozzetti con 2 mL di terreno DMEM completo e incubare a 37 ° C in un incubatore di 5% CO2 per circa 24 h. Nota: Se si utilizza una piastra di dimensioni diverse, regolare la densità cellulare placcato proporzionale alla relativa superficie affinché le cellule raggiungere confluency di 80% al momento della trasfezione.</li>
	<li>Quando confluency di cella è 80%, rimuovere il supporto dalle cellule e sostituirlo con 1 mL di terreno completo DMEM per pozzetto. Restituire la piastra nell'incubatore fino a PEI-SPION/siRNA complessi sono stati preparati e sono pronti all'uso (circa 30 min).</li>
	<li>Preparare il PEI-SPION/siRNA complessi: calcolare la quantità di complessi di PEI-SPION/siRNA necessario per un esperimento di transfezione. In un tubo del microcentrifuge RNAsi-libera 1,5 mL, mescolare una quantità appropriata di PEI-SPIONs con siRNA un rapporto determinato Fe: siRNA. Per esempio, per preparare il PEI-SPION/siRNA NPs contenente 100 µ g di Fe con un rapporto di Fe: siRNA di 4, aggiungere 100 µ l (1 mg Fe/mL) di PEI-SPIONs a 96 μL di siRNA (0,26 μg/μL), seguita da mescolando delicatamente con una micropipetta. Incubare per 30 minuti a TA. Nota: Preparare un volume di PEI-SPION/siRNA complesso che è 10% oltre la massa totale finale per tenere conto di eventuali perdite accidentali. Fare PEI-SPION/siRNA complessi rapporti di bassa Fe: siRNA, sotto il quale molecole di siRNA sono completamente caricati su PEI-SPIONs e, quindi, piccole quantità di PEI-SPIONs può essere utilizzato per ridurre al minimo il potenziale citotossicità. Esperimenti pilota (analisi di ritardo del gel) per l'ottimizzazione del rapporto Fe: siRNA sono necessari.</li>
	<li>Prendere la piastra 6 pozzetti dall'incubatrice (punto 3.7). Aggiungere un volume richiesto di PEI-SPION/siRNA complesso goccia a goccia in ciascun pozzetto e agitare la piastra con cautela per garantire una distribuzione uniforme. Riporre la piastra nell'incubatore fino alla valutazione del cellulare assorbimento o gene atterramento efficienza (d 1-3). Nota: Macrofagi trasfezione con siRNA/PEI-SPION ad una concentrazione di ~ 15 μg Fe/mL possono massimizzare efficienza di trasfezione riducendo potenziali citotossicità.</li>
</ol>4. consegna sistemica di siRNA ai macrofagi nei ratti con artrite sperimentale
<ol><li>Ottenere specifiche di Wistar maschio esenti da patogeni che sono vecchio 7 settimane. Habituate i ratti per 7 d prima dell'uso e di fornire loro con acqua e cibo adeguato. Indurre l'artrite ausiliaria (AA) nei ratti come descritto in precedenza18.</li>
	<li>Preparare il PEI-SPION/siRNA complessi come descritto al punto 3.8.</li>
	<li>Iniettare il NPs PEI-SPION/siRNA (0,3 mg di siRNA/kg) nell'AA ratti tramite vena caudale. Valutare l'assorbimento cellulare tramite, per esempio, citometria a flusso, tessuto biodistribuzione tramite, per esempio, una fluorescenza in tempo reale sistema di imaging o effetti terapeutici sulla base, per esempio, clinici, istologici e radiografici 18punti di analisi all'orario desiderato. Nota: Per gli studi di biodistribuzione cellulari e tissutali, trattare i ratti con una singola iniezione di NPs desiderata; per gli studi terapeutici, iniettare i ratti con NPs per essere testato 1 volta a settimana per tre settimane consecutive.</li>
</ol>

