Name: Estrazione ed analisi di propoli verde taiwanesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Impara a estrarre e caratterizzare la propoli verde taiwanese con etanolo per valutarne l'attività antibatterica. Questo metodo affidabile consente di determinare con precisione la qualità della propoli per studi biochimici.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo manoscritto è stato modificato da Wallace accademico Editing.

1. preparazione di composti di etanolo-estratti
<ol><li>Pesare 10 g di propoli verde Taiwanese congelati, che è stato raccolto dagli alveari in Taiwan da maggio a luglio, e macinatelo usando la smerigliatrice della Spezia. Confermare che pezzi interi di propoli verde Taiwanese sono macinati in polvere finissima senza eventuali particelle di grandi dimensioni.</li>
	<li>Aggiungere 100 mL di varie concentrazioni di etanolo (60%, 70%, 80%, 95% e 99,5%) e acqua per beute separate e mescolare ogni concentrazione con 10 g di propoli di terra.</li>
	<li>Incubare a 25 ° C ed agitare il matraccio a 250 giri/min per 48 h.</li>
	<li>Filtrare gli estratti di etanolo attraverso carta da filtro con un diametro dei pori 25 μm.</li>
	<li>Ricostituire i filtrati al loro volume originale (100 mL) con etanolo al 95% utilizzando un matraccio.</li>
	<li>Conservare gli estratti dell'etanolo a-20 ° C. Nota: Il protocollo può essere messo in pausa qui.</li>
</ol>2. preparazione degli estratti dell'etanolo per HPLC
<ol><li>Concentrato 10 mL di etanolo estratti per evaporazione sotto vuoto a 40 ° C per 15 min.</li>
	<li>Cuocere in forno la sostanza secca a 45 ° C per 24 h.</li>
	<li>Ricostituire la sostanza secca con 10 mL di etanolo al 95%.</li>
	<li>Filtro 1 mL di etanolo estrae utilizzando un filtro siringa sterile con un diametro dei pori da 0,45 µm.</li>
	<li>Refilter gli estratti di etanolo con un filtro siringa sterile con un diametro dei pori da 0,22 µm. Il filtrato viene raccolto e possa essere analizzato direttamente mediante HPLC.</li>
</ol>3. analisi del contenuto Propolin facendo uso di HPLC
<ol><li>
Creazione di curve standard di propolins
	<ol>
<li>Preparare 1 L della fase mobile della soluzione di metanolo: acqua di 88.8:11.2 (v/v).</li>
		<li>Preparare diluizioni seriali del propolin concentrazioni standard (C, D, F e G) (15,625 mg/mL, 31,25 mg/mL, 62,5 mg/mL e 125 mg/mL, rispettivamente) utilizzando la soluzione di fase mobile come un solvente.</li>
		<li>Iniettare 20 µ l di propolin concentrazioni standard nella colonna fase inversa, in modo sequenziale dalla bassa concentrazione ad alta concentrazione.</li>
		<li>Impostare la colonna HPLC a 30 ° C e portata del flusso a 1 mL/min.</li>
		<li>Impostare la lunghezza d'onda del rilevatore UV a 280 nm e il tempo di registratore a 20 min.</li>
		<li>Analizzare le norme almeno 3 x.</li>
		<li>Tracciare la risposta di misurazione (asse y) contro la concentrazione (asse x) usando calcolo foglio software e creare una curva standard con l'equazione e il valore R-quadrato.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analisi di Estratto di etanolo s
	<ol>
<li>Iniettare 20 µ l di etanolo estratti ottenuti dal passo 2.5 nella colonna a fase inversa.</li>
		<li>Impostare la colonna HPLC a 30 ° C e portata del flusso a 1 mL/min.</li>
		<li>Impostare la lunghezza d'onda del rilevatore UV a 280 nm e il tempo di registratore a 20 min.</li>
		<li>Analizzare le norme almeno 3 x.</li>
		<li>Calcolare la concentrazione di propolin nell'estratto dell'etanolo, usando l'equazione per la curva standard ottenuta dal punto 3.1.7 che utilizza l'area dei picchi per ogni propolin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. minima concentrazione inibente e minima concentrazione battericida analisi
Nota: Il metodo di microdilution è utilizzato per valutare l'efficacia antibatterica di propolins etanolo-estratti da propoli verde Taiwanese.
<ol><li>
Preparazione degli organismi di prova
	<ol>
<li>Scongelare i ceppi batterici, Staphylococcus aureus ed Escherichia coli e quindi, cultura li in brodo di soia triptico e brodo nutritivo, rispettivamente, a 37 ° C per 24 h.</li>
		<li>Passaggio di S. aureus utilizzando brodo di soia triptico ed e. coli utilizzando brodo nutritivo per due generazioni e, quindi, calcolare unità formanti colonie contando diverse colonie su una piastra di agar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparazione di etanolo estratti per test di attività antibatterica
	<ol>
<li>Concentrare gli estratti dell'etanolo ottenuti dal passaggio 1.5 per evaporazione sotto vuoto a 40 ° C per 15 min.</li>
		<li>Ricostituire la sostanza secca con solfossido dimetilico (DMSO) e regolare la concentrazione dell'estratto di 12,8 mg/mL.</li>
		<li>Preparare una diluizione seriale (concentrazioni: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 e 640 µ g/mL) di etanolo estratti utilizzando il brodo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Prove di concentrazione minima inibente
	<ol>
<li>Aggiungere 10 µ l di etanolo diluito estratti che vanno da 0,156 a 640.0 µ g/mL in una piastra a 96 pozzetti.</li>
		<li>Utilizzando il brodo, regolare il volume a 100 µ l e mantenere 5% DMSO in tutte le diluizioni.</li>
		<li>Inoculare 100 µ l di coltura batterica (1 x 106/ml) nella piastra a 96 pozzetti.</li>
		<li>Inoculo di coltura contenenti varie concentrazioni di etanolo estrae a 37 ° C per 48 h.</li>
		<li>Analizzare la crescita batterica secondo la torbidità e l'utilizzo di densità ottica (lettore di micropiastre) a 590 nm per determinare la concentrazione minima inibente (MIC).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Concentrazione battericida minima test
	<ol>
<li>Inoculare 10 µ l di cultura liquido da ciascun pozzetto del test MIC che ha esibito alcuna crescita su una piastra di agar.</li>
		<li>Incubare a 37 ° C per 24 h.</li>
		<li>Determinare l'attività battericida identificando la concentrazione più bassa che ha rivelato nessun visibile crescita batterica. La concentrazione che elimina completamente la crescita delle cellule è considerata essere la minima concentrazione batterica (MBC).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Uno studio ha riferito che la macerazione, utilizzando le varie concentrazioni di etanolo, poteva essere utilizzati per propoli brasiliano estrazione17; Tuttavia, il processo è stato molto tempo17. Ci sono voluti almeno 10 giorni per estrarre i composti bioattivi, ad esempio contenuto fenolico, dal propoli brasiliano17. In alternativa, estrazione di etanolo in combinazione con il riscaldamento a 37 ° C, 50 ° C o 70 ° C per 30 min è stato proposto per...

