Un protocollo di Rhizobox ottimizzato per visualizzare la crescita delle radici e tempi di risposta alle sostanze nutrienti localizzate

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della scienza della radice e della rizosfera, come il modo in cui le radici rispondono a macchie localizzate di sostanze nutritive. I principali vantaggi di questa tecnica sono che consente misurazioni ripetute e non invasive di un singolo apparato radicale nel terreno, ma non richiede attrezzature specializzate ed è relativamente economico. Raccogliete le parti per il Rhizobox per l'assemblaggio.

Questi includono pannelli anteriori e posteriori in acrilico chiaro di circa 40 centimetri per 61 centimetri. A questo punto, ci sono distanziale laterali e inferiori sopra il pannello posteriore. I distanziale sono allineati con i fori precedentemente praticati nei pannelli.

Tagliare una lunghezza di imbottitura in poliestere per andare lungo la parte inferiore del Rhizobox. Posare l'imbottitura sul pannello posteriore direttamente sopra il distanziale inferiore per evitare perdite. Mettere il pannello superiore in posizione sui distanziale per mantenere l'imbottitura in posizione.

Ora prendi l'hardware per assemblare il Rhizobox. Utilizzare una vite, due rondelle e un dado esagonale per ciascuno dei fori praticati. Posizionare una rondella sul pannello frontale e stringere la vite attraverso di essa sul pannello posteriore.

Un'altra lavatrice e il dado esagonale. Per evitare la perdita di terreno, assicurarsi che tutte le viti siano molto strette. Inoltre, creare due distanziale per formare le patch di trattamento e controllo.

Renderli con fogli di polietilene ad alta densità e fissare una vite nella parte superiore per consentire solo l'inserimento parziale. Per la privazione della luce e la riduzione del calore, preparare una custodia protettiva in grado di racchiudere la scatola. Infine, costruisci una cornice per incoraggiare le radici a crescere contro il pannello posteriore.

Questo telaio in PVC mantiene la scatola con un angolo di circa 55 gradi. Avere pronto una miscela omogeneizzata di terreno di campo e sabbia. Inizia con un grande sacchetto contenente la miscela di substrato per ogni Rhizobox.

Etichetta due piccole borse ziptop per scatola per le patch di trattamento e controllo. Utilizzare una bilancia e pesare 30 grammi del substrato di sabbia del suolo. Trasferire il substrato nel sacchetto di controllo.

Allo stesso modo, aggiungere 30 grammi di substrato al sacchetto di trattamento. Quindi pesare un grammo di azoto 15 sorgente di azoto etichettata e aggiungerlo al sacchetto di trattamento. Mescolare accuratamente il substrato e la fonte di azoto.

Lavora con un Rhizobox ed è distanziale patch. Inserire i due distanziale nel Rhizobox fino a quando la vite non impedisce ulteriori movimento. Segnate la profondità del bordo inferiore dei distanziale sul lato del Rhizobox.

Quindi rimuovere i distanziale per i passaggi successivi. Utilizzando un imbuto, riempire il Rhizobox dal grande sacchetto di substrato alla profondità marcata. Sposta l'imbuto avanti e indietro lentamente e uniformemente per riempire il Rhizobox in modo uniforme.

Quando il substrato si trova alla profondità contrassegnata, mettere i distanziati nella scatola. Dovrebbero essere a cinque centimetri dai lati sinistro e destro della scatola. Continuare a riempire la scatola fino a quando il substrato è a circa cinque centimetri dalla parte superiore della scatola.

Successivamente, disporre l'irrigazione lenta del substrato nella scatola con 150 millilitri di acqua con emettitori di gocciolamento o a mano. Lasciare riposare diverse ore o durante la notte in modo che l'acqua si disffondoni e l'area intorno a ciascun distanziale sia completamente bagnata. A questo punto, rimuovere i distanziale per lasciare una cavità vuota per le patch.

Ora, pellicola di trasparenza del nastro all'esterno della scatola. Utilizzare la trasparenza per etichettare una patch come trattamento e l'altra come controllo. Quindi utilizzare l'imbuto e il substrato di controllo preparato per riempire la patch di controllo.

Questa è la patch di controllo etichettata dopo che è stata riempita. Passare a riempire il cerotto di trattamento con il substrato di trattamento preparato allo stesso modo. Al termine, utilizzate un marcatore permanente per tracciare il limite di ogni patch sulla pellicola trasparente.

Quindi, riempire il Rhizobox uniformemente con il substrato rimanente dalla grande borsa. Finire tracciando la parte superiore del substrato sulla trasparenza. Una volta che la scatola è pronta, trapiantare un seme germinato.

Per prima cosa, usa una spatola stretta per scavare un buco al centro del Rhizobox. Il foro dovrebbe essere profondo 2,5 centimetri. Posizionare il seme germinato all'interno assicurando che il radicale sia orientato direttamente verso il basso.

Tracciate la posizione del seme sulla trasparenza attaccata alla scatola. Coprire il seme, quindi annaffiarlo con fino a 50 millilitri di acqua deionizzata. Successivamente, racchiudere la scatola nel suo caso per evitare che la luce interagisca con le radici durante la crescita.

Porta la scatola al telaio preparato per questo. Posiziona il Rhizobox sul telaio per incoraggiare la crescita verso il telaio posteriore. Recupera la scatola dopo ogni tre o quattro giorni di crescita delle piante.

Con la custodia rimossa, traccia le radici visibili delle piante usando ogni volta una penna di colore diversa. Come in questo esempio, sii coerente e sistematico per questo passaggio. Riportare la scatola coperta al suo supporto e assicurarsi che sia nel suo orientamento originale.

Qui, le lunghezze totali delle radici tracciate sul retro di 24 Rhizobox vengono tracciate in base alle lunghezze delle radici misurate utilizzando uno scanner e un software per computer. Un grafico simile per motivi di radice tracciati nella parte anteriore della scatola dimostra che le radici sono cresciute preferenzialmente contro la parte posteriore della scatola. Le pendenze consistenti in questo grafico del logaritmo della lunghezza totale della radice in funzione dei giorni di crescita suggeriscono che i tassi di crescita erano simili tra le diverse caselle.

Ecco i dati per la densità della lunghezza delle radici per un genotipo di mais. La densità per la patch di controllo è inferiore alla densità per il cerotto trattato con azoto. L'esperimento ha confrontato la densità della lunghezza delle radici per sei genotipi di mais separati.

In tutti i casi, la densità della lunghezza della radice era maggiore nel cerotto di trattamento etichettato azoto 15 rispetto al cerotto di controllo. Questo protocollo può essere combinato con altri metodi come la sfigmografia o la florescence nell'ibridazione situ al fine di visualizzare la distribuzione spettria dell'attività enzimatica o dei microbi.