<ol><li>Murray, P. J., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+and+pathogenic+functions+of+macrophage+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protective and pathogenic functions of macrophage subsets.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (11), 723(2011).</li>
<li>Maeß, M. B., Wittig, B., Lorkowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+transfection+of+human+THP-1+macrophages+by+nucleofection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Highly efficient transfection of human THP-1 macrophages by nucleofection.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51960(2014).</li>
<li>Zhang, X., Edwards, J. P., Mosser, D. M. The Expression of Exogenous Genes in Macrophages: Obstacles and Opportunities. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+X+%22Macrophages+and+Dendritic+Cells%22">Macrophages and Dendritic Cells</a>. , Springer. 123-143 (2009).</li>
<li>Zhang, M., Gao, Y., Caja, K., Zhao, B., Kim, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-viral+nanoparticle+delivers+small+interfering+RNA+to+macrophages+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Non-viral nanoparticle delivers small interfering RNA to macrophages in vitro and in vivo.</a> PLoS ONE. 10 (3), e0118472(2015).</li>
<li>Davignon, J. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+monocytes%2Fmacrophages+in+the+treatment+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Targeting monocytes/macrophages in the treatment of rheumatoid arthritis.</a> Rheumatology. 52 (4), 590-598 (2012).</li>
<li>Brown, J. M., Recht, L., Strober, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+targeting+macrophages+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The promise of targeting macrophages in cancer therapy.</a> Clinical Cancer Research. 23 (13), 3241-3250 (2017).</li>
<li>Karunakaran, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+macrophage+necroptosis+for+therapeutic+and+diagnostic+interventions+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Targeting macrophage necroptosis for therapeutic and diagnostic interventions in atherosclerosis.</a> Science Advances. 2 (7), e1600224(2016).</li>
<li>Prosperi, D., Colombo, M., Zanoni, I., Granucci, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+nanocarriers+to+treat+autoimmunity+and+chronis+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Drug nanocarriers to treat autoimmunity and chronis inflammatory diseases.</a> Seminars in Immunology. 34, 61-67 (2017).</li>
<li>Höbel, S., Aigner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethylenimines+for+siRNA+and+miRNA+delivery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews%3A+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Polyethylenimines for siRNA and miRNA delivery in vivo.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (5), 484-501 (2013).</li>
<li>Whitehead, K. A., Langer, R., Anderson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knocking+down+barriers%3A+advances+in+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Knocking down barriers: advances in siRNA delivery.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 8 (2), 129(2009).</li>
<li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Alkyl-PEI-functionalized+iron+oxide+nanoclusters+for+efficient+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">N-Alkyl-PEI-functionalized iron oxide nanoclusters for efficient siRNA delivery.</a> Small. 7 (19), 2742-2749 (2011).</li>
<li>Weissleder, R., Nahrendorf, M., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+macrophages+with+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Materials%22%5BJournal%5D)">Imaging macrophages with nanoparticles.</a> Nature Materials. 13 (2), 125(2014).</li>
<li>Magro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Covalently+bound+DNA+on+naked+iron+oxide+nanoparticles%3A+Intelligent+colloidal+nano-vector+for+cell+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29-General+Subjects%22%5BJournal%5D)">Covalently bound DNA on naked iron oxide nanoparticles: Intelligent colloidal nano-vector for cell transfection.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 1861 (11), 2802-2810 (2017).</li>
<li>Abdelrahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((siRNA+delivery+system+based+on+magnetic+nanovectors%3A+Characterization+and+stability+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">siRNA delivery system based on magnetic nanovectors: Characterization and stability evaluation.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 106, 287-293 (2017).</li>
<li>Zhang, H., Lee, M. -Y., Hogg, M. G., Dordick, J. S., Sharfstein, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+in+three-dimensional+cell+cultures+by+superparamagnetic+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Gene delivery in three-dimensional cell cultures by superparamagnetic nanoparticles.</a> ACS Nano. 4 (8), 4733-4743 (2010).</li>
<li>Moghimi, S. M., Hunter, A. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-circulating+and+target-specific+nanoparticles%3A+theory+to+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice.</a> Pharmacological Reviews. 53 (2), 283-318 (2001).</li>
<li>Harvey, A. E. Jr, Smart, J. A., Amis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+spectrophotometric+determination+of+iron+%28II%29+and+total+iron+with+1%2C+10-phenanthroline%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Simultaneous spectrophotometric determination of iron (II) and total iron with 1, 10-phenanthroline.</a> Analytical Chemistry. 27 (1), 26-29 (1955).</li>
<li>Duan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethyleneimine-functionalized+iron+oxide+nanoparticles+for+systemic+siRNA+delivery+in+experimental+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Polyethyleneimine-functionalized iron oxide nanoparticles for systemic siRNA delivery in experimental arthritis.</a> Nanomedicine. 9 (6), 789-801 (2014).</li>
<li>Fröhlich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+surface+charge+in+cellular+uptake+and+cytotoxicity+of+medical+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The role of surface charge in cellular uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 5577(2012).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-small+particles+of+iron+oxide+as+peroxidase+for+immunohistochemical+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Ultra-small particles of iron oxide as peroxidase for immunohistochemical detection.</a> Nanotechnology. 22 (22), 225703(2011).</li>
<li>Xia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethyleneimine+coating+enhances+the+cellular+uptake+of+mesoporous+silica+nanoparticles+and+allows+safe+delivery+of+siRNA+and+DNA+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Polyethyleneimine coating enhances the cellular uptake of mesoporous silica nanoparticles and allows safe delivery of siRNA and DNA constructs.</a> ACS Nano. 3 (10), 3273-3286 (2009).</li>
<li>Mocellin, S., Provenzano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference%3A+learning+gene+knock-down+from+cell+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">RNA interference: learning gene knock-down from cell physiology.</a> Journal of Translational Medicine. 2 (1), 39(2004).</li>
<li>Courties, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((et+al.In+vivo+RNAi-mediated+silencing+of+TAK1+decreases+inflammatory+Th1+and+Th17+cells+through+targeting+of+myeloid+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">et al.In vivo RNAi-mediated silencing of TAK1 decreases inflammatory Th1 and Th17 cells through targeting of myeloid cells.</a> Blood. 116 (18), 3505-3516 (2010).</li>
<li>Zolnik, B. S., Gonzalez-Fernandez, A., Sadrieh, N., Dobrovolskaia, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minireview%3A+nanoparticles+and+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Minireview: nanoparticles and the immune system.</a> Endocrinology. 151 (2), 458-465 (2010).</li>
<li>Mulens-Arias, V., Rojas, J. M., Pérez-Yagüe, S., Morales, M. P., Barber, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethylenimine-coated+SPIONs+trigger+macrophage+activation+through+TLR-4+signaling+and+ROS+production+and+modulate+podosome+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Polyethylenimine-coated SPIONs trigger macrophage activation through TLR-4 signaling and ROS production and modulate podosome dynamics.</a> Biomaterials. 52, 494-506 (2015).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