La propoli è una miscela resinosa naturale prodotta da specie di ape mellifera di Apis. Propoli sono stato ampiamente utilizzato sin dall'antichità in folk medicine. Uno studio recentemente riferito che propoli sono utile per prevenire le infezioni microbiche e infiammazione1. Numerosi studi hanno dimostrato che i principali composti bioattivi in propoli sono i flavonoidi, esteri di acidi fenolici, prenilato p-cumarico acidi e acidi diterpenici2,3. Fino ad oggi, sono state identificate 10 derivati di flavanone prenilato da Taiwanese propoli verde mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC)4,5,6,7. I più abbondanti fra questi sono propolins C, D, F e G5,7. Gli effetti biologici considerevoli di propoli verde Taiwanese sono correlati con il suo alto contenuto di propolins8.
Le concentrazioni di composti bioattivi in propoli variano notevolmente a seconda della stagione e la posizione geografica da cui si ricava la propoli. Propoli europeo contiene principalmente il flavonoide aglicone e fenolica acidi9. I principali composti bioattivi propoli in Brasile sono prenilato p-cumarico acidi, ad esempio artepillin C10. Uno studio ha dimostrato che la stagione è un fattore critico per la determinazione del contenuto totale propolin in Taiwanese propoli verde11. Il contenuto di propolin in Taiwanese propoli verde è più alto in estate (maggio - luglio) e la più bassa in inverno11. La proprietà antibatterica della propoli è stato ampiamente considerata un indicatore di attività biologica. Generalmente, i campioni di propoli raccolti da varie regioni hanno esibito una simile proprietà antibatteriche; ad esempio, è generalmente efficace contro quasi tutti i batteri Gram-positivi ed esibisce un limitato effetto antibatterico contro batteri gram-negativi10,12,13. Interazioni sinergiche tra i flavonoidi nella propoli sono state dimostrate per avere un effetto antibatterico14. Allo stesso modo, propoli verde Taiwanese è stato segnalato per avere un effetto antimicrobico contro batteri Gram-positivi15. Inoltre, uno studio ha inoltre identificato un effetto antimicrobico dall'interazione di propolins in Taiwanese propoli verde8.
La caratterizzazione dei composti bioattivi di propoli è difficile perché la sua composizione chimica può variare secondo la sua fonte di provenienza. Pertanto, è necessario stabilire un metodo fattibile e ripetibile per determinare la qualità della propoli verde Taiwanese. Tuttavia, nessuna procedura standard è stato stabilito per l'estrazione di propoli verde Taiwanese e successiva analisi funzionale. Sono stati proposti diversi metodi che variamente applicano solventi organici ed inorganici per propoli estrazione16,17,18,19,20. Perché la propoli è un composto lipofilico, studi hanno dimostrato che estrazione biologica è meglio di estrazione inorganici8,18,19. La concentrazione totale propolin in Taiwanese propoli verde e le sue proprietà antibatteriche sono indicatori chiave della qualità della propoli verde Taiwanese. Così, lo scopo di questo studio è di presentare un protocollo per l'utilizzo dell'etanolo come solvente per estrarre e caratterizzare le proprietà antibatteriche del Taiwanese propoli verde.

