Raccolta rapida di volatili di fragranze floreali utilizzando una tecnica di raccolta volatile Headspace per il campionamento della postura termica GC-MS

Qui, presentiamo un protocollo per raccogliere la fragranza floreale volatile dai fiori in fiore, utilizzando una procedura di campionamento non distruttivo.

Poiché la fragranza floreale è fondamentale per attirare gli impollinatori, questo metodo potrebbe essere utilizzato per comprendere meglio o persino migliorare l'impollinazione delle specie di fiori autoctone. Con questo metodo, i volatili delle fragranze vengono campionati utilizzando un metodo non distruttivo con una macchina facilmente trasportabile. Questa metodologia utilizza il campionamento rapido, riducendo il tempo di campionamento da due a tre ore a 10 minuti.

Questi metodi forniscono un modo per campionare rapidamente i volatili prodotti dai fiori e potrebbero essere utilizzati per campionare volatili anche da altri campioni, come i feromoni degli insetti. Per iniziare, selezionare un fiore inizialmente non aperto e contrassegnare il fiore con nastro adesivo per garantire il campionamento ripetuto dello stesso fiore. Far bollire i sacchetti di forno in acqua per 30 minuti per rimuovere i composti plastici residui.

Per asciugare, cuocere in forno a 175 gradi Celsius per 60 minuti. Una volta che i sacchetti si sono asciugati, aggiungere un'unione di paratie in polipropilene ad ogni angolo dell'estremità chiusa dei sacchetti del forno. Risciacquare tutti i sacchetti e i tubi con il 75% di etanolo e lasciarli asciugare all'aria.

Quindi, cuocere i sacchetti e i tubi in un forno a fuoco basso, tra 74 e 85 gradi Celsius per 30 minuti. A seconda della durata del tempo di fioritura, se possibile attendere almeno 24 ore dopo la fioritura per raccogliere il campione. Coprire il fiore selezionato con un sacchetto da forno al forno.

Stringi la borsa strettamente con una cravatta con zip di plastica sotto il fiore per evitare che l'aria indesiderata fluisa nella borsa. Indossando guanti sterili in neoprene, attaccare un tubo dall'uscita dell'aria dell'attrezzatura di raccolta e collegarlo a una delle unioni di paratie sul sacchetto del forno. Sull'altra unione delle paratie, attaccare una cartuccia di filtro di vetro contenente adsorbente polimero poroso.

Collegare un secondo tubo all'apparecchiatura di raccolta sull'ingresso sottovuoto. Collegare l'estremità del secondo tubo alla cartuccia del filtro di raccolta volatile in vetro. Accendere sia la pompa dell'aria che il vuoto contemporaneamente e impostare a 0,05 litri al minuto.

Lo spazio della testa intorno al fiore è pieno d'aria ma non gonfiato troppo. Il sistema estrae l'aria dalla borsa attraverso il filtro, intrappolando i volatili floreali. Lasciare funzionare la macchina per 10 minuti.

E poi spegnere sia la pompa dell'aria che il vuoto. Smontare i tubi e la cartuccia del filtro di vetro. Posizionare il filtro in una fiala di vetro e avvitare un cappuccio.

Sigillare il flaconcino con nastro filettato tubo PTFE. Conservare il campione in un congelatore fino all'analisi GCMS. Ripetere questo processo con un sacchetto del forno vuoto per raccogliere un campione d'aria vuota come controllo.

Per repliche coerenti degli stessi volatili, ripetere la raccolta del campione alla stessa ora ogni giorno, poiché alcuni fiori producono diversi livelli di fragranza nel corso della giornata. Per prima cosa, rimuovere la cartuccia del filtro di vetro dal congelatore e posizionarla in un GCMS nella porta dell'iniettore. Per rilasciare i volatili dello spazio della testa raccolti sull'adsorbente polimerico poroso dall'adsorbente, riscaldare la trappola di raccolta termica a 220 gradi Celsius per otto minuti all'interno di un flusso di gas elio a 1,2 millilitri al minuto.

Confrontare i cromatogrammi dei volatili raccolti per identificare i picchi ricorrenti comuni. Dopo aver identificato il picco di volatili, utilizzare Pherobase per determinare se sono stati precedentemente descritti nelle fragranze floreali. In questo studio, i dati rappresentativi del GCMS sono mostrati come un cromatogramma.

Picchi tra i 10 e i 15 minuti sono volatili floreali. I volatili raccolti sono stati referenziati in Pherobase per determinare se sono stati precedentemente descritti in una fragranza floreale. Ad esempio, il composto numero 21, con un tempo di ritenzione di 10.311 è stato identificato come benzaldeide.

La benzaldeide è ricercabile su Pherobase con un elenco di tutte le specie di fiori, organizzato per famiglia di piante, da cui è stato identificato quel composto di fragranze. Le specie di orchidee sono mostrate qui, da cui la benzaldeide è stata determinata per essere presente nella fragranza floreale. I metodi precedenti hanno richiesto da due a quattro ore per campione.

L'uso di un solvente per rimuovere il campione dal filtro comporterebbe un picco di solvente sul GCMS. Questo nasconderebbe i composti da zero a 3,5 minuti. Questo metodo consente di vedere tutti i composti.