I macrofagi sono refrattari a transfect da approcci nonviral comunemente utilizzati, quali l'elettroporazione, liposomi cationici e specie del lipido. Qui abbiamo descritto un metodo affidabile ed efficiente per transfect macrofagi con siRNA. Utilizzando il presente protocollo, oltre 90% di macrofago-come 264.7 celle grezze (Figura 2B) e macrofagi peritoneali di ratto18 può essere trasfettate con siRNA senza significativa compromissione dell'attuabilità delle cellule....

I macrofagi sono un tipo di cellule immuni innate distribuiti in tutti i tessuti del corpo, anche se in quantità diverse. Producendo una varietà di citochine e altri mediatori, giocano ruoli critici nella difesa ospite contro l'invasione di microrganismi patogeni, nella riparazione del tessuto dopo la lesione e nel mantenimento di omeostasi del tessuto1. A causa della loro importanza, i macrofagi sono stati continuamente oggetto di intensa ricerca. Tuttavia, nonostante la sua prevalenza negli studi di funzione e regolazione genica, silenziamento genico siRNA-mediata è meno probabilità di riuscire a macrofagi perché queste cellule — in particolare, macrofagi primari — spesso sono difficili a transfect. Ciò può essere ascritto ad un grado relativamente elevato di tossicità associata con approcci di transfezione più consolidati in cui la membrana cellulare è chimicamente (ad es., con polimeri e lipidi) o fisicamente (ad es., mediante elettroporazione e pistole di gene) interrotto per consentire siRNA molecole attraversano la membrana, riducendone drasticamente vitalità2,3 dei macrofagi. Inoltre, i macrofagi sono dedicati fagociti ricchi di enzimi degradativi. Questi enzimi possono danneggiare l'integrità del siRNA, indebolendo la sua efficienza silenziamento anche se siRNA gene-specifico è stato consegnato in cella3,4. Di conseguenza, un sistema di consegna efficace del macrofago-mirati siRNA ha bisogno proteggere l'integrità e la stabilità di siRNA durante la consegna4.
È sempre più evidente che i macrofagi disfunzionali siano implicati nell'iniziazione e progressione di alcuni comuni disturbi clinici come cancro, aterosclerosi e malattie autoimmuni. Per questo motivo, modulando la funzione del macrofago con, per esempio, siRNA, sta emergendo come una metodologia attraente per il trattamento di questi disturbi5,6,7. Nonostante i progressi realizzati, una sfida importante della strategia di trattamento basati su siRNA è la specificità di povera cella di siRNA sistematicamente amministrato e l'assorbimento di siRNA insufficiente da parte dei macrofagi, che di conseguenza portare a effetti collaterali indesiderati. Confrontato con acido nucleico libero terapeutica che in genere mancano della selettività cellulare ottimale e spesso portare a effetti avversi, caricati nanoparticelle (NPs), a causa della loro tendenza spontanea di essere catturato dal sistema reticoloendoteliale, fuori bersaglio possono essere progettati per il targeting passivo a macrofagi in vivo, permettendo una migliore efficacia terapeutica con effetti collaterali minimi8. NPs corrente esplorato per il rilascio di molecole di RNA includono nanovettori inorganici e liposomi vari polimeri9. Tra loro, polyethyleneimine (PEI), un tipo di polimeri cationici in grado di legare e di condensazione di acidi nucleici in NPs stabilizzato, Mostra il RNA più alto offrendo capacità9,10. PEI protegge gli acidi nucleici da degradazione enzimatici e non enzimatici, media il loro trasferimento attraverso la membrana cellulare e promuove il loro rilascio intracellulare. Anche se inizialmente introdotto come un reagente di consegna di DNA, PEI successivamente è stata dimostrata per essere una piattaforma attraente per in vivo siRNA consegna, o in locale o sistemica9,10.
Nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetico (SPIONs) hanno mostrato grande promessa nel campo della biomedicina, a causa delle loro proprietà magnetiche, biocompatibilità, dimensioni paragonabili agli oggetti biologicamente importanti, alto rapporto superficie-zona--volume e facilmente adattabile superficie per agente allegato11. Per esempio, a causa della loro utilità potenziale come un agente di contrasto e di rapido assorbimento da parte dei macrofagi, SPIONs sono emersi come uno strumento clinico a immagine del tessuto macrofagi12. Mentre SPIONs inoltre sono stati studiati estesamente come acido nucleico consegna veicoli11,13,14,15, a nostra conoscenza, la letteratura contiene pochi rapporti di SPIONs come vettore per consegna del macrofago-mirati siRNA. Per la consegna del gene di SPIONs, la loro superficie è solitamente rivestita con uno strato di polimeri cationici idrofilici su cui caricati negativa degli acidi nucleici può essere elettrostaticamente attratto e legati. Qui, presentiamo un metodo per la sintesi di SPIONs cui superficie viene modificata con basso peso molecolare (10 kDa), ramificata PEI (PEI-SPIONs). Questi nanoplatforms magnetico sono quindi impiegati per condensare siRNA, formando dei complessi PEI-SPION/siRNA che permettono il trasporto di siRNA nella cellula. Abbiamo ragione quella spontanea fagocitosi di SPIONs dalle cellule del sistema reticoloendoteliale16, accoppiato con la forte capacità di associazione e condensazione di acidi nucleici da PEI, rende PEI-SPIONs adatto per il trasporto efficiente di siRNA in macrofagi. I dati presentati qui sostengono la fattibilità del silenziamento genico PEI-SPION/siRNA-mediata nei macrofagi in cultura come pure in vivo.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>caldo in 37 gradi C bagnomaria prima dell'uso</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>A31608-02</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina/streptomicina (1,5 ml)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Kit di test MTS a base di tetrazolio</td><td>Promega</td><td>G3582</td><td>Per l'analisi della citotossicità</td></tr><tr><td>Linea cellulare RAW 264.7</td><td>Banca cellulare dell'Accademia cinese delle scienze, Shanghai, Cina</td> Piastre per colture tissutali <td>TCM13</td><td></td></tr><tr><td>(6 pozzetti)</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Piastre per coltura tissutale (10 cm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Provette prive di RNasi (1,5 ml)</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga (15 ml)</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Wistar ratti</td><td>Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Scienze</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bacillus Calmette&ndash; Gu&eacute; rin polvere liofilizzata</td><td>National Institutes for Food and Drug Control, Cina</td><td></td><td>per indurre l'artrite adiuvante nei ratti</td></tr><tr><td>siRNA</td><td>GenePharma (Shanghai, Cina)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cy3-siRNA</td><td>RiboBio (Guangzhou, Cina)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polietilenimmina (10 kDa)</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td></td><td></td>E107079</tr><tr><td>Acqua di ammoniaca</td><td>Aladdin Reagente chimico Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A112077</tr><tr>acido<td>oleico</td><td>Aladdin reagente chimico Co., Ltd.</td><td></td><td></td>O108484</tr><tr><td>Dimetilsolfossido</td><td>Aladino Reagente Chimico Co., Ltd.</td><td></td><td></td>D103272</tr><tr><td>FeSO4&toro; 7H2O</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10012118</td><td></td></tr><tr><td>FeCl3&bull; 6H2O</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10011918</td><td></td></tr><tr><td>Acido dimercaptosuccinico</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td></td><td></td>D107254</tr><tr><td>provetta per ultrafiltrazione</td><td>Millipore</td><td>UFC910096</td><td></td></tr><tr><td>soluzione di idrossido di tetrametilammonio</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td></td><td></td>T100882</tr><tr><td>Analizzatore di dimensioni delle particelle e potenziale zeta</td><td>Malvern, Inghilterra</td><td>Nano ZS90</td><td></td></tr></tbody></table>

nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con polyethyleneimine come un veicolo per la consegna di piccolo rna interferente ai macrofagi in vitro e in vivo

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

A causa del loro ruolo critico nella regolazione della risposta immunitaria, i macrofagi sono stati continuamente oggetto di intensa ricerca e rappresentano un promettente bersaglio terapeutico in molti disturbi, quali malattie autoimmuni, aterosclerosi e cancro. Silenziamento genico RNAi-mediata è un valido approccio di scelta per sonda e modificare la funzione del macrofago; Tuttavia, la transfezione di macrofagi con siRNA è spesso considerata di essere tecnicamente impegnativo e, attualmente, sono disponibili alcune metodologie dedicati al trasferimento siRNA ai macrofagi. Qui, presentiamo un protocollo di utilizzo di nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetico rivestite con polyethyleneimine (PEI-SPIONs) come veicolo per la somministrazione mirata di siRNA di macrofagi. PEI-SPIONs sono capaci di legare e di condensazione completamente siRNA quando il rapporto di peso di Fe: siRNA raggiunge 4 e sopra. In vitro, queste nanoparticelle possono fornire in modo efficiente siRNA in macrofagi primari, così come nella linea cellulare del 264,7 macrofago-come, senza compromettere la vitalità cellulare presso la dose ottimale per la transfezione, e, in definitiva, essi inducono destinazione di siRNA-mediata del silenziamento genico. Oltre ad essere usato per trasfezione con siRNA in vitro , PEI-SPIONs sono anche uno strumento promettente per la consegna di siRNA a macrofagi in vivo. In considerazione di sue caratteristiche unite di proprietà magnetiche e capacità di silenziamento genico, sistematicamente amministrati PEI-SPION/siRNA particelle dovrebbero non solo di modulare la funzione dei macrofagi, ma anche per attivare i macrofagi a essere imaged e tracciati. In sostanza, PEI-SPIONs rappresentano una piattaforma nonviral semplice, sicura ed efficace per la consegna di siRNA ai macrofagi sia in vitro che in vivo.

La dimensione e la zeta potenziale di PEI-SPIONs preparato con questo protocollo sono stati nella gamma di 29-48 nm (indice di polidispersione: 0.12 - 0.23) e 30-48 mV, rispettivamente. Erano stabili in acqua a 4 ° C per oltre 12 mesi senza aggregazione ovvio. Per valutare la loro capacità di associazione di siRNA, PEI-SPIONs sono stati mescolati con siRNA a vari rapporti di peso Fe: siRNA. La figura 1 Mostra che quando il rapporto di peso di Fe: siRNA raggiu...

Descriviamo un metodo di utilizzo polyethyleneimine (PEI)-rivestito di nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetico per macrofagi trasfezione con siRNA. Queste nanoparticelle è in grado di fornire in modo efficiente siRNA di espressione del gene bersaglio macrofagi in vitro e in vivo e silenzio.

Nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con Polyethyleneimine come un veicolo per la consegna di piccolo RNA interferente ai macrofagi In Vitro e In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...