<table><tbody><tr><td>etanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Whatman n. 4 carta da filtro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>metanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>fase inversa RP-18 colonna</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>brodo di soia triptico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>brodo nutriente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>dimetil solfossido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>macinaspezie</td><td>Waring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre</td><td>Molecular Devices</td><td>Sistema HPLC EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Agilent</td><td>Serie</td><td></td>1200</tr><tr><td>Evaporazione sottovuoto</td><td>B&Uuml; CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

estrazione ed analisi di propoli verde taiwanesi

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Propoli verde taiwanese sono ricco di flavonoidi prenilato e presenta una vasta gamma di attività biologiche, come antiossidante, antibatterico e quelli anticancro. I composti bioattivi di propoli verde Taiwanese sono propolins, cioè C, D, F e G. La concentrazione di propolins in Taiwanese propoli verde varia a seconda della stagione e la posizione geografica. Pertanto, è fondamentale per stabilire una procedura standard ripetibile per la determinazione della qualità di propoli verde Taiwanese. Qui, presentiamo un protocollo che utilizza estrazione basata su etanolo, cromatografia liquida ad alte prestazioni e un'analisi di attività antibatterica per caratterizzare la qualità Taiwanese propoli verde. Questo metodo indica che le estrazioni di etanolo 95% e 99,5% raggiungere i rendimenti massima sostanza secca da Taiwanese propoli verde, producendo quindi le più alte concentrazioni di propolins che hanno proprietà antibatteriche. Secondo questi risultati, il presente protocollo è ritenuto affidabile e ripetibile per determinare la qualità di propoli verde Taiwanese.