Questa misura può aiutare a rispondere alle domande chiave. Nel campo dell'umanologia. Quella risposta in funzione dei macrofagi in condizioni fisiologiche di fine patologica.Il principale vantaggio di questa tecnica è che il rivestimento in polietileneimina può essere efficacemente in vitro senza compromettere la cellula. Sotto dosi ottimali. Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la terapia e la diagnosi di molti disturbi infiammatori cronici e tumori.Dove i macrofagi svolgono un ruolo essenziale nella patogenesi. A dimostrare la procedura sarà Na Jia. Uno studente laureato del mio laboratorio.E Kaixuan Wang, uno studente laureato del laboratorio del dottor Xiaohua. Per preparare l'acido alleato modificato super paramagnetico ossido di ferro nanoparticelle o il primo di SPION aggiungere 28 grammi di faraone cloruro esaidrato. E 20 grammi di faraoni autoaidrato a un becher contenente 80 millilitri di acqua deionizzata.E usa un condotto di vetro per introdurre azoto nella soluzione. Mescolando fino a quando la materia solida non si è sciolta. Riscaldare la miscela di reazione a 72 gradi Celsius mescolando a 800 rotazioni al minuto.E aggiungere 40 millilitri di acqua al 28% di ammoniaca al becher. Dopo cinque minuti aggiungere nove millilitri di acido alleato goccia saggio. E mantenere la miscela a 72 gradi Celsius per tre ore con agitazione continua.Alla fine dell'incubazione raffreddare la soluzione risultante a temperatura ambiente. E far precipitare la miscela tramite separazione magnetica secondo protocolli standard. Quindi lavare lo SPION contenente precipitato tre volte con alcol etilico assoluto.E asperse il precipitato in 100 millilitri di n-esano. Per preparare l'acido acrilico dimercapto modificato spion aggiungere 800 milligrammi di acido alleato modificato SPION. Disperso in 200 millilitri di n-esano e 400 milligrammi di acido acrilico dimercapto dispersi in 200 millilitri di acetone in un pallone a tre colli in un bagno d'acqua a 60 gradi Celsius.Aggiungere quindi 200 microlitri di trietilammina cadere saggiamente al pallone mescolando a 1000 rotazioni al minuto e reflusso. Un precipitato nero può essere ottenuto mediante separazione magnetica dopo cinque ore. Quindi utilizzare idrossido di tetrametilammonio per regolare il pH della soluzione per la dispersione omogenea degli SPION idrofili in acqua deionizzata.Degenerato polietileneimina rivestito spion aggiungere l'acido acrilico dimercapto modificato la soluzione colloidale di SPION cadere saggio in una soluzione di polietileneimina da 10 kilodalton. In un pallone a tre colli da 500 millilitri sotto agitazione meccanica a 1000 rotazioni al minuto per due ore. Al termine dell'incubazione aggiungere la soluzione risultante a un tubo di ultra filtrazione con un peso molecolare tagliato di 100 kilodalton e un contenuto di 15 millilitri.Centrafutilizzare il campione fino a quando la soluzione rimanente raggiunge un volume di millilitro. Aggiungere acqua deionizzata alla soluzione per riportare il volume a 15 millilitri. E centrafuse e reidratare la soluzione altre dieci volte come appena dimostrato.Quindi filtrare la soluzione attraverso un filtro da 22 micron per la conservazione a quattro gradi Celsius. Per preparare le nanoparticelle di siRNA aggiungere prima tre microlitri di soluzioni di siRNA 20 micromolare preparate al momento a cinque tubi microcentroafusi liberi di RNA etichettati. E aggiungere 0, 8, 1,6, 3,2 e 6,4 microgrammi di POlietileneimina SPION ai tubi etichettati rispettivamente zero, uno, due, quattro e otto.Dopo la miscelazione con pipettazione delicata, incubare i campioni per 30 minuti a temperatura ambiente per consentire la forma dei complessi siRNA SPION in polietileneimina. E preparare un gel di agarosio al tre per cento con I purity agarose. Al termine dell'incubazione aggiungere un microlitro di tampone di carico di DNA 6X per cinque microlitri di campione a ciascun tubo e mescolare con attenzione.Quindi caricare tutti i campioni sul gel. Ed eseguire l'elettroforesi a cinque volt per centimetro. Fino a quando il colorante blu bromofenolo migra due terzi della lunghezza sul gel.Un giorno prima della trasfezione lavare un microfago di topo come raw264.7 coltura cellulare con PBS. E trattare le cellule con un millilitro del 25% di tripside per cinque-dieci minuti a 37 gradi Celsius in un incubatore di anidride carbonica al cinque%. Quando la maggior parte delle cellule si è staccata.Disattivare la tripina con cinque millilitri di DMEN completo. Quindi convogliare la soluzione più volte per disperdere eventuali cluster di celle. Trasferire la sospensione cellulare in un tubo sterile conackel da 15 millilitri per la centrifugazione.Quindi sospendere di nuovo le cellule in cinque millilitri di DMEN fresco completo per il conteggio. Diluire le cellule a 4,5 per dieci fino alla quarta cellule per millilitro di concentrazione completa di DMEN. E aggiungere due millilitri di mezzo ad ogni pozzo di un piatto di sei pozza per un'incubazione 24 ore su 24 nell'incubatrice di coltura cellulare.Il giorno successivo preparare il rapporto appropriato delle nanoparticelle di siRNA SPION in un tubo di microcentrifugo a flusso di RNA da 1,5 millilitri con miscelazione delicata come appena dimostrato. E aggiungere il volume appropriato di polietileneimina SPION siRNA nanoparticella complesso ad ogni pozzo che è stato sostituito con un millilitro di mezzo fresco. Preparare complessi di POlietileneimina SPION si.in questo caso possono essere utilizzati molti altri mesi di polietileneimina SPION riducendo così al minimo la loro potenziale tossicità. Quindi ruotare attentamente la piastra per ottenere una distribuzione uniforme delle nanoparticelle attraverso i fondi del pozzo. Riportare la piastra all'incubatore di coltura cellulare fino al successivo aggiornamento cellulare o all'analisi della carenza di knockdown genico.I POlietilenimina SPION con un potenziale zeta di 30,5 e 37 millivolt non presentano un'apparente tossicità citografica a concentrazioni fino a 30 microgrammi di ferro per millilitro. Che è circa due volte il noleggio rispetto alla concentrazione normalmente utilizzata per la trasfezione cellulare. Il potenziale zeta di POlietileneimina SPION di 48 millivolt tuttavia è tossico.Anche alla dose più bassa esaminata. Come analizzato dalla citometria a flusso, oltre il 90% delle cellule può essere transetto con complessi di siRNA SPION in polietileneimina etichettati fluorescentmente a 15 microgrammi di ferro per millilitro. La valutazione degli effetti delle concentrazioni di siRNA SPION in polietileneimina sull'internalizzazione cellulare mediante frantumazione della colorazione blu rivela una colorazione minimamente rilevabile a 7,5 microgrammi di ferro per millilitro.Ma punti chiaramente visibili a 15 microgrammi di ferro per millilitro che non aumentano a concentrazioni più elevate di ferro probabilmente a causa della saturazione dell'assorbimento del siRNA di POlietileneimina SPION. I macrofagi peritoneali trasfettato con siRNA specifico che ospita polietileneimina SPION presentano una significativa diminuzione dei livelli di mRNA di catrame rispetto al siRNA non specifico. Suggerendo che il siRNA può fuggire dalle vescicole endocitiche nel citoplasma per raggiungere il meccanismo di interferenza dell'RNA.Inoltre, dopo l'iniezione endovenosa di una singola dose di complessi di nanoparticelle di polietileneimina SPION siRNA, l'analisi flocentimetrica delle cellule positive CD11b e CD3 rivela un assorbimento più efficiente delle nanoparticelle da parte di CD11b che esprime macrofagi rispetto alle cellule positive cd3 in qualsiasi momento in tutti gli organi esaminati. Durante il tentativo di questa procedura è importante ricordare di preparare i polietilenimina SPION con un potenziale dati medio non superiore a 37 millivolt e di preparare i complessi di siRNA SPION in polietileneimina sui bassi rapporti ferro/siRNA. Questa tecnica confronta la necessità per i ricercatori di esplorare il potenziale terapeutico di targeting del macrofago nei motori animali di malattie umane come e cancro.