Positivi dati rappresentativi per l'estrazione di etanolo sono presentati nella tabella 1. La resa di sostanza secca da propoli verde Taiwanese è stata associata positivamente con la concentrazione di etanolo. Gli estratti di etanolo 95% e 99,5% avevano la sostanza secca più alta rendimento da propoli verde Taiwanese. Il rendimento più basso secca da propoli verde Taiwanese si è verificato quando l'acqua è stata usata come il solvente di estrazione. Questi risultati indic...

Vi presentiamo un protocollo per l'utilizzo dell'etanolo come solvente per estrarre e caratterizzare Taiwanese propoli verde che esibisce l'attività antibatterica.

Estrazione ed analisi di propoli verde taiwanesi

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

Qui, presentiamo il protocollo per l'uso dell'etanolo come solvente per estrarre e caratterizzare la propoli verde taiwanese che inibisce l'attività antibatterica. Questo protocollo è un metodo affidabile e ripetibile per determinare la qualità della propoli verde taiwanese. A dimostrare la procedura saranno Chun'Ting Chen e Yi'Hsuan Chien, dottorandi del mio laboratorio.Per iniziare, pesa 100 grammi di propoli verde taiwanese. Usando una smerigliatrice di spezie, macinare la propoli assicurandosi che i pezzi siano macinati in una polvere fine senza particelle di grandi dimensioni. Impostare cinque contenitori e aggiungere 100 millilitri di varie concentrazioni di etanolo in acqua a ciascuno.Mescolare 10 grammi di propoli macinata nella soluzione di etanolo in ogni pallone e incubare a 25 gradi Celsius con scuotimento a 250 giri/min per 48 ore. Successivamente, utilizzare carta da filtro con una dimensione dei pori di 25 micrometri per filtrare gli estratti di etanolo. Utilizzando un pallone volumetrico, ricostituire i filtrati al loro volume originale di 100 millilitri con 95% di etanolo.Conservare gli estratti ricostituiti a meno 20 gradi Celsius fino a quando non sono pronti per l'uso. Quando sei pronto a preparare gli estratti per HPLC, usa l'evaporazione sottovuoto per concentrare 10 millilitri di ogni estratto a 40 gradi Celsius per 10 minuti. Cuocere la sostanza secca a 45 gradi Celsius per 24 ore.Quindi, ricostituire ogni campione di sostanza secca con 10 millilitri di etanolo al 95%. Utilizzando un filtro siringa con una dimensione dei pori di 0,22 micrometri, rifiltrare ogni estratto e raccogliere il filtrato per l'analisi diretta con HPLC. Per iniziare a stabilire una curva standard, preparare un litro della soluzione di metanolo e acqua di fase mobile con un rapporto tra 88,8 e 11,2.Utilizzando la soluzione di fase mobile come solvente, preparare diluizioni seriali delle concentrazioni standard di propolina come delineato nel protocollo di testo. Iniettare 20 microlitri di ogni concentrazione standard nelle colonne in fase inversa in sequenza dalla concentrazione più bassa alla più alta. Quindi, impostare la colonna HPLC su 30 gradi Celsius, impostare la lunghezza di rinuncia del rilevatore UV su 280 nanometri e la portata su un millilitro al minuto e il tempo del registratore su 20 minuti.Analizzare gli standard almeno tre volte. Successivamente, utilizzare il software della scheda di calcolo per collegare la risposta di misurazione alla concentrazione risultante in una curva standard con un'equazione determinata e un valore R al quadrato. Per iniziare ad analizzare gli estratti, iniettare 20 microlitri di ogni estratto nella colonna di fase inversa.Impostare la colonna HPLC su una temperatura di 30 gradi Celsius e una portata di un millilitro al minuto. Impostare la lunghezza di rinuncia del rilevatore UV su 280 nanometri e il tempo del registratore su 20 minuti. Analizzare gli estratti almeno tre volte.Quindi, utilizzare la curva standard per determinare la concentrazione di propolina in ogni estratto di etanolo. Dopo aver preparato gli organismi di prova e gli estratti di etanolo, aggiungere 10 microlitri di estratto diluito di etanolo, che vanno da 0,156 a 640 microgrammi per millilitro nei pozzi di una piastra di 96 pozzetti. Utilizzare brodo per regolare il volume in ogni pozzo a 100 microlitri assicurandosi di mantenere il 5% di DMSO in tutte le diluizioni.Successivamente, inoculare 100 microlitri di coltura batterica in ogni pozzo della piastra del pozzo 96. Cultura a 37 gradi Celsius per 48 ore. Utilizzare un lettore di micropiastrine a 590 nanometri per analizzare la crescita batterica in base alla torbidità e determinare la concentrazione inibitoria minima.Successivamente, inoculare 10 microlitri di coltura liquida da ogni pozzo che mostrava alla crescita su una piastra di agar. Incubare a 37 gradi Celsius per 24 ore. Identificare la concentrazione più bassa che non ha rivelato una crescita batterica visibile per determinare l'attività batterica.La concentrazione che ha completamente eliminato la crescita cellulare è considerata la concentrazione batterica minima. In questo studio, la propoli verde taiwanese viene estratta con etanolo. La resa di sostanza secca sembra essere più alta quando si utilizza un'alta concentrazione di etanolo e più bassa quando si utilizza acqua.Questi risultati indicano che un solvente organico funziona meglio durante questa estrazione e che la resa è positivamente associata alla concentrazione di etanolo. Allo stesso modo, la concentrazione di propolini sembra essere positivamente associata alla concentrazione di etanolo durante l'estrazione, con la più alta resa di propolini ottenuta negli estratti di etanolo del 95% e del 99,5%. Vengono quindi studiati gli effetti antibatterici degli estratti di etanolo contro l'aureo S e l'E coli.La concentrazione minima media inibitoria per S aureus sembra essere compresa tra 10 e 20 microgrammi per millilitro e la concentrazione batterica media sembra essere di 20 microgrammi per millilitro. Gli estratti d'acqua, tuttavia, non hanno avuto alcun effetto antibatterico contro S aureus. Non si osserva alcun effetto antibatterico per l'E coli quando si utilizzano l'acqua o gli estratti di etanolo.Una delle principali procedure sperimentali è evitare l'uniformità della propoli verde taiwanese durante la macinazione.

extraction-and-analysis-of-taiwanese-green-propolis

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biochemistry

Biochimica

Biomassa vegetale offre una risorsa rinnovabile per più prodotti, compreso il combustibile, mangimi, prodotti alimentari e una varietà di materiali. In questo articolo analizziamo le proprietà di albero di tabacco (Nicotiana glauca) e pioppo fonti adatti per una pipeline bioraffineria.

Trascrizione e metabolita Profiling per la valutazione del Tabacco Albero e pioppo come materia prima per l&#39;industria con sede a Bio

Consorzi microbici all'interno alveari dell'ape di bumble arricchiscono e preservare il polline per larve di ape. Mediante sequenziamento di nuova generazione, insieme al laboratorio ed esperimenti sul campo, questo manoscritto descrive protocolli utilizzati per verificare l'ipotesi che residui di fungicidi alterano il microbioma di polline e demographics di Colonia, infine conducendo alla Colonia perdita.

Empirica, metagenomica e tecniche computazionali illuminano i meccanismi attraverso i quali salute delle API di fungicidi compromesso

L'espressione eterologa transitoria degli enzimi biosintetici in foglie di Nicotiana benthamiana può deviare endogene forniture di 2,3-oxidosqualene verso la produzione di nuovi prodotti ad alto valore triterpenici. Qui è descritto un protocollo dettagliato per produzione preparativo-scala rapidamente (5 giorni) di triterpeni e analoghi utilizzando questa potente piattaforma di origine vegetale.

Espressione transiente in Nicotiana Benthamiana lascia per produzione del Triterpene su scala preparativa

Qui, ci avvaliamo di un metodo di estrazione (PHWE) di acqua calda pressurizzata, che utilizza la macchina da caffè espresso per la casa non modificato per introdurre gli studenti universitari alla chimica di prodotti naturali in laboratorio. Due esperimenti sono presentati: PHWE di eugenolo e acetyleugenol da chiodi di garofano e PHWE di seselin e (+)-epoxysuberosin dalla pianta australiana Correa reflexa.

Impiegando l'estrazione con acqua calda pressurizzata (PHWE) per esplorare la chimica di prodotti naturali in laboratorio dello studente non laureato

Il presente protocollo descrive la contaminazione degli alcaloidi pirrolizidinici (PA) nei campioni di tè provenienti da erbe infestanti produttrici di PA nei giardini del tè.

Fonte e via di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nei campioni di tè

Il presente protocollo descrive l'uso della tecnologia di codifica a barre del DNA per autenticare materiali medicinali di origine vegetale e la pianta medicinale Angelica sinensis (Oliv.) Diels è stato identificato come esempio.

Applicazione del DNA Barcoding per identificare le piante medicinali

Questo studio ha confrontato il contenuto di polisaccaridi di Hippophae rhamnoides subsp. sinensis Rousi e Hippophae gyantsensis (Rousi) Y. S. Lian ottenuti mediante estrazione con acqua calda e quantificati mediante colorimetria con acido fenolo-solforico. Abbiamo anche studiato in vitro le attività antiossidanti dei polisaccaridi di queste due specie di Hippophae attraverso esperimenti di scavenging dei radicali liberi con 2,2-difenil-1-pirilidrazile.

Studio comparativo sul contenuto di polisaccaridi e sulle attività antiossidanti di Hippophae rhamnoides subsp. sinensis e Hippophae gyantsensis

Questo manoscritto descrive come schermo per thermostabilizing mutazioni, purificare il trasportatore della serotonina umano, generare anticorpi ad alta affinità, e cristallizzare il complesso trasportatore della serotonina-anticorpo legato alla antidepressivo della droga S -citalopram. Questo protocollo può essere adattato allo studio di altri trasportatori di membrana impegnativi, recettori e canali.

Thermostabilization, Espressione, purificazione e cristallizzazione della umana trasportatore della serotonina associato a<em&gt; S</em&gt; -citalopram

Viene presentato un protocollo per l'estrazione totale dei lipidi, dei metaboliti e delle proteine ​​dai tessuti biologici utilizzando un campione.

Un semplice metodo di estrazione frazionata per l&#39;analisi completa dei metaboliti, dei lipidi e delle proteine ​​da un singolo campione

Questo protocollo descrive una metodologia efficace per l'estrazione e la quantificazione di caffeina in sospensioni cellulari di L. c. arabica e un processo sperimentale per valutare l'attività enzimatica della sintasi di caffeina con il livello di espressione il gene che codifica per questo enzima.

Estrazione di caffeina, l'attività enzimatica e l'espressione genica della sintasi di caffeina da sospensioni di cellule vegetali

Impara a estrarre e caratterizzare la propoli verde taiwanese con etanolo per valutarne l'attività antibatterica. Questo metodo affidabile consente di determinare con precisione la qualità della propoli per studi biochimici.

Estrazione ed analisi di propoli verde taiwanesi

Esplora altri video