polyethyleneimine-coated-iron-oxide-nanoparticles-as-vehicle-for

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Ripetute iniezioni retro-orbitali di liposomes/siRNA/ITSN-1s cationici complessi nei topi, ogni 72 ore per 24 giorni, fornire in modo efficiente il duplex siRNA per il mouse microcircolo polmonare riducendo mRNA ITSN-1s e di espressione proteica del 75%. Questa tecnica è altamente riproducibile in un modello animale, non ha effetti collaterali ed evita infortuni mortali.

Silencing a lungo termine di Intersectin-1s in Polmoni mouse consegna ripetuta di un siRNA specifico tramite liposomi cationici. Valutazione degli effetti Knockdown al microscopio elettronico

In questo protocollo, descriviamo metodi per trasfettare in modo efficiente linee cellulari di macrofagi murini con siRNA utilizzando il sistema navetta a 96 pozzetti Amaxa Nucleofector, stimolare i macrofagi con lipopolisaccaride e monitorare gli effetti sulla produzione di citochine infiammatorie.

Usando RNA-interferenza per Indagare sulla risposta immunitaria innata in mouse macrofagi

Consegna resta la sfida principale per l'attuazione terapeutico di piccoli RNA interferenti (siRNA). Questo protocollo prevede l'utilizzo di una piattaforma di distribuzione siRNA multifunzionale e biocompatibile, composto da arginina e polietilenimmina innestato microparticelle di silicio poroso.

Poroso Silicon microparticelle per consegna di siRNA Therapeutics

Questo manoscritto descrive l'erogazione efficiente, non virale miR alle cellule endoteliali da un vettore PEI / MNP e la loro magnetizzazione. Così, oltre alla modificazione genetica, questo approccio consente di orientamento delle cellule magnetica e risonanza magnetica rilevabilità. La tecnica può essere utilizzata per migliorare le caratteristiche dei prodotti cellulari terapeutici.

preparazione e<em&gt; In Vitro</em&gt; Caratterizzazione di magnetizzato miR-modificato cellule endoteliali

Questo manoscritto viene illustrato lo svuotamento dell'espressione genica in midgut il tedesco scarafaggio attraverso ingestione orale di RNA double-stranded incapsulato in liposomi.

Uso pratico di interferenza del RNA: consegna orale del RNA Double-stranded in elementi portanti di liposomi per scarafaggi

Questo protocollo viene illustrata una procedura sicura ed efficace per modificare CD133+ cellule staminali ematopoietiche. L'approccio non-virale, magnetico presentato basato su polyplex può fornire una base per l'ottimizzazione degli effetti terapeutici delle cellule staminali anche per quanto riguarda il monitoraggio del prodotto somministrato cella tramite risonanza magnetica.

Protocollo per il trasferimento di MicroRNA in adulto cellule staminali emopoietiche derivate da midollo osseo per abilitare ingegneria cellulare combinata con il Targeting magnetico

Inibizione di tessuto-specifici microRNA è una tecnologia che è sottosviluppata nel campo dei microRNA. Qui, descriviamo un protocollo per inibire la famiglia di microRNA miR-181 in cellule dei mioblasti dal cuore. Nanovector tecnologia viene usata per fornire un microRNA spugna che dimostra significativa in vivo cardio-miR-181 famiglia inibizione specifica.

In Vivo Nanovector consegna di una cuore specifici MicroRNA-spugna

Qui descriviamo un protocollo per la generazione di nanoliposomi cationici, che si basa sul metodo a secco-pellicola e possono essere utilizzato per la cassaforte e consegna efficiente in vitro di trascritti di RNA messaggero.

Generazione di nanoliposomi cationici per la consegna efficiente In Vitro di trascritti di RNA messaggero

Qui, forniamo miRNA esogeni sintetizzati artificialmente al rene tramite iniezione di vena della coda di un vettore non virale e nanoparticelle di polietilenimina in diversi modelli murini di malattie renali. Ciò ha portato a una significativa sovraespressione del miRNA bersaglio nel rene, con conseguente progressione inibita della malattia renale in diversi modelli murini.

Rilascio di miRNA esogeno sintetizzato artificialmente al rene utilizzando nanoparticelle di polietilenimina in diversi modelli murini di malattie renali

Qui, descriviamo il protocollo per la somministrazione in vivo di nanoparticelle magnetiche di ossido di ferro che trasportano oligomeri di RNA al carcinoma mammario metastatico in modelli animali, fornendo un approccio clinicamente valido per il silenziamento terapeutico di acidi nucleici oncogenici.

Monitoraggio dell'accumulo di nanofarmaci nelle metastasi del carcinoma mammario murino

La barriera emato-encefalica è un ostacolo significativo nella somministrazione di terapie per il glioblastoma, una malattia per la quale non esiste una cura. Qui, riportiamo una nano piattaforma terapeutica di ossido di ferro guidata da immagini in vivo che può bypassare questa barriera fisiologica in virtù delle dimensioni e accumularsi nel tumore.

Consegna di nanoparticelle di un carico utile di oligonucleotidi in un modello animale multiforme di glioblastoma

Scopri come trasfettare macrofagi con nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con PEI per la consegna di siRNA. Questo metodo consente il silenziamento genico efficace in vitro e in vivo per applicazioni terapeutiche.

Nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con Polyethyleneimine come un veicolo per la consegna di piccolo RNA interferente ai macrofagi In Vitro e In Vivo (Video) | JoVE Journal

Nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con Polyethyleneimine come un veicolo per la consegna di piccolo RNA interferente ai macrofagi In Vitro e In Vivo

Esplora